1

Tipos de replicacin del ADN

Han existido 3 teoras de la replicacin del ADN:

- Conservadora, en la que se sintetiza una molcula completamente nueva y otra que resulta ser una copia
igual a la primera original.
- Dispersora o dispersante, es cuando la cadena hija tiene fragmentos de la cadena original y tambin
posee fragmentos nuevos.
- Semiconservativa, es la que se acepta hoy como la correcta, y es el proceso que resulta en una hebra de
la cadena original y otra hebra nueva.
Para fundamentar la teora de la replicacin semiconservativa, Meselson y Stahl en el ao 1958 condujeron
un experimento.
Usaron como base a una bacteria Escherichia coli que la hicieron crecer durante 14 generaciones
sucesivas en un medio que contena como nica fuente al Nitrgeno15 (N15). Durante 14 generaciones las
bases nitrogenadas del ADN de la bacteria, se haban sintetizado con N15. Luego, comprobaron poder
distinguir entre el ADN que se replicaba con bases nitrogenadas de nitrogeno 14, el "normal", y el que
haban crecido durante 14 generaciones con N15. Esto se pudo lograr a travs de la extraccin de ADN de
cada bacteria y la centrifugacin de las molculas, lo cual result demostrando que el ADN de la bacteria
sometida a N15 tenan mayor densidad a las moleculas de ADN normales.
A continuacin, sometieron a las bacterias de ADN con N15, a un medio de cultivo de N14, y a cada
generacin tamaban muestras del ADN y las centrifugaban en gradiente de densidad de CsCl.
Cuando extrajeron el ADN producido en el medio de cultivo con N14,que llevaba 1 generacin y la
centrifugaban, obtenan una sola banda de densidad intermedia entre la del ADN N14 y el ADN N15.
Cuando extrajeron el ADN de 2 generacin obtenan 2 bandas, una correspondiente al ADN con N14 y otra
de densidad intermedia.
A la tercera generacin encontraron 3 bandas de ADN N14 y otra de densidad intermedia (N14-15).
http://bioleah.blogspot.com/2010/04/tipos-de-replicacion-del-adn.html

Caractersticas generales de la replicacin

El material gentico tiene dos propiedades importantes, la conservacin y el dinamismo:
1) Conservacin (fidelidad de la replicacin): la replicacin es un proceso extraordinariamente fiel; la
secuencia de nucletidos ha de estar conservada de unas clulas a otras: si tenemos una clula, cuando
se divida va a dar dos clulas con un material gentico en cada una idntico al de la primera, en tamao y
en secuencia; si no fuera as se pondra en peligro la supervivencia de la clula y por lo tanto de la
especie. Esto es ms importante an pues el DNA slo se replica una vez. Cmo se consigue esta
fidelidad? La tasa de errores de las DNA polimerasas es muy baja, adems tienen asociada una actividad
correctora de errores (exo 3' 5) que aumenta an mas su fidelidad (son las nicas enzimas que poseen
esta capacidad). Ejemplo: E. coli (cepa k12), 4639221 pb; la DNA polimerasa que replica este DNA tiene
una tasa de mutacin de 710-6 (por cada 7 millones de nucletidos incorporados comete un error), la
actividad correctora de errores baja esta tasa de mutacin 10 3 veces, hasta 510-9 (incorpora un error por
cada 5000 millones de nucletidos incorporados). Lo que quiere decir que en esta cepa de E. coli se

comete un error por cada

1000 rondas de replicacin.
DNA polimerasas
Enzima

Localizacin de
dominios sintticos y
exo 3 5

Frecuencia de error
Sin Correccin

Con
correccin

DNA pol I de E. coli

Igual subunidad

10-5

510-7

DNA pol III de E. coli

Subunidades separadas

710-6

510-9

DNA pol I de T4

Igual subunidad

510-5

10-7

DNA pol I de T7

Desconocido

10-5

10-6

Transcriptasa reversa

No tiene

10-5

En la tabla se observa la alta tasa de error de la transcriptasa reversa, la cual no tiene actividad
correctora, su ausencia puede ser responsable de la alta tasa de cambio en la secuencia genmica durante
una infeccin retroviral.
Otro tipo de error es el cambio de marco de lectura, este error esta afectado por otra caracterstica de la
polimerasa: laprocesatividad o tendencia de la enzima a permanecer unida al molde, en lugar de
disociarse y reasociarse. Se puede definir como Nmero de nucletidos incorporados por evento de unin
entre enzimas y DNA. Esto es particularmente importante para la replicacin de un tramo

3
homopolimrico, por ejemplo una larga secuencia de dTn:dAn en el cual el deslizamiento (slippage) de la
polimerasa puede cambiar la longitud del homopolmero. Como una regla general, la procesatividad
incrementada reduce la probabilidad de tales eventos. En las polimerasas multimricas la procesatividad
es incrementada por una subunidad particular que no es necesaria para la actividad cataltica por si.
2) Dinamismo: el material gentico no est totalmente conservado, es dinmico, lo que proviene de:

Errores en la replicacin que escapan a la actividad correctora.

Lesiones sufridas por el material gentico a causa de agentes mutagnicos. La molcula de

DNA es la nica que tiene sistemas que reparan las lesiones producidas en l, aunque estos sistemas no
son eficaces en un 100%.

Recombinacin (proporciona la mayor fuente de variabilidad).

Caractersticas generales de la replicacin:
1. Es un proceso estrictamente controlado. Una clula ha de duplicar su genoma antes de dividirse: ha
de existir un mecanismo que acople la replicacin con la divisin celular. El control de replicacin se
efecta a dos niveles: iniciacin, que el DNA se replique en un momento determinado y bloqueo de
reiniciacin, que impida que una vez iniciada una ronda de replicacin no comience otra. El control de la
divisin celular es fundamental para muchos procesos, por ejemplo el cncer.
2. Es semiconservativa, Watson y Crick ya intuyeron que su modelo de doble hlice sugera un
mecanismo semiconservativo de duplicacin. En 1958, Meselson y Stahl se propusieron distinguir de
manera experimental entre las siguientes posibilidades de replicacin:

Replicacin conservativa: una clula hija tiene las dos cadenas sintetizadas de nuevo y se conserva la
hlice doble parental.

Replicacin dispersiva: da lugar a dos clulas hijas cuyas cadenas contienen ciertos segmentos de
DNA parental y otros sintetizados de nuevo.

Replicacin semiconservativa: cada hlice doble hija contiene una cadena parental y otra recin
sintetizada.
Cultivaron clulas de E. coli en un medio que contena el istopo pesado del N (15N), en lugar del istopo
ligero normal (14N). El istopo pesado se incorpor a las bases nitrogenadas, que fueron incorporndose a
su vez, a las nuevas cadenas de DNA. Tras muchas divisiones celulares en presencia de 15N, todo el DNA de
las clulas estaba marcado con el istopo pesado. Las clulas marcadas con 15N se pasaron a un medio
con 14N, tomando muestras despus de una y dos divisiones celulares. Extrajeron DNA de las clulas de
cada una de las muestras y lo centrifugaron hasta equilibrio en un gradiente de densidad de CsCl.
Si el CsCl se centrifuga durante muchas horas a velocidades muy elevadas se establece un gradiente de
iones Cs+ en el tubo, con mayores concentraciones de ellos en el fondo (mayor densidad). Tambin las
molculas de DNA en solucin son empujadas hacia el fondo por la fuerza centrfuga, pero en su recorrido
descendente encuentran una concentracin de sal cada vez mayor que tiende a empujarlas de nuevo
hacia arriba, de esa manera, el DNA se "deposita" finalmente en cierta posicin del tubo, donde la
densidad del DNA coincide con la del CsCl del gradiente. La "flotabilidad" del DNA en este tipo de
gradiente depende por tanto de su densidad. El DNA extrado de clulas crecidas en un medio con 15N
puede distinguirse con facilidad del DNA de las clulas que lo han hecho en medio 14N, por la posicin que
alcanzan en el gradiente de CsCl a equilibrio. Tales muestras se denominan familiarmente DNA "pesado" y
"ligero", respectivamente. La figura siguiente muestra el experimento:

Meselson y Stahl comprobaron que una generacin despus de

que las clulas crecidas en medio pesado se trasladaron a un
medio con 14N, el DNA formaba una nica banda de densidad
intermedia entre las densidades de los controles de DNA pesado y
ligero. Despus de dos generaciones en medio con 14N, el DNA
formaba 2 bandas: una en posicin intermedia y otra en posicin
ligera. Este es el resultado esperado del modelo de replicacin
semiconservativa; de hecho, el resultado slo es compatible con
este modelo.
3. Es ordenada y secuencial. Se inicia en unos puntos fijos del
cromosoma, y el crecimiento de la cadena de DNA se produce de
manera simultnea al desenrollamiento de la doble hlice original.
Como otros procesos biosintticos utiliza sustratos activados,
desoxirribonuclesido 5'-trifosfatos (dNTP). LasDNA
polimerasas sintetizan DNA incorporando nucletidos en
direccin 5 3 complementarios a un molde de DNA. No hay
ninguna DNA polimerasa capaz de iniciar la sntesis de DNA, a
menos que tenga un primer iniciador, que es una molcula que
suministra el extremo 3OH. El grupo 3OH es el que va a formar el
enlace fosfodister con el nucletido complementario al molde
(normalmente el primer es un RNA)
4. Es semidiscontinua. El hecho de que la replicacin (sntesis de
DNA) sea en sentido 5 3 implica que, al menos en una banda,
la sntesis sea discontinua, ya que la polaridad de las dos hebras
de DNA es opuesta. Cuando la polaridad de sntesis es contraria a
la de apertura de la horquilla, la sntesis ha de ser discontinua. El
siguiente esquema representa lo que ocurre dentro de la horquilla
(fork) en la replicacin semidiscontinua (leading strand = cadena
conductora, lagging strand = cadena seguidora):

La demostracin experimental de esto la llev a cabo Okazaki en un experimento de velocidad de

sedimentacin en un gradiente de sacarosa, donde las molculas ms grandes sedimentan ms rpido
que las pequeas. Esto se hace a pH bsico, para que las cadenas de DNA estn disociadas (DNA
desnaturalizado), ya que se hallan unidas por puentes de H. Se creci un cultivo de E. coli y se dieron
pulsos cortos (5 -10 seg) con un precursor marcado radiactivamente (H 3-Timidina) que se incorpor al DNA.
Se extrajo el DNA y se centrifug en el gradiente de sacarosa alcalino, apareciendo material de bajo
coeficiente de sedimentacin, 10 S, pero a medida que pasaba el tiempo (3060 seg.), apareca material
de elevado coeficiente de sedimentacin, 45 S, es decir, al principio todo el material tiene tamao
pequeo, pero con el tiempo, aparecen tamaos ms grandes.

Si el pulso se sigue con una caza (exceso de precursor no radiactivo, pulso

seguido) nos permite ver qu le pas al DNA sintetizado antes; vemos que
todo el material sintetizado es grande, lo que quiere decir que: primero se
sintetiza el DNA en fragmentos pequeos y luego estos fragmentos se
unen para dar fragmentos ms grandes.
Por qu a tiempos cortos slo aparecen fragmentos pequeos? Es que la
sntesis de las 2 hebras es discontinua? No, es que el DNA se fragmenta.
Por qu se fragmenta? Una de las lesiones ms comunes es la
desaminacin oxidativa de la citosina (ya que la citosina tiene la
estabilidad qumica ms baja de las bases) originando as uracilo. La clula
tiene mecanismos de reparacin para eliminar los uracilos que encuentra
en el DNA: la N-uracilglicosidasa rompe el enlace glucosdico del uracilo y
se rompe la cadena. A pulsos muy cortos el DNA est fragmentado con un
tamao medio de 1000 a 2000 nucletidos (10 S).Los fragmentos
provienen de la sntesis discontinua, dando lugar a los llamados fragmentos de Okazaki.El DNA est
fragmentado. Aproximadamente 1 de cada 300 citosinas se deasamina dando lugar a uracilo, si la
N-uracilglicosidasa rompe la cadena por los uracilos, se originaran fragmentos de un tamao medio
aproximado de 1200 nucletidos (tamao similar a los fragmentos de Okazaki). Cmo demostramos que
la sntesis de una de las bandas es continua? Con un mutante deficiente en la enzima N-uracilglucosidasa.
En un pulso corto aparece DNA de tamao pequeo (10 S) y grande (45 S).
http://fbio.uh.cu/sites/genmol/confs/conf4/