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Ao de la Diversificacin Productiva y del Fortalecimiento de la Educacin

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL


FACULTAD DE INGENIERIA GEOGRAFICA, AMBIENTAL Y ECOTURISMO
ESCUELA DE INGENIERIA AMBIENTAL

TEMA:
Ensayo de Micronucleos con el Pez Cebra

PROFESOR:
Blgo. Flix Alvarez Alvarez

SECCIN: TA/ b4-5

FECHA:

07 de Noviembre

INTEGRANTES:

Asurza Gallegos ,Kelly

Juscamaita Santos, Yenny Ana

Maylle Leon, Alan

Sanchez Vallejos, Cinthya

Yaringao Vilcapoma, Karen

Tomas Colqui, Gaby

I.

INTRODUCCION

El rpido crecimiento de la poblacin humana, la industrializacin, y la urbanizacin son las


principales causas asociadas a la contaminacin del agua, la cual pone en peligro a los
ecosistemas acuticos continentales (Vzquez Silva y col. 2006). En general, estos ecosistemas
mantienen una gran diversidad de organismos, por lo que los impactos, como la introduccin de
xenobiticos inducen cambios en la estructura de las comunidades, la dinmica de las
poblaciones y las funciones biolgica de los organismos, afectando su ciclo de vida,
crecimiento y condicin reproductiva (Lpez 2008).
Los peces pueden actuar como organismos centinela para inferir el nivel de exposicin de
poblaciones humanas a sustancias qumicas txicas presentes en los ecosistemas acuticos. En
este sentido, la realizacin de bioensayos para determinar los efectos de sustancias
contaminantes de origen antropognico o industrial, empleando peces como bioindicadores,
proporciona informacin sobre los efectos de contaminantes qumicos en ambientes acuticos,
permitiendo un mejor monitoreo de las condiciones ambientales. Dentro de la especie ms
usada como bioindicador se encuentra pez Cebra Danio rerio. Dentro de las sustancias
xenobioticas presentes en los ecosistemas acuticos se encuentran los hidrocarburos aromticos
policclicos (HAPs), los cuales son un grupo complejo de sustancias que tiene ms de 10,000
compuestos individuales con 2 o ms anillos de benceno fusionados. La alta toxicidad de los
HAPs se debe principalmente a los metabolitos txicos generados durante los procesos de
biotransformacin, los cuales establecen enlaces covalentes con macromolculas de ADN,
ARN y protenas, generando efectos carcinognicos y mutagnicos.
La presencia de microncleos es ampliamente utilizada como indicador de dao cromosmico y
de inestabilidad del genoma, puesto que evidencia alteraciones en el huso cromtico o en la
estructura de los cromosomas; por lo tanto, desde hace aproximadamente 15 aos, es una
tcnica usada con xito en los estudios de biomonitoreo.
Las alteraciones morfolgicas nucleares ocurren por anormalidades durante la segregacin de
las cromtides en el proceso de divisin celular o durante la amplificacin gnica. Las
anormalidades nucleares (MN, clulas binucleadas, ncleos lobed y ncleos blebbed)
identificadas en los eritrocitos perifricos de los peces son consecuencia de agresiones
genotxicas o citotxicas. As mismo, el efecto de los HAPs ha sido estudiado In situ, donde se
reporta mayor presencia de MN y AN en sangre perifrica de peces que habitan ambientes
susceptibles de contaminacin por efluentes de refineras petroleras.

II.

OBJETIVO
Conocer el ncleo de los glbulos rojos del Pez Cebra Danio rerio y microncleos en
sus diferentes tipos afectados por xenobioticos.

III.

MARCO TEORICO
a. TOXICOLOGIA ACUATICA
Una gran cantidad de compuestos txicos, como los de origen natural y antrpico,
llegan a los ecosistemas acuticos, donde son absorbidos acumulados,
biotransformados por procesos biolgico y/ o qumicos. Estos compuestos disueltos o
dispersos en el agua, ingresan a los organismo, estas sustancias toxicas interactan en
diversos procesos fisiolgicos y rutas metablicas.
Se pueden definir dos tipos de contaminacin:
I.
Contaminacin puntual o localizada donde los contaminantes ingresan de
forma directa a los cursos acuticos (tpica de efluentes urbanos e
industriales).
II.
Contaminantes difusa o no localizada, donde no existe un punto claro de
ingreso al curso de aguas (tpicamente la producida por actividades agrcolas).
En el primer caso, las fuentes son fciles de identificar, monitorear y regular, pero
producen un alto impacto sobre el sitio inmediato que recibe la descarga.
El segundo caso los contaminantes (pesticidas fertilizante y otros qumicos)
generalmente son arrastrados por lixiviados y escorrenta, del medio terrestre al
medio acutico.
b. GENOTOXICIDAD
Dentro de los contaminantes que pueden ingresar a los ecosistemas, se encuentran los
agentes genotoxicos. Dicho agentes actan indirectamente sobre el material gentico y
producen efectos detectables.
c. ENSAYO DE MICRONUCLEOS
La contaminacin por alcoholes produce cambios a nivel de micro ncleos (MN) son
indicadores de dao cromosmico que se originan durante la divisin celular, tanto
por los fragmentos acntricos o cromosomas que no se incorporan en los ncleos
hijos. Esto se debe a la ocurrencia de eventos clastogenicos (perdida de unos
fragmentos cromosmicos acntricos) o aneurogenico (perdida de cromosomas
completos) ocurridos en algn momento del ciclo celular provocados por la accin de
agentes genotpicos.

IV.

EQUIPOS, REACTIVOS Y MATERIALES.

REACTIVOS.

EQUIPOS:

MATERIALES.

MUESTRA BIOLGICA:

V.

PROCEDIMIENTO

1. Se seleccionan los peces.

2. Se sacrifican realizando un corte en la parte anterior del mismo, entre el oprculo y las
aletas

pectorales,

con

la

finalidad

de

obtener

la

sangre

perifrica.

3. Se colecta la sangre perifrica colocando una gota de sangre en un extremo de la lmina


porta objeto e inmediatamente se realiza el frotis.

4. Se deja secar a temperatura ambiente por 15 minutos.

5. Se sumergen las muestras en etanol absoluto frio por 15 minutos. Luego se procede a
retirarlas y dejarlas secar por 15 minutos a temperatura ambiente.

6. Se prepara la solucin de GIEMSA al 10%.

7. Las lminas se colorean con GIEMSA por 8 minutos.

8. Se lava con agua destilada para retirar el exceso de colorante y dejar secar a temperatura
ambiente.

9. Finalmente se procede a la observacin microscpica a 400x.

VI.

RESULTADOS
Como resultado luego de la evaluacin de clulas sanguneas del Pez Cebra (Danio
rerio) se pudo observar eritrocitos con ncleo en posicin central de forma elptica de
contornos definidos, esto corresponderan a eritrocitos normales. Sin embargo tambin
se pudo notar la existencia de eritrocitos con alteraciones en la morfologa nuclear,
esto correspondera a una anomala por generacin espontanea, ya que no se haba
inducido ningn tipo de xenobitico antes del experimento a la muestra en anlisis.
La principal caracterstica de estas anormalidades radica en que los eritrocitos
presentan Nuclear buds (brotes nucleares) como se puede ver en la Imagen.

Especficamente estas anormalidades tendran estn caracterstica:

VII.

DISCUSION DE RESULTADOS
Este anlisis se desarrollo en ausencia de un agente xenobitico, sin embargo si
contrastamos un caso en el que se aplico Dicromato de Potasio como xenobitico a
eritrocitos de sangre perifrica de oreochromis niloticus (tilapia) se observo que los
resultados son distintos. Esta variacin podra sustentarse en el hecho de que se tratan
de especies de muestra distinta, sin embargo buscamos demostrar que la mayora de
estas anormalidades se deben a la presencia y naturaleza del xenobitico.
El dao gentico producido por el Cr(VI) de K2 C2 rO7 se observ por un incremento
de microncleos y nuclear buds en los eritrocitos de sangre perifrica de O. niloticus.
La regresin estimada entre las concentraciones utilizadas y los valores de MN y
nuclear buds demuestran un efecto dosis dependiente durante la exposicin a los tres
das con K2 C2 rO7 . De acuerdo a los trabajos realizados en diferentes especies y con
diferentes genotxicos, se observa que durante los primeros das de exposicin existen
incrementos progresivos de microncleos y despus de esos das los valores
disminuyen. Zulita Prieto (2008).

VIII.

CONCLUSIONES

Se concluye que de la muestra de micronucleos tomada del pez cebra en el laboratorio se


vio afectada por el uso de etanol, pues se observ que el micronucleo se encontraba en
nivel 3 de afectacin, el cual presentaba una forma arionada.
Se concluye que el ensayo de microncleos est considerado como un ensayo prctico,
universalmente validado y accesible tecnolgicamente, til para evaluar la inestabilidad
gentica inducida por agentes genotxicos.

IX.

BIBLIOGRAFIA

Induccin de microncleos y otras anormalidades nucleares en Astyanax gr.


bimaculatus (Pisces: Characidae) expuestas a fenantreno. Disponible en:
http://www.scielo.org.co/pdf/rori/v16s1/v16s1a09.pdf

Juan Manuel Gutierrez/Micronucleos en peces como indicadores de calida


ambiental en estuarios de la costa uruguaya./Universidad de la republica
Uruguaya./Montevideo Uruguay/2013.

Olivera Bez Ramires/Bioacumulacion y daos genotoxicos en pez cebra./revista


Aquatic/2004

Efecto Genotxico Del Dicromato De Potasio En Eritrocitos De Sangre


Perifrica De Oreochromis Niloticus (Tilapia).