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ANEXOS

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ANEXO 1

Descripcin del Anlisis Proximal

El procedimiento de anlisis proximal para alimentos de humanos y animales fue
desarrollado a mediados del siglo XIX en Alemania por Henneberg y Stohman, en la
estacin experimental de Weende, de all que este sistema de anlisis es tambin
conocido como mtodo de Weende.
Este procedimiento es probablemente el esquema qumico mas utilizado universalmente
para anlisis de alimentos, a pesar de que la informacin que se obtiene, puede ser de
incierta significacin nutricional o conducir a ciertos errores, tal como se vera cuando se
describan cada una de las fracciones analizadas.
El anlisis proximal incluye la determinacin de diversas fracciones, las cuales pueden
ser el punto de partida para anlisis mas detallado de nutrientes especficos.

Humedad (H)
La humedad contenida en una muestra se determina secando la misma en una estufa
de aire caliente a 110 C durante 24 horas o hasta peso constante. Por diferencia con
relacin al peso de la muestra original se obtiene el valor de la materia seca.
El error que se puede cometer por este mtodo se debe a que cualquier material que
se volatilice a esta temperatura se pierde, como es el caso de los cidos grasos de
cadena corta en los ensilajes (actico, butrico y lctico). Otros mtodos para
determinar el contenido de humedad de los alimentos incluyen la destilacin con
tolueno y la deshidratacin por congelacin.

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Cenizas (C)
Es el residuo inorgnico que permanece luego de que la muestra ha sido colocada
en una mufla a 600 C durante un periodo de 12 horas.
La ceniza va a estar constituida principalmente por los minerales presentes en la
muestra; sin embargo, a esta temperatura se puede alterar la forma de algunos de
ellos, mientras que otros como el Zn, Cl, y I se pueden volatilizar.

Protena Cruda (PC)

La protena cruda se calcula multiplicando por el factor 6.25 los valores de
nitrgeno obtenidos por el mtodo de Kjeldahl, considerando que las protenas
contienen en promedio 16 % de nitrgeno en su peso molecular.
Este anlisis no distingue una forma de nitrgeno de otra, es decir, si el nitrgeno
presente en la muestra proviene de protena verdadera o de otras fuentes de
nitrgeno no proteico (NNP). Tampoco da informacin sobre el tipo y cantidad de
aminocidos presentes.

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DETERMINACIN DE LA MATERIA SECA A 55 C

Materiales y Equipos
Balanza de metal.
Balanza elctrica con capacidad de 20 Kg.
Estufa.
Desecador.
Bolsas plsticas.

Procedimientos
1) Identificar y pesar la bandeja a utilizar.
2) Mezclar bien la muestra, dividirla por el mtodo de los cuartetos geomtricos y
pesar en la bandeja aproximadamente 500 g.
3) Colocar la bandeja con la muestra en la estufa a una temperatura de
aproximadamente 55 C.
4) Dejar la muestra en la estufa durante un periodo de 48 h.
5) Permitir equilibrar la muestra con la temperatura ambiente y pese de nuevo.
6) Conservar la muestra en un envase hermticamente cerrado y debidamente
identificado.

Clculos
%MS (55 C)=

Peso de la muestra parcialmente seca x 100 %

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Peso de la muestra tal como se recolecto

DETERMINACION DE CENIZAS
La determinacin de cenizas consiste en la incineracin de la muestra a 600 C con el fin
de calcinar toda la materia orgnica presente. La materia inorgnica, la cual no se
destruye a esa temperatura recibe el nombre de ceniza. Esta ceniza representa la cantidad
total de minerales presentes en la muestra y es el punto de partida para los anlisis
especficos de cada uno de ellos. A partir del porcentaje de ceniza tambin se calcula el
porcentaje de materia orgnica y ELN.

Materiales y Equipos
Mufla.
Crisoles de porcelana (30 y 50 cc).
Desecadores.
Balanza analtica.

Procedimientos
1) Colocar los crisoles previamente lavados en la mufla a 650 C por una hora.
Retirar y enfriar los crisoles en un desecador a temperatura ambiente.
2) Pesar cuidadosamente los crisoles en la forma mas rpida posible, manejndolos
con las pinzas metlicas para evitar las variaciones de peso causadas por la
manipulacin.
3) Pesar en el crisol 2 g de la muestra y colocarlos en la mufla a 600 C por espacio
de 12 h.

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4) Enfriar la mufla y retirar los crisoles a un desecador valindose de pinzas

metlicas; no abrir la mufla a mas de 60 C pues los crisoles pueden colapsar por
el cambio violento de temperatura. Dejarlos enfriar y pesar.
5) Calcular el contenido de ceniza de la muestra y expresarlo como porcentaje.
Referir este valor en base a materia seca, la cual ha sido previamente determinada.
6) Una vez determinada la ceniza guardar el material para determinaciones
posteriores de minerales.

Clculos
% de C(55 C) =

Peso de la ceniza
Peso de la muestra parcialmente seca

x 100 %

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DETERMINACIN DE MINERALES
Equipos y Materiales
Crisol de porcelana.
Mufla.
Baln de 50 mL de capacidad.
Espectrofotmetro de absorcin Atmica.
Balanza analtica.

Reactivos
cido ntrico al 20 %.
Soluciones patrones de los elementos Fe, Mn, Mg, Ca, K, P, Cu, Zn, y Na.

Preparacin del extracto inicial

1) Pesar 1g de la muestra slida molida y seca.
2) Se coloca la muestra ya pesada en un crisol de porcelana.
3) Se introduce en la mufla a una temperatura de 500 C por 5 horas.
4) Apagar la mufla una vez cumplido el tiempo asignado.
5) Esperar que se enfri la mufla para extraer los crisoles.
6) Sacar cada crisol y se le agregan 10ml de cido ntrico al 20 %; mezcle
suavemente.

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7) Dejar reposar un tiempo mnimo de 12 horas (Max. 24 horas).

8) Trasvasar la solucin arrastrando con agua destilada aun baln de 50ml y enrasar
con esta.

Lecturas a realizar
1) Encender el equipo con antelacin de 15 min para la lectura.
2) Se le agrega la solucin a los viales para la toma de la lectura.
3) Preparacin de la solucin patrn de los elementos: Fe, Mn, Mg, Ca, K, P, Cu, Zn,
y Na.
4) Se presentan dos mtodos calorimtricos para la determinacin del contenido de
contenido de hierro; el mtodo de tiocianato y el de O-fenantrolina.
5) Realizar la determinacin respectiva del elemento.
6) Construir una curva patrn, e interpolar los valores de la lectura de cada muestra a
fin de calcular una concentracin de elementos en ppm.
7) Los resultados son expresados en ppm.

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DETERMINACIN DEL EXTRACTO ETEREO

La fraccin extracto etreo esta constituida por aquellos componentes del tejido animal o
vegetal que son solubles en ter. Esta fraccin incluye una amplia variedad de
compuestos orgnicos de los cuales no todos tienen significacin desde el punto de vista
nutricional. Entre los componentes de importancia en la nutricin cuantitativa estn los
triglicridos (grasas y aceites), lpidos compuestos (fosfolipidos y glucolipidos) y
provitaminas tales como los pigmentos carotenoides presentes en las plantas. Tambin se
pueden encontrar en el EE, sustancias como las ceras y otros pigmentos vegetales
(clorofila) que no son de importancia en la nutricin. Sin embargo, la mayor produccin
lo constituyen las grasas y otros lpidos, de all que los resultados de su determinacin en
ocasiones viene expresados como contenido de grasa en la muestra.
Para la determinacin del EE, el ter se calienta, se evapora y se condensa, pasando a
travs de la muestra para extraer en el todos los materiales solubles en el. Este proceso
se repite por varias horas y al final del mismo el ter es destilado y recogido en otro
recipiente y el EE obtenido se seca y se pesa.
Para esta determinacin es indispensable disponer de una muestra seca ya que la
humedad dificulta la penetracin del ter en la misma y desmejora el contacto con las
sustancias a extraer.

Materiales y Equipos
Aparato para la extraccin de grasa Goldfish.
Beacker.
Dedales de extraccin.
Tubos de recoleccin de ter.
Papel de filtro.

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Estufa.

Reactivos
ter dietlico anhidro.

Procedimiento
1) Seque los beacker en la estufa a 110 C por una hora, enfrelos a temperatura
ambiente en el desecador y pselos, manejndolos siempre con pinzas metlicas.
2) Pese 2 g de la muestra proveniente de la determinacin de materia seca.
3) Pase la muestra a un papel de filtro y colquela en el dedal de extraccin.
4) Coloque el dedal con la muestra en el soporte de metal y fjelo bajo el condensador
del aparato Goldfish.
5) Agregue de 25 a 30 mL de ter dietlico al beacker y colquelo sobre el
condensado, asegurndolo con el anillo de rosca, el cual debe ser apretado tanto
como sea posible.
6) Abra la llave del agua que enfra el condensador y suba la plancha de
calentamiento hasta ponerla en contacto con el beacker.
7) Lleve el interruptor individual a la posicin correcta y conecte el control elctrico
general del aparato.
8) Observe el beacker hasta que el ter comience a evaporarse y condensarse,
comprobando que no existe escape de cantidades apreciables de ter. Cuando el
nivel de ter en el beacker baje a un nivel constante, el aparato puede dejarse solo

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y realizarse observaciones peridicas. El periodo de extraccin ser de 4 h si la

velocidad es menor de 3 gotas por segundo.
9) Al final del periodo de extraccin, apague el interruptor central del aparato.
Remueva la muestra y coloque en su lugar el tubo de vidrio para recoger el ter.
Vuelva a colocar el beacker y suba la plancha caliente. No dejar el equipo solo, la
muestra se puede quemar.
10) Antes de que el ter se evapore completamente, baje la plancha caliente y retire el
beacker. Vaci el ter del tubo de recuperacin en un recipiente especial para
conservar el ter usado.
11) Deje el beacker sobre la mesa de trabajo por un rato para completar la evaporacin
del ter al aire. Coloque el beacker en la estufa a 110 C por 30 min y retrelo a un
desecador hasta alcanzar la temperatura ambiente.
12) Pese el beacker y calcula el peso del EE. Lleve este valor a porcentaje y reprtelo
como porcentaje en base a la materia seca de la muestra.

Clculos
Peso del EE = (peso EE + beacker) (peso del beacker)
%EE (55 C) =

Peso del EE

Peso de la muestra

x 100 %

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DETERMINACIN DE PROTEINA CRUDA

La mayor parte del nitrgeno (N) requerido por el organismo animal es utilizado en la
sistensis de protenas, tambin la mayor parte del N presente en los alimentos se
encuentra en forma de protenas, por lo tanto es conveninte y casi universal que los
requerimientos del N del animal y el contenido del N en los alimentos sea expresado
como porcentajes de protenas.
El N es el elemento caracterstico de las protenas razn por la cual se toma como base
para las determinaciones cuantitativas de las mismas. Para el anlisis del N se utiliza el
mtodo Kjeldahl y los valores obtenidos incluyan la mayora de las formas de nitrgeno
(proteico, aminocidos, nitratos, nitritos, aminas, amidas, otros). Los nitritos y ciertos
compuestos cclicos requieren de tcnicas especiales.
La protena se calcula multiplicando el contenido de nitrgeno de la muestra por un
factor de conversin que varia de acuerdo al contenido de este en el peso molecular de la
protena. Generalmente se toma el factor 6.25 debido a que se considera que el nitrgeno
constituye en promedio 16 % del peso molecular de las protenas. Al valor calculado se
le da el nombre de protena cruda.
El termino PC comprende tanto la protena, como aquel material nitrogenado no
proteico. Desde el punto de vista de la alimentacin animal, este valor es aplicable
directamente a la alimentacin de los rumiantes, los cuales pueden utilizar
eficientemente casi todas las formas de N. Para las especies no rumiantes la PC no tiene
el mismo valor ya que estas especies tienen requerimientos especficos de aminocidos y
prcticamente no utilizan los compuestos nitrogenados no proteicos.
El procedimiento Kjeldahl para la determinacin de N se basa en la digestin de una
muestra con cido sulfrico concentrado en ebullicin, lo cual transforma el N de las
protenas y otros compuestos en una sal estable que es el sulfato cido de amonio. El

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resto de la materia orgnica se convierte en anhdrido carbnico, sulfuro y agua. Una vez
terminada la digestin, el residuo se enfra, se diluye con agua y se agrega hidrxido de
sodio concentrado. El amoniaco que se desprende se destila y recibe en una solucin de
cido brico, la cual contiene una solucin indicadora (dos indicadores). Luego se titula
con cido sulfrico estandarizado hasta lograr el punto de cambio.
Otro procedimiento alterno es el que utiliza cido sulfrico o cido clorhdrico
estandarizado para recoger el amoniaco y una base estandarizada (NaOH) para titular el
cido en exceso.

Materiales y Equipos
Aparato de digestin y destilacin macro y micro TECATOR.
Tubos macro y micro TECATOR.
Frascos Enlermeyer de 250 mL.
Buretas.

Reactivos
cido sulfrico concentrado 93-98 % grado reactivo.
Solucin de hidrxido de sodio (40 %), libre de nitrgeno.
Mezcla catalizadora.
Zinc en grnulos.
Solucin indicadora.
Solucin de cido brico al 4 %.
Solucin de cido clorhdrico estandarizado (0.1 N).

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Procedimientos
1) Pese 1000g (macro) o 0.350 (micro) de la muestra sobre papel de aluminio.
2) Transfiera cuantitativamente la muestra al tubo de digestin.
3) Agregue 7 g de la mezcla catalizadora al tubo de digestin y luego adicione 12 mL
(macro) o 6ml (micro) de cido sulfrico concentrado.
4) Fije la campana de extraccin de humo sobre el extremo superior del tubo y
colquelo en el digestor precalentado a 420 C. Coloque las pantallas reflectoras
de calor alrededor de los tubos y encienda el aparato neutralizador de vapores o el
grifo de vaci.
5) Digiera la muestra durante 30 min o hasta que la solucin se tome clara. Remueva
la campana de extraccin de humo y coloque el tubo en el soporte de enfriamiento.
6) Cuando el tubo este fro, agregue 75 mL (macro) o 25 mL (micro) de agua
destilada y mezcle bien para disolver los cristales formados, luego djelo enfriar a
temperatura ambiente. En este punto el proceso puede ser interrumpido por el
tiempo que se desee; sin embargo, es recomendable mantener tapados los tubos.
7) Agregue 25 mL (macro) o 20 mL (micro) de solucin de cido brico con solucin
indicadora al frasco Erlenmeyer de 250 mL y colquelo en la plataforma de la
unidad de destilacin.
8) Ponga a funcionar el sistema de destilacin. Fije el tubo de digestin al soporte del
destilador y dispense 50 mL (macro) o 25 mL (micro) de hidrxido de sodio
concentrado (40 %). Destile durante 5 min o hasta obtener un volumen de 100 mL
en el frasco Erlenmeyer.

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9) Cuando se haya completado la destilacin, baje la plataforma donde esta colocado

el frasco Erlenmeyer de manera que el extremo final del tubo de condensacin
quede fuera de la solucin. Apague el destilador, descarte el contenido del tubo de
digestin y remueva el Erlenmeyer de recepcin para la titulacin.
10) Deje enfriar la solucin destilada y titule el amoniaco recogido usando cido
clorhdrico estandarizado 0.1 N hasta obtener un color morado tenue.

Clculos
Calculo del porcentaje de nitrgeno
% N = mL cido titulacin x 0.1 N x 0.01401 x 100 %
Peso de muestra
Conversin del porcentaje en N a PC
% PC = % N x 6.25

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DETERMINACIN DE NITRGENO (PROTEINA CRUDA)

EN RACIONES
Mtodo propuesto por Bilbao et. al., (1999).

Reactivos
Solucin de Digestin: Un litro de cido sulfrico concentrado (H2SO4).
Soluciones

Patrones:

Prepare

soluciones

que

contengan

las

siguientes

concentraciones de sulfato de amonio anhidro [ (NH4)2SO4 ]: 1,576; 3,1433; 6,2858;

9,4229; 12,5725 y 15,7158 gramos / 100 mL. Estas soluciones contienen 0,5; 1,0;
2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mg de nitrgeno / 150 L de solucin patrn, que el volumen a
ser usado en la curva patrn.
Reactivos de color:
a) Solucin de Fenol-Nitroprusiato: Disuelva 100 mg de nitroprusiato de sodio
en 1litro de fenol al 5 % (50 g de fenol en 1litro de agua destilada).
b) Solucin de Hipoclorito de Sodio Alcalino: Mezclas 250 mL de NaOH 2.5 N
(100 g NaOH / litro) con 40 mL de hipoclorito de sodio al 25 % (se puede usar
el cloro) y lleve a un litro con agua destilada. O usar 25 g de NaOH con 20 mL
de cloro todo en un litro de agua destilada.
NOTA: Guardar esta solucin en botella oscura a 4 C.

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Procedimiento
1) A tubos de 16x150 mm, aada 50 mg de muestra y 2 mL de solucin de digestin.
A los tubos que contendrn la solucin patrn aada 50 L de esta solucin en
lugar de la muestra.
2) Agregue a los tubos 10 gotas de cido perclrico (HCLO4).
3) Prenda la plancha de calentamiento y coloque los tubos en los bloques cuando la
plancha alcance una temperatura entre 170 y 220 C.
4) Inmediatamente

despus de colocar los tubos, agtelos

continuamente,

comenzando por el primero que coloco en la plancha, esencialmente los que

contienen la muestra, durante los primeros 5min de calentamiento; despus agite
peridicamente y aumente la temperatura hasta no mas de 220 C por 1.5 a 2.5
horas.
5)

Cuando las muestras y patrones estn incoloras, agitar vigorosamente, para

comprobar que todo el cloro se ha evaporado (que no aparezca color amarillo).

6) Saque los tubos de los bloques y espere 10 min; luego enfre los tubos hasta
temperatura ambiente y aada lentamente por las paredes del tubo 5 mL de agua
destilada, agitando continuamente. Vuelva a enfriar los tubos a temperatura
ambiente.
7) Tome una alcuota de 400 L de cada uno de los tubos transfirindolas a tubos de
16x150 mm. Aada 5 mL de agua destilada y agite bien usando el vortex.
8) En tubos de 16x150 mm tome 200L, para el desarrollo de color, aada 2 mL de la
solucin de nitroprusiato de sodio en fenol y despus 2 mL de la solucin de
hipoclorito alcalino, agite bien (el orden de los reactivos es importante).

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9) Incube en un bao de agua por 20 min a 37 C y lea la absorbancia a 625 nm

contra un blanco que contenga los dos reactivos de color.

Clculos
% protena en la racin = (mg de Nx100x0.1x6.25)/(WxC)
donde:
mg de N = mg de nitrgeno en la muestra ledos directamente de la curva patrn.
W = Peso de la muestra empleada en la digestin expresados en mg, en este caso 50
mg.
C = Volumen de muestra usada en el desarrollo de color expresado en mL.

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ANLISIS DE VAN SOEST

Como consecuencia de las dificultades para la interpretacin de las fracciones del

anlisis Weende que incluyen los carbohidratos presentes en una muestra, representados
por la FC y el ELN, especialmente en el caso de los forrajes tropicales y por su
importancia en la alimentacin de los rumiantes se han realizado esfuerzos tendientes a
reemplazar este sistema de anlisis por otros mas confiables.
Entre los diversos procedimientos sugeridos, solamente consideramos el mas importante
y cuyo uso se a generalizado casi universalmente. Este procedimiento es conocido como
anlisis de Van Soest (1965-1994).
El Anlisis o mtodo Van Soest fue desarrollado utilizando soluciones detergentes,
basndose en el principio de que la materia seca puede ser fraccionada en dos porciones,
una rpidamente disponible al animal, representada por el contenido celular y otra
parcialmente disponible, representada por la pared celular, cuyos constituyentes se
determinan como Fibra cido Detergente (FAD) y Fibra Neutra Detergente (FND).

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DETERMINACIN DE LA FIBRA INSOLUBLE EN

DETERGENTE NEUTRO (FND)
El procedimiento qumico para determinar la FND consiste en digerir la muestra con una
solucin buffer que contiene un detergente aninico. Este divide la materia seca del
alimento en dos fracciones: una soluble, que es el contenido celular y otra insoluble,
constituida por la pared celular.
Los constituyentes de la pared celular FND son los componentes fibrosos de la planta:
celulosa, hemicelulosa y lignina, solo o en combinaciones como nitrgeno- hemicelulosa
o lignocelulosa.
El contenido celular esta integrado por almidn, carbohidratos solubles, pectinas,
nitrgeno no proteico, nitrgeno proteico, lpidos y componentes solubles en agua
incluyendo minerales y vitaminas.
Los constituyentes del contenido celular son parcialmente a bien utilizados tanto por
rumiantes como no rumiantes. Sin embargo, los componentes de la fraccin pared
celular son parcialmente utilizables o completamente indigestibles y su degradacin
solamente es posible a travs de un proceso de fermentacin microbiana.

Materiales y Equipos
Aparato de reflujo: Plancha de calentamiento y bloque de metal de 36 orificios.
Tubos de Tylor, con capacidad de 50 mL.

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Crisoles de vidrio esmerilado de porosidad gruesa (C), con capacidad de 50 mL.

Sistema de vaci para filtracin.

Reactivos
Solucin neutra detergente: Agregue 30 g de sulfato laurino de sodio USP; 18.61g
del reactivo etileno diamino tetra acetato disodico dihidrogenado; 6.81g de borato
de sodio decahidratado; 4.56 g de fosfato disodico hidragenado anhidro y 10 mL de
2-etoxietanol (etilenglicol, ter monoetilico grado purificado), en un litro de agua
destilada. Agtese hasta disolver y controle el pH entre 6.9 y 7.1.
Decahidro nafteno (Decalin) grado tcnico.
Acetona grado libre de color, que no deje residuo al evaporarse.
Sulfito de sodio, grado reactivo.

Procedimiento
1) Pese por diferencia aproximadamente 350 mg de muestra, y depostelo en un tubo
de Tylor para iniciar el reflujo.
a)

Agregue en el orden sealado los siguientes reactivos:

b)

35 mL de solucin detergente a temperatura ambiente.

c)

2 mL de decahidronaftaleno (Decalin).

d)

0.5 g de sulfito de sodio anhidro.

2) Caliente la plancha hasta una temperatura entre 128 y 130 C. Reduzca la

temperatura una vez que comience la ebullicin para solucin hervida entre 110 y

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115 C, a un nivel constante. Mantenga el reflujo por 60 min, contados a partir del
instante en que la solucin comienza a hervir.
3) Coloque el crisol previamente tarado en el aparato de filtracin con succin al
vaco. Agite el tubo para suspender el material slido y filtre la solucin en
caliente. Use poco vaco al principio, aumentndolo a medida que sea necesario.
Lave la muestra utilizando un mnimo de agua caliente (80 C). Una vez concluido
este paso suspenda al vaco.
4) Lave la muestra dos veces con acetona y squela con el vaco.
5) Seque el crisol a 110 C durante toda la noche. Enfre en un desecador y pese.

Clculos
% FND = Peso FND
Peso muestra

x 100 %

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DETERMINACIN DE LA FIBRA ACIDA DETERGENTE (FAD)

Los constituyentes de la pared celular pueden a su vez ser subdivididos por digestin
con una solucin cida que contiene un detergente cationico, el cual hidroliza adems de
la hemicelulosa libre los complejos nitrgeno-hemicelulosa, dejando la fibra cida
detergente (FAD), la cual al ser tratada con cido sulfrico al 72 % permite una posterior
divisin en lignina y celulosa.

Materiales y equipos
Aparato de reflujo: Plancha de calentamiento y bloque de metal con 36 orificios.
Tubos de Tylor con capacidad para 50 mL.
Crisoles de vidrio esmerilado de porosidad gruesa con capacidad para 50 mL.
Sistema de vaco para filtracin.

Reactivos
Solucin cida detergente: cido sulfrico grado reactivo estandarizado a 1 N. (Se
prepara agregando 49.04 g de H2SO4 por litro de agua destilada).
Decalin ( decahidronaftaleno).
Acetona grado reactivo.
Hexano grado reactivo.

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Procedimientos
1) Pese aproximadamente 350 mg de muestra y depostelo en un tubo de Tylor.
2) Agregue 35 mL de la solucin cida detergente a temperatura ambiente y 2 mL de
decahidronaftaleno (Decalin).
3) Caliente la plancha hasta una temperatura entre 128 y 130 C. Una vez que se
inicie la ebullicin baje la temperatura (entre 110 y 115 C) para evitar la
formacin de espuma. Mantngase en reflujo constante por 60 min contados a
partir del inicio de la ebullicin, la cual debe ser lenta durante todo el
procedimiento.
4) Filtre la solucin en un crisol previamente tarado y lave dos veces con agua
caliente (90 -100 C). Lave los lados del crisol de la misma manera.
5) Repita igualmente el lavado con acetona hasta que desaparezca totalmente el color,
rompiendo cualquier grumo que se haya formado para que el solvente entre en
contacto con todas las partculas de fibra.
6) Lave la muestra con hexano mientras contenga algo de acetona ( el hexano puede
omitirse si la formacin de grumos no constituye problema).
7) Mantenga la muestra bajo succin hasta que se elimine el hexano.
8) Seque los crisoles a 110 C por 8 h o durante toda la noche. Enfre en un desecador
y pese.

Clculos
% FAD (BSA) =

Peso FAD

x 100 %

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Peso muestra

DETERMINACIN DE PH
Materiales y Equipos
Beackers de 50 mL.
Pizeta.
pH-metro porttil, marca BOECO, modelo PT-40.
Agua desionizada.
Acetona pura o alcohol etlico o metilico puro
Solucin amortiguadora de pH=7.

Procedimientos
1) Calibrar el equipo de medicin en la solucin amortiguadora en un pH=7 antes de
medir la solucin formada.
2) Medir el pH colocando el electrodo en el aceite hasta tener una lectura uniforme
sin fluctuaciones.
3) Luego de realizar la medida de la muestra correspondiente, lavar el electrodo
primero con acetona o alcohol y luego con agua desionizada a continuacin,

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colocarlo en la solucin amortiguadora para su posterior calibracin mientras se

prepara la muestra siguiente.

DETERMINACIN DE ENERGA BRUTA (EB)

La energa bruta (EB) es la cantidad de calor medida en cal / g, Kcal / g o Mcal / Kg que
resulta de la oxidacin completa de una muestra de alimento u otra sustancia (heces,
orina, etc.).
Para la determinacin de la EB se utiliza un aparato llamado Bomba Calorimtrica, en la
cual el valor de energa de una muestra se obtiene mediante la combustin total de la
misma en una atmsfera saturada de oxigeno. Cuando la muestra se a quemado
completamente, el calor producido eleva la temperatura del agua que circunda el
recipiente donde se encuentra la muestra y el aumento de esta temperatura proporciona
la base para el calculo de la EB.
El valor de EB de un alimento tiene poca aplicacin por si mismo; sin embargo, es
necesario para determinar la energa digestible de los alimentos o raciones, mediante la
evaluacin de la energa contenida en el alimento o racin y la energa de las heces
correspondientes al mismo.

Materiales y Equipo
Bomba calorimtrica Parr y sus accesorios (calormetro).

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Prensa para la elaboracin de Pastillas.

Balanza analtica.
Balanza de pesar soluciones con capacidad para 300 g.

Reactivos
Solucin estandarizada de carbonato de sodio, equivalente a 1cal / ml. (3.658 g de
carbonato de sodio por litro).
Indicador anaranjado o rojo de metilo.

Procedimiento
1) Pese aproximadamente un gramo de la muestra a ser analizada y elabore el pellet
en la prensa.
2) Cheque que el peso de la muestra no sea mayor a 1.5 g.
3) Coloque la muestra en una cpsula de combustin limpia.
4) Use un alambre de fusible aproximadamente 10 cm de longitud entre los
electrodos del cabezal de la bomba y coloque la cpsula de combustin con la
muestra en el electrodo de lazo. Ajuste el alambre fusible para que este en contacto
con la muestra.
5) Cloque aproximadamente 1ml de agua en el cilindro de la bomba y rtelo con el
fin de humedecer las paredes internas. Este paso no es necesario si la bomba se
encuentra aun hmeda de la determinacin previa.
6) Antes de encender el calentador mueva el interruptor de control manual del
calormetro a la posicin de caliente para permitir que circule agua desde el
calentador hasta la cmara.

93

7) Encienda el calentador y espere 10 min hasta que alcance la temperatura fijada.

Durante este periodo mueva el interruptor de control manual a la posicin de fro y
contine llenando la cmara hasta que aparezca el agua en el tubo de desage.
8) Ensamble la bomba ajustando la tapa de rosca, luego cierre la vlvula de escape de
presin y llnela de oxigeno a 25 atm.
9) Pese 2000 g de agua destilada (use un frasco volumtrico de 2000 mL) y virtala
en el balde. Coloque el balde en el calormetro e introduzca dentro la bomba,
conectando los alambres de ignicin al cabezal de la misma.
10) Cierre la tapa del calormetro teniendo la precaucin de que los termmetros estn
levantados. Baje los termmetros, ajuste los lentes de lectura y ponga a funcionar
el motor de circulacin del agua.
11) Ajuste la temperatura del agua de la cmara para que esta sea aproximadamente
igual a la del balde. Esta operacin se logra con la adicin de agua caliente o fra
segn sea necesario.
12) Usando el control manual lleve la temperatura del agua de la cmara a 2 grados
por encima de la temperatura del agua del balde. En este punto debe estar
encendida la luz que indica alto flujo de agua caliente (primera luz a la derecha o
luz roja). En este punto la luz blanca y mbar (luz del centro) deben encender
alternativamente. Si esto no sucede se debe ajustar los flujos de agua con la
vlvula respectiva, chequeando primero la vlvula de agua fra de manera que este
abierta al menos en dos vueltas completas y luego abriendo y cerrando la vlvula
de agua caliente.
13) Vibre el termmetro del balde, lea y anote la temperatura del agua del balde y de
la cmara, las cuales no deben diferir en mas de 0.02 C. Si esto sucede reduzca la
diferencia moviendo el botn de balance de control.

94

14) Lea y registre la temperatura inicial con aproximacin de 0.0002 C y luego

presione el botn de ignicin para que se produzca la incineracin de la muestra.
Cuando ocurra la ignicin el operador debe mantenerse alejado del calormetro al
menos durante los 30 seg siguientes.

15) Luego de 6 minutos vibre el termmetro del balde y lea la temperatura con
intervalos de un minuto, hasta que alcance la temperatura mxima que permanezca
constante al menos dos minutos. Registre la ultima temperatura (temperatura
final).
16) Suba el termmetro, deslice la tapa del calormetro y saque el balde del mismo,
permitiendo que el motor continu en la posicin de corrida (Run). Luego
mueva el interruptor a la posicin de purga.
17) Saque la bomba del balde y moviendo la vlvula respectiva libere el oxigeno
lentamente (no menos de un minuto).
18) Destape la bomba, observando si la combustin fue completa. Enjuague toda la
superficie interna con agua destilada y recoja la solucin en un beacker limpio.
Para determinar la cantidad de cidos formados provenientes de la oxidacin
incidental de compuestos nitrogenados y azufrados, titule el agua del lavado con
solucin estandarizada de carbonato de sodio (0.0725 N), empleando el indicador
anaranjado o rojo de metilo. Se realiza esta correccin para tomar en cuenta el
calor que ha sido liberado en la formacin de los cidos.
19) Retire de los electrodos las piezas de alambre que no se quemaron y mida la
longitud total en cm. Reste el resultado obtenido de los 10 cm iniciales de alambre.

95

20) Corrija las temperaturas inicial y final con el uso de la curva calibrada que viene
con el termmetro del calormetro.
21) Aplique la formula para obtener el valor de energa bruta y exprselo en cal / g.

Clculos
EB=(Tf iTi n)(2405cal/C)(cm alambre fundido*2.3cal/cm)(mL d Na2CO3*1cal / mL)
Peso de la muestra (g)

DETERMINACIN DE ALMIDONES TOTALES

Materiales y Equipos

Tubos de ensayo.

Tubos de centrfuga.

Baln aforado de 100 mL.

Balanza electrnica ACCULAB con capacidad de 200 mg.

pH-metro porttil, marca BOECO, modelo PT-40.

Bao de mara.

Micropipetas de 100 y 900 L.

Estufa.

Reactivos

Solucin de -amilasa: Pesar 65 mg de la enzima -amilasa y aadirla en un

baln aforado de 100 mL. Aparte, preparar una solucin de agua destilada cuyo pH
este entre 6 y 7 y luego aadrsela al baln que contiene la enzima previamente
pesada hasta enrasar.

96

Procedimiento
1) Pesar en un tubo de ensayo 350 mg de la muestra a la cual se le extrajo el aceite
(muestra residuo del extracto etreo).
2) Aadir 3 mL de agua destilada y colocar la solucin en un bao de mara por 1 h a
40 C.
3) Centrifugar a 5000 r.p.m. durante 15 min.
4) Separar el precipitado del liquido sobrenadante.
5) Colocar en una estufa por 48 h a 60 C.
6) Tomar el peso la muestra.
7) Aadir 100 L de la enzima -amilasa y 900 L de agua destilada a la muestra
secada del paso 6. Luego, colocar esta solucin en un bao de mara por 24 h a
40C.
8) Centrifugar a 5000 r.p.m. durante 15 min.
9) Separar el liquido sobrenadante.
10) Colocar en una estufa por 48 h a 60 C.
11) Tomar el peso la muestra.

Clculos

97

Masa de almidn = (masa de la muestra pesada en el paso6 - masa de la muestra pesada

en el paso11)
% AT =

(masa de almidn) x100 %

masa inicial de la muestra

MEDICIONES DE FENOLES Y TANINOS TOTALES USANDO EL

METODO DE FOLIN-CIOCALTEU

De acuerdo a Makkar et al., (1993), el mtodo para fenoles totales es til pata conocer lo
eficiente de la extraccin de fenoles en solventes. Este mtodo puede ser acoplado con el
uso de la matriz insoluble, polyvinyl polypyrrolidone (PVPP; adhiere taninos fenolicos)
para mediciones de taninos. Los resultados pueden expresarse como equivalentes de
cido tanico.

Reactivos

Reactivo de Folin-Ciocalteu (1 N): Diluya el reactivo de Folin-Ciocalteu

comercial disponible (2 N) con un volumen igual de agua destilada. Transfiera a
una botella mbar y almacene en un refrigerador a 4 C. Esta debera presentar
una coloracin dorada. No usar si es de color verde oliva.

Carbonato de sodio al (20 %): Pese 40 g de carbonato de sodio decahidratado,

disuelva con 150 mL de agua destilada y luego enrase a 200 mL con agua
destilada.

Polyvinyl polypyrrolidone insoluble (PVPP).

98

Solucin estndar de cido tanico (0,1 mg / mL): Disuelva 25 mg de cido

tanico en 25 mL de agua destilada y diluya 1:10 en agua destilada.

Preparacin de la curva de calibracin

Tubo

Sol.

de

cido Agua

Reactivo de Solucin

de Absorbancia cido

tanico (0,1 mg / destilada

Folin

carbonato

de en 725 nm

mL)

(mL)

sodio

mL

mL
Blanco
T1
T2
T3
T4
T5

tanico
(g)

(mL)
0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10

0,50
0,48
0,46
0,44
0,42
0,40

0,25
0,25
0,25
0,25
0,25
0,25

1,25
1,25
1,25
1,25
1,25
1,25

0
0,112
0,218
0,327
0,432
0,538

0
2
4
6
8
10

Anlisis de fenoles totales

Tome una alcuota adecuada de extracto que contiene los taninos(pruebe inicialmente
con 0,02; 0,05 y 0,1 mL) en un tubo de ensayo, agregue la cantidad de agua destilada
hasta completar 1 mL. Agregue 0,5 mL del reactivo de Folin-Ciocalteu y luego 2,5 mL
de la solc. de carbonato de sodio. Se debe controlar la temperatura de los tubos entre 18
y 25 C. Medir la absorbancia en una longitud de onda 725 nm despus de 40 min.
Calcule la cantidad de fenoles totales como equivalentes de cido tanico utilizando la
curva de calibracin. Exprese el contenido de fenoles totales como porcentaje en base
seca.

99

Ejemplo:
Para 50 L del extracto que contiene los taninos se registra una lectura de absorbancia de
0,531 = 9,896 g equivalentes de cido tanico (TA) (segn la curva de calibracin).
Por lo tanto, 1 mL de extracto tiene 9,896 / 0,05 = 197,9 g de TA = 0,198 mg de TA
200 mg de muestra de hoja fueron extrados en 100 mL de solvente.
Por lo tanto 100 mg de hojas contienen 0,198*5 = 0,99 mg de TA o 100 g de hoja tienen
0,99 g de TA.
Si las hojas contienen 95 % de MS entonces los taninos.
% X = TA in MS = 0,99 / 0,95 = 1,04 %.

Remocin de taninos
Pese 100 mg de PVPP colquelos en tubo de ensayo de 100x12 mm aadir 1 mL de agua
destilada y 1 mL del extracto que contiene los taninos y vorterizar, luego coloque los
tubos por 15 min en un bao de agua fra (4 C). Retire los tubos y centrifugue 3000
r.p.m por 10 min del sobrendante, tomar el doble o el triple de lo aadido en la prueba
de fenoles totales. Agregue agua destilada hasta completar 1 mL. Coloque en los tubos
de ensayo 0,5 mL de la soluc. de Folin-Ciocalteu y 2,5 mL de carbonato de calcio
conservando este orden en los reactivos. Colocar en un bao fro (entre 18 y 20 C),
realizar las lecturas de absorbancia luego de haber transcurrido 40 min. Expresar el
contenido de fenoles no tanicos en base seca.
Ejemplo:
Para 100 L del sobrenadante tratado con PVPP se registra una lectura de absorbancia de
0,312 = 5,75 g equivalentes de cido tanico (TA) (segn la curva de calibracion).
Por lo tanto, 1 mL de sobrenadante = 5,75 / 0,1 = 57,54 g de TA = 0,058 mg de TA
10 mg de muestra de hoja contienen 0,058 mg de TA.

100

Por lo tanto 10 mg de hojas contienen 0,058*10 = 0,58 mg de TA.

Si las hojas contienen 95 % de MS entonces los taninos.
% Y = TA in MS = 0,58 / 0,95 = 0,611 %.
Los taninos (como equivalentes de cido tanico) = % X - % Y = (1,04 - 0,611) % = 0,43
% en BS.

DETERMINACIN DE LA DENSIDAD DEL ACEITE

Para el anlisis de densidad, se propuso el siguiente mtodo: se tomo un volumen de 240

L de aceite, luego este volumen fue colocado en un beacker pequeo previamente
tarado en la balanza; a continuacin, se tomo la lectura del peso de dicho aceite. Este
procedimiento fue realizado por muestra a la misma temperatura.
La densidad viene dada por la siguiente formula:
D = masa leda del aceite
0.24 mL

DETERMINACIN DE LA DENSIDAD DEL FRUTO MADURO

Para el anlisis de densidad, se propuso el siguiente mtodo: inicialmente se pesa el fruto

maduro, luego se introduce en un cilindro graduado con un volumen inicial de agua de
40 mL, posteriormente se mide el volumen final de la mezcla. Este procedimiento fue
realizado para 25 frutos maduros por muestra.

101

La densidad viene dada por la siguiente formula:

D=

peso del fruto maduro

(40 mL - volumen final de mezcla)