UniversidaddeSantiagodeChile.

FacultaddeQumicayBiologa.
LaboratoriodeInmunologadelaReproduccin

Prcticon6
MetabolismoEnergtico

Integrantes:CamilaBaezaDaz
XimenaCortsHidalgo
IsidoraMolinaRiquelme
Carrera:IngenieraenBiotecnologa
Ramo:LaboratorioBioqumica
Profesora:PatriciaReuquenLopez
Fechaentrega:30dediciembre2015

Introduccin

El metabolismo se define comola totalidad de lasreacciones qumicas catalizadas

enzimticamentequeseproducendemanerareguladaysimultneaenelinteriorde
las clulas de unorganismovivo. Elmetabolismo se divide encatabolismo,que se
refiere a lasreacciones degradativas, y anabolismo, que se refiere alasreacciones
de biosntesis. El catabolismo es el proceso mediante el cual los nutrientes
(carbohidratos, lpidos y protenas) provenientes del medio ambiente o de
almacenajecelular, puedenser degradadosa molculas mssencillas comoloson
el cido lctico, etanol, CO
2 o urea. Este proceso se realiza con liberacin de
energa que luego se conservaenformadeATP.Porotraparte,elanabolismoesel
conjunto de reacciones en donde molculas precursoras se unen para formar
macromolculas componentesde lasclulas, como polisacridos,cidosnucleicos,
protenasylpidos. Estas reaccionessellevan a cabo congastodeenerga,quees
proporcionadaporlahidrlisisdelATP.[1]

La gliclisis es uno de los cientos de procesos que se llevan a cabo en el

organismo, y su finalidad es obtener energa a partir de losnutrientes mediantela
oxidacin de la glucosa. Esta consta de diez pasos en los que la glucosa es
fosforiladayoxidada, para finalmente obtener una ganancia neta de dosmolculas
de piruvato a partir de una molcula de glucosa. Este procedimiento es
independiente de la presencia de oxgeno, sin embargo esta condicin ser
determinante para la ruta de reacciones que seguir el piruvato. En condiciones
aerbicas elpiruvatoseconvertirenacetilCoA, para ser procesadoenel ciclode
Krebs, y asposteriormente habr movimiento deelectroneshastaeloxgenocomo
aceptor final, que ser oxidado completando el ciclo de la respiracin celular. En
condiciones anaerbicas el piruvato puede convertirse en cido lctico, proceso
llamado fermentacin lctica, o en etanol y CO
2 , proceso conocido como
fermentacin alcohlica. Estas reacciones anaerbicas no tienen como finalidad
obtener energaparala clula, sinoquerecuperarlasmolculasdeNAD+reducido
paracontinuarrealizandolagliclisis.[2]

Las levaduras son organismos eucariotas clasificados como hongosmicroscpicos

unicelulares, que tienen la capacidad de realizar la descomposicin de diversos
nutrientes, especialmente los hidratos de carbono, mediante la fermentacin
alcohlica. En el caso de que el sustrato sea un hidrato de carbono, se pueden
cultivaren unmedioconfructosa,glucosaosacarosa,paraobtenercomoproductos
finales un alcoholenforma de etanol, dixido decarbonoy dosmolculasdeATP.
Esteprocesosepuederepresentarpormediodelasiguientereaccinqumica:[3]

C
H
O
+2P
+2
ADP
2CH
CH
OH+2CO
+2
ATP
6
12
6
i
3
2
2

Acontinuacin se experimentarcon levaduraendiferentesmedios decultivo,para

determinar lacantidadformadadeCO
2porfermentacinylavelocidaddeformacin
deeste.

Materialesymetodologa.

Materiales

4Pipetasde2mL
4tubosdeensayo
Micropipetade1000L

Reactivos

Solucindesacarosa10%p/v
Solucindeglucosa10%p/v
Solucindefluorurodesodioal3%p/v
Suspensindelevadura

Procedimiento

Prepararen4tubosdeensayoslassolucionesqueseexpresana
continuacin:

Tubo1

3mLsolucindesacarosa(10%p/v)
1mLagua
4mLsuspensindelevadura

Tubo2

3mLdesolucindeglucosa(10%p/v)
1mLdeagua
4mLsolucindelevadura

Tubo3

4mLdeagua
4mLdesuspensindelevadura

Tubo4

1mLdeFluorurodesodio(3%p/v)
3mLdesolucindeglucosa(10%p/v)
4mLdesolucindelevadura

Sellarextremoinferiordelas4pipetasconparafilm. Extraer1mLdesolucin
decadatuboyverterenlaspipetas.
Sellar extremosuperior de laspipetas con parafilm para apreciarel volumen
degasformadoporlafermentacindelaslevaduras.
RegistrarvolumendegasCO
producidocada5minutospor20minutos.
2
Graficarcantidaddegasformadovseltiempo.
Calcularvelocidaddeformacindelgas.

Resultados.

Se prepararon 4 tubos paraincubar levaduraendiferentesmedios,yseregistr el

volumen inicial de la solucin y el volumen final de la solucin considerando las
burbujas formadas que no fuesen posibles de reventar al cabo de 5, 10, 15 y 20
minutosdeincubacinobtenindoselossiguientesdatos:

Minutos

Ntubo

0min

5min

10min

15min

20min

0,8mL

1,05mL

1,20mL

1,31mL

1,37mL

0,85mL

1,05mL

1,22mL

1,34mL

1,42mL

0,80mL

0,80mL

0,80mL

0,80mL

0,80mL

1,23mL

1,23mL

1,23mL

1,23mL

1,23mL

Tabla 1: Volumen de solucin total en cada tubo luego de 5, 10, 15 y 20 minutos de

incubacindelalevaduraaTambiente(25C).

Conlosdatosanteriores,secalculanlosvolmenesdeformacindeCO
:
2
Minutos

Ntubo

5min

10min

15min

20min

0,25

0,15

0,11

0,06

0,2

0,17

0,12

0,08

Tabla 2: Volumen formado de CO

2 en cada tubo luego de 5, 10, 15 y 20 minutos de
incubacindelevaduraaTambiente(25C).

Luego de graficar1 losvaloresdevolmenesdeformacinseobtienelaecuacinde

la rectadelostubos1y2,enlascualeslapendienterepresentalaconcentracinde
lasmuestras.
EjemplodeclculodelaconcentracindeCO
deltubo1alos5minutos:
2
y=0,008x+0,225
0,25=0,008*C+0,225
0,025=0.008*C
C=3,125milimoles
Losgrficos1y2ylastablasdeconcentracinyvelocidaddeformacindeCO
seencuentranenel
2
anexo.
1

Apartir delos moles deCO

enrazndeltiempodeformacin,seobtiene
2formados

lavelocidaddeformacin:
Vo=3,125milimoles/5min
Vo=0,625[mM/min]
A continuacin se presentan los grficos que relacionanlos datos obtenidosycon
los cuales se busca calcular la velocidad y la concentracin de los tubos en los
distintostiempos.

Grfico 1: Formacin de CO
2 en el tiempo en tubo 1. La ecuacin de esta recta est
representadapory=0,008x+0,225ylacorrelacinesdeR=0,9877.

Grfico 2: Formacin de CO
2 en el tiempo en tubo 2. La ecuacin de esta recta est
representadapory=0,0082x+0,245ylacorrelacinesdeR=0,9917.

Discusin.

De acuerdo a los volmenes obtenidos de CO

2 formado, se aprecia un
estancamiento en los tubos 3 y 4. Esto se debe a que, en el tubo 3, slo existe
levadura en presenciade agua por lo que no tieneun medioricoennutrientespara
poderdesarrollarse y llevaracabolafermentacinalcohlica,yporconsiguienteno
habr formacin de este gas. De igual forma en el tubo 4, la levadura si est en
presencia de un medio rico en glucosa, pero tambin est presente el compuesto
fluoruro de sodioeste compuestoensolucinacuosasedisociaformandolosiones
+
Na
y F
. Esteltimoion,elfluoruro,seuneafosfatosinorgnicos,generandoasun
complejo que se ubicar en el sitio activo de la enolasa, inhibiendo
competitivamente su actividad. La enolasa es una enzima que participa en la
novena etapa de la gliclisis permitiendo que el 2fosfoglicerato se convierta en
fosfoenolpiruvato liberando una molcula de agua, por loquesi esta estinhibida,
no habr formacin depiruvatoyas a suvezserimposible realizarfermentacin
etanlica,pueselpiruvatoeselprecursordeesteprocesometablico.

En el caso de los tubos 1 y 2, la levadura se encontraba en un medio rico en

glucosa y fructosa, y no exista presencia de inhibidores, por lo que s se llev a
cabo la gliclisis y posteriormente la fermentacin etanlica. Esto se puede
comprobar observando la variacin de volumen formado del gasCO
2 en el tiempo
analizado. En el transcurso de 20 minutos de incubacin, se produjeron deltas de
volumenquedisminuanconeltiempo,esporesoqueenlosgrficos1y2(anexos)
sepresentanrectasconpendientenegativa.Estapendienteesdemasiadopequea,
por loque se podraconsiderarqueelvolumendeformacindeCO
2enestostubos
novaraconsiderablemente.

Utilizando lasrelacionesestequiomtricasentregadasen laintroduccin,es posible

calcular tericamente la cantidad mxima de moles deCO
2 que se producir tanto
en el tubo 1 y en el tubo 2. Debido a que la sacarosa eventualmente ser
transformada en glucosa y que ambas fueron agregadas en cantidades similares
(soluciones con %10 p/v) los clculos son iguales para ambos casos. Segn la
3
estequiometra deberan esperarse como mximo 3,33 x 10
moles de CO
, no
2
obstante, nuestros clculos arrojan ms que eso, cosa que no puede ocurrir. No
obstante, debido a las caractersticas poco precisas de este laboratorio, puede
atribuirse este inconveniente a un error de medicin y a la faltade materiales ms
precisos.

Utilizando la frmula de los gases ideales (PV=nRT) es posible obtener los moles
quesegeneraran encondiciones ideales depresin ytemperatura.Estosdatosno
son comparables a los nuestros, dado a que carecemos de los datos exactos de
temperatura y presinaloscualesserealizaron lasmediciones,ademsdecarecer
de un instrumento que permitiera calcular elvolumen generadode maneraexacta.
No obstante, es importanteapreciarqueutilizandoestafrmulayreemplazandocon
los datos de condiciones normales de presin y temperatura (298,15 K y una
3
atmsfera de presin)los datos de molesproducidosnosobrepasan los3,33x10
,
locualcorrespondeanuestromximoterico.

Conclusin.

Pese a que el volumen formado de CO

2 no
fueron los esperados tericamente, se
cumplieron los objetivos, ya que se determin el volumen formado de CO
2 , y la
velocidad de formacin en distintos medios de cultivos, obteniendo los siguientes
valores:

VolumenformadodeCO
(mL):
2
Tubo 1:0,25 0,15 0,110,06.Tubo2:0,20,170,120,08.Tubo3y4:000
0.A5,10,15y20minutosrespectivamentecadatubo.

Velocidaddeformacin(mM/min):
Tubo 1:0,625 0,9375 0,9583 1,0313Tubo2:1,09760,91460,85371,0185.
Tubo3y4:0000.A5,10,15y20minutosrespectivamentecadatubo.

Bibliografa.

[1] Garrido A. 2001, Bioqumica metablica Granada, Espaa, Editorial Tbar,

Pgina:11.

[2] Rodriguez J. 2006, Microorganismos y salud, Madrid, Espaa, Editorial

Complutense,Pginas:3740

[3] Vzquez H. 2007, Fermentacin alcohlica: Una opcin para laproduccin de

energa renovable a partir de desechos agrcolas, Ingeniera investigacin y
tecnologa,Pginas:249259.

Anexo.

Tiempo[min]

Ntubo

10

15

20

3,125

9,375

14,375

20,625

5,4878

9,146

0,958

1,0313

Tabla3:Concentraciones(milimol)deCO2eneltiempo.

Tiempo[min]

Ntubo

10

15

20

0,625

0,9375

0,9583

1,0313

1,0976

0,9146

0,8537

1,0185

Tabla4:Velocidades(mM/min)deformacindelCO2.

Tiempo[min]

Ntubo

10

15

20

5
1,022x10

6
6,131x10

6
4,500x10

6
2,453x10

6
8,175x10

6
6,950x10

6
4,905x10

6
3,270x10

Tabla5:MolesdeCO
2formadosencadatubosegnlafrmulaPV=nRT