ANEXO

I.

CARACTERIZACIN

QUMICA

DE

LOS

RESIDUOS

AGROINDUSTRIALES. MTODOS EXPERIMENTALES

Los mtodos experimentales utilizados en la caracterizacin qumica de la biomasa se
basan en normas Tappi[1] y procedimientos experimentales que describen a
continuacin:
Tom a y preparacin de m uestras para anlisis (TAPPI T 257 cm -85)
La norma define el procedimiento a seguir para la realizacin de una toma de muestra
significativa de la materia prima y su posterior preparacin para ser sometida a los
diferentes anlisis qumicos. De acuerdo a lo indicado en la norma, la materia se divide
en grupos homogneos por tamao y caractersticas, tomando al menos dos muestras
de cada subdivisin. A continuacin, se procede a la preparacin de muestras con el
tamao de partcula apropiado para el anlisis en el laboratorio. En nuestro caso, la
materia prima se somete a molienda en un molino Restch 2000, despreciando la
fraccin con un tamao menor de 0.25 mm. Posteriormente, el material obtenido se
tamiza en un equipo tamizador marca Controls, seleccionando la fraccin comprendida
entre 0.40 y 0.25 mm, o sea las que se quedan en el tamiz de 0.25. Las diferentes
muestras fueron almacenadas en bolsas identificadas de acuerdo a su tamao.
Anlisis de la hum edad (TAPPI T264 cm-97)
La humedad de las muestras corresponde a la humedad de equilibrio de cada muestra
y es tenida en cuenta en posteriores anlisis. La humedad de las muestras preparadas
segn la norma TAPPI 257 cm-85 se determina pesando 2.000.01 g de muestra (mo)
en un recipiente tarado libre de humedad, luego, el conjunto se coloca en una estufa a
105 3 C durante 24 horas. Una vez transcurrido el tiempo de secado, las muestras
se enfriaron a temperatura ambiente dentro de un desacador de silica gel. Una vez
fras las muestras se pesan (mf) y se determina la humedad de acuerdo a la siguiente
formula:
% humedad = ((mo - mf)/ mo) x 100

Anlisis de cenizas a 525 C (TAPPI T211 om -93)

El ensayo se lleva a cabo sobre 1.000.01 g de materia prima a la humedad de
equilibrio, puesta en un crisol de porcelana (mo) tarado libre de humedad, preparada
segn la norma TAPPI 257 cm-85, que se somete a calcinacin en mufla a 525 C
durante 3 horas. El crisol debe ser enfriado dentro de un desecador se silica gel. Una
vez fro se pesa el conjunto (mf) y se calcula el porcentaje de cenizas como:
% cenizas = mf / (mo humedad) x 100
Extrables con etanol-tolueno (TAPPI T204 cm -97)
Mediante este mtodo se determina la cantidad de compuestos no voltiles extrables
con disolventes orgnicos que presenta la materia prima, como ceras, grasas, algunas
resinas, hidrocarburos no voltiles, carbohidratos de bajo peso molecular y algunas
sales.
Para su determinacin, se utilizan 4.00.1 g de muestra (mo) a la humedad de
equilibrio, preparada segn la norma TAPPI 257 cm-85. La materia prima se dispone
en un cartucho de papel filtro, previamente pesado. Luego, encima del cartucho con la
muestra en su interior, se coloca otro cartucho ajustado como tapa, tambien pesado,
para evitar prdidas de muestra durante la extraccin. El conjunto se coloca en un
soxhlet y se aaden 150 mL de mezcla etanol-tolueno (1:2 v/v), mas o menos hasta
una sifonada y media. El soxhlet se acopla a un matraz y un condensador y se calienta
a reflujo en campana, llevando la mezcla a ebullicin. Tras un mximo de 6 horas,
durante el cual deben ocurrir no menos de 24 extracciones, y una vez fro, se
desmonta el soxhlet y se deja evaporar parcialmente el disolvente del erlenmeyer a
temperatura atmosfrica y en campana. El cartucho con la muestra se recoge para
posteriores anlisis, se seca en estufa a 105 C durante 24 horas hasta que el extracto
est seco. Finalmente, se pesa y se obtiene la masa extrada (mf). El resultado del
anlisis se expresa en base seca y el porcentaje de extrables se obtiene mediante la
siguiente formula:
% extrables E-T = mf / (mo humedad) x 100

Contenido en lignina insoluble en cido (TAPPI T222 om-98)

Mediante la aplicacin de este mtodo los carbohidratos de la materia prima son
hidrolizados y solubilizados con cido sulfrico, de forma que la lignina insoluble en
cido queda aislada.
El procedimiento consiste en pesar 1.00.1 g de la muestra libre de extrables
(preparada segn la norma TAPPI T204 cm-97). Luego, se adicionan 15 mL de cido
sulfrico al 72%, agitando de vez en cuando durante 2 horas a temperatura ambiente.
Despus se trasvasa el contenido a un matraz de 1000 mL y se aade 560 mL agua
destilada y se lleva a ebullicin con reflujo durante 4 horas. La disolucin se filtra en
un filtro nmero 3 previamente pesado y se lava con agua caliente hasta pH neutro. El
filtro se seca en estufa a 100-105 C durante 24 horas. Transcurrido este tiempo, el
filtro se coloca en un desecador de silica gel para evitar la absorcin de humedad. Una
vez fro se pesa el filtro y se determina el porcentaje de lignina como:
% lignina = mf / mo x 100
Contenido en holocelulosa (Mtodo de W ise y col., [2])
La holocelulosa se define como la fraccin de carbohidratos insoluble en agua
presentes en las materias primas vegetales. Incluye, por lo tanto, la celulosa y
hemicelulosas presentes en los sustratos. El mtodo de Wise y col. se basa en que el
dixido de cloro que se desprende en los sucesivos tratamientos con clorito sdico
disuelve la lignina mientras los hidratos de carbono permanecen inalterados.
Para llevar a cabo dicho mtodo se parte de 2,50,1 g de muestras libres de extractos
(preparada segn la norma TAPPI T204 cm-97) y secas que se disponen en un
erlenmeyer, donde se aaden 80 mL de agua destilada caliente (70-80 C) y la mezcla
se sumerge en un bao termostatizado a 70 C, agitando peridicamente con una
varilla a fin de homogenizarla. A continuacin, se aaden cada 60 minutos 0.5 mL de
cido actico glacial y 2.6 mL de clorito sdico al 25%, hasta cubrir un total de 6-8
horas. Despus de transcurrido ese tiempo la mezcla se mantiene en el bao durante
12 h ms sin nuevas adiciones. Para finalizar, el residuo slido (holocelulosa) se filtra

(filtro nmero 2), se seca durante 24 h en una estufa a 105 C, se enfra en un

desecador y se determina su cantidad mediante pesada.
% holocelulosa = mf / mo x 100
Determinacin de -celulosa y hem icelulosas (Mtodo de Rowell [3])
Dado que la norma TAPPI T203 om-93 (Determinacin de -, - y -celulosa en
pastas) est definida nicamente para pastas de papel, y hace especial nfasis sobre
ello, se ha optado por utilizar el protocolo propuesto por Rowell para determinar el
contenido en -celulosa y hemicelulosas en muestras de madera. El trmino
hemicelulosas se define en este mtodo como los componentes de la pared celular
vegetal que son solubilizados mediante el tratamiento con hidrxido sdico y cido
actico que se expone a continuacin, mientras que la -celulosa corresponde a la
fraccin de holocelulosa que permanece insoluble tras dicho tratamiento.
Segn indica el mtodo empleado, se pesan 2.000.01 g de muestra de holocelulosa
seca y libre de extractos, extrada del sustrato segn el mtodo descrito en el apartado
anterior (Mtodo de Wise y col.). Se aaden 10 mL de NaOH al 17.5 % agitando hasta
lograr una correcta dispersin. Posteriormente, se aaden 5 mL de NaOH al 17.5 %
cada 5 minutos hasta completar un total de 25 mL (3 adiciones de 5 mL). Tras la
ltima adicin se deja reposar 30 min a 20 C (tiempo total de reaccin de 45
minutos). Despus, se aaden 33 mL de agua destilada a 20 C agitando bien toda la
dispersin y se deja reposar 1 hora antes de proceder a su filtrado en un filtro de
porosidad media nmero 2. Posteriormente se lava el residuo slido con 100 mL de
disolucin de NaOH al 8.3 % tras lo cul se lava con agua destilada dos veces ms. Se
aaden 15 mL de cido actico al 10 %, dejndolo reaccionar 3 minutos antes de
conectar el vaco. Finalmente, se lava con agua destilada hasta que el filtrado queda
libre de cido (pH neutro). Se seca a 105 C, se enfra en desecador y se determina la
-celulosa gravimtricamente, correspondiente a la fraccin que permanece insoluble a
lo largo de todo el tratamiento. Las hemicelulosas se calculan por diferencia con la
muestra inicial. Las cantidades se obtienen de los clculos siguientes:
% celulosa = mf / mo x 100
% hemicelulosas= % holocelulosa - % celulosa

Anexo I. Referencias
[1] TAPPI Standards, 2007. TAPPI Test Methods, Atlanta.
[2] Wise L.E., Murphy M., DAdieco A.A. Chlorite holocellulose, its fractionation and
bearing on summative wood analysis and on studies on the hemicelluloses, Paper
Trade J. 122 (1946) 2, 3543.
[3] Rowell R. The Chemistry of Solid Wood. Based on short course and symposium
sponsored by the Division of Cellulose, Paper, and Textile Chemistry at the 185th
meeting of the American Chemical Society, Seattle, Washington (1983) pp. 7072.