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UNIVERSIDADE FEDERAL DE JUIZ DE FOR A

DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA, MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA

Antimicrobianos

Luciana Debortoli de Carvalho

CONCEITOS BSICOS
Antimicrobianos

naturais
antibiticos

Penicillium, Streptomyces,
Cephalosporium, Micromonospora,
Bacillus

sintticos
quimioterpicos

Antibiose: relao ecolgica no qual uma


espcie bloqueia o crescimento ou a
reproduo de outra espcie.

Antibitico:

substncia

microrganismos

que,

produzida
em

por

pequenas

quantidades, inibe o crescimento de outros


microrganismos.

Antimicrobianos: ao biolgica
Bacteriosttico:inibidores de sntese protica por
ligao reversvel aos ribossomos .

Bactericida: inibidores de replicao por ligao


irreversvel a DNA girase.

Bacterioltico: inibidores de formao da parede


celular

clulas viveis

clulas totais

PROPRIEDADES DESEJVEIS PARA UM AGENTE ANTIMICROBIANO


Parede celular
Membrana citoplasmatica

Toxicidade seletiva: destruir o patgeno sem


atacar o hospedeiro.

Bactericida
Principalmente

em
em

Ribossomos

vez

de

bacteriosttico:

hospedeiros

imuno-

comprometidos;

No induzir resistncia bacteriana;

Espectro de ao satisfatrio
-Amplo/estreito espectro X terapia emprica;

Cromossomo
Metabolismo de
acido flico

PROPRIEDADES DESEJVEIS PARA UM AGENTE ANTIMICROBIANO


No alergnico;

Ativo quando dissolvido nos fluidos corporais ou exudatos;

Solvel e estvel em soluo aquosa;

Atingir o nvel mximo sistmico rapidamente;

Capaz de atingir o stio de infeco.

Caractersticas gerais das drogas antimicrobianas

Exemplos de diferentes drogas antimicrobianas, classificadas de acordo com o


espectro de ao.
(Adaptado de Madigan et al., Brock Biology of Microorganisms, 2003)

SINERGISMO x ANTAGONISMO

Sinergismo => ao combinada entre dois agentes antimicrobianos


significativamente superior soma dos efeitos alcanados por cada um dos
frmacos isoladamente.
Antagonismo => ao combinada entre dois agentes antimicrobianos
inferior quela do frmaco quando administrado isoladamente.

Uso de combinaes de antimicrobianos

Tratamento imediato de pacientes em estado crtico, com suspeita de infeco


microbiana grave;
Tratamento de infeces mistas, em particular as que ocorrem aps traumatismo;
Para preveno da resistncia a drogas. Se uma bactria torna-se resistente a uma das
drogas, a outra droga pode ter um efeito letal sobre este micro-organismo.

Mecanismos de ao de agentes antimicrobianos nas clulas


bacterianas

1 - Interferncia na sntese de parede celular;


2 - Interferncia nas funes da membrana;
3 - Interferncia na sntese protica;
4 - Interferncia no metabolismo de cidos nuclicos;
5 - Interferncia em reaes enzimticas (anlogos estruturais)

1 - ANTIMICROBIANOS QUE INTERFEREM NA SNTESE DE PAREDE


CELULAR:
Beta-Lactmicos:
- So principalmente bactericidas
- Anel -lactmico
- Principais: penicilinas, cefalosporinas, carbapenmicos, monobactmicos.

- Toxicidade: reao de hipersensibilidade:


- Hipersensibilidade a penicilina:

- cefalosporinas e carbapenmicos
- exceo - monobactmicos

- Amplo espectro de ao (infeces estreptoccicas, meningoccicas, sfilis, infeces


dentrias, infeces por bacilos Gram negativos)

Beta-lactmicos representativos
Penicilinas
Penicilina G e V

Penicilina natural

Cloxacilina
Dicloxacilina
Nafcilina
Oxacilina
Meticilina

Penicilina semi-sinttica
(penicilinas estveis resistentes
beta lactamases produzidas por S.
aureus)

Amoxicilina
Ampicilina

(amino) penicilina semisinttica

Carbenicilina
Ticarcilina

(carboxi) penicilina semisinttica

Mezlocilina
Piperacilina

(uredo) penicilina semisinttica

Beta-lactmicos representativos

Cefalosporinas

Cefadroxil
Cefazolina
Cefalexina
Cefalotina
Cefradina

Primeira gerao

Cefaclor
Cefamandol
Cefonicid
Cefprozil
Cefuroxima
Cefotetan
Cefmetazol
Cefoxitina
Cefamicina

Segunda gerao

Cefdinir
Cefditoren
Cefoperazona
Cefpodoxima
Cefotaxima
Ceftazidima
Ceftibuten
Ceftizoxima
Ceftriaxona

Terceira gerao

Cefepima
Cefpiroma

Quarta gerao

Beta-lactmicos representativos
Carbapenmicos

Ertapenem, Imipenem ,
Meropenem

So ativos contra estreptococos, estafilococos,


enterobactrias, P. aeruginosa, Haemophilus e algumas
bactrias anaerbias.
Particularmente teis no tratamento de infeces por
bactrias resistentes a outros antibiticos. Utilizadas no
tratamento de infeces polimicrobianas.

Monobactmicos:

Aztreonam

No posssui atividade contra bactrias Gram positivas e nem


contra micro-organismos anaerbios.
essencialmente no alrgico, podendo ser utilizado em
pacientes com alergia a cefalosporinas e penicilinas.

1 - ANTIMICROBIANOS QUE INTERFEREM NA SNTESE DE PAREDE


CELULAR:

Glicopepitdeos (Vancomicina e Teicoplanina)


- Bactericida

- Espectro de ao restrito => Gram positivos


- Dificuldade de penetrar a membrana externa de Gram negativos
- Baixa toxicidade ; no absorvida por via oral
-Alternativa para pacientes alrgicos aos -lactmicos e para infeces causadas
por estafilococos resistentes a oxacilina.

2 - INTERFERNCIA NAS FUNES DA MEMBRANA:

Polimixinas (Colistina, polimixina B)


- Bactericida
- Polipeptdeo derivado do Bacillus polimixa
- Espectro de ao restrito: Gram negativos

- Uso clnico restrito, altamente txicos


- Desestabilizao da membrana e interferncia no equilbrio osmtico celular

3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:

INIBIDORES DA TRANSCRIO

- Ligao e inativao da RNA polimerase dependente de DNA => impede a


transcrio do DNA em RNA.

RIFAMICINA
- amplo espectro de ao (Gram positivos e micobactrias)

3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:


INIBIDORES DA TRADUO

AMINOGLICOSDEOS
- Bactericida
- Ligao a sub-unidade 30S impedindo a juno da sub-unidade 50S
- O acmulo de sub-unidades 30S aberrantes txico para a clula
- Amplo espectro de ao
- Ativos contra bacilos Gram negativos (principalmente enterobactrias) micobactrias,
enterococos, P. aeruginosa e estafilococos.
Gentamicina

Netilmicina

Trobamicina

Neomicina

Canamicina

Estreptomicina

Amicacina

3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:


INIBIDORES DA TRADUO

TETRACICLINAS
- Bacteriosttico
- Ligao a sub-unidade 30S, inativando o stio A
- Toxicidade baixa - uso e abuso - ampla resistncia
- Novas tetraciclinas: desestabilizao da membrana - altamente txicas para humanos
Tetraciclina
Clortetraciclina
Oxitetraciclina
Doxicilina
Minociclina

3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:


INIBIDORES DA TRADUO
MACROLDEOS, LINCOSAMIDAS e ESTREPTOGRAMINAS
- Bacteriosttico para a maioria das bactrias / bactericida para alguns Gram positivos.
Utilizados contra infeces respiratrias.
- Ligao a sub-unidade 50S impedindo a elongao do peptdio: peptidil-transferase
- Clindamicina => reserva para anaerbios, principalmente grupo B. fragilis
- Toxicidade baixa - uso e abuso => ampla resistncia

Eritromicina

Macroldeos

Roxitromicina*
Azitromicina*
Claritromicina*
* Novos Macroldeos

Lincosamida
Clindamicina

Estreptograminas
Dalfopristina (estreptogramina A)
Quinupristina (estreptogramina B)

3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:

INIBIDORES DA TRADUO
OXAZOLIDINONAS (Linezolida)
- Classe de novos antimicrobianos sintticos com ao bacteriosttica
- Espectro de ao: principalmente contra Gram positivos
- Ligao a sub-unidade 50S impedindo a elongao do peptdio.
- Reservada para o tratamento de infeces por estafilococos e enterococos.
CLORANFENICOL
- Bacteriosttico
- Boa distribuio tecidual mesmo no crebro e fluidos crebro-espinhais
- Toxicidade - uso clnico restrito => txico para a medula ssea
- Ligao a sub-unidade 50S impedindo a elongao do peptdio: peptidil-transferase
- Utilizado no tratamento de meningites (3 patgenos clssicos)

3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:


INIBIDORES DA TRADUO

CIDO FUSDICO
- Ao bacteriosttica principalmente contra Gram positivos (estafilococos)
- Alta toxicidade seletiva
- Ligao ao fator de elongamento do peptdio interrupo da sntese de protenas

4 - INTERFERNCIA NA SNTESE DE CIDOS NUCLICOS:


QUINOLONAS
- Inibio da duplicao do DNA
- Bactericida
- Fluoroquinolonas: boa atividade antibacteriana e boas propriedades
farmacolgicas
- Ligao sub-unidade beta das DNA girases - inibio da atividade
- enzimas essenciais no enrolamento e relaxamento das fitas de DNA
- Usos:
- ativo contra Gram positivos e Gram negativos
- baixa atividade contra anaerbios => manuteno da microbiota residente
- boa penetrao em macrfagos e PMNs

Quinolonas representativas

* As quinolonas de segunda, terceira e quarta gerao so fluoroquinolonas

cido nalidxico

Primeira gerao

Ciprofloxacina
Enoxacina
Lomefloxacina
Norfloxacina
Ofloxacina

Segunda gerao

Levofloxacina
Gatifloxacina
Moxifloxacina
Sparfloxacina

Terceira gerao

Trovafloxacina

Quarta gerao

4 - INTERFERNCIA NA SNTESE DE CIDOS NUCLICOS:


NOVOBIOCINA
- Bactericida
- Amplo espectro de ao (especialmente Gram positivos)

- Inibio da replicao do DNA - Ligao sub-unidade beta das DNA girases


- inibio do enrolamento das fitas de DNA (supercoiling)

- Uso: em testes - no h indicaes para o uso teraputico

separao de linhagens de:


Staphylococcus epidermides (sensvel)
e
Staphylococcus saprophyticus (resistente)

4 - INTERFERNCIA NA SNTESE DE CIDOS NUCLICOS:

METRONIDAZOL
- Bactericida
- Inicialmente usado para tratamento de infeces por protozorios

- Amplo espectro de ao: Anaerbios, microaerfilos, protozorios e fungos


- Antimicrobiano de escolha contra o grupo B. fragilis

- Droga ativa apenas em anaerobiose


- Oxidao e fragmentao do DNA

5 - INTERFERNCIA EM REAES ENZIMTICAS


(anlogos estruturais)
TRIMETOPRIM E SULFONAMIDAS
- Amplo espectro de ao: Gram negativos e Gram positivos
- Inibidores competitivos na sntese de cido tetrahidroflico (FH4)

- Alta toxicidade seletiva: clulas de mamferos no sintetizam FH4


- Sulfonamidas: similar ao PABA - inibe a reao da dihidropteroato - sintetase
-Trimetropim: similar ao cido dihidroflico inibidor da dihidrofolato redutase
- teis contra S. pyogenes, Haemophilus influenza, Chlamydia trachomatis
- Trimetoprim exerce efeito sinrgico quando utilizado com uma sulfonamida.
Sulfametoxazol-trimetoprim = co-trimoxazol.

cido dihidroflico

cido flico

MECANISMO DE AO DE ALGUMAS DROGAS NA CLULA BACTERIANA


-lactamases
(gram negativas)
CROMOSSOMO E PLASMDIO

-lactamases
(gram positivas)

Novobiocina
(DNA-girase, sntese de DNA)

Membrana externa

Porina

Peptoglicano

Quinolonas
(DNA-girase, sntese de DNA,
permeabilidade)

Espao periplasmtico
PBP

Metronidazol
(DNA, fragmentao)
Mitomicina
sntese e fragmentao)
RIBOSSOMOS E mRNA
Aminoglicosdio
30s, sntese protica)

PABA

ANLOGOS ESTRUTURAIS

cido flico

Sulfonamida
(Dihidropteroato-sintetase,
inibe a reao)

(DNA,

(Rib.

Tetraciclina
sntese protica)

(Rib. 30s,

Clorafenicol
sntese protica)

(Rib. 50s,

(FH4)

inibe

PBP
PAREDE

Eritromicina
50s, sntese protica)

(Rib.

Penicilina, Cefalosporina, Imipenem


sntese)

Lincomicina
50s, sntese protica)

(Rib.

Glicopeptdeos (acil-D-alanil-alanina, sntese)

Rifamicina
polimerases, sntese mRNA)

Trimetropim
(Dihidrofolato redutase,
a reao)

Cicloserina (anlogo D-alanina, sntese)


(RNA-

Bacitracina (Defosforilao do pirofosfato, sntese)

MEMBRANA CITOPLASMTICA
(PBP,
Polimixina
(desestruturao
e alterao das propriedades
osmticas - toxicidade)

Antibiograma
Finalidade
Avaliar in vitro a interao frmaco x bactria
Determinando a sensibilidade
Concentrao mnima inibitria

Orientar o Tratamento

33

METODOLOGIAS
Avaliao QUALITATIVA
DISCO DIFUSO EM GAR
Avaliao QUANTITATIVA
DILUIO EM CALDO
Macrodiluio

Microdiluio
DILUIO EM GAR
AUTOMATIZADOS
ETEST
34

Mtodo da Difuso em gar


FUNDAMENTO

(Tcnica de Kirby-Bauer)

Os antibiticos impregnados nos discos, difundem

no gar e formam um halo de inibio ao seu redor


quando encontram bactrias sensveis. As bactrias

resistentes

crescem

prximo

ao

disco,

no

ocorrendo a formao de halo


35

TESTE DE DISCO DIFUSO EM GAR

Princpio do mtodo

36

Mtodo de Kirby-Bauer
Discos de papel de filtro impregnados com
concentraes fixas de antimicrobianos

Conforme nvel srico do frmaco a partir de doses padres

No h resultados numricos halos em mm


Interpretao R, I, S tabelas padres

37

TESTE DE DISCO DIFUSO EM GAR

Utilizado rotineiramente

Fcil execuo
Flexibilidade na escolha dos antibiticos
Reprodutibilidade nos resultados
Padronizao dos resultados
Baixo custo
38

Teste de sensibilidade aos


antimicrobianos
Leitura e Interpretao

mm

39

MEIO MUELLER- HINTON


Reprodutibilidade do teste.
Baixo teor de inibidores de sulfonamidas, trimetoprim
e tetraciclinas.
Permite crescimento satisfatrio da maioria dos
patgenos.
Grande nmero de dados e experincia com o meio.

40

TESTE DE DISCO DIFUSO EM GAR

O que devemos saber sobre os meios?


Hidratar e autoclavar
60 a 70 mL

150 mm

25 a 30 mL

90 mm

pH

4 mm

7.2 a 7.4

Conservao

2 a 8o C

Teste de esterilidade
41

TESTE DE DISCO DIFUSO EM GAR

O que devemos saber sobre os meios?


Umidade

Efeito da Timidina ou Timina


Inibidores das sulfonamidas e trimetoprim.

Conservao

2 a 8 oC

Teste de esterilidade

Efeitos da variao de Magnsio e Clcio


42

Inculo

3 a 5 colnias

4 a 5 mL de caldo ou salina

Ajustar a turbidez

0,5 McFarland
1 a 2 x 108 UFC/mL

Estabilizar 15 min.

43

Inoculao
Superfcie do gar no deve estar
mida
Inoculao homognea

Esperar diminuir a umidade antes da


aplicao dos discos

44

45

46

DISCOS
Agente antimicrobiano em concentrao padronizada
Correlacionada com a obtida na corrente circulatria

Conservao dos discos em geladeira ou congelados


Temperatura ambiente para uso
Observar prazo de validade
Uma vez colocados no remover disco pois a difuso da droga
inicia imediatamente

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TESTE DE DISCO DIFUSO EM GAR

Discos
Conservao

8oC ou
freezer (no frost free)

Imipenem, Ertapenem Cefaclor e combinaes de c.clavulnico

Retirar do refrigerador ou do freezer at


2 horas antes do uso

Evitar umidade
Data de validade
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Incubao

Imediatamente aps colocao dos discos


No mximo 15 minutos
Estufa bacteriolgica -35-37C
Tempo de incubao:16 a 18 horas

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LEITURA
Deve haver crescimento confluente.
Colnias isoladas indicam inoculo
insuficiente-Teste deve ser repetido.
Medida do dimetro do halo realizada em mm.

50

Discos utilizados nos testes


Utilizam-se discos de concentrao nica e adequada,
para cada antibitico, obteno de halos de inibio
indicadores do grau de sensibilidade de diferentes
bactrias.

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INTERPRETAO
Aps medida do halo
Consultar tabela para classificar nas categorias

Sensvel:
A infeco pode ser adequadamente tratada utilizando o antimicrobiano na
dose recomendada para aquele tipo de infeco.

Intermedirio:
_ Inclui isolados cujo MIC se aproxima dos nveis obtidos no sangue e tecidos
mas apresenta resposta menor do que a microorganismos sensveis.
Resistente:
No inibida pelas concentraes usuais.

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Parmetros para Interpretao


a) Concentrao mnima inibitria (C.M.I.) - dose mnima de
antibitico que, adicionada ao meio de cultura (lquido ou
slido), capaz de inibir totalmente o crescimento de um

inculo padro;
b) Zona de inibio ( Z.I.) - dimetro do halo estril em torno

do disco, em placas semeadas com as mesmas cepas


bacterianas.

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CIM
Concentrao de antimicrobiano
No stio da infeco

Necessria para inibir o crescimento da bactria


infectante.

Valor numrico (mg/mL)


til para ajuste de dose

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Etest

Difuso

55

56

E-test - MIC

MIC

expressa

concentrao

mnima

do

antimicrobiano que necessria para inibir o crescimento


do microrganismo que est sendo avaliado. Existem
tabelas para a converso desses valores em R, I ou S,
sendo que no Brasil normalmente utilizada a tabela
preparada pelo National Committe for Clinical Laboratory

Standards (CLSI), rgo americano responsvel pela


padronizao de testes laboratoriais.

57

Interpretao do Etest

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Interpretando a CIM
SENSVEL OU SUSCEPTVEL (S)
CIM < Concentrao atingida no stio (sangue) aps dose
padro
A infeco pode ser tratada
Com a dose recomendada

A categoria susceptvel implica que a infeco causada


pela cepa bacteriana isolada pode ser adequadamente
tratada com a dosagem do antimicrobiano recomendada
para o tipo de infeco e o agente infeccioso.

-Desde que no haja contra indicao.


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Resistente (R)

A categoria resistente inclui isolados que no so inibidos


pelas concentraes usuais do antimicrobiano na dosagem
padro e/ou falha quando um especfico mecanismo de
resistncia expressado.

Intermediria (I)
A categoria intermediria inclui isolados cujos MICs so
prximos aos do sangue e tecidos. Ela permite a aplicabilidade
do antimicrobiano em infeces em stios onde as drogas so
fisiologicamente concentradas ou quando doses maiores
podem ser utilizadas.
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Sistema MicroScan
Sistema MicroScan (Dade Behring) - AutoScan-4 e WalkAway 40 ou 96

Walkaway 40 e 96

AutoSCAN - 4

Painel
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