MICROBIOLOGA

norma erazo Sandoval

CAPTULO I
GENERALIDADES

A. INTRODUCCIN
El mundo de los microbios es quiz tan grande como el Universo, basta entender
que un puado de tierra contiene tantos microorganismos como seres humanos en
todo el planeta. El tamao tan pequeo de stos hizo difcil su comprensin por
mucho tiempo sobre su existencia y funcionamiento.
personajes de la ciencia

El trabajo de muchos

a lo largo de unos 200 aos, dio como resultado el

surgimiento de la microbiologa como ciencia.

La accin de los microorganismos ha condicionado y condiciona la

caractersticas de toda la biosfera, por lo que el conocimiento de la accin de
los microorganismos puede ayudar a comprender el potencial que tienen stos
y su uso en diferentes campos, como en procesos de biodegradacin,
procesos

industriales

(obtencin

de

antibiticos,

vitaminas,

enzimas),

depuracin de aguas y procesos agrcolas como fertilizantes microbianos y

biopesticidas, masa microbiana (protena unicelular y vacunas) .
Actualmente, los microorganismos son manipulados genticamente, mediante a la
aplicacin de las tcnicas de ADN recombinante (Biotecnologa Molecular) en los
seres vivos para la obtencin de productos de inters industrial como la insulina,
hormonas de crecimiento e interfern.

B. CONCEPTO

Es una Ciencia experimental que se ocupa del estudio de los microorganismos,

como: bacterias, virus, algas unicelulares, protozoos, hongos; de sus interacciones
con otros organismos y con el medio ambiente.
C. LOS PRINCIPIOS DE LA MICROBIOLOGA
1. Generacin espontnea
Las primeras explicaciones acerca del origen y la existencia de estos seres
microscpicos dieron lugar en primer lugar a la teora de la generacin
espontnea, la que se remonta a tiempos tan lejanos como antes de la Era
Cristiana y persisti por ms de 1.500 aos. Doscientos aos antes de ella,
Varro ya propona la posibilidad del contagio de ciertas enfermedades debido a
criaturas invisibles suspendidas en el aire.
Lucrecio (75 A. C.) pensaba que, las cosas surgan de una especie de tomo
o semilla. En el libro VI dice: "As como hay semillas benficas para nuestra
vida, seguramente existen otras que causan enfermedad y muerte", adems de
alguna forma esta primera semilla se haba generado espontneamente, es
decir que podan aparecer organismos vivientes a partir de materia no viviente.
Otros personajes pensaban que las plagas o epidemias eran gobernadas por
fuerzas sobrenaturales.

Hipcrates y Galeno

consideraban que las

epidemias o vapores venenosos eran generados por conjunciones planetarias

o por alteraciones en la propia Tierra.
El simple razonamiento sobre la existencia de los microbios no constituy la
prueba de su verdadera existencia. sta slo pudo ser demostrada gracias al
descubrimiento de una lente de aumento y fue el holands Antonie van
Leeuwenhoek (1632-1723) quien fabric la primera lente lo suficientemente
poderosa como para observar por primera vez a los organismos unicelulares.
como protozoarios, tanto de vida libre como parsitos de las vsceras de
algunos animales; tambin logr observar hongos filamentosos y levaduras.
Hizo importantes observaciones sobre la estructura de las plantas y descubri

los espermatozoides de algunos animales. Solo fue hasta 1676 que pudo
observar organismos an ms pequeos, como las bacterias.
2. La controversia de la generacin espontnea
La verdadera comprensin de la importancia de los microorganismos en el
mundo comenz como resultado de la controversia sobre la generacin de
materia viviente a partir de la materia muerta. En un principio existan dos
escuelas bien definidas de pensamiento: aqulla que tomando a Lucrecio al pie
de la letra apoyaba la idea de que se podran generar animales a partir de
materia muerta gracias a la existencia de una "fuerza vital" (generacin
espontnea) y la que deca que la vida slo se genera a partir de vida (en latn
omne vivum ex vivo). Los antiguos que crean en la generacin espontnea
daban recetas para preparar "ratones" a partir de comida en putrefaccin.
Opuestas a este punto de vista eran las ideas de Redi, quien en 1668 mostr
que la aparente generacin espontnea de larvas en la carne provena de la
visita de las moscas que ponan huevecillos sobre ella. Sin embargo,
Needham, otro investigador, hirvi extracto de carne en un frasco, lo tap y
encontr que despus de algunos das aparecan criaturas que se movan.
Esto, llev a pensar que dichos organismos eran realmente producto de la
generacin espontnea. Ms tarde, Spallanzani llev a cabo experimentos
ms cuidadosos con los que demostr que los organismos grandes eran
destruidos al ser hervidos durante 30 segundos, pero los microorganismos
sobrevivan y se desarrollaban aunque los frascos estuvieran hermticamente
cerrados. Despus de muchos ensayos, encontr que si herva los frascos
parcialmente cerrados durante 45 minutos, el contenido se mantena sin
contaminarse casi indefinidamente, y slo si se permita la entrada de aire, el
contenido entraba en putrefaccin rpidamente. Un cocinero francs, llamado
Francois Appert, a principios del siglo XIX desarroll el arte de preservar
comida en frascos sellados para lo cual hirva el contenido dentro del frasco y
los cerraba sin permitir la entrada de aire fresco. Este hallazgo lo llev a fundar
una prspera industria de conservas.

Schultze en 1836 conect el recipiente

que contena extracto de carne a otros dos recipientes, uno de los cuales
contena cido sulfrico y el otro potasa; a travs de stos se hizo pasar

lentamente aire fresco todos los das durante tres meses y el extracto de carne
no se contamin. Theodor Schwann, en 1837, llev a cabo un experimento
similar, pero la diferencia consisti en que el aire fresco se haca pasar por un
recipiente que contena un metal fundido en ebullicin y de esta forma cualquier
materia orgnica se mantena estril en el interior. Sin embargo, cuando se
dejaba pasar aire fresco sin entrar en contacto con el metal fundido, el
contenido se contaminaba invariablemente. La interpretacin que dio Schwann
a sus resultados fue la siguiente: "Los microorganismos que deben estar
presentes en el aire son destruidos al hacer pasar el aire por un lquido
incandescente. Por lo tanto, la putrefaccin sin duda se debe al hecho de que
estos grmenes, al nutrirse y desarrollarse a costa de esta sustancia, la
descomponen y sobreviene la putrefaccin."

Ms tarde, la tcnica de estos

experimentos fue simplificada y en 1853 Schroeder y Von Dush descubrieron

que, despus de hervir el recipiente, bastaba con cerrar el extremo abierto con
un tapn de algodn.

A partir de estos experimentos se

derivan dos

importantes postulados: el primero consiste en hacer un medio de cultivo libre

de microorganismos; el segundo consiste en mantener el medio estril por
largo tiempo y esto se logra evitando la entrada de los microorganismos que
estn suspendidos en el aire.

A pesar de estos avances, los resultados de

Spallanzani, Schultze y Schwann no fueron aceptados por la mayora del

pblico cientfico de la poca debido a que muchos microorganismos resisten
temperaturas hasta de l00C durante varias horas.

Koch, ms tarde, llev a

cabo estudios sobre el bacilo del ntrax y encontr que las esporas de algunas
bacterias eran altamente resistentes al calor y que slo se destruan a l20C o
ms, y eso al cabo de 20 minutos. Pasteur (1822-1895) fue quien desech la
teora de la generacin espontnea mediante sus experimentos convincentes.
El experimento ms sorprendente fue aquel en el que Pasteur mostr cmo un
medio nutritivo permaneca estril aun cuando estuviera comunicado con el
exterior. Para esto dise unos frascos especiales (cuello de ganso) que
presentaban dobleces en el cuello, donde se retienen los posibles microbios
contaminantes, esto demostr que la putrefaccin proviene del crecimiento de
microorganismos y no de la generacin espontnea. Pasteur y Koch llegaron a
ser considerados hroes por haber rescatado a la humanidad de una de las
ms grandes amenazas, esa era la contaminacin microbiana.

Otro personaje importante fue el fsico ingls Tindall quien estaba interesado
en los fenmenos de la dispersin de la luz en el agua y en el aire (fenmeno
que hoy se conoce como efecto Tindall), sus observaciones se apoyaron en
los experimentos de Pasteur.

Al pasar un rayo de luz observ pequeas

partculas que flotan y l lo atribuy a la presencia de los microorganismos

responsables del fenmeno de putrefaccin. Tindall mostr que el aire normal
contenido en una cmara hermtica presenta una serie de partculas diminutas
que se hacen aparentes al incidir un rayo de luz en la cmara. Sin embargo,
despus de algunas semanas las partculas se depositan en el fondo y el rayo
de luz ya no es dispersado. A esto Tindall lo llam cmara pticamente vaca.
En 1869 demostr que al llenarse una cmara con aire que se forzaba a pasar
a travs de un algodn, se lograba obtener aire pticamente vaco y ste no
iniciaba el proceso de putrefaccin.
En estudios posteriores sobre la fermentacin butrica y la produccin de
vinagre, Pasteur encontr que estos procesos se deban al desarrollo de
microorganismos especficos como son el Vibrion butiricum y el Mycoderma
aceti. Pasteur aclar los conceptos sobre la fermentacin y defini que sta es
el producto de una reaccin que lleva a cabo un microorganismo y que cada
microorganismo tiene su propio tipo caracterstico de fermentacin. Las
levaduras producen alcohol, las bacterias lcticas cido lctico, el vibrin
butrico cido butrico, etctera.
Edward Buchner, ms adelante, logr demostrar en forma accidental que la
fermentacin ocurra en un extracto de levaduras, y comenz a pensar en la
fermentacin como una cadena de reacciones qumicas que podan ocurrir aun
en ausencia del microorganismo.
D. IMPORTANCIA DEL ESTUDIO DE LA MICROBIOLOGA
La Microbiologa como ciencia tiene aplicaciones importantes que producen
impacto en nuestra vida cotidiana en las reas:

1. Mdica:
Identificacin de los diferentes microorganismos de importancia mdica.
Prevencin y tratamiento de enfermedades infecciosas causadas por
microorganismos en plantas y animales, incluyendo al hombre.
2. Industrial:
En procesos de fermentacin en la produccin de antibiticos, cidos
orgnicos, aminocidos, enzimas, disolventes, combustibles (Metano, etanol y
otros).
Control de calidad de productos industriales: Biodeterioro de papel, madera,
textiles, pintura y corrosin de metales.
3. De los Alimentos:

Deterioro microbiano de los alimentos.

Mtodos de conservacin de los alimentos.

Produccin de alimentos por mtodos microbiolgicos: Productos

lcteos, fermentacin del pan, bebidas alcohlicas, protena de origen
unicelular.

4. Agrcola:

Fertilidad del suelo.

Enfermedades microbianas de las plantas.

Plaguicidas microbianos.

5. Microbiologa Ambiental:

Ciclos biogeoqumicos (Fijacin del Nitrgeno en el suelo).

Interacciones entre las poblaciones: Simbiosis fijadora de nitrgeno.

Micorrizas.

Bioluminiscencia.

Los microorganismos en sus hbitats naturales: Aire, Agua, Suelo y

Ambientes Extremos (Aguas Termales, Lagos salados, y otros).
Reduccin de la Calidad y la Contaminacin Ambiental.

Procesos de Biorremediacin.

E. DESARROLLO HISTRICO
En el desarrollo de la ciencia de la Microbiologa se puede distinguir las siguientes
etapas.
1. Emprico.
El proceso de la fermentacin, definido como la transformacin qumica de
compuestos orgnicos con la ayuda de enzimas (sobre todo los producidos por
microorganismos), es muy antiguo. Sumerios y Babilonios antes del ao 6.000 A.C
ya conocan la capacidad de las levaduras para producir alcohol en forma de
cerveza.

Los egipcios, en el ao 4.000 A.C descubrieron que el CO2 generado

por la accin de las levaduras (Saccharomyces) poda fermentar el pan. El vino, otro
antiguo producto de fermentacin ya se lo menciona en la biblia en el libro de
Gnesis.
Hacia el siglo XIV D.C la destilacin de bebidas alcohlicas era comn en muchas
zonas del mundo como Francia (Brandy) y

Escocia (Whisky).

Los

microorganismos han proporcionado alimentos y bebidas durante ms de 8.000

aos, sin que se tuviera nocin de su existencia.
Leeuwenhoek, en el siglo XVIII, fue la primera persona que los describi al
observar, a travs de su microscopio simple. Sin embargo, estas observaciones no
condujeron a ninguna investigacin acerca de las posibles actividades de los
microorganismos.
El papel de las levaduras como agentes fermentadores no fue reconocido hasta
mediados del siglo XIX por Pasteur quien descubri que las levaduras transforman
el azcar en alcohol en ausencia de aire (fermentacin alcohlica).

Emil Christian Hansen, en 1883 obtuvo el primer cultivo puro de levadura

cervecera que denomin Saccharomyces carlsbergensis. Pero, es a finales del
siglo XIX y gracias al desarrollo de las tcnicas de cultivos puros, se aisla y
distribuye la primera cepa de levadura vnica, la Steinberg 92, para su uso
comercial en la produccin del vino.

Con estos trabajos y los de Pasteur, la

fermentacin pasa de ser un arte (resultados imprevisibles) a ser una ciencia

(resultados previsibles).
2. Cientfico
Los progresos realizados en bioqumica a partir del descubrimiento de las enzimas
por Buchner en 1897 fue considerable, pero no comenzaron a aplicarse en la
fermentacin industrial hasta la primera guerra mundial (1914).
En el lado alemn, la obtencin de glicerol para la fabricacin de explosivos se
convirti en una necesidad urgente. El bioqumico alemn Carl Neuberg utiliz
pequeas cantidades de glicerol producidas en los procesos de fermentacin
alcohlica (lgrima del vino). Este cientfico descubri que la adicin de bisulfito
sdico al tanque de fermentacin favoreca la produccin de glicerol, en ese
entonces se produca alrededor de 1.000 toneladas de glicerol al mes.
A los ingleses, por su parte, les haca falta acetona para la fabricacin de
municiones. Este problema fue resuelto por un qumico de origen ruso, Chain
Weizmann, quien desarroll la fermentacin butanol-acetona utilizando la bacteria
anaerobia Clostridium acetobutylicum. Este descubrimiento fue determinante en el
desarrollo de la guerra.
La produccin de cido ctrico por microorganismos tambin tiene su origen en la
primera guerra mundial. Hasta entonces este cido

se extraa de los ctricos,

siendo Italia el mayor productor. Cuando los hombres fueron llamados a la guerra,
los cultivos se desatendieron, esto hizo que se incrementara considerablemente el
precio. Por lo que en 1923 se introdujo un proceso microbiano para su obtencin.
El organismo fue Aspergillus niger, el mismo que es hongo aerobio obligado.
En 1928, Alexander Fleming observ que el hongo Penicillium notatum mataba
sus cultivos de la bacteria Staphylococcus aureus. Descubri que el lquido celular

poda inhibir el crecimiento de muchas especies bacterianas, a esto lo llam

penicilina.

En la dcada de 1930, algunos qumicos britnicos intentaron aislar la

penicilina, pero fracasaron debido a su inestabilidad. Fue en 1939, cuando Howard

Florey, Ernest Chain y colaboradores en la Universidad de Oxford obtuvieron la
penicilina en una forma estable y con ello tambin se demostr su impresionante
actividad antibacteriana.

El primer ensayo clnico en un paciente de Oxford con

septicemia (Staphylococcus) se llev a cabo el 12 de Febrero de 1941. Debido a la

segunda guerra mundial se consider que Estados Unidos fuera el pas donde
produjera a gran escala.
La necesidad de utilizar tcnicas aspticas para conseguir cultivos puros llev al
desarrollo de los fermentadores con agitacin que hasta la actualidad son los ms
usados.
Otra contribucin al desarrollo de la biotecnologa moderna fue el desarrollo de las
tcnicas de seleccin de razas o cepas. Penicillium notatum produca 2 mg de
penicilina por litro de cultivo, mientras que un mutante de Penicillium chrysogenum
produce actualmente hasta los 20 g/L.
El descubrimiento de la penicilina seal el comienzo de la era de los antibiticos.
Selman Waksman aisl estreptomicina

de Streptomyces gryseus.

A partir de

entonces se hizo prctica comn el muestreo de suelos para la obtencin de un

gran nmero de aislamientos, de

los cuales se han obtenido y se siguen

obteniendo numerosos antibiticos, sobre todo de un grupo de bacterias

denominadas Actinomicetos.
a. Ingeniera Gentica
Despus de la fermentacin de la penicilina no hubo ningn desarrollo significativo
en la microbiologa industrial durante 30 aos.
Al fines de los aos 60 se gener expectativas por utilizar las clulas microbianas
(biomasa) como una fuente de protenas, lo que se denomina Single Cell Protein
(SCP). Sin embargo, los pases desarrollados no necesitaron el SCP por que
generaron cultivos con altos rendimientos, mientras que los pases subdesarrollados
no podan construir plantas industriales para obtener SCP.

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En 1973, Stanley Cohen, Herbert Boyer y sus colaboradores desarrollaron la

metodologa necesaria para transferir la informacin gentica de un organismo a
otro, con lo cual se consigue la capacidad de crear (ms que aislar) cepas
superproductoras como en el caso de la produccin de insulina humana a partir de
la bacteria Escherichia coli en 1978.
b. Futuro
El uso potencial de los microorganismos puede llevar a los siguientes beneficios:

Diagnstico, prevencin o cura de enfermedades infecciosas y genticas.

Aumento del rendimiento de cultivos mediante la

creacin de plantas

resistentes a insectos, hongos y virus.

Desarrollo
polmeros,

de

microorganismos que

aminocidos,

enzimas

producirn
y

varios

compuestos qumicos,
aditivos

de

alimentos.

Eliminacin de contaminantes y residuos txicos del medio ambiente.

Muchos autores mencionan adems, que entre los aspectos positivos de los nuevos
avances, tambin es necesario considerar las consecuencias sociales que pueden
derivarse del uso de esta tecnologa y por ello se plantean las siguientes preguntas:
Puede ser algn organismo modificado genticamente perjudicial para otros
organismos o el medio ambiente?
Puede el desarrollo y uso de los organismos modificados genticamente reducir la
diversidad gentica natural?
Deben modificarse genticamente a los hombres?
Los

nuevos

diagnsticos

invadirn

la

privacidad

de

las

Deben tener propietario, los organismos creados por ingeniera gentica?

personas?

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CAPITULO II
EL SUELO

A. GENERALIDADES
El suelo es un sistema dinmico, donde existe una gran diversidad de
microorganismos que interactan entre ellos y establecen relaciones de
diversos tipos con plantas y animales. Son responsables de la formacin del
suelo.
El nmero y tipo de microorganismos presentes en el suelo dependen de
diversos factores como: los nutrientes, la humedad, aireacin, temperatura,
pH, prcticas agrcolas, etc.
Su principal accin est

relacionada con la transformacin de la materia

orgnica y la disponibilidad de los elementos para las plantas, por lo tanto

tienen mucho que ver con el desarrollo y sanidad de las mismas.

B. IMPORTANCIA ECOLGICA DE LOS MICROORGANISMOS DEL SUELO

El funcionamiento del suelo depende del ciclo de nutrientes y de la
disponibilidad de energa, y estos de los organismos que viven en l. Los
microorganismos son generadores del flujo de energa y del reciclaje de los
nutrientes.
La fuente primaria de energa proviene del sol; la que es captada por las
plantas y

las algas verdes y azules, que la almacenan en forma de

compuestos orgnicos que sirve de alimento para otros organismos.

Sin

embargo, la fuente de energa para el suelo, principalmente proviene de los

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residuos de los cultivos y en menor proporcin, de animales muertos o de sus

residuos, donde intervienen los microorganismos edficos, que ayudan a liberar
la energa necesaria para el funcionamiento del sistema suelo
De esta manera la energa va siendo pasada a travs de una cadena o red ,
desde su captacin por las plantas, pasando a los animales, luego a los
organismos que les consumen, para finalmente pasar a los microorganismos
descomponedores del suelo, que van pasando de un nivel de la red al otro.
La vegetacin silvestre y los cultivos toman sus nutrientes gracias a que los
microorganismos edficos los liberan del material descompuesto. Las plantas
interactan con diversos organismos mediante asociaciones temporales
o permanentes, como las de tipo simbitico o de beneficio mutuo y que
muchas veces llegan a ser sinrgicas, como bacterias y hongos que
obtienen el carbono desde las plantas y facilitan el transporte de
nutrientes como el nitrgeno, fsforo y potasio hacia las plantas.
Por otro lado, existe el conjunto de especies que conforman la Comunidad
Recicladota del suelo, integrada por especies trituradoras, descomponedoras,
parasticas, predadoras, patognicas, saprofticas, etc que van desintegrando
los compuesto orgnicos complejos hasta un estado inorgnico.

Mientras

mayor sea el nmero de microorganismos, como hongos, bacterias y algas

verdeazules o cianofceas y mesofauna como insectos, caros, moluscos,
colmbolos, ispodos, enqutridos, miripodos y las lombrices,

ms

rapidamente se produce la descomposicin y el reciclaje de nutrientes.

Los nutrientes pueden estar temporalmente retenidos en el suelo en el interior
de los organismos, en las partculas minerales del suelo, especialmente las
arcillas, en agregados, en los coloides; pudiendo ser obtenidos tambin desde
el aire y el agua. Los seres vivientes en el suelo conforman la biomasa.

Los microorganismos del suelo juegan un papel indispensable, manteniendo la

fertilidad de los suelos. Elementos esenciales para el crecimiento, tales como

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oxgeno,

nitrgeno,

carbn,

azufre

fsforo,

son

reciclados

por

microorganismos del suelo.

C. USO POTENCIAL DEL LOS MICROORGANISMOS DEL SUELO
1. Como indicadores de contaminacin.
Por ser el suelo uno de los principales hbitats de muchos microorganismos,
stos pueden ser usados en procesos de descontaminacin y algunos pueden
ser usados

como indicadores de contaminacin, Los microorganismos

indicadores

deben estar ausentes del medio especfico (agua suelo), a

menos que ste haya sido contaminado, y generalmente no son miembros de

la flora nativa del suelo o del sistema acutico.
Diferentes grupos de microorganismos participan en el tratamiento biolgico de
residuos lquidos y slidos, los mismos que pueden ser de tipo aerobio,
anaerobio mixto.
2. Como agentes de biorremediacin.
Se entiende por Biorremediacin al uso de microorganismos para degradar
agentes txicos y desechos peligrosos, que surge como un tratamiento para la
restauracin de suelos, masa de agua y subsuelos contaminados.
Los procesos biolgicos que tienen lugar mediante la presencia de
microorganismos son de gran importancia para restaurar los ambientes
contaminados. Entre estos procesos se cita a:
a.

Biomineralizacin: Es la completa destruccin de los contaminantes

orgnicos para reducirlos a sus constituyentes minerales bsicos.

b. Biotransformacin: Los contaminantes orgnicos son parcialmente
degradados formando otras sustancias qumicas menos complejas.
c. Biovolatilizacin: Las bacterias y hongos pueden volatilizar metales por
adicin del grupo metilo, que hace al metal muy voltil.
d. Cometabolismo: Se refiere a la habilidad de las bacterias de romper un
contaminante en la adicin de un sustrato primario, es decir que los

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compuestos qumicos al ser metabolizados, pueden apoyar el crecimiento y

servir como fuente de carbono u otro elemento energtico.
La descontaminacin se puede realizar por:
a. Bioaumentacin: Consiste en la adicin de microorganismos al sitio
contaminando cuando la poblacin nativa carece de capacidad degradadora.
b. Bioestimulacin: Adicin de estimulantes en la actividad microbiana nativa
como sustratos o aceptores de electrones para la degradacin anxica.
c. Bioventeo: Es la introduccin de oxgeno a travs del suelo para estimular
la poblacin microbiana netamente aerobia.
d.

Composteo: El material contaminado se coloca sobre la superficie del

terreno en forma de pilas que se cubren para crear condiciones termfilas,

peridicamente se mezcla para favorecer la aceleracin.
e. Biocultivo: Tratamiento en fase slida que generalmente se realiza en sitios
confinados para retener los lixiviados que se forman.
f. Biosorcin: Uso de microorganismos con afinidad para absorber metales
bajo ciertas condiciones, generalmente se aplica en fase lquida.
3. Ventajas de la biorremediacin:

Son seguros, econmicos y ms rpidos

que algunos tratamientos

fisicoqumicos.

Se utilizan sistemas biolgicos cuyo costo es mnimo, ms an si se

utiliza la poblacin autctona.

El ecosistema del sitio contaminado prcticamente no se altera; al

contrario se recupera.

No se generan desechos como producto del tratamiento, ya que los

contaminantes son realmente degradados.

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Pueden ser acoplados a otro tipo de tecnologa cuando la remocin de

los contaminantes no es la deseada.

Los contaminantes absorbidos o atrapados en los poros del suelo,

tambin son biodegradados.

Si la actividad microbiana no es la deseada, puede estimularse con la

adicin controlada de compuestos requeridos.

Cuando los contaminantes orgnicos son empleados como la principal

fuente de carbono y energa para los microorganismos el proceso se
realiza con mayor rapidez.

Cuando se trata de una biorremediacin in situ se tienen ventajas

adicionales.

Se eliminan costos de transportacin.

Al utilizar la poblacin microbiana autctona se elimina la necesidad de

introducir microorganismos potencialmente peligrosos.

D. MICROORGANISMOS INVOLUCRADOS EN ALGUNOS PROCESOS

DE BIODEGRADACIN
1. Biodegradacin de Hidrocarburos
En el siguiente cuadro se representan los gneros ms comunes de hongos
y bacterias que tienen la capacidad degradadora. Estos microorganismos
degradan compuestos especficos o grupos de compuestos.
BACTERIAS
Achromobacter
Micrococcus
Acinetobacter
Mycobacterium
Alcaligenes
Nocardia
Arthrobacter
Proteus
Bacillus
Pseudomonas
Brevibacterium
Sarcina
Chromobacterium
Serratia
Corynebacterium
Spirillum
Cytophaga
Streptomyces

HONGOS
Acremonium
Glicladium
Aspergillus
Graphium
Aureobasidium
Humicola
Beauveria
Monilia
Botrytis
Mortierela
Candida
Paecelomyces
Chryisosporium
Penicillium
Cladosporium
Rhodotorula
Cochlobolus
Saccharomyces

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Erwinia
Flavobacterium

Vibrio
Xanthomonas

Cylindrocarpon
Debaryomyces
Fusarium
Geotrichum

Spicardia
Tolypocladium
Thrichoderma
Verticillium

2. Biodegradacin de Pesticidas
Algunos gneros de hetertrofos usan pesticidas como sustratos ya
sea cometabolizando las molculas o usando stas como nutrientes.
BACTERIAS
Agrobacterium
Arthrobacter
Bacillus
Clostridium
Corynebacterium
Flavobacterium
Klebsiella
Pseudomonas
Xanthomonas

ACTINOMICETOS
Streptomyces
Nocardia
Micromonospora

HONGOS
Alternaria
Aspergillus
Cladosporium
Fusarium
Glomerella
Mucor
Penicillium
Rhizoctonia
Trichoderma

3. Biodegradacin de metales pesados

MERCURIO

SELENIO

ARSENICO

Bacillus
Clostridium
Mycobacterium
Pseudomonas
Aspergillus
Neurospora
Scopulariopsis
y algunas levaduras

Candida spp
Clostridium
Corinebacterium
Micrococcus

Aspergillus
Mucor
Scopulariopsis
Fusarium
Paecilomyces

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CAPTULO III
PRINCIPALES GRUPOS DE MICROORGANISMOS

A. BACTERIAS
1. rbol Filogentico Universal
Las bacterias o eubacterias son microorganismos unicelulares que
pertenecen al dominio Bacteria.

Los miembros de este dominio tienen

diferencias con aquellos pertenecientes a los otros dos dominios, Archaea y

Eukarya.
En la Tierra, existen slo dos tipos bsicos de clulas que son estructuralmente
muy diferentes: las procariontes y las eucariontes. Las bacterias son
clulas procariontes.

rbol Filogentico Universal

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2. Abundancia
En general, el grupo ms numeroso de bacterias en el suelo son los
Actinomicetos que resisten condiciones secas y pueden sobrevivir en suelos
desrticos.

Los gneros ms comunes son: Nocardia, Arthrobacter y

Streptomyces.
Las bacterias del gnero Streptomyces adems de producir antibiticos,
producen metabolitos llamados geosminas las cuales dan al suelo su olor
caracterstico.
Otro grupo comn de bacterias heterotrficas del suelo es el Myxobacteria que
son pigmentadas y forman masas brillantemente coloreadas. Bajo condiciones
de inanicin se acumulan para formar complejos cuerpos fructificantes
macroscpicos,

los cuales contienen esporas que pueden sobrevivir en

condiciones pobres de nutrientes.

Las bacterias estn ntimamente ligadas a la existencia de la vida sobre la
Tierra. Son causantes de muchas enfermedades, pero tambin en muchos
casos son las responsables de la continuidad de la vida.
3. Caractersticas
Las bacterias no poseen todas las estructuras que contienen en su interior las
clulas de los organismos superiores (desde levaduras hasta las clulas de
cualquier animal).
Las eubacterias presentan las siguientes caractersticas principales:
a. Presentan una envoltura llamada pared celular, con excepcin de los
Mycoplasmas, que le otorga rigidez y proteccin en medios osmticamente
inadecuados. La pared celular est formada de un componente qumico
especfico llamado peptidoglicano y su presencia ha permitido catalogar a
las bacterias en Gram positivas (color violeta) y Gram negativas (color
rosado).

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b. La membrana citoplasmtica posee una estructura trilaminar tpica y est

formada por lpidos, protenas y pequeas cantidades de hidratos de
carbono.
c. No tienen un ncleo que contenga al cido desoxirribonucleico (ADN), el
cual es el material gentico, sino que ste se encuentra libre en su interior
(citoplasma), es decir, el cromosoma es desnudo y se lo conoce como
nucleoide. El tamao de esta molcula de ADN es varios cientos de veces
ms grande que la bacteria misma y contiene toda la informacin hereditaria
necesaria.
d. El citoplasma contiene, adems, molculas de ARN, llamadas ribosomas,
cuya funcin es la de ensamblar protenas que tendrn, a su vez, diversas
funciones. Estos ribosomas son ms pequeos (70s) que los de las clulas
de los animales superiores.
e. Poseen grnulos citoplasmticos que son acumulaciones de materiales
de reserva como polisacridos, lpidos y polifosfatos.
f. Las bacterias pueden tener organelos que les permitan moverse, los ms
comunes son los flagelos.
g. Las bacterias pueden tener diversas formas: esfricas, en forma de bastn y
hasta ramificadas. En general, su tamao es muy inferior al de una clula de
un organismo superior y su multiplicacin es por divisin Se reproducen por
fisin binaria o divisin asexual simple. (Ej. Escherichia coli completa su
divisin en 45 minutos)
d. Algunas bacterias tienen estructuras conocidas como endosporas, las
cuales pueden resistir el paso del tiempo y aun agresiones tales como altas
temperaturas y productos qumicos txicos que acaban normalmente con
una bacteria. Estas esporas permanecen en estado latente y, bajo
condiciones adecuadas, pueden dar lugar a una nueva bacteria.

20

4. Clasificacin de las bacterias segn la estructura de la

pared celular
Dentro de las eubacterias existen tres grupos de bacterias que pueden ser
diferenciados en relacin a la estructura de la pared celular.
La forma ms sencilla de identificar una bacteria es la coloracin o tincin de
Gram, la misma que es una tincin diferencial porque no todas las clulas se
tien de la misma manera y de esa manera permite discriminar entre dos
grandes grupos de eubacterias, las eubacterias Gram positivas y Gram
negativas.
Los microorganismos Gram positivos, como el Staphylococcus aureus,
adquieren un color violeta despus de la coloracin de Gram, debido a que
contienen una pared celular estructuralmente muy diferente a la de los
microorganismos Gram negativos, como la Escherichia coli, que adquieren un
color rosado.
El tercer grupo de eubacterias es el de los Bacilos Acido-Alcohol
Resistentes (BAAR) que pueden ser diferenciados utilizando la coloracin de
Ziehl-Neelsen. La diferencia en la coloracin no se debe a reacciones qumicas
con ciertos componentes de la pared sino a la estructura fsica de la misma.
a. Caractersticas de las eubacterias Gram positivos
Las eubacterias Gram positivas son clulas con una gruesa pared celular de
peptidoglicano, mientras que la membrana citoplasmtica est formada con
fosfolpidos y protenas. El compuesto peptidoglicano es una macromolcula
gigante

formada

por

cadenas

de

un

dmero

compuesto

por

N-

acetilglucosamina y N-acetilmurmico. A su vez, estas cadenas se

encuentran unidas entre s mediante pptidos, que son pequeas cadenas de
aminocidos que se entrecruzan. Estos puentes peptdicos son caractersticos
de las distintas bacterias y presentan mayor rigidez cuanto ms complejo sea el
entrecruzamiento.

21

El peptidoglicano es una malla porosa que otorga forma y rigidez a la clula, y

evita que la clula estalle en medios hipotnicos. Al ser porosa permite el paso
de nutrientes desde el exterior y el movimiento de enzimas catalticas y
productos de secrecin hacia el exterior de la clula.
La pared celular Gram positiva tambin contien cidos teicoicos y cidos
lipoteicoicos. Los cidos teicoicos son cadenas de ribitol o glicerol unidas
por fosfodisteres, y estn unidos covalentemente al peptidoglicano por
medio de grupos fosfodister en el oxihidrilo del C6 del N-acetilmurmico. Los
cidos lipoteicoicos son polmeros de glicerofosfato se encuentran anclados en
la membrana citoplasmtica y no estn unidos al peptidoglicano. La funcin de
estos compuestos sera estructural, pero existen evidencias que indican que
tambin participaran en la regulacin de las enzimas hidrolticas que renuevan
la pared celular.

Esquema de las Envolturas de una Eubacteria Gram Positiva

b. Caractersticas de las eubacterias Gram negativas

Las eubacterias Gram negativas son clulas con una delgada capa de
peptidoglicano y una segunda envoltura denominada membrana externa.
Las clulas se encuentran envueltas por una membrana citoplasmtica
formada por una bicapa fosfolipdica y protenas. Por encima de esta
membrana se encuentra una fina capa de peptidoglicano que se halla unida

22

covalentemente a unas lipoprotenas de anclaje que fijan la membrana

externa por medio de porciones lipoflicas. Entre la membrana citoplasmtica y
la membrana externa queda delimitado el espacio periplsmico. Este espacio
es ocupado por el periplasma que es una matriz isotnica respecto al
citoplasma, isotonicidad que es mantenida mediante los oligosacridos
derivados de membrana (MDO), y en la que se hallan componentes catalticos
de suma importancia para la viabilidad celular.
La membrana externa tiene una estructura de bicapa asimtrica en donde la
cara externa esta compuesta por el lipopolisacarido (LPS) y la cara interna
por fosfolpidos. Adems, esta membrana es rica en protenas, algunas de las
cuales se denominan porinas. La membrana externa funciona como una
barrera de permeabilidad para ciertas sustancias como antimicrobianos y
retarda el pasaje de otros que son inactivados en el periplasma. El LPS est
formado por tres regiones: el polisacrido O (Antgeno O), el polisacrido
del centro (KDO) y el lpido A (Endotoxina). La presencia del LPS en la
membrana externa le confiere a la clula una efectiva proteccin contra
enzimas digestivas y detergentes como las sales biliares, y dota a la superficie
bacteriana con una fuerte hidrofilicidad que le permite a la clula evadir la
fagocitosis, tener cierta resistencia al complemento, evitar la respuesta inmune
especfica por alteracin de la superficie antignica y adherirse a ciertas clulas
del hospedero.
Las porinas son poros o canales proteicos no especficos que pueden ser
atravesados por pequeas molculas hidroflicas. En la membrana externa se
encuentran otras protenas que funcionan como canales de difusin especficos
y facilitan el paso de di, tri y oligosacridos.

23

Esquema de las Envolturas de una Eubacteria Gram Negativa

c. Caractersticas de los Bacilos Acido-Alcohol Resistentes

Los

microorganismos

pertenecientes

al

gnero

Mycobacterium

se

caracterizan por tener una pared celular completamente diferente a las

restantes eubacterias. La pared de las Mycobacterias posee un alto contenido
de lpidos que la hace impermeable a los agentes hidroflicos, por lo tanto estos
microorganismos no se tien adecuadamente con los reactivos utilizados en la
coloracin de Gram y no pueden ser clasificados como Gram positivos o
negativos. Las Mycobacterias son teidas adecuadamente por el mtodo de
Ziehl-Neelsen (Tincin Acido-Rpida) que utiliza como solucin decolorante
una mezcla de etanol y cido clorhdrico. Estos microorganismos una vez
coloreados son resistentes a la decoloracin cido-alcohlica y por eso se
denominan Bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR).
Los microorganismos del gnero Mycobacterium contienen una membrana
citoplasmtica formada por una bicapa lipdica similar a las restantes
eubacterias. Por encima de esta membrana se encuentra el rgido
peptidoglicano

que

contiene

N-glucolilmurmico

en

lugar

de

N-

acetilglucosamina. Por medio de una unin fosfodister, el peptidoglicano se

halla unido covalentemente al arabinogalactano, un polmero de arabinosa y
galactosa. En la porcin ms distal y externa de los arabinogalactanos se

24

hallan fijados los cidos miclicos que tienen cadenas carbonadas largas
(C60 a C90). Los glucolpidos son un grupo de compuestos (micolatos de
trealosa, sulfolpidos, micsidos, etc) que se encuentran asociados no
covalentemente a los cidos miclicos y se ubican perifricamente en la pared.
Los micolatos de trealosa (llamados factores de cordn porque su presencia
produce cultivos que tienen forma de cordones serpenteantes) y sulfolpidos se
encuentran principalmente en las cepas de Mycobacterias ms virulentas. El
lipoarabinomanano (LAM) es un compuesto que se halla anclado en la
membrana citoplasmtica. El LAM es considerado como el equivalente
mycobacteriano del lipopolisacrido de las Gram negativas debido a que
provoca una importante respuesta antimicrobiana en macrfagos. En las cepas
de Mycobacterias ms virulentas la arabinosa terminal del LAM est recubierta
con residuos de manosa (manLAM) a diferencia de las cepas no virulentas no
estn recubiertas (AraLAM). Adems, el LAM tambin podra servir como poro
para el paso de los nutrientes a travs de la pared celular. En la pared celular
tambin se encuentran protenas inmunoreactivas que son utilizadas con fines
diagnsticos (PPD).
El Mycobacterium tuberculosis es el agente etiolgico de la tuberculosis, una
enfermedad que primariamente produce lesiones en los pulmones y que puede
causar la muerte.

La lepra es una infeccin causada por el Mycobacterium

leprae que es un parsito intracelular obligado.

Esquema de las Envolturas de una Eubacteria Acido - Alcohol Resistente

25

5. Algunos grupos de bacterias

a. Bacterias verdaderas heterotrofas
Gram Negative
Pseudomonas
Rhizobium
Bradyrhizobium
Azotobacter
Agrobacterium
Serratia
Flavobacterium
Enterobacter
Sphaerotilus
Spirillum
Myxococcus
Escherichia
Photobacterium
Leptothrix
Desulfovibrio

Gram Positive
Bacillus
Clostridium
Enterococcus
Corynebacterium
Arthrobacter
Mycobacterium
Micrococcus

Actinomycetes
Rhodococcus
Nocardia
Frankia
Streptomyces

b. Bacterias verdaderas autotrofas

Fotoautotrofas

Nitrificadores

Purple Sulfur
Green Sulfur
Purple Nonsulfur

Nitrosomonas
Nitrobacter

Oxidadotas del Metanotrofas

S
Thiobacillus
Methylomonas
Beggiatoa

c. Archaeabacteria
Methanogens

Halophiles

Hyperthermophiles

Methanobacterium

Halobacterium
Natronobacterium

Thermococcus

d. Cyanobacterias (algas azul - verdes)

Oscillatoria
6. Bacterias que causan enfermedades humanas.

Sulfur
Dependent
Sulfolobus

26

Slo una pequea parte de los miles de especies de bacterias causan

enfermedades humanas conocidas. Generalmente, las bacterianas son
destridas con calor (esterilizacin y pasteurizacin) y antibiticos. Pero el abuso
de estos compuestos en los ltimos aos ha favorecido el desarrollo de cepas
de bacterias resistentes a su accin, como Mycobacterium tuberculosis, que
causa la tuberculosis. Entre los gneros importantes se mencionan a:
TIPO
Bacilo

ESPECIE
Bacillus anthracis
Bacillus cereus
Clostridium botulinum
Clostridium perfringens
Clostridium tetani
Corynebacterium diphtheriae
Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Mycobacterium leprae
Mycobacterium tuberculosis
Salmonella sp.
Salmonella typhi
Salmonella typhimurium
Shigella dysenteriae
Shigella sp.
Yersinia enterocolitica
Yersinia pestis
Yersinia pseudotuberculosis

Clamidia Chlamydia trachomatis

Cocoba Bordetella pertussis
Brucella sp.
cilo

Haemophilus influenzae
Haemophilus pertussis

Coco

Neisseria gonorrhoeae
Neisseria meningitidis
Staphylococcus aureus
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus pyogenes
Streptococcus sp.

Listeria

Listeria monocytogenes

Micoplas Mycoplasma pneumoniae

ma
Rickettsia prowazekii
Rickett
sia
Rickettsia rickettsii
Rickettsia typhi

Espirilo

Campylobacter fetus jejuni

Spirillum minor

ENFERMEDAD
ntrax
Intoxicacin alimentaria por Bacillus cereus
Botulismo
Mionecrosis clostridial (gangrena gaseosa)
Ttanos
Difteria
Diarrea
Bronconeumona
Lepra
Tuberculosis
Salmonelosis
Fiebres tifoideas
Gastroenteritis por Salmonella
Disentera bacilar
Sigelosis
Yersiniosis, gastroenteritis
Peste
Linfadenitis mesentrica
Tracoma, uretritis, cervicitis, conjuntivitis
Tos ferina
Brucelosis
Meningitis, neumona bacteriana
Tos ferina
Gonorrea, enfermedad inflamatoria plvica
Meningitis
Neumona, sndrome de shock txico,
infecciones de la piel, meningitis
Neumona, infecciones del odo, meningitis
Infecciones de garganta, fiebre reumtica
Escarlatina, fiebre puerperal
Listeriosis, septicemia perinatal, meningitis,
encefalitis, infecciones intrauterinas
Neumona
Tifus epidmico, enfermedad de Brill-Zinsser
(transmitida por piojos)
Fiebre de las montaas Rocosas
(transmitida por garrapatas)
Tifus endmico (tifus murino, transmitido por
la pulga de la rata)
Campilobacteriosis (diarrea bacteriana)
Fiebre producida por mordedura de rata

27

Espiro
queta
Vibrio

Treponema pallidum

Sfilis

Aeromonas hydrophila

Gastroenteritis, septicemia, celulitis,

infecciones de heridas, infecciones de las
vas urinarias
Gastroenteritis, diarrea
Clera epidmico
Gastroenteritis
Gastroenteritis por Vibrio parahemolyticus
Infecciones de heridas, gastroenteritis,
septicemia primaria

Plesiomonas shigelloides
Vibrio cholerae 01
Vibrio cholerae no-01
Vibrio parahemolyticus
Vibrio vulnificus

7. Bacterias que causan enfermedades a plantas.

B. HONGOS
1. Generalidades
Los hongos son organismos que pertenecen a al reino Fungi,
para diferenciarlo de Procariote, Protista, Plantae y Animalia.
Las caracteristicas especficas de los hongos son:
a. Presencia

de

sustancias

trealosa y manitol.

qumicas

especiales,

como

la

28

b. La diversidad y complejos ciclos de sus ciclos de vida

(diferenciacin sexual y la duracin de la fase diploide).
c. La nutricin es por absorcin, a diferencia de lo que ocurre
en el reino vegetal que es por fotosntesis y digestin en el
reino animal.
d. El crecimiento depende enteramente sobre la reproduccin
asexual.
Los hongos tienen similitud con los miembros del reino vegetal por
la presencia de una pared celular y vacuolas.
Tambin, los hongos se parecen a los animales por la carencia de
plastidios, qumicamente son similares a algunos animales por
poseer quitina en sus paredes celulares y compuestos especficos
de almacenamiento como el glucgeno.
Algunos hongos son saprofticos, es decir pueden explotar materia
orgnica muerta.

Viven sobre hojarasca, restos de vegetales y

animales muertos y sobre estircol.

Otros son parsitos y explotan materia orgnica viva, daando al
hospedero, el cual puede ser animal, vegetal u hongo.

Otras especies han preferido mantener relaciones simbiticas con

organismos, generalmente auttrofos, donde la relacin implica
beneficio

mutuo.

Los

mejores

ejemplos

son

los

(alga/hongo) y las micorrizas (vegetal/hongo).

2. Importancia
Importantes descomponedores de la materia orgnica.

lquenes

29

Comestibles: Pleurotas ostreatus, lentinula edades, Stropharia

rugosoannulata,
Legista

nuda,

Auricularia
Tuber

aurcula-judae,

melanosporum,

Coprinus

Suillus

comatus,

luteus,

Agaricus

bisporus, Flammulina velutipes , etc.

Medicinales: Penicillium, Lentinula edodes
Bioindicadores: Los que forman lquenes, micorrizas
Etnomicolgicos: Marasmius, Cortinarius .

3. Morfologa
Los hongos no poseen tallo, hojas ni races.

Su cuerpo consiste

de un talo, no forman tejidos en el sentido funcional por lo tanto

no forman rganos.
El talo generalmente est formado de clulas alongadas llamadas
hifas, las cuales pueden ser septadas (conparedes horizontales
cruzadas)

no

septadas

(aseptadas)

si

no

cruzadas, esta es la estructura coenoctica.

tienen

paredes

La ltima estructura

es limitada a pocos grupos particulares como MASTIGOMYCOTA Y

ZYGOMICOTYNA.
corresponde
levaduras.

En

solamente

algunos
a

una

casos,
clula,

el

aparato

como

el

vegetativo

caso

de

las

Sin embargo, en la mayora de los casos las hifas se

juntan para formar microscpicos filamentos, lo cual se denomina

micelio, vara en densidad, carece de cualquier estructura
prominente.
En

un

cierto

estado

de

desarrollo,

si

las

condiciones

son

favorables el proceso reproductivo se inicia, produce una clase

especial de clulas llamadas esporas a partir de una simple
fragmentacin del talo no diferenciado o a partir de la fusin de
ncleos celulares donde se mezclan los genes.

30

Las esporas pueden provenir directamente del micelio o mas

frecuentemente

de

estructuras

diferenciadas,

denominadas

esporforos, los mismos que pueden ser de variadas formas,

tamao y complejidad, como aquellos que producen las Morchelas,
Trufas,

Boletus

Amanitas.

Pero

otros

hongos

producen

esporforos microscpicos, tan espectaculares como los primeros.

3. Ciclos de vida
El

curso

del ciclo

de vida de

un

hongo

muestra

marcadas

variaciones de acuerdo a la consideracin del grupo.

Se puede decir que el nacimiento de un hongo ocurre en el
momento de la germinacin de la espora. Este evento da lugar al
micelio, llamado en este caso micelio primario, cu yas clulas
contienen un solo ncleo con n cromosomas.
Este micelio primario se desarrollar invadiendo su sustrato, el
cual coloniza rpidamente, en dependencia de los parmetros
ambientales.

Durante este estado, el micelio puede permanecer

difuso o arreglarse en masas estructuradas, las cuales no forman

tejidos reales, pero reciben el nombre de plectnquimas.
Cuando las condiciones lo permiten, la reproduccin puede ocurrir.
Entre

las

condiciones

que

se

mencionan

favorecen

la

reproduccin, no solamente son las de tipo favorable sino tambin

muchos hongos reaccionan al stress.
Si la reproduccin es de tipo asexual, el micelio primario produce
esporas dispersas solamente sobre el micelio o en esporforos
mas o menos complejos formados a partir de plectnquimas de
varias clases.
Si la reproduccin es de tipo sexual, es importante primero la
presencia de dos micelios de polaridad complementaria , los
cuales

se

fusionan

ocurre

la

plasmogamia

(fusin

del

31

citoplasma) y da lugar a un micelio secundario (fase dicaritica con

2 x n cromosomas).

Las conexiones clam frecuentemente

ocurren sobre las septas. Cuando las condiciones son adecuadas

crecern esporforos que contienen clulas frtiles como ascos o
basidios, mas tarde en la fase de su ciclo reproductivo, ocurre la
fusin nuclear, con la cual se forman ncleos con 2n cromosomas.
La fusin es inmediatamente seguida por una serie de tres
divisiones, las cuales redistribu yen un stock nuclear haploide.
Entonces el ciclo es completado.
Poco se conoce acerca de la muerte de un hongo.

Esto ocurre

cuando el micelio primario o secundario desaparece por varias

razones. Algunas especies parecen ser anuales, y ellos recurren a
la produccin de esporas para la perpetuacin de su especie.
Otros son perennes, sobreviven en una forma micelial por muchos
aos antes de producir esporforos.
4. Fisiologa
Los hongos son organismos heterotrficos con respecto al carbono.
Su comportamiento es ms variable con respecto al nitrgeno,
algunas utilizan nitrgeno orgnico o mineral. Tambien necesitan
Hidrgeno, fsforo, potasio, magnesio, azufre, manganeso, cobre,
hierro, zinc, vitaminas, etc.
todo su ciclo biolgico.

Necesitan agua durante una parte o

El calor y la luz tambin tienen un papel

importante en su fisiologa.
Son es su mayora aerbicos, aunque la micoflora del tracto
digestivo de los rumiantes es anaerbica.
Los hongos tienen un gran potencial metablico en virtud de sus
variadas

reacciones

enzimticas.

Eso

implica,

que

pueden

adaptarse a numerosos hbitats donde pueden producir una gran

cantidad y variedad de molculas qumicas, entre las que se

32

destacan muchas de tipo beneficioso y otros como altamente

venenosos para el hombre.

Hongos que causan enfermedades a humanos

En la mayora de la gente sana, las infecciones por hongos como la tia y el pie
de atleta son leves, afectan slo a la piel, el cabello, las uas, u otras zonas
superficiales. Sin embargo, en las personas con un sistema inmunolgico
deteriorado, como en pacientes con SIDA, diabetes, o que estn recibiendo
hormonas esteroideas; este tipo de infecciones, denominadas dermatofitosis
(Microsporum, Epidermophyton y Trichophyton), pueden persistir durante
largo tiempo y pueden causar la muerte. Los

pacientes con una infeccin

crnica por Candida, Histoplasma o Cryptococcus pueden necesitar

tratamiento a largo plazo.
Hongos que causan enfermedades a plantas
C.

VIRUS

1. Introduccin
(Del latn, veneno),

son consideradas como entidades orgnicas

compuestas tan slo de material gentico, rodeado por una envuelta

protectora. El trmino virus se utiliz en la ltima dcada del siglo pasado
para describir a los agentes causantes de enfermedades ms pequeos
que las bacterias. Los virus son parsitos intracelulares obligados, es
decir: slo se replican en clulas con metabolismo activo, y fuera de ellas se
reducen a macromolculas inertes.

Muchos

virus conocidos causan

enfermedades a los seres humanos, animales, bacterias y plantas.

33

La existencia de los virus se estableci en 1892, cuando el cientfico ruso

Dmitry I. Ivanovsky, descubri unas partculas correspondientes al virus
del mosaico del tabaco. En 1898 el botnico holands Martinus W.
Beijerinck denomin virus a estas partculas infecciosas. Pocos aos ms
tarde, se descubrieron virus que crecan en bacterias, a los que se
denomin bacterifagos.

En la dcada de 1940 el desarrollo del

microscopio electrnico posibilit la visualizacin de los virus por primera

vez.
2. Caractersticas

Partes de un virus
Los virus son parsitos intracelulares submicroscpicos, compuestos por ARN
o por

ADN

(nunca ambos) y una capa protectora de protena sola o

combinada (lipdos y glcidos). En general, el cido nucleico es una molcula

nica de hlice simple o doble; sin embargo, ciertos virus tienen el material
gentico segmentado en dos o ms partes. La cubierta externa de protena
se llama cpsida y las subunidades que la componen, capsmeros. Se
denomina nucleocpsida, al conjunto de todos los elementos anteriores.
Algunos virus poseen una envuelta adicional que suelen adquirir cuando la
nucleocpsida sale de la clula hospedera. La partcula viral completa se
llama virin.
El tamao y forma de los virus son muy variables, pero hay dos grupos
estructurales bsicos: isomtricos, con forma de varilla o alargados, y virus
complejos, con cabeza y cola (como algunos bacterifagos). Los virus ms

34

pequeos son icosadricos (polgonos de 20 lados) que miden entre 18 y 20

nanmetros. Los de mayor tamao son los alargados; algunos miden varios
micrmetros de longitud, pero en forma general no suelen medir ms de 100
nanmetros de ancho.
Muchos virus con estructura helicoidal interna (forma esfrica) presentan
cubiertas externas compuestas de lipoprotenas, glicoprotenas, o ambas, su
tamao oscila entre 60 y ms de 300 nanmetros de dimetro. Los virus
complejos, como algunos bacterifagos, tienen cabeza y una cola tubular que
se une a la bacteria hospedera.
En las plantas los virus causan daos como deformaciones, enanismo y
disminucin de la produccin de frutos y bulbos. Estas enfermedades pueden
ser reconocidas por sntomas como pequeas lesiones necrticas, manchas
amarillas (mosaico), anillos de color ms claro o lneas blancas (variegado) en
las hojas o deformaciones y cambios de color en los frutos. Una vez que la
planta est infectada es muy difcil que se pueda recuperar. Lo recomendable
es eliminar las enfermas y realizar acciones preventivas para evitar la
diseminacin de la enfermedad en el cultivo.
Los virus ingresan a las plantas por contacto directo entre un individuo
enfermo y otro sano, por ejemplo a travs de heridas durante la poda con
herramientas infectadas, o a causa de vectores biolgicos como insectos
(pulgones, mosquitos) o nemtodos que muerden sus races. Luego los virus
se mueven hacia los diferentes tejidos de la planta, diseminando la infeccin.
Los virus se detectan mediante el test ELISA (Enzime-Linked Immunosorbent
Assay). Usando extractos de varias plantas se ponen en los distintos pocillos
de una placa. Si los virus estn presentes son atrapados por anticuerpos que
reconocen las protenas virales (cambio de color). De este modo, se puede
distinguir plantas sanas (pocillos incoloros) y plantas infectadas (pocillos de
color).
Ultimamente, se estn creando plantas transgnicas resistenctes a virus, para
los cual a una planta normal se introduce un pequeo trozo del genoma del
virus (utilizando un vector que generalmente es Agrobacterium), con lo cual el

35

vegetal queda preparado para contrarrestar una infeccin viral, impidiendo

que el virus se replique.
3. Replicacin
Los virus carecen de las enzimas y precursores metablicos necesarios para
su propia replicacin, por lo que, los obtienen de la clula hospedera que
infectan. La replicacin viral es un proceso que incluye varias sntesis
separadas y el ensamblaje posterior de todos los componentes, para dar
origen a nuevas partculas infecciosas. La replicacin se inicia cuando:
a. El virus entra en la clula y las enzimas celulares eliminan la cubierta y el
ADN o ARN viral.
b. ADN o ARN viral se pone en contacto con los ribosomas, dirigiendo la
sntesis de protenas.
c. El cido nucleico del virus se autoduplica y se sintetizan las subunidades
proteicas que constituyen la cpsida.
d. Los componentes se ensamblan dando lugar a nuevos virus. Una nica
partcula viral puede originar una progenie de miles.
Determinados virus se liberan destruyendo la clula infectada, y otros sin
embargo salen de la clula sin destruirla por un proceso de exocitosis que
aprovecha las propias membranas celulares. En algunos casos las infecciones
son silenciosas, es decir, los virus se replican en el interior de la clula sin
causar dao evidente.
Los virus que contienen ARN son sistemas replicativos nicos, ya que el ARN
se autoduplica sin la intervencin del ADN. En algunos casos, el ARN viral
funciona como ARN mensajero, y se replica de forma indirecta utilizando el
sistema ribosomal y los precursores metablicos de la clula hospedera. En
otros, los virus llevan en la cubierta una enzima dependiente del ARN que
dirige el proceso de sntesis. Otros virus de ARN, los retrovirus, pueden
producir una enzima que sintetiza ADN a partir de ARN. El ADN formado acta
entonces como material gentico viral.

36

Durante la infeccin, los bacterifagos y los virus de animales difieren en su

interaccin con la superficie de la clula husped. Por ejemplo, el bacterifago
T7, que infecta a la bacteria Escherichia coli, se fija primero a la clula y,
despus, inyecta su ADN dentro de ella y luego ocurre los mismos eventos
bsicos de la replicacin viral.

Proceso de replicacin de un bacterifago

4. Virus que causan enfermedades humanas
Los virus causan muchas enfermedades humanas comunes, como resfriados,
gripes, diarreas, varicela, sarampin y paperas. Algunas enfermedades vricas,
como la rabia, la fiebre hemorrgica, la encefalitis, la poliomielitis, la fiebre

37

amarilla o el sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), son mortales. La

rubola y el citomegalovirus pueden provocar anomalas graves o la muerte en
el feto.
Se estima que hay entre 1.000 y 1.500 tipos de virus, de los que
aproximadamente 250 son patgenos para el hombre.
TIPO
Adenovirus
Bunyavirus

VIRUS

ENFERMEDAD
Resfriado comn
Hantaan
Insuficiencia renal
La Crosse
Encefalitis (infeccin
Sin Nombre
cerebral)
Sndrome pulmonar
Calicivirus
Norwalk
Gastroenteritis (diarrea,
vmitos)
Coronavirus Corona
Resfriado comn
Filovirus
bola
Fiebre hemorrgica
Marburg
Fiebre hemorrgica
Flavivirus
Hepatitis C (no A, no B)
Hepatitis
Fiebre amarilla
Hepatitis, hemorragia
Hepadnavirus Hepatitis B (VHB)
Hepatitis, cncer de hgado
Herpesvirus Citomegalovirus
Defectos de nacimiento
Virus Epstein-Barr (VEB)
Mononucleosis, cncer
Herpes simple tipo 1
nasofarngeo
Herpes simple tipo 2
Herpes labial
Virus herpes humano 8
Lesiones genitales
(VHH8)
Sarcoma de Kaposi
Varicela-zster
Varicela, herpes zster
Ortomixovirus Influenza tipos A y B
Gripe
Papovavirus Virus del papiloma humano Verrugas, cncer de cuello
(VPH)
del tero
Picornavirus Coxsackievirus
Miocarditis (infeccin del
Echovirus
msculo cardiaco)
Hepatitis A
Meningitis
Poliovirus
Hepatitis infecciosa
Rinovirus
Poliomielitis
Resfriado comn
Paramixovirus Sarampin
Sarampin
Paperas
Paperas
Parainfluenza
Resfriado comn, infecciones
del odo
Parvovirus
B19
Eritema infeccioso, anemia
crnica
Poxvirus
Ortopoxvirus
Viruela (erradicada)
Reovirus
Rotavirus
Diarrea
Retrovirus
Virus de la
Sndrome de

38

inmunodeficiencia humana
(VIH)
Virus de la leucemia
humana de las clulas T
(VLHT-1)
Rhabdovirus Rabia
Togavirus
Encefalomielitis equina del
este
Rubola

inmunodeficiencia adquirida
(SIDA)
Leucemia de clulas T del
adulto, linfoma,
enfermedades neurolgicas
Rabia
Encefalitis
Rubola, defectos de
nacimiento

6. Virus que causan enfermedades a plantas

D. PROTOZOARIOS
1. Introduccin
Son organismos microscpicos unicelulares, su hbitat es muy diverso, pero
frecuentemente se los encuentra en la tierra y el agua. Algunos de ellos
pueden vivir durante muchos aos de forma inactiva protegidos por una
cubierta en forma de quistes.

Al ser humano pasan a travs del agua,

alimentos, picaduras de insectos portadores y mediante relaciones sexuales.

Una de las enfermedades producida por protozoos, y muy extendida por todo el
mundo, es la malaria, transmitida por la picadura del mosquito Anopheles. La
disentera amebiana es transmitida por la ingesta de aguas contaminadas,
mientras que, la tricomoniasis es una infeccin que se transmite por contagio
sexual.

C APITULO IV
FISIOLOG A DE LOS MICROBIOS

39

A. REQUERIMIENTOS NUTRICION ALES

1. Requerimientos qumicos
El objetivo de un microorganismo es crecer y dividirse; para ello necesita
duplicar el material que posee. Las clulas utilizan elementos qumicos que
provienen del medio ambiente para transformarlos en los constituyentes
caractersticos que componen dicha clula. Estos compuestos qumicos se
llaman nutrientes y el proceso por el cual una clula transforma estos nutrientes
en sus componentes celulares se denomina anabolismo o biosntesis. La
biosntesis es un proceso que requiere energa. Esta energa se obtiene del
medio ambiente. Las clulas pueden utilizar tres tipos distintos de fuentes de
energa: luz, compuestos orgnicos o compuestos inorgnicos. Aunque algunos
organismos obtienen su energa de la luz, la mayor parte lo hacen a travs de
compuestos qumicos. Cuando estos compuestos qumicos se rompen
originando compuestos ms simples se libera energa y a este proceso se le
denomina catabolismo. El resultado colectivo de las reacciones anablicas y
catablicas es el metabolismo.
Cuando los microorganismos se separan de su hbitat (donde adquieren los
nutrientes) y se cultivan en laboratorios o industrias se deben usar medios de
cultivo que contengan los elementos qumicos necesarios para su crecimiento.
Los nutrientes que requiere una clula para su crecimiento se pueden clasificar
en los siguientes grupos:
a. Macronutrientes: carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno.
b. Micronutrientes: fsforo, potasio, azufre, magnesio.
c. Vitaminas y hormonas o factores de Crecimiento.
d. Elementos traza

o Iones Inorgnicos (zinc, cobre, manganeso,

molibdeno, cobalto, etc.).

40

a. Macronutrientes
1. Carbono
Todos los organismos necesitan carbono en alguna de sus formas. El carbono
forma el esqueleto de los tres ms importantes nutrientes (carbohidratos,
lpidos y protenas) que se utilizan para la obtencin de energa as como
material celular. Los microorganismos que utilizan compuestos orgnicos como
fuente de carbono se llaman hetertrofos y aquellos que utilizan el CO2 como
fuente de carbono se llaman auttrofos.

Este elemento puede aportarse a los microorganismos en forma muy diversa

dependiendo del tipo de metabolismo que posean. El carbono es utilizado por
los microorganismos para sintetizar los compuestos orgnicos requeridos para
las estructuras y funciones de la clula.
Los microorganismos se pueden dividir en categoras nutricionales en base a
dos parmetros: naturaleza de la fuente de energa y naturaleza de la
fuente principal de carbono.
Fototrofos: utilizan luz como fuente de energa.
Quimiotrofos: la fuente de energa es qumica.
Autotrofos: utilizan como fuente de carbono al CO 2 y a partir del cual
sintetizan los esqueletos carbonados de los metabolitos orgnicos.
Heterotrofos: utilizan compuestos orgnicos como fuente de C y
electrones.
Combinndose estos dos parmetros se pueden establecer cuatro categoras
principales de organismos:

41

Fotoautotrofos: dependen de la luz como fuente de energa y utilizan CO 2

como principal fuente de carbono. Vegetales superiores, bacterias
fotosintticas, algas eucariticas, etc.
Fotoheterotrofos: utilizan luz como fuente de energa y emplean
compuestos orgnicos como fuente de carbono. Algunas bacterias
fotosintticas y algas eucariticas.
Quimioautotrofos: utilizan CO2 como fuente de carbono y emplean fuentes
de

energa

qumica

proveniente

generalmente

de

compuestos

inorgnicos reducidos (H2, S2-, NH4+, etc).

Quimioheterotrofos: utilizan compuestos orgnicos como fuente de
carbono y energa. Los compuestos orgnicos tambin se comportan
como fuente de electrones. Este grupo est integrado por animales
superiores, hongos, protozoos y la mayora de las bacterias.
2. Hidrgeno
El hidrgeno forma parte de muchos compuestos orgnicos. Se encuentran
en el H2O, como componentes de nutrientes y en la atmsfera.
3. Nitrgeno
Todos los organismos requieren nitrgeno. El nitrgeno es metabolizado y entra
a formar parte de las protenas, cidos nucleicos y polmeros de la pared
celular. Las fuentes de nitrgeno que pueden ser utilizadas por diferentes
organismos incluyen el N2 atmosfrico en algunos procariotas, otros utilizan
compuestos inorgnicos como nitratos, nitritos o sales de amonio, mientras que
otros requieren compuestos nitrogenados orgnicos como son los aminocidos
o pptidos.
El nitrgeno es utilizado por las bacterias para formar aminocidos, pirimidinas,
purinas, etc, y puede provenir de fuentes diferentes.

42

Asimilacin de NH3 y sales de amonio: el nitrgeno es transferido con

este estado de oxidacin a los aminocidos por la va de la
glutamato/glutamina.
Fijacin de Nitrgeno: el N2 es reducido dentro de la clula a NH4+ y
metabolizado.
Reduccin asimiladora de Nitratos: los nitratos son reducidos dentro de
la clula por la va de los nitritos a NH3 y metabolizado.
Hidrolizados proteicos: los microorganismos incapaces de asimilar el
nitrgeno de sales inorgnicas, lo obtienen a travs de compuestos
orgnicos nitrogenados como los hidrolizados proteicos. Estos
compuestos proteicos son a su vez hidrolizados por enzimas
bacterianas, fuera de la clula, a aminocidos, los que despus son
metabolizados dentro de la clula.
4. Oxgeno
De acuerdo a los requerimientos de oxgeno, las bacterias se pueden dividir en
5 grupos:
Aerobios obligados: requieren oxgeno para el crecimiento pues dependen
de este elemento para cubrir sus necesidades energticas. El oxgeno
es el aceptor final de electrones en la cadena respiratoria.
Anaerobios obligados: crecen en ausencia total de oxgeno porque
necesitan un medio muy reductor. Utilizan respiracin anaerobia donde
los aceptores finales de electrones pueden ser generalmente SO 42-,
fumarato2- o CO32-.

43

Anaerobios facultativos: pueden crecer en presencia o ausencia de

oxgeno. Utilizan al oxgeno como aceptor final de electrones en la
cadena respiratoria cuando est disponible, y en ausencia de oxgeno la
energa

la

obtienen

por

fermentacin

respiracin

anaerobia

(generalmente el NO3- es un aceptor final de electrones en las

enterobacterias).

Anaerobios aerotolerantes: pueden crecer en presencia o ausencia de

oxgeno, pero la energa la obtienen por fermentacin.
Microaerofilos: slo pueden crecer con bajas tensiones de oxgeno porque
las altas tensiones son txicas para este tipo de microrganismos (1 a
12% de O2 en la fase gaseosa). La energa la obtienen por respiracin
aerbica, cuando no hay aceptores electrnicos terminales alternativos,
o anaerbica.
b. Micronutrientes
1. Fsforo.
El fsforo es esencial para la sntesis de cidos nucleicos y ATP; tambin forma
parte de los fosfolpidos y polmeros de la pared celular. El fsforo se suministra
normalmente como fosfato inorgnico; alternativamente se puede utilizar
fosfato orgnico como son los glicerofosfatos y fosfolpidos.
2. Potasio
El in potasio acta como coenzima y probablemente como catin en la
estructura de RNA y otras estructuras aninicas celulares.
3. Magnesio
Se utiliza como cofactor de reacciones enzimticas donde acta el ATP.

44

4. Azufre
El azufre es necesario para la biosntesis de los aminocidos cisteina, cistina y
metionina. Forma parte de coenzimas como biotina, coenzima A y ferredoxina.
Tiene un papel muy importante en la estructura terciaria de las protenas
(formacin de puentes S-S) y en el sitio cataltico de enzimas.
El azufre se suministra en forma inorgnica como sulfato u orgnica como
cistina, cisteina y metionina.

Puede ingresar en la clula reducido (grupos

sulfhidrilos), como sulfato (debe ser reducido dentro de la clula para

metabolizarse) o como aminocidos azufrados.
c. Factores de Crecimiento
Son compuestos orgnicos que el microorganismo es incapaz de sintetizar a
partir de los nutrientes y son fundamentales para la maquinaria metablica de
la clula. Son vitaminas, aminocidos, purinas, pirimidinas, etc.
Las vitaminas se clasifican en dos grupos, hidrosolubles y liposolubles. Dentro
de stas ltimas la vitamina A, D y E no son necesarias para el crecimiento de
las bacterias. Todas las vitaminas hidrosolubles, excepto el cido ascrbico,
son necesarias para el crecimiento de bacterias. La mayor parte de las
vitaminas hidrosolubles son componentes de coenzimas. En los medios
indefinidos se utiliza como fuente de vitaminas el extracto de levaduras.
En relacin al requerimiento de factores de crecimiento los microorganismos se
pueden dividir en:
Prottrofos: microorganismos que sintetizan sus propios factores de
crecimiento.
Auxtrofos: microorganismos que requieren una fuente exgena de
factores de crecimiento debido a que son incapaces de sintetizarlos.
d. Elementos traza (c.a. 25 mg / l) o Iones Inorgnicos

45

Son esenciales para el crecimiento porque estabilizan los compuestos

biolgicos como enzimas, ribosomas, membranas, etc. Los iones requeridos
para el crecimiento bacteriano son aportados en el medio a travs de sales que
contienen K+, Mg2+, Mn2+, Ca2+, Na+, PO43-, Fe2+, Fe3+ y trazas de Cu2+, Co2+ y
Zn2+.
En general los requerimientos de elementos traza se conocen slo
cualitativamente ya que es difcil demostrar su requerimiento debido a que las
cantidades necesarias se suelen encontrar a menudo como contaminantes en
otros constituyentes del medio. Son necesarios para activar algunos enzimas;
por ejemplo, el Mo6+ se necesita en la nitrogenasa que es el enzima que
cataliza la conversin del nitrgeno atmosfrico en amonaco en la fijacin
biolgica de nitrgeno.
2. Requerimientos fsicos
a. Temperatura
Todos los microorganismos tienen una temperatura ptima de crecimiento. Esto
significa que a determinada temperatura la velocidad de duplicacin (o la
velocidad de crecimiento poblacional) de los microorganismos es mayor.
Hay que tener en cuenta que no todos los microorganismos crecen en el mismo
rango de temperaturas, por lo que se les ha clasificado de la siguiente manera:

Clasificacin

Rango

Optima

Termfilos

25 - 80 C 50 - 60 C

Mesfilos

10 - 45 C 20 - 40 C

Psicrfilo

-5 30 C 10-20 C

46

La temperatura afecta la estabilidad de las protenas celulares porque induce

cambios

en su conformacin que alteran la actividad biolgica de estos

compuestos, especialmente la de enzimas.

b. pH
La mayora de los microorganismos crecen en pH cercanos a la neutralidad,
entre 5 y 9, cosa que no excluye que existan microorganismos que puedan
soportar pH extremos y se desarrollen. Segn el rango de pH del medio en el
cual se desarrollan pueden clasificarse en:

Clasificacin

pH externo pH interno

Acidfilos

1.0 - 5.0

6.5

Neutrfilos

5.5 - 8.5

7.5

Alcalfilos

9.0 10.0

9.5

47

Los microorganismos regulan su pH interno mediante un sistema de transporte

de protones que se encuentra en la membrana citoplasmtica, que incluye una
bomba de protones ATP dependiente.
El rango de pH ptimo para el desarrollo de los microorganismo es estrecho
debido a que frente a un pH externo muy desfavorable se requiere un gran
consumo de energa para mantener el pH interno.
c. Agua
El agua es el solvente en donde ocurren las reacciones qumicas y enzimticas
de la clula y es indispensable para el desarrollo de los microorganismos.
La actividad de agua (aW) del medio representa la fraccin molar de las
molculas de agua totales que estn disponibles, y es igual a relacin que
existe entre la presin de vapor de la solucin respecto a la del agua pura
(p/po). El valor mnimo de a W en el cual las bacterias pueden crecer vara
ampliamente, pero el valor ptimo para muchas especies es mayor a 0.99.
Algunas

bacterias

halfilas

(bacterias

que

se

desarrollan

en

altas

concentraciones de sal) crecen mejor con aW = 0.80.

Variaciones en la actividad de agua puede afectar la tasa de crecimiento, la
composicin celular y la actividad metablica de la bacteria, debido a que si no
disponen de suficiente cantidad de agua libre (no asociada a solutos, etc) en el
medio necesitaran realizar ms trabajo para obtenerla y disminuir el
rendimiento del crecimiento.
d. Potencial de Oxido-Reduccin
El Potencial de Oxido-Reduccin es una medida de la tendencia del medio a
donar o recibir electrones.

Es crtico para el crecimiento de los

microorganismos y generalmente est asociado con la presencia de oxgeno

molecular disuelto en el medio el cual es muy oxidante.

En medios que

contienen oxgeno, en condiciones similares a las atmosfricas, el potencial

redox vara entre 0,2 y 0,4 Voltios. Los anaerobios estrictos necesitan una
atmsfera sin oxgeno pues deben crecer en medios reductores donde el

48

potencial no sea mayor a -0,2 Voltios. Sin embargo, potenciales redox positivos
creados por la presencia de otras sustancias qumicas no afectan el
crecimiento de los anaerobios ms estrictos, aunque muchos anaerobios
estrictos son inhibidos por potenciales mayores a -0.100 mV.
B. TRANSPORTE DE NUTRIENTES EN LOS MICROORGANISMOS
La membrana citoplsmica controla el paso de los nutrientes dentro de la
clula, as como hacia fuera de la clula. Existen 4 mecanismos que regulan el
transporte de nutrientes:

1. Difusin pasiva
Las molculas de H2O y algunos nutrientes liposolubles pasan
libremente a travs de la membrana hasta equilibrar concentraciones.
No hay consumo de energa.

2. Difusion facilitada
Los nutrientes se unen a una protena transportadora para atravesar la
membrana pasando de mayor a menor concentracin. No hay consumo
de energa.
3. Transporte activo
La mayor parte de los nutrientes son transportados mediante este
mecanismo. Este proceso permite concentrar altos niveles de nutrientes
necesarios para las actividades metablicas dentro de la clula. Hay
consumo de energa. El ATP distorsiona el sitio de unin de la protena
transportadora dificultando a la molcula salir de la clula.
4. Transporte por translocacion de grupo
En este tipo la protena transportadora es un enzima que aade un
grupo fosfato del cido fosfoenolpirvico al nutriente durante el

49

transporte. Este nutriente alterado ya no es capaz de unirse a la protena

transportadora por lo que se acumula dentro de la clula.

C. CRECIMIENTO DE LOS MICROORG ANISMOS

1. Cur va de crecimiento
Un cultivo de un microorganismo, como el de las bacterias es simple y
homogneo, tiene un ciclo de crecimiento como el que se representa a
continuacin, donde se puede distinguir las siguientes fases:

Curva de crecimiento de una bacteria

a. Fase de Latencia: Es la fase de adaptacin al medio, existe aumento de
la masa celular pero no hay aumento en el nmero de clulas.
b. Fase de Crecimiento Exponencial: Es la fase donde se produce un
incremento exponencial del nmero de microorganismos.
c. Fase Estacionaria: Es la fase a la que se llega cuando se ha agotado la
fuente de energa.
d. Fase de Muerte: Es la fase que se caracteriza por una disminucin
exponencial del nmero de microorganismos.

50

La fase de latencia puede ser inducida por un rpido cambio en las condiciones
del cultivo. En un medio fresco, el largo de la fase de latencia va a depender
del tamao del inculo, de la edad del inculo, y de los cambios en la
composicin y concentracin de los nutrientes que experimenten las clulas.
En el caso de la edad del inculo, ste va a influir en el tiempo de latencia en el
medio fresco debido a la acumulacin de materiales txicos y a la falta de
nutrientes esenciales dentro de la clula durante el crecimiento anterior.

En

general, inculos viejos alargan la fase de latencia.

Cambios en la composicin y concentracin de nutrientes entre el cultivo del
inculo y el medio fresco pueden desencadenar el control y la regulacin de la
actividad enzimtica dentro de las clulas o la diferenciacin morfolgica, como
la formacin de esporas. Si las clulas son transferidas de un medio simple a
un medio rico, se van a necesitar ms tiempo y nutrientes para incrementar la
concentracin de enzimas necesarias para el metabolismo.
2. Medida del crecimiento
El crecimiento de una poblacin bacteriana puede ser entendido desde
diferentes perspectivas y de acuerdo a stas se puede llegar a determinar la
medida del crecimiento mediante diversas metodologas.
Para algunos, el crecimiento es la capacidad para multiplicarse que tienen las
clulas individuales. Existen dos formas para determinar el nmero total de
microorganismos en una muestra:
a. Recuento microscpico de partculas
b. Recuento electrnico de partculas
Para otros, el crecimiento implica el aumento de los microorganismos capaces
de formar colonias debido a que slo se tiene en cuenta el nmero de
microorganismos viables y se lo puede determinar mediante:
a. Recuento de colonias

51

b. Mtodo del nmero ms probable

Para los fisilogos bacterianos, bioqumicos y bilogos moleculares una medida
del crecimiento es el incremento de biomasa. Para ellos, la sntesis
macromolecular y un incremento en la capacidad para la sntesis de los
componentes celulares es una medida del crecimiento.
a. Determinacin de peso hmedo
b. Determinacin de peso seco
c. Determinacin de nitrgeno total
d. Determinacin qumica de un cido nucleico
Un ltimo grupo entiende al crecimiento sobre la base de la influencia que
ejercen los microorganismos en los cambios qumicos de su entorno como
consecuencia del incremento de la biomasa.
e. Recuentos Directos
1. Recuento microscopico: Es una tcnica comn, rpida y barata que utiliza
un equipamiento fcilmente disponible en un laboratorio de microbiologa. Para
estos recuentos se utilizan generalmente cmaras de recuentos.
La mayor dificultad del recuento en cmara es obtener veracidad en el llenado
de la cmara con lquido. Otra dificultad es la adsorcin de las clulas en las
superficies del vidrio, incluyendo pipetas.
Las cmaras ms utilizadas son las de Hawksley y la de Petroff-Hausser. La
primera tiene la ventaja que puede ser utilizada con objetivos de inmersin,
aunque la mayora de los recuentos se realizan con objetivos secos. Una de las
mayores ventajas del recuento microscpico es brindar informacin adicional
sobre el tamao y la morfologa de los objetos contados.

52

Cmara de recuento de Petroff-Hausser

Tipo de cuadro

Area

Volumen

Factor

[cm2]

[ml]

[1/Volumen]

Cuadrado total

1.00 x 10-2

2.00 x 10-5

5.00 x 104

Cuadrado grande

4.00 x 10-4

8.00 x 10-7

1.25 x 106

Cuadrado pequeo 2.50 x 10-5

5.00 x 10-8

2.00 x 107

1/Dilucin: 1 sobre la dilucin utilizada para llenar la cmara de recuento.

Nmero de cuadrados contados: Cantidad de cuadrados de la cmara
que se utilizaron para contar un el nmero de bacterias.
Volumen del cuadrado: Volumen de cada cuadrado de la cmara.
Depende del tipo de cuadrado en donde se realiz el recuento. Por

53

ejemplo, cada cuadrado pequeo tiene un volumen de 5 x 10 -8 ml (50 m

x 50 m x 20 m = 5 x 104 m3 = 5 x 10-8 ml).

2. Recuento electronico: Los contadores electrnicos permiten realizar

recuentos de bacterias, levaduras no filamentosas y protozoarios, pero no de
hongos y microorganismos filamentosos o miceliares.
Estos instrumentos constan bsicamente de dos compartimientos comunicados
a travs de un pequeo conducto. En ambos compartimientos hay electrodos
que miden la resistencia elctrica del sistema, y como el orificio del conducto es
muy pequeo y su resistencia es muy alta, la resistencia elctrica de cada
compartimiento es independiente. El principio de funcionamiento de estos
instrumentos es el que se explica a continuacin. Un volumen fijo de una
suspensin bacteriana es forzada a pasar desde un compartimiento al otro a
travs del pequeo conducto, en un muy breve intervalo de tiempo. Cuando un
microorganismo pasa al nuevo compartimiento, la resistencia de ste se
incrementa debido a que la conductividad de la clula es menor que la del
medio. Estos cambios en la resistencia son convertidos en pulsos o voltaje y
contados.
3. Medida de la Biomasa
La medida de la masa de los constituyentes de la clula bacteriana es utilizada
frecuentemente como base para la medida de una actividad metablica, o de
un constituyente metablico o qumico.
Algunos de los mtodos para cuantificar la biomasa son obvios y confiables,
pero pueden volverse complicados si se busca la exactitud.
Peso hmedo: Se obtiene a partir de una muestra en suspensin que es
pesada luego de la separacin de las clulas por filtracin o
centrifugacin. Es una tcnica til para grandes volmenes de muestra.
La principal desventaja es que el diluyente queda atrapado en el espacio

54

intercelular y contribuye al peso total de la masa y generalmente se

ubica entre el 5 y 30% del peso.

Peso seco: El peso seco (contenido de slidos) de las clulas bacterianas

que se encuentran en una suspensin se obtiene por el secado de un
volumen en un horno a 105C hasta peso constante. Esta tcnica es til
para grandes volmenes de muestra, debido a que diferencias del orden
de los miligramos representan el peso de un gran nmero de bacterias.
Determinacin de acidos nucleicos: Es una tcnica que permite
determinar indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. Se
determina la cantidad existente de un determinado cido nucleico
(generalmente DNA) y a partir de este dato se estima la masa de la
poblacin.
Determinacion de nitrgeno: Es una tcnica que permite determinar
indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. Existen distintas
tcnicas para determinar la cantidad de nitrgeno que contiene una
muestra en relacin al compuesto que se quiera determinar. Puede
analizarse el nitrgeno no proteico mediante el NO 2-, NO3-, NH4+, el
nitrgeno proteico mediante absorcin en UV, Reaccin de Biuret,
Reaccin de Lowry, o el nitrgeno total mediante la Digestin de
Kjeldahl.

Incorporacin de precursores radiactivos: Es una tcnica que permite

determinar indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. En esta
tcnica se adiciona al medio un compuesto marcado radiactivamente
que puede ser incorporado a la clula, y luego se determina la cantidad
de marca incorporada por toda la poblacin.
Dispersin de la Luz

55

Cuando un haz de luz paralelo golpea una partcula en suspensin, parte de la

luz es reflejada, parte es diseminada, parte es absorbida y parte es transmitida.
La nefelometra mide la luz dispersada por una solucin de partculas. La
turbidimetra mide la luz dispersada como un decrecimiento de la luz
transmitida a travs de la solucin. En relacin a la longitud de onda y al
tamao de la partcula pueden existir tres tipos de dispersin.
Los mtodos de dispersin de la luz son las tcnicas ms utilizadas para
monitorear el crecimiento de los cultivos bacterianos. Son muy tiles pero
pueden llevar a resultados errneos. Principalmente, dan informacin sobre el
peso seco (contenido macromolecular).

Absorbancia en funcin del Peso Seco

56

Absorbancia en funcin del Peso Seco

Absorbancia en funcin del Nmero de Microorganismos Totales

En estos grficos se puede apreciar que suspensiones diluidas de dos
microorganismos diferentes con igual peso seco tienen la misma absorbancia,

57

mientras que para el mismo nmero de microorganismos totales la absorbancia

de cada suspensin es distinta.
Medios de cultivo
Los medios de cultivo son una mezcla equilibrada de nutrientes que en
concentraciones adecuadas y con condiciones fsicas ptimas permiten un
buen crecimiento de los microorganismos. Contienen una base mineral; fuente
de carbono, nitrgeno y azufre; atmsfera adecuada y los factores de
crecimiento necesarios.
Medio sintetico: son los medios que contienen una composicin qumica
definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para el estudio de
requerimientos nutricionales y para obtener resultados reproducibles.
Medio mnimo: son los medios que presentan la mnima cantidad de
nutrientes capaz de permitir el desarrollo de los microorganismos.
Medio complejo: medios que contienen nutrientes de composicin qumica
variable o no establecida. Son mezclas complejas y poco definidas de
sustancias. Se forman a partir de extractos animales, vegetales, etc.
Se utilizan cuando se necesita obtener una amplia gama de
microorganismos.
Medio enriquecido: medio que tiene un gran exceso de nutrientes y se
utiliza

para

microorganismos

que

tienen

grandes

exigencias

nutricionales.
No pueden ser selectivos. Agar chocolate, agar cerebro-corazn, etc.
Medio selectivo: medio que slo permite el crecimiento de un grupo de
microorganismos e inhibe el de otros. Permite seleccionar y aislar
microorganismos a partir de poblaciones mixtas Agar salado-manitol o
Chapman (permite el crecimiento de ciertos Staphilococcus).
Medio diferencial: medio que permite revelar caractersticas fisiolgicas de
los microorganismos. Levine (permite visualizar la fermentacin de

58

lactosa por viraje de un indicador cido-base), Agar sangre (permite

visualizar la sntesis de hemolisinas).
Enriquecimiento: Es una tcnica que permite el desarrollo de un grupo de
microorganismos a partir de una muestra que contiene una gran variedad de
microorganismos. Se utiliza un medio selectivo lquido para favorecer la
competencia entre los organismos y se incuba bajo determinadas condiciones.
Aquellos microorganismos para los que el ambiente sea ms favorable
crecern ms que los otros y finalmente sern predominantes.
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