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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS


QUIMICA DE ALIMENTOS
NOMBRE: IvonneVsquez
CURSO: 9 Alimentos
FECHA: Lunes 18-04-2011
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA
CONSULTA: DENSIDAD OPTICA (ABSORBANCIA) Y TURBIDIMETRIA PARA
CUANTIFICACIN DE BIOMASA
Mtodos turbidimtricos (pticos).
Son mtodos indirectos de medicin de masa celular. La base comn de estos
mtodos consiste en la medicin de la cantidad de luz dispersada o transmitida a
travs de un cultivo bacteriano.
Las suspensiones bacterianas dispersan la luz, al igual que cualquier partcula
pequea suspendida en agua (efecto Tyndall). La dispersin de la luz es, dentro de
ciertos lmites, proporcional a la masa del cultivo.
a) Espectrofotmetro: Mide la densidad ptica (D.O.), es decir la absorbancia
(una medida de la luz transmitida a travs de la suspensin).
- Hay que realizar una curva estndar para relacionar los valores de A con la
masa bacteriana en una muestra problema.
- La cantidad de luz dispersada es proporcional al cociente entre el tamao de
la partcula y la longitud de onda incidente; la sensibilidad de la tcnica
aumenta pues a longitudes de onda (l) cortas. La proporcionalidad entre A y
masa bacteriana slo es vlida para >107cls/ml.
b) Nefelmetro: mide la luz dispersada por una solucin de partculas. Posee
mayor sensibilidad que el espectrofotmetro
Las fases de crecimiento de una poblacin bacteriana pueden determinarse
midiendo la turbidez del cultivo. Aunque dicha turbidez no es una medida directa del
nmero de clulas, su incremento es una indicacin del crecimiento bacteriano.
El cambio de luz se registra en el espectrofotmetro como porcentaje de transmisin
(cantidad de luz transmitida) y absorbancia o densidad ptica (D.O.), valor derivado
del porcentaje de transmisin, correspondiente al log del cociente entre la
intensidad de luz incidente sobre la suspensin (Io) y la de la luz transmitida por la
suspensin
A = log Io/I
Turbidimetra: La turbidimetra mide la reduccin de la transmisin de luz debido a
partculas de una suspensin y cuantifica la luz residual transmitida.
Estudios tericos y experimentales han mostrado que soluciones diluidas de
diferentes tipos de bacterias, independientemente del tamao celular, tienen casi la
misma absorbancia por unidad de concentracin de peso seco. Esto quiere decir
que, en soluciones diluidas, la absorbancia es directamente proporcional al peso
seco, independientemente del tamao celular del microorganismo. Sin embargo, se

encuentran absorbancias muy diferentes por partcula o por UFC cuando los
tamaos de las clulas bacterianas son diferentes. Por esta razn, para estimar el
nmero de microorganismos totales o el nmero de microorganismos viables de una
suspensin bacteriana debe realizarse una "curva de calibracin" con cada tipo de
microorganismo, slo de esta forma es posible relacionar Absorbancia (Densidad
ptica) con el nmero de microorganismos totales o con UFC.
Peso seco: Concentracin celular bacteriana expresada en unidades de peso seco
(g/ml-mg/ml).
La relacin directa entre la absorbancia y el peso seco slo se aplica para
suspensiones diluidas de bacterias. Estas suspensiones no deben tener una
absorbancia mayor a 0.3, ya que valores mayores producen desviaciones de la ley
de Beer. Sin embargo, el inconveniente de utilizar suspensiones diluidas puede
involucrar un mayor error de pipeteo y menor sensibilidad por el bajo nivel de
absorcin.
VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL METODO DE CUANTIFICACION DE BIOMASA
Los mtodos de dispersin de la luz son las tcnicas ms utilizadas para monitorear
el crecimiento de los cultivos bacterianos. Son muy tiles y poderosos pero pueden
llevar a resultados errneos. Principalmente, dan informacin sobre el peso seco
(contenido macromolecular).
Ventajas
- Son mtodos rpidos.
- La turbidimetra puede realizarse en espectrofotmetros de radiacin visible o
UV.
- La fuente de radiacin ms frecuentemente usada es la lmpara de
wolframio, pero pueden utilizarse otras fuentes de radiacin visible.
Desventajas
- Cuantificar microorganismos vivos y muertos.
- til para densidades microbianas bajas de microorganismos unicelulares y
tamaos de unos cuantos micrmetros.
- Para microorganismos ms grandes y productores de polisacridos esta
metodologa no es adecuada.
BIBLIOGRAFA:
1. http://www.ucm.es/info/mfar/pdfs/guias/Guia_Indus.pdf
2. http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioRecuento.htm
3. http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/12crecimiento.htm#_Toc58934319

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