CDU: 637.

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AL 03.01-303

LECHE EN POLVO

Norma Tcnica
Ecuatoriana

DETERMINACION DE LA PROTEINA

INEN 301
1977-06

Instituto Ecuatoriano de Normalizacin, INEN Casilla 17-01-3999 Baquerizo Moreno E8-29 y Almagro Quito-Ecuador Prohibida la reproduccin

1. OBJ ETO

1.1 Esta norma tiene por objeto establecer el mtodo para determinar el contenido de protenas en la leche
en polvo.

2. ALCANCE

2.1 Esta norma se aplica a los siguientes tipos de leche:

a)

Tipo I.

Leche entera en polvo.

b)

Tipo II.

Leche semidescremada en polvo.

c)

Tipo III.

Leche descremada en polvo.

3. TERMINOLOGA

3.1 Contenido de protenas en la feche en polvo. Es la cantidad de nitrgeno total de la leche en polvo,
expresada convencionalmente como contenido de protenas y determinada mediante procedimientos
normalizados.

4. RESUMEN

4.1 Se determina el contenido de nitrgeno total mediante el mtodo Kjeldahl y se multiplica el resultado
por el factor 6,38 para expresarlo como protena.

5. INSTRUMENTAL

5.1 Balanza analtica. Sensible al 0,1 mg.

5.2 Aparato Kjeldahl, para digestin y destilacin.
3

5.3 Matraz Kjeldahl, de 500 cm .

3

5.4 Matraz Erlenmeyer, de 500 cm .

3

5.5 Bureta, de 50 cm .

6. REACTIVOS
3

6.1 Acido sulfrico concentrado, con densidad 1,84 g/cm a 20C, exento de nitrgeno.

-1-

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6.2 Solucin 0,1 N de cido sulfrico, debidamente estandarizada.

6.3 Solucin concentrada de hidrxido da sodio. Disolver 450 g de hidrxido de sodio en agua destilada y
3

diluir la solucin hasta 1 000 cm . La densidad relativa de la solucin final debe ser mayor de 1,36.
6.4 Solucin 0,1 N de hidrxido de sodio, debidamente estandarizada.
6.5 Solucin de sulfuro alcalino, o solucin de tiosulfato de sodio. Disolver 40 g de sulfuro de potasio o
3

sulfuro de sodio en 1 000 cm de agua destilada; o disolver 80 g de tiosulfato de sodio pentahidratado en

3

100 cm de agua destilada.

6.6 Sulfato de potasio, o sulfato de sodio anhidro, exento de nitrgeno, reactivo para anlisis.
6.7 Oxido mercrico, o mercurio metlico, reactivo para anlisis (ver Anexo A).
3

6.8 Solucin alcohlica de rojo de metilo. Disolver 1 g de rojo de metilo en 200 cm de alcohol etlico al
95% (V/V).

7. PREPARACIN DE LA MUESTRA

7.1 La leche en polvo es un producto que absorbe fcilmente humedad y olores extraos; por tanto, es
necesario que todos los utensilios y recipientes, adems de limpios y estriles, estn secos.
7.2 La extraccin de la muestra debe realizarse en un ambiente seco y exento de polvo y olores, lo ms
rpidamente posible, procurando reducir al mnimo el tiempo que el producto que se ha de ensayar
permanezca en contacto con el aire.
7.3 Transferir la leche en polvo a un frasco limpio, estril y bien seco, de capacidad aproximadamente dos
veces el volumen de la muestra, e inmediatamente tapar y homogeneizar, invirtiendo varias veces el
recipiente que lo contiene.

8. PROCEDIMIENTO
8.1 La determinacin debe realizarse por duplicado sobre la misma muestra preparada (ver 8.13).
8.2 Pesar, con aproximacin a 0,1 mg, aproximadamente 1 g de muestra.
8.3 Transferir la muestra al matraz Kjeldahl y agregar el catalizador (ver Anexo A), formado por 0,5 g de
xido de mercurio (o 0,60 g de mercurio metlico) y 15 g de sulfato de potasio en polvo (p 15 g de sulfato
de sodio anhidro).
8.4

Agregar 20 cm

de cido sulfrico concentrado y un trozo pequeo de parafina, para reducir la

formacin de espuma durante la digestin.

8.5 Agitar el matraz y colocarlo en forma inclinada en la hornilla del aparato KjeldahI. Calentar suavemente
hasta que no se observe formacin de espuma, y aumentar el calentamiento hasta que el contenido del
matraz hierva uniformemente y presente un aspecto Impido. Este calentamiento debe durar 1 h 30 m;
luego, dejarlo enfriar.

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8.6 Agregar aproximadamente 250 cm de agua destilada, enfriar la mezcla hasta una temperatura inferior
3

a 25C, agregar 25 cm de la solucin de sulfuro alcalino (o tiosulfato de sodio) y agitar la mezcla para
precipitar el mercurio (ver A.2).

8.7 Agregar unas pocas granallas de zinc para evitar proyecciones durante la ebullicin.
3

8.8 Inclinar el matraz y verter por sus paredes cuidadosamente, para que se formen dos capas, 70 cm de
la solucin concentrada de hidrxido de sodio (o mayor cantidad, si fuera necesario, para alcanzar un alto
grado de alcalinidad).

8.9

Inmediatamente, conectar el matraz Kjeldahl al condensador mediante la ampolla de destilacin. El

3

extremo de salida del condensador debe estar sumergido en 40 cm de la solucin 0,1 N de cido sulfrico
3

contenida en el matraz Erlenmeyer de 500 cm , a la cual se han agregado unas gotas de la solucin
alcohlica de rojo de metilo.

8.10 Agitar el matraz Kjeldahl hasta mezclar completamente su contenido y luego calentarlo.

8.11

Destilar hasta que todo el amoniaco haya pasado a la solucin cida contenida en el matraz
3

Erlenmeyer (lo cual se logra despus de destilar, por lo menos, 150 cm ).

8.12

Usando la solucin 0,1 N de hidrxido de sodio, titular el exceso de cido contenido en el matraz

Erlenmeyer.

8.13

Realizar un solo ensayo en blanco con todos los reactivos, sin la muestra y siguiendo el mismo

procedimiento descrito a partir de 8.3, para cada determinacin o serie de determinaciones.

9. CALCULOS

9.1 El contenido de protenas en la leche en polvo se calcula mediante la ecuacin siguiente:

(V1 N1 - V2N2)-(V3N1 - V4N2)

P = (1,40) (6,38)
m
Siendo:
P

= contenido de protenas en la leche en polvo, en porcentaje de masa.

V1

= volumen de la solucin de cido sulfrico empleado para recoger

3

el destilado de la muestra, en cm .
N1

= normalidad de la solucin de cido sulfrico.

V2

= volumen de la solucin de hidrxido de sodio empleado en la

titulacin, en cm

N2

= normalidad de la solucin de hidrxido de sodio.

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V3

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= volumen de la solucin de cido sulfrico empleado en recoger

3

el destilado de! ensayo en blanco, en cm .

V4

= volumen de la solucin de hidrxido de sodio empleado en la

3

titulacin del ensayo en blanco, en cm .

m

= masa de la muestra de la leche en polvo, en g.

10. ERRORES DE METODO

10.1 La diferencia entre los resultados de una determinacin efectuada por duplicado no debe exceder de
0,005%; en caso contrario, debe repetirse la determinacin.

11. INFORME DE RESULTADOS

11.1 Como resultado final, debe reportarse la media aritmtica de los dos resultados de la determinacin.

11.2

En el informe de resultados, deben indicarse el mtodo usado y el resultado obtenido. Debe

mencionarse, adems, cualquier condicin no especificada en esta norma, o considerada como opcional, as
como cualquier circunstancia que pueda haber influido sobre el resultado.

11.3 Deben incluirse todos los detalles necesarios para la completa identificacin de la muestra.

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ANEXO A
A.1 Por convenio previo entre las partes interesadas, podrn usarse los siguientes catalizadores:

a)

2,5 g de la siguiente mezcla:

Selenito de sodio,

3g

Sulfato cprico,

6g

Sulfato de potasio,
b)

c)

50 g

2,5 de la siguiente mezcla:

Sulfato cprico,

8g

Selenio en polvo

8g

Sulfato de sodio,

500 g

2,0 g de la siguiente mezcla:

Sulfato de potasio,

96 g

Selenito mercrico,

4g

d) 10 g de sulfato de potasio, y 2 g de oxalato de potasio.

A.2 Cuando se usen los catalizadores indicados en A.1, no debe agregarse la solucin de sulfuro alcalino o de
tiosulfato de sodio.

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APNDICE Z

Z.1 NORMAS A CONSULTAR

Esta norma no requiere de otras para su aplicacin.

Z.2 NORMAS PUBLICADAS SOBRE EL TEMA

INEN

Leche y productos lcteos. Definiciones.

INEN

Leche y productos lcteos. Muestreo.

INEN 17

Leche y productos lcteos. Examen micribiolgico. Disposiciones generales.

INEN 299

Leche en polvo. Determinacin da la humedad.

INEN 300

Leche en polvo. Determinacin de la grasa.

INEN 302

Leche en polvo. Determinacin de las cenizas.

INEN 303

Leche en polvo. Determinacin de la acidez.

INEN 304

Leche en polvo. Determinacin de bacterias activas.

INEN 305

Leche en polvo. Determinacin de bacterias coliformes.

INEN 306

Leche en polvo. Determinacin del ndice de solubilidad.

INEN 307

Leche en polvo. Ensayo de la fosfatasa.

Z.3 BASES DE ESTUDIO

Mtodo AOAC de Anlisis 15. Dairy Products. Dried Milk. Protein. Kjeldahl Method. Association of
Official Analytical Chemists. Washington, 1970.
Norma Britnica BS 1743. Methods for the chemical analysis of dried milk. Determination of total
nitrogen. British Standards Institution. Londres, 1968.

Norma Francesa NF V 04-211. Analyse physique et quimique du lait. Dosage de Lazote total. Association
Franaise de Normalisation, AFNOR. Pars, 1954.

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INFORMACIN COMPLEMENTARIA
Documento:
Cdigo:
TTULO: LECHE EN POLVO. DETERMINACIN DE LA
NTE INEN 301
AL 03.01-303
PROTEINA.
ORIGINAL:
REVISIN:
Fecha de iniciacin del estudio:
Fecha de aprobacin anterior por Consejo Directivo
Oficializacin con el Carcter de
por Acuerdo No.
publicado en el Registro Oficial No.

Fecha de iniciacin del estudio:

Fechas de consulta pblica: 1976-05-28

1976-07-13

Subcomit Tcnico: AL 03.01, Leche y productos lcteos

Fecha de iniciacin:

Fecha de aprobacin: 1976-10-06

Integrantes del Subcomit Tcnico:

NOMBRES:

INSTITUCIN REPRESENTADA:

Sr. Manuel Tobar Zaldumbide

Dr. Alberto Proao
Ing. Nicols Guilln
Dr. Germn Fierro y
Dr. Sergio Coellar

HERTOB, PROMISA, EL ANGEL

MINISTERIO DE LA PRODUCCION
MINISTERIO DE LA PRODUCCION
PASTEURIZADORA QUITO. ILESA, SUPER DE
GUAYAQUIL E INDUSTRIA LECHERA
CARCHI
CAMARA DE AGRICULTURA DE LA 1ra. Zona
CAMARA DE AGRICULTURA DE LA 1ra. Zona
PRODUCTOS LACTEOS GONZALEZ
PRODUCTOS LACTEOS GONZALEZ
INSTITUTO NACIONAL DE NUTRICION
INSTITUTO NACIONAL DE NUTRICION
DIRECCION DE HIGIENE MUNICIPAL
INDUSTRIA LECHERA CAP
FAO
FAO
COLEGIO DE QUMICOS DE PICHINCHA

Ing. Carlos Molina

Ing. Jaime Flores Gonzlez
Sr. Luis Gonzlez y
Dr. Hernn Avila Orejuela
Dr. Nelson Valle P.
Dr. Gustavo Guerra
Dr. Jorge Donoso
Sr. Carlos Pazmio Gallo
Ing. Federico Schaerer
Ing. Ejvind Christensen
Sr. Jos E. Muoz
Sr. Pablo Lozada
Ing. Jos Arellano
Dra. Leonor Orozco

INSTITUTO DE COMERCIO EXTERIOR E INTEGRACION

CENTRO DE DESARROLLO CENDES

INEN

Otros trmites:
4 Esta norma sin ningn cambio en su contenido fue DESREGULARIZADA, pasando de
OBLIGATORIA a VOLUNTARIA, segn Resolucin de Consejo Directivo de 1998-01-08 y oficializada mediante
Acuerdo Ministerial No. 235 de 1998-05-04 publicado en el Registro Oficial No. 321 del 1998-05-20
El Consejo Directivo del INEN aprob este proyecto de norma en sesin de

1977-06-02

Oficializada como: Obligatoria

Por Acuerdo Ministerial No. 331 del 1980-03-12
Registro Oficial No.
153 del 1980-03-24

Instituto Ecuatoriano de Normalizacin, INEN - Baquerizo Moreno E8E8-29 y Av. 6 de Diciembre

Casilla 1717-0101-3999 - Telfs: (593 2)2 501885 al 2 501891 - Fax: (593 2) 2 567815
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certificacion@inen.gov.ec
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Mail:verificacion@inen.gov.ec
verificacion@inen.gov.ec
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inencati@inen.gov.ec
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Mail:inenguayas@inen.gov.ec
inenguayas@inen.gov.ec
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Regional Chimborazo: EE-Mail:inenriobamba
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