Universidad Nacional del Callao

Laboratorio de Orgnica I
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I.

INTRODUCCIN
La cromatografa es un mtodo de separacin para la caracterizacin de mezclas
complejas, la cual tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia y la fsica. Es un
conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin selectiva, cuyo objetivo es
separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y
determinar

las

cantidades

de

dichos

componentes.

Las tcnicas cromatografas son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase
mvil que consiste en un fluido (gas, lquido o fluido supercrtico) que arrastra a la
muestra a travs de una fase estacionaria que se trata de un slido o un lquido
fijado en un slido. Los componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma
con la fase estacionaria. De este modo, los componentes atraviesan la fase
estacionaria a distintas velocidades y se van separando. Despus de que los
componentes hayan pasado por la fase estacionaria, separndose, pasan por un
detector que genera una seal que puede depender de la concentracin y del tipo de
compuesto.

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II.

OBJETIVOS
Aprender tericamente el mtodo de la cromatologa.
Evaluar los diversos tipos de cromatologa.
Realizar la interpretacin de resultados en los ensayos de cromatologa.

III.

FUNDAMENTO TEORICO
La cromatografa es un mtodo fsico de separacin para la caracterizacin de
mezclas complejas, la cual tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia. Es un
conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin selectiva, cuyo objetivo es
separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de dichos componentes. Diferencias sutiles en
el coeficiente de particin de los compuestos da como resultado una retencin
diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una separacin efectiva en funcin
de los tiempos de retencin de cada componente de la mezcla.
La cromatografa puede cumplir dos funciones bsicas que no se excluyen
mutuamente:

Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y que puedan

ser usados posteriormente (etapa final de muchas sntesis).

Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad analtica). En

este caso, las cantidades de material empleadas son pequeas.

TIPOS DE CROMATOGRAFA.

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Dependiendo de la naturaleza de la fase estacionaria y de la fase mvil se pueden

distinguir distintos tipos de cromatografa.
a) Cromatografa slido-lquido:
La fase estacionaria es un slido y la mvil un lquido.
b) Cromatografa lquido-lquido:
La fase estacionaria es un lquido anclado a un soporte slido.
c) Cromatografa lquido-gas:
La fase estacionaria es un lquido no voltil impregnado en un slido y la fase
mvil es un gas.
d) Cromatografa slido-gas:
La fase estacionaria es un slido y la mvil un gas.
Segn el tipo de interaccin que se establece entre los componentes de la mezcla y
la fase mvil y estacionaria podemos distinguir entre:

Cromatografa de adsorcin:
La fase estacionaria es un slido polar capaz de adsorber a los componentes
de la mezcla mediante interacciones de tipo polar.

Cromatografa de particin:
La separacin se basa en las diferencias de solubilidad de los componentes
de la mezcla en las fases estacionaria y mvil, que son ambas lquidas.

Cromatografa de intercambio inico:

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La fase estacionaria es un slido que lleva anclados grupos funcionales

ionizables cuya carga se puede intercambiar por aquellos iones presentes en
la fase mvil.

CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

La cromatografa en capa fina (CCF), TLC (Thin layer chromatography) es
una tcnica cromatogrfica. La fase estacionaria es una capa uniforme de un
absorbente mantenido sobre una placa, la cual puede ser de vidrio, aluminio u otro
soporte.
En cromatografa en capa fina se utiliza una placa cromatogrfica inmersa
verticalmente en un eluyente apolar; La placa cromatogrfica consiste en una fase
estacionaria polar (comnmente se utiliza slica gel) adherida a una superficie solida
con algn agente cementante. El eluyente debe ser un compuesto lquido apolar,
generalmente orgnico. Para realizar la CCF, se debe apoyar la placa cromatogrfica
sobre algn recipiente o cmara que contenga la fase lquida a aproximadamente 1
cm (la distancia entre el principio de la placa y la muestra que se desea analizar). La
cromatografa en capa fina es la combinacin de todos los colores en un papel.

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CROMATOGTRAFIA EN PAPEL
La cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para
realizar unos anlisis cualitativos ya que pese a no ser una tcnica muy potente no
requiere de ningn tipo de equipamiento.
La fase estacionaria est constituida simplemente por una tira de papel filtro. La
muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas de la solucin y
evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase mvil se hace
ascender por capilaridad. Esto es, se coloca la tira de papel verticalmente y con la
muestra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene fase mvil en el
fondo.
Despus de unos minutos cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al
extremo se retira el papel y se seca. Si el disolvente elegido fue adecuado y las
sustancias tienen color propio se vern las manchas de distinto color separadas.
Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de
revelado.
Hay varios factores de los cuales depende una cromatografa eficaz: la eleccin del
disolvente y la del papel de filtro.

En la siguiente tabla se resumen algunos resultados de la experiencia acerca del uso

de disolventes y adsorventes para investigacin cromatogrfica:
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Sustancia

Adsorvente

Disolvente

Aminocidos

Almidn

Agua

Aminocidos

Resinas para intercambio de Agua

iones.

Aminocidos

Dixido de Titanio

Agua

Aminocidos

Almina

Agua

Alcaloides

Resinas para intercambio de Agua

iones.

Alcaloides

Almina

Agua

Clorofilas

Sacarosa

ter

de

petrleo

ms

petrleo

ms

alcoholes
Xantofilas

Sacarosa

ter

de

alcoholes
Xantofilas
Alcoholes

Magnesia
alifticos

y Almina

esteroides

MATERIALES Y REACTIVOS

ter

de

benceno

Cromatografa en

IV.

ter de petrleo ms acetona

petrleo

ms

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Materiales

Mechero de bunsen

acido saliclico

Vaso precipitado

Resorcina

Tubos de ensayo

Etanol

Tubo capilar

Metanol

Gradilla

FeCl3

Papel filtro
Lpiz
Regla
Cmara de vidrio
Cinta de pegar
Cmara ultravioleta

V.

PARTE EXPERIMENTAL

Reactivos

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Acido
saliclico

Muestra

Resorcina

1. Preparacin de la fase mvil.

Cogemos un vaso de precipitado limpio y lo enjuagamos con alcohol,
seguidamente colocamos 2,5ml de alcohol isoproplico ((CH3)2CHOH) y
adicionamos 2,5ml de cloroformo (CHCl3), procedeos a tapar el vaso y luego
pasamos a la siguiente fase.

Alcohol isoproplico + CHCl3

2. Preparacin de la fase estacionaria.

Tenemos un vidrio rectangular de 5 * 15 centmetros, dividimos el largo en partes de tal

manera que ubiquemos las tres tiritas de papeles de filtro a lo largo del vidrio, para eso
tambin cortamos el papel filtro con las medidas correspondientes.

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2 cm

1cm

Para esto tambin trazamos las lneas de fuente de solvente y la lnea de base.

Donde:

Acido saliclico (1)

Muestra problema (2)
Resorcina

son nuestros patrones.

(3)

3. Sembrado

a. En la lnea de origen marque con un punto (punto medio de la columna) donde

colocara la siembra de la muestra problema y la correspondiente a los dos patrones
en cada columna equidistantes a la muestra. Para nuestro experimento utilizaremos
como patrones el acido saliclico y la resorcina.
b. La muestra problema y los patrones son depositados en la parte inferior del papel
filtro con pequeas gotas empleando tubos capilares (un tubo capilar para cada
muestra).

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Sembrado de la muestra

c. Despus de haber realizado el primer sembrado con la muestra y con cada patrn se
procede a secar calentando suavemente con el mechero de bunsen.
d. Repetir el paso 2 y el paso3 cinco veces para los patrones y la muestra.

4.
Desarrollo

Esta es el cuarto proceso para la cromatografa, una vez sembrado las muestras
procedemos a introducirlas al tanque que contiene el solvente ya preparado (alcohol
isoproplico y el cloroformo) las muestras subirn, esperamos hasta que cualquiera
de ellas suba hasta la lnea de frente del solvente, una vez alcanzado el nivel
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esperado marcamos con un lpiz las alturas a la que llegaron las dems para as
poder realizar los clculos necesario ms adelante.
Tener en cuenta que mientras este proceso ocurre no debe de ser movido por ningn
motivo el recipiente que contiene la solucin y la lamina ya que nuestro resultado
sera el equivocado.

Desarrollo

5. Revelado

Llvalos la muestra al generador UV (con una longitud de onda de 366 nm.)

marcamos con un lpiz la mancha observada.

Revelado ultravioleta
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Luego llevamos el vidrio con la muestra problema al extractor y le adicionamos

FeCl3 atomizado, observamos las manchas y damos los resultados.
Resultados.

Revelado
cromtico

Reaccin:
Acido benzoico:
COOCOOH
+ FeCl3

Acido saliclico:

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Fe + 3 HCl

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COOH
OH

COO-

+ FeCl3

OH

Fe + 3 HCl

Observacin:
Como no se pudo observar casi nada en el generador UV, no se marco nada.
Al adicionarle el FeCl3, se pudo divisar unas manchas color violeta cerca la altura
del acido saliclico por lo que se concluye que la muestra contiene cido saliclico.
La muestra problema contiene acido saliclico, ya que se observo que contena el
mismo color y la misma altura que el papel que contena dicho cido, por lo cual se
concluyo lo que contena.

6. Interpretacin de resultados

Observamos el resultado de los colores y las alturas en las muestras tratadas.

Calculamos el Rf en cada caso.

Resultados:

Podemos observar que la tira que contiene la muestra problema y la tira que
contiene al acido saliclico tienen casi la misma altura y el mismo color despus
de haberle atomizado el FeCl3, con lo cual podemos calcular su R f, de cada una
de las tiras (Ac. Saliclico, Ac. Benzoico, M.P).

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Clculos de los Rf de cada tira tratada:

Para el Ac. Saliclico:

Frente de solvente

Nueva ubicacin
10cm

14c
m

Lnea de base (origen)

Ahora calculamos el Rf:

Frente de solvente

Para la muestra problema:

Nueva ubicacin

14
Lnea de base (origen)

9
cm

15 cm

Calculamos el Rf

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Para el Ac. Benzoico:

Como no se observo mancha alguna concluimos que el R f es

cero:

Interpretacin de los

VI.

CONCLUSIONES
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En el generador de rayos UV no fue posible observar de manera clara la

mancha que nos indicara la existencia de unos de los dos patrones.

Al llevarlo a la campana extractora para adicionarle el FeCl3, se nota de manera

clara las manchas que nos facilitara la interpretacin de los resultados, llegando
a la conclusin que la muestra problema contena Ac. Saliclico.

Al realizar los clculos del Rf nos confirmo la existencia de Ac. Saliclico ya que
los resultados fueron muy cercanos para el Ac. Saliclico y la M.P.

VII.

RECOMENDACIONES

Lavar bien los tubos de ensayo, as obtengamos nuestros resultados deseados.

Tener limpio y ordenado nuestro ambiente de trabajo.
Tener mucho cuidado al trabajar con los cidos.
Utilizar lpiz en vez de lapicero para hacer las marcas sobre el papel filtro ya

que si no afectara a nuestro resultado la existencia de otros componentes.

Asegurar bien el papel filtro con la cinta scotch ya que afectara al ponerlo en la
cmara cromatografa haciendo que este se pueda salir.

VIII.

BIBLIOGRAFIA
CARRASCO, Luis. Qumica experimental. Ed. San marcos tercera edicin-2005
BRICEO, Carlos Omar. Qumica General. Ed. Panamericana 1994.
CAREY, Francis. Qumica Orgnica. Tercera edicin. Ed. Mc Graw Hill. 1999.
http://www.jergym.hiedu.cz/~canovm/cinidla/nes.htm
http://es.wikipedia.org/wiki/Reactivo_de_Ne%C3%9Fler

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