CENTRO DE INVESTIGACION Y ESTUDIOS

SUPERIORES DE ESTOMATOLOGIA Y SALUD.

FOTOACTIVACION DE FACTOR DE CRECIMIENTO

ENDOGENO B1 DIRECTAMENTE A DIFERENCIACION DE
CELULAS DENTALES POR REGENERACION.

Abigail Corts Vera.

Laura Abigail Arriaga Crcamo.
Dolores Rebeca Cano Sosa.

Prof. Alberto Molina Hernndez.

Pg. 1

INDICE
Contenido
INTRODUCION

CELULAS MADRE

FACTORES DE CRECIMIENTO

FACTORES DE CRECIMIENTO TRANSFORMANTE (TGF - )

RESULTADOS

LPL TRATAMIENTO QUE INDUCE LA FORMACION DE DENTINA TERCIARIA

LPL-ROS activa LTGF-

11

Tratamiento LPL dirige la diferenciacin de las clulas madre dentales humanos.

13

LPL dentina induce la diferenciacin en cultivos de dos y tres dimensiones.

14

TGF- 1 es crtica para la LPL mediada por la regeneracin de la dentina in vivo

15

Apoyar la funcin de TGF- en la regeneracin LPL mediada

15

DISCUSIN

17

MATERIALES Y MTODOS

19

Modelo de roedor para la reparacin de la dentina

20

Cultivo de clulas

20

MEFs LTGF-1 de la transfeccin

21

La deteccin de ROS en la presencia de clulas

22

Los tratamientos con lser

22

Pre-dontoblastos en la cultura andamio 3D

23

El anlisis histolgico

23

Anlisis estadstico

24

BIBLIOGRAFIAS

25

Pg. 2

INTRODUCION
El estudio de las clulas madre podra revolucionar el campo de la medicina
regenerativa. Existen factores biolgicos como el factor de crecimiento B1 (TGFB1). TGF-B1 es secretado como un complejo y su activacin es importante para
su funcin fisiolgica. TGF-B1 es codificado por 23 genes distintos como BMP,
activa nodos, inibina y GDF.
Las clulas madre son capaces de pluripotenciarse y realizar diferenciacin y esto
se pudo demostrar mediante experimentos. El factor de crecimiento acta como
mediador en la diferenciacin de clulas madre y tiene un papel fundamental en el
desarrollo del rgano dentario (principalmente la pulpa y dentina).
Este experimento es prometedor en la endodoncia regenerativa. Se han descrito
distintos mtodos para la activacin de TGF-B1, como pH extremo, temperatura,
ultrasonidos, rayos X, la radiacin ionizante, y proteasas, tales como
trombospondina-1.
Estos factores desencadenantes de TGF- tienen varios grados de atractivo para
aplicacin clnica debido a las preocupaciones prcticas y de seguridad. La luz es
una modalidad atractiva para la medicina regenerativa, pero su uso hasta la fecha
se ha centrado fundamentalmente en su efectos foto txicas destructivos, por
ejemplo, para destruir las clulas tumorales. En contraste con aquellas
modalidades, la luz de baja potencia terapia (LPL) se ha observado para reducir el
dolor y la inflamacin y para promover la curacin de heridas, y estos efectos se
denominan colectivamente fotobiomodulacin. LPL tratamiento se ha observado
de manera anecdtica para promover la regeneracin de la funcin cardiaca, la
piel, pulmn, y tejidos nerviosos. Estas respuestas regenerativas se han sugerido
para ser mediada por los efectos directos o indirectos sobre las clulas madre
pero un vnculo directo entre el lser.
Se evala la capacidad de la LPL que dirigen la diferenciacin de las clulas
madre dentales para dentina regeneracin, e investigar los mecanismos
moleculares exactos involucrados en el proceso.
LPL parece generar especies reactivas de oxgeno (ROS), que a su vez activan
LTGF-1 a travs una metionina especfica, en el pptido asociado a la latencia
(LAP). Un roedor se utiliz como modelo de curacin dentino-pulpar, se us en
estos estudios debido a la abundante poblacin de clulas madre dental en la
cavidad oral de fcil acceso

Pg. 3

Las terapias con clulas madre son o podran ser efectivas en numerosas
enfermedades, incluyendo patologas dentales (caries, gingivitis) que son de
mayor frecuencia.
La odontologa clnica tiene como objetivo principal las restauraciones que implica
colocacin de materiales, pero la regeneracin de tejidos es una alternativa,
porque los materiales dentales no proporcionan la funcionalidad completa del
tejido. La aplicacin clnica de las terapias con clulas madre se lleva a cabo por
manipulacin de cultivo de las clulas especificas en cada paciente y
reintroduccin anatmica especfica, en contexto, los cuerpos exgenos puedes
ser utilizados en tejidos y promover clulas madre residentes para efectuar
funciones biolgicas especficas.
En cualquier situacin el material exgeno debe ser controlado estrictamente y
esto plantea significativamente aplicaciones clnicas generalizadas.

Pg. 4

CELULAS MADRE
Las clulas madre son las clulas que dan origen a todos los tejidos y rganos del
cuerpo tales como el corazn, hgado, cerebro y la piel. Dichas clulas, en
condiciones controladas, pueden desarrollar diferentes tipos de tejidos y hasta
reparar el sistema inmunolgico. Estudios recientes han demostrado que las
clulas dentales, a diferencia de otro tipo de clulas madre, se multiplican muy
rpidamente, pueden diferenciarse en varios tipos de clulas y desarrollar
mltiples tipos de tejidos.
Es por esto que los dientes son una fuente multipotencial de clulas madre que se
pueden convertir en huesos, piel, msculos, clulas cardiacas y clulas nerviosas.
Las clulas madre dentales tienen la posibilidad de ser utilizadas incluso por
familiares del paciente y pueden llegar a tratar lesiones hepticas, regenerar
nuevas crneas, ayudar en cirugas reconstructivas y tratar problemas del
corazn, entre otros padecimientos.
La terapia con clulas madre trata enfermedades reemplazando a las clulas
enfermas y disfuncionales por clulas saludables y funcionales. No eliminando los
sntomas pero curando la enfermedad. La terapia con estas clulas pueden
ofrecer un remedio a condiciones tales como: Mal de Parkinson; Alzheimer;
Diabetes; Lesiones hepticas; Lesiones de mdula espinal; Esclerosis Mltiple y
enfermedades crnico degenerativas; Artritis y lesiones en las articulaciones;
Algunos tipos de cncer; Lesiones en los huesos; Reconstruccin de dientes y
tejido periodontal; Infartos y otras enfermedades cardiacas; Produccin de piel
nueva en quemaduras graves. Produccin de nuevas crneas.
Para que la terapia de clulas madre funcione es importante que la fuente de
dichas clulas sea compatible con el husped. Cuando se realiza el trasplante
autlogo (de un mismo individuo), no se presentan reacciones inmunolgicas ni
rechazo de clulas en los tejidos, no se necesita tratamiento de inmunosupresin
ni medicamentos y se reduce significativamente el riesgo de contraer
enfermedades contagiosas.
Un estudio publicado por The Journal of Dental Research demuestra que las
clulas madre obtenidas de los dientes (mesenquimales), son capaces de
diferenciarse en clulas beta, las cuales son encargadas de producir insulina. Por
esto y otras de sus caractersticas, como su capacidad para diferenciarse en otros
tejidos, las clulas madre han sido ampliamente estudiadas demostrando que
podran ser utilizadas en el tratamiento de la diabetes tipo 1. Segn los
investigadores, este hallazgo podra permitir la sustitucin de clulas para la
diabetestipo 1 dando como resultado un trasplante autlogo de clulas madre. En
trminos ms simples, esto significa que un paciente podra hacer uso de sus
propias clulas madre dentales para ayudar a crear las clulas pancreticas que
producen insulina.

Pg. 5

Ms all de la diabetes, estos hallazgos promueven la criopreservacin de las

clulas madre dentales como un seguro de vida y su futuro uso en la terapia de
clulas madre autlogas. Estos resultados no podran haberse realizado sin el
descubrimiento de clulas madre en los dientes conocidos como de leche, los
cuales se pierden entre los 6 y 12 aos de edad y que representan una abundante
fuente de clulas madre que gracias a la tecnologa, se pueden preservar y
cultivar para el futuro.
Actualmente se conocen cinco fuentes importantes para obtener clulas madre:
los embriones congelados, la mdula sea, el tejido adiposo, la sangre de cordn
umbilical y la pulpa de dientes. Entre esas cinco fuentes, las dos que se han
popularizado ms son la del cordn umbilical y la de pulpa dental porque las otras
enfrentan dificultades ticas y tcnicas. Lo increble de las clulas encontradas en
los dientes es que su capacidad de autorreplicacin (clonarse as mismas) es
mucho mayor que la capacidad de clonarse de las clulas madre obtenidas de
otras partes del cuerpo, por lo cual las oportunidades de tratar en un futuro
cercano (4 a 5 aos) enfermedades que en la actualidad no tienen cura, se
multiplican.
Actualmente ya existen algunas compaas que se dedican a almacenar dientes
sanos que tienen pulpa sana, para poder ser usada en un futuro como fuente de
clulas madre y reparar tejidos daados. Estos dientes se transportan a un banco
de clulas madre. En 2010, cirujanos mexicanos comenzaron a utilizar clulas
madre, extradas de la pulpa de dientes sanos, para regenerar huesos destruidos
por quistes y tumores malignos.
La primera ciruga de este tipo se realiz en 2010, en el rea de Ciruga
Maxilofacial, del Hospital Jurez de Mxico, para reconstruir el maxilar de un joven
que perdi hueso debido a una enfermedad degenerativa y actualmente se estudia
la posibilidad de usarlas para reparacin de tejido cardiaco, cartlago y piel.
En Mxico ya hay empresas que ofrecen los servicios de expansin y crio
preservacin de clulas madre de origen dental.
FACTORES DE CRECIMIENTO

Los factores de crecimiento son seales bioqumicas capaces de modificar las

respuestas de las clulas del organismo. Estn involucrados en el control del
crecimiento y diferenciacin celular. Existen muchsimos tipos de factores de
crecimiento diferentes. Muchos de estos factores se encuentran en la sangre y
especialmente en las plaquetas. Los Factores de crecimiento son pptidos, es
decir, secuencias cortas de aminocidos, que usualmente transmiten seales
entre las clulas modulando su actividad. Los avances de los ltimos aos en
biologa molecular y biotecnologa han permitido la identificacin de este tipo de

Pg. 6

elementos y su estudio ha sido decisivo en el tratamiento de diversas

enfermedades como veremos ms adelante. Se trata habitualmente de protenas
solubles que actan de mediadores biolgicos naturales siendo responsables de
distintos eventos celulares como la mitosis, la quimiotaxis (desplazamiento de las
clulas en el medio lquido), la citodiferenciacin y la sntesis de la matriz entre
otros. Los factores de crecimiento ejercen varios efectos sobre los procesos de
reparacin y regeneracin, y por ejemplo son considerados iniciadores de los
procesos de cicatrizacin. La sntesis de los factores de crecimiento se encuentra
mediada por receptores de membrana especficos en la superficie celular, sobre
los cuales a su vez ellas actan, promoviendo una proliferacin o una inhibicin en
diferentes situaciones. Se puede clasificar los factores de crecimiento segn sea
su especialidad: amplia o reducida. Los de especialidad amplia como el factor de
crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF) y el factor de crecimiento epitelial
(EGF) actan sobre muchas clases de clulas, entre ellas tenemos: fibroblastos,
fibras musculares lisas, clulas neurogliales y el ltimo, adems, sobre clulas
epiteliales y no epiteliales. Su mecanismo de accin siempre comienza al unirse a
receptores especficos de membrana. Para cada clase de factor de crecimiento
existe un receptor o conjunto de receptores especficos de tal forma que las
clulas responden a un factor de crecimiento slo si disponen de la protena
receptora apropiada. Los factores son el estmulo necesario para iniciar una
cadena de eventos celulares que tienen como resultado las funciones
anteriormente mencionadas. El proceso est mediado por un sistema de segundos
mensajeros en el que interviene una protena tirosnquinasa. Debido a este
mecanismo, la accin de los factores en el lugar de la lesin contina aunque
hayan desaparecido los mismos del medio, ya que han activado el sistema de
segundos mensajeros. 47 Entre los tipos celulares productores de los factores de
crecimiento estn los fibroblastos, osteoblastos, clulas endoteliales y leucocitos,
especialmente, monocitos y macrfagos. Adems existen lugares de
almacenamiento, como son las plaquetas (en los grnulos a) y el hueso (adheridos
a la matriz sea). Los mecanismos reparativos y la liberacin de los factores de
crecimiento seo son activados ante cualquier cosa que altere la morfologa
estructural o celular del tejido seo. Se incluyen como desencadenantes de
activacin de los factores: el traumatismo, accidental o quirrgico, del tejido seo
como por ejemplo en la prdida dental o la colocacin de implantes, la interrupcin
temporal del aporte vascular asociado a la desvitalizacin y necrosis del tejido
seo, e incluso las alteraciones humorales con repercusiones en el metabolismo
del calcio.

Pg. 7

FACTORES DE CRECIMIENTO TRANSFORMANTE (TGF - )

El factor de crecimiento transformante beta (TGF-) es una familia de protenas
que incluye al TGF-, activinas y a la protena morfognica de hueso (BMP, por
sus siglas en ingls), citocinas que son secretadas y se relacionan
estructuralmente en diferentes especies de metazoarios. Los miembros de la
familia del TGF- regulan diferentes funciones celulares como proliferacin,
apoptosis, diferenciacin, migracin, y tienen un papel clave en el desarrollo del
organismo. El TGF- est implicado en varias patologas humanas, incluyendo
desrdenes autoinmunes y vasculares, as como enfermedades fibrticas y
cncer. La activacin del receptor del TGF- propicia su fosforilacin en residuos
de serina/treonina y dispara la fosforilacin de protenas efectoras intracelulares
(smad), que una vez activas se translocan al ncleo para inducir 49 la
transcripcin de genes blanco, y as regular procesos y funciones celulares. Se
estn desarrollando novedosas estrategias teraputicas encaminadas a corregir
las alteraciones presentes en patologas que involucran al TGF- como actor
principal. (AU). Los factores de crecimiento ms comunes en el plasma rico en
plaquetas son (TGF- 1) y (TGF- 2), que son mediadores locales cuyas
principales actividades son estimular la quimiotaxis y la mitosis de clulas
osteoprogenitoras. Tambin actan sobre los osteoclastos inhibiendo la resorcin
sea, actan tambin sobre los fibroblastos, clulas endoteliales, etc. Otros
efectos son: promueve la formacin de matriz extracelular, posee pocos efectos en
la migracin de los fibroblastos, inhibe la proliferacin de clulas epiteliales,
aumenta la expresin los receptores del PDGF. La TGF junto con la TGF forma
la TGF.

Pg. 8

RESULTADOS
LPL TRATAMIENTO QUE INDUCE LA FORMACION DE DENTINA TERCIARIA
La pulpa dental en el maxilar de dos ratones en sus primeras molares fueron
expuestas mecnicamente: una recibi LPL de tratamiento mientras que otra con
un control (sin laser) ambos dientes recibieron un relleno.

Fig. 1
Se observa la pulpa
dental
de
las
morales de dos
ratones en donde
uno de ellos fue
tratado y rellenado
con el LPL, por lo
que el otro fue con
un control sin
laser. Y muestras
radiogrficas.

El
tratamiento
LPL no tuvo un efecto significativo sobre la respuesta inflamatoria en las 24 horas.
Como indicacin por una sonda de mioloperoxidasa. Hidrxido de calcio fue usado
como control positivo para la induccin de dentina terciaria en este modelo. La
induccin
de
dentina
terciaria
fue
hecha
con
alta
resolucin
microtomograficamente. El volumen de la dentina terciaria incremento ya que se
observaron 12 semanas despus del tratamiento con LPL y tambin se compar
con los controles de CT e histolgicos.
La dentina terciaria est caracterizada por clulas desorganizadas como las del
hueso (osteodentina), su morfologa y composicin mineral es distinta y su
localizacin anatmica. Como se not en las muestras tratadas con hidrxido de
calcio. La dentina terciaria inducida por LPL tena una composicin similar
comparada con la de hidrxido de calcio segn la evaluacin de energa dispersa
y microscpica.

Pg. 9

Tratamiento LPL genera ROS se examin los mecanismos que median los efectos
regeneradores de tratamiento LPL. La generacin de ROS inducida por la LPL se
evalu mediante sondas fluorescentes. Aumentado superxido y perxido de
hidrgeno (H2O2 ) se observaron en las clulas epiteliales de pulmn de visn
(Mv1Lu ) despus del tratamiento LPL de una manera dependiente de la dosis ,
mientras que no hay cambios en el xido ntrico (NO) , ya sea en Mv1Lu o
clulas de la pulpa dental de ratn [ papila dental ratn clula - 23 ( MDPC - 23 ).
La incubacin con un eliminador de ROS, N -acetil cistena (NAC) , la reduccin de
la deteccin de ROS despus del tratamiento LPL. Antimicina A, una inhibidor de
la fosforilacin oxidativa mitocondrial que genera ROS, se utiliz como una control
positivo soluciones libres de clulas de suero bovino fetal (FBS) al lado se
someten a un tratamiento LPL. Un LPL dependiente de la dosis generacin de
superxido, H2O2, y los radicales hidroxilos se observaron. La sustitucin de
agua con deuterio, que mejora ROS tiempos de vida debido a las diferencias en
las constantes dielctricas y de difusin, para diluir el suero resultaron en un
aumento significativo de ROS inducida por LPL. Los metales de transicin forman
protones del ncleo complejos de donantes que facilitan la absorcin de fotones.
Que agotan los iones de metales de transicin por pre incubacin de suero con
resina Chelex seguido de tratamiento LPL demostr una reduccin significativa de
la generacin de ROS.

Fig. 2
Se observan el
mecanismo que
median los efectos
de
tratamiento
con LPL en donde
se
evalu
mediante sondas
fluorescentes en el
que se observan
los cambios de los
componentes que
lo conforman.

Pg. 10

LPL-ROS activa LTGF-

Debido a LPL que genera ROS in vitro, el papel de estos qumicos de intermedios
reactivo de especies en la modulacin de complejos biolgicos que se sigui
examinando. El uso de un colorante fluorescente, IAEDANS, que se une a
cistenas libres, que destac el aumento de la fluorescencia despus del
tratamiento LPL de FBS, lo que indica que LPL induce cambios conformacionales
de suero constituyendo complejos. Para identificar posibles candidatos, las
muestras de suero marcados con IAEDANS se sometieron a electroforesis en gel,
y complejos distintos se observaron en la LPL-tratados muestras en comparacin
con los controles. Una banda principal fue la albmina srica, que experimenta
cambios conformacionales redox-sensibles. inmunotransferencia identificado otras
bandas como las diversas formas de TGF- (Fig. 3B, panel derecho), como era de
esperar de anteriores estudios. La escisin de enlaces disulfuro, exponiendo
cistenas libres, que est involucrado en la activacin de TGF-1; Por lo tanto, este
hallazgo sugiere que el tratamiento LPL conduce a TGF-1 activacin. Soluciones
de purificada, LTGF-1 recombinante humana (rhLTGF-1) fueron tambin
probados, y los resultados demostraron que el tratamiento LPL es capaz de
modular directamente su estructura conformacional.

Fig. 3

Muestras del suero marcado con IAEDANS en

donde se sometieron a electroforesis con gel.

Pg. 11

La capacidad de la LPL para activar directamente LTGF-1 fue el siguiente

caracterizado. El suero y el LTGF-1 recombinante se trataron con LPL, y su
activacin se evalu mediante enzymelinked (ELISA). LPL activa dos formas
diferentes de LTGF-1 en una de manera dependiente de la dosis. Adems, el
tratamiento LPL de TGF- reportero (p3TP-luc) clulas MvLu1 condujeron a
aumento de la actividad de la luciferasa, indicando que LPL-activado TGF- era
biolgicamente potente. Pre-incubacin de estas clulas con inhibidores de ROS
(NAC) o TGF-RI (SB431542) antes del tratamiento LPL reducen parcialmente la
actividad de luciferasa. La incapacidad de estos inhibidores para proporcionar
completa prdida de la actividad del indicador es probablemente debido a los
elementos de la p3TP AP-1 (protena activadora 1) reportero que son susceptibles
de transactivacin por otros factores de crecimiento. ROS individuales generados
por la LPL, a saber, el superxido, el H2O2, y radicales- hidroxilo fueron evaluados
por su capacidad para activar LTGF-1. Se generaron Las tres especies
individualmente en el suero (tabla S1) y eran capaces de activar la LTGF-
compleja. Un residuo de TGF-1 crtico que confiere sensibilidad ROS es
metionina en la posicin 253.
En el pptido asociado a la latencia (LAP); mutacin a alanina (M253A) abroga
este ROS sensibilidad. Fibroblastos embrionarios de ratn transfectadas de forma
estable (MEFs) que secretan o bien una de longitud completa de tipo salvaje o un
mutante insensible a ROS (M253A) de LTGF-1 se utilizaron para evaluar LPLROS generado la activacin del LTGF-1. Ambas lneas celulares secretan niveles
equivalentes de LTGF-1 y eran susceptibles a la activacin qumica de rutina (fig.
S4D). En el tratamiento con LPL, los MEFs que expresan de tipo salvaje LTGF-1
demostr un slido aumento de la p-Smad2, pero esto estaba ausente en MEFs
con mutante LTGF-1 (Fig. 3D). La adicin directa de TGF-1 recombinante a los
MEFs mutantes inducida p-Smad2, confirmando la integridad de la TGF- va de
transduccin de seales en estas clulas. Tratamiento de medio condicionado de
MEFs mutados con H2O2 tambin demostrado disminucin de la activacin de
TGF-, en comparacin con medio de los MEF de tipo salvaje (Fig. S4, D y E). En
conjunto, estos resultados indican que ROS. Se requiere sensibilidad en el regazo
de la activacin de TGF- por tratamiento LPL.

Pg. 12

Tratamiento LPL dirige la diferenciacin de las clulas madre

dentales humanos.

Fig. 4
Se observa una serie de
investigaciones para
regeneracin de los dientes y
la medicin de las clulas.

A continuacin se investig posibles objetivos biolgicos de los ejes LPL-ROSTGF-beta 1 en el contexto de la regeneracin de los dientes.
TGF- tiene un papel central en la mediacin de odontoblastos mamferos la
diferenciacin (26, 27). Las clulas madre dentales humanos adultos (hDSCs) en
el expreso pulpa dental marcadores de superficie caractersticos de clulas madre
(positivos para CD44, CD90, CD106, CD117, y Stro-1; negativo para CD45) y son
capaces de diferenciarse en diferentes lneas, hacindolos clave jugadores en la
regeneracin de dientes (28). La capacidad de la LPL para activar TGF-1 y dirigir
la por tanto, se examin la diferenciacin de estas clulas madre dentales. hDSCs
se aislaron de extrado muestras de dientes, y la expresin de marcadores de
superficie de clulas pluripotencia era confirmado (fig. S5). LPL activa TGF-1 en
las hDSCs (Fig. 4, A y B), que fue bloquearon con NAC o SB431542. Tratamiento
LPL demostr sustancial baja regulacin de marcadores de clulas Stro-1, CD90,
CD117 y CD44, mientras que la expresin CD106 era madre ligeramente reducida
(Fig. 4, C y D). Esto sugiere que la LPL indujo una transicin en estas clulas lejos
de su estado pluripotente. Al mismo tiempo, las clulas madre tratadas con LPL
mostraron un aumento en los marcadores de odontoblastos (clulas formadoras
de dentina) diferenciacin comparacin con el control hDSCs, incluyendo protena

Pg. 13

de matriz de dentina 1 (DMP1), sialoprotena de dentina (DSP), osteopontina

(OPN), y fosfatasa alcalina (ALP) (Fig. 4E) (tabla S2) (29, 30).

LPL dentina induce la diferenciacin en cultivos de dos y tres

dimensiones.
Para confirmar an ms el papel de la LPL en la diferenciacin de odontoblastos,
un ratn pre-odontoblastos lnea celular, MDPC-23, se someti a tratamientos
LPL. LPL activa la seal de TGF- transduccin y la actividad ALP inducida en
estas clulas en cultivo en dos dimensiones (2D). Esto pareca estar mediado en
parte por ROS y TGF-, como la preincubacin con NAC o SB431542 reducen
parcialmente la actividad de ALP (Fig. 5B y fig. S6A). Debido a limitado
diferenciacin espacial, la secrecin de matriz, y la organizacin en sistemas de
cultivo 2D, una poli (lactida-co-glicolida) se utiliz (PLG) sistema de andamios para
evaluar la dentina madura la diferenciacin en 3D.
Tratamiento LPL activado TGF-1 en el sistema de andamios 3D, como se
observa con el aumento de la actividad de luciferasa en reportero TGF- (p3TPluc) clulas MvLu1 sealizacin de TGF- fue impedido por la preincubacin con
NAC, lo que indica que LPLgenerated ROS son necesarios. Como control positivo,
la adicin de recombinante TGF-beta 1 en s robustamente inducida por la
actividad de luciferasa.
MDPC - 23 clulas se cultivaron en los armazones de PLG 3D en cultivo
mineralizante condiciones durante 21 das. Que complementa los cultivos con TGF
- 1 recombinante o clulas que tratan con medio acondicionado activado con
H2O2 inducida expresin matriz de dentina y ALP actividad. Tratamiento LPL
indujo la diferenciacin de la dentina en cultivo 3D , como indicado por la sobre
regulacin de la actividad de ALP y DMP1 y expresin de OPN . En conjunto,
estas observaciones sugieren que el tratamiento LPL dirige la diferenciacin de
dentina hDSCs (cultivo 2D) y de ratn pre- odontoblastos (cultivo 2D y 3D ) a
travs del ROS - TGF

Pg. 14

Fig. 5
Tratamiento donde se
someti LPL el cual
activa la seal de TGFb. se observaron el
sistema andamios en 3D

TGF- 1 es crtica para la LPL mediada por la regeneracin de la

dentina in vivo
Dos estrategias de intervencin distintos fueron elegidos para confirmar el papel in
vivo de LPLactivated endgeno TGF-1 en la regeneracin de la dentina. En el
primer enfoque, el tratamiento LPL se combin con la administracin controlada de
un inhibidor de molcula pequea de TGF-RI (Alk5) n SB431542, a partir de
micro esferas de PLG en la pulpa dental expuesta de los dientes de rata.
La liberacin sostenida de un inhibidor de TGF-RI en el sitio de tratamiento LPL
en el transcurso de 7 das impedido induccin dentina terciaria, como se observa
con CT e histologa (Fig. 6, A y B),

Apoyar la funcin de TGF- en la regeneracin LPL mediada.

El segundo enfoque en vivo fue tomada usando ratones transgnicos. Un
knockout condicional (DSPPCreTGF-RIIfl / fl) del ratn se gener mediante el
cruce de la dentina sialophosphoprotein-Cre (DSPPCre) con el receptor de floxed
tipo TGF- II (TGF-RIIfl / fl) ratones (fig. S8, A y B).

Pg. 15

El gen se expresa en DSPP finales dentinogeneses y codifica dos matriz de

dentina distintas protenas con funciones clave en la mineralizacin de la dentina,
a saber, DSP y fosfoprotena dentina (DPP) (31). TGF-RII es el receptor
especfico para ligados TGF-beta y tiene muy alta afinidad paraisoformas de TGF 1, 2, y 3 (32). El ratn knockout TGF-RII simula TGF- knockout, que indica
que tiene un papel clave en la fisiopatologa de TGF- normal (33). DSPPCre se
observ a ser expresado despus del nacimiento (fig. S8, C y D), y el
DSPPCreTGF-RIIfl ratones / FL parecen tener morfologa dentina normal y
organizacin (fig. S8, E y F). Adems, clulas de la pulpa de los dientes de los
ratones DSPPCreTGF-RIIfl / fl eran capaces de un tejido mineralizado respuesta
de reparacin (ALP actividad inducida por BMP4), pero eran sin respuesta a TGF1 estimulacin (Fig. 6C).

Fig. 6

Se observa un experimento sobre la dentina con el receptor floxed de

unos ratones transgnicos, se codificaron dos matriz de dentina distintas

protenas con funciones en la mineralizacin.

Pg. 16

LPL tratamiento de pulpa expuesta en los ratones DSPPCreTGF-RIIfl / fl (n = 3),

ha demostrado una cantidad similar de induccin de dentina terciaria a los
controles no tratados por anlisis CT (Fig. 6D). Los anlisis histolgicos de los
dientes de ambos grupos demostraron un mnimo de induccin dentina (fig. 6E).
Los dientes LPL tratados tambin demostraron, vasos sanguneos dilatados
congestionados con una mejor estroma organizada (Fig. 6E). Esto podra ser
potencialmente atribuirse a diferencias en seccionar aviones. Por el contrario, una
respuesta normal de reparacin de la dentina se observ en ratones fl TGF-RIIfl /
(n = 2), de manera similar en ratas (Fig. 1), despus de los tratamientos LPL (fig.
S9). Estos dos distintos in vivo enfoques de orientacin de la va TGF- en los dos
dientes de rata y ratn compatible con el papel de la activacin de TGF-
endgeno en la mediacin de LPL efectos regeneradores de dentina terciaria
induccin.

DISCUSIN
Una amplia variedad de bioqumicos (molculas pequeas, factores de
crecimiento, pptidos, microRNAs) y biofsicos (elctrica, magntica, ultrasonido)
seales actualmente se estn explorando para su capacidad para promover la
regeneracin de tejidos. La capacidad de la LPL para activar una endgeno
morfgeno para dirigir la diferenciacin de clulas madre residente en este caso,
las clulas madre dentales-aade una nueva y potente herramienta para el arsenal
regenerativa. Este estudio dilucidado tanto la eficacia y la principal funcin
mecnica de la LPL y ROS-TGF-1 en la mediacin de la dentina regeneracin.
La capacidad de activar los componentes endgenos de una forma controlada,
autolimitada forma es un aspecto crtico de este potencial modalidad teraputica
debido a que ambos ROS y TGF-1 en cantidades excesivas son potentemente
deletreo (34, 35). La absoluta LPL activadas niveles de estos dos productos
intermedios clave dependeran de su origen biolgico y presencia de otros
inhibidores (por ejemplo, antioxidantes) en las zonas de tratamiento. Nuestro libre
de clula ms simple sistema con las soluciones de suero estaba destinado a
probar la hemosttico medio despus de la herida, el presente durante el
tratamiento LPL, que contiene abundante derivado de plaquetas y el suero LTGF1. No obstante, el tratamiento LPL se extiende mucho ms all del sitio de la
exposicin local y podra potencialmente activar otras fuentes, tales como la Matriz
celular secretada y extracelular y la dentina en forma de matriz secuestrado de
LTGF-1 (36). TGF- tiene un papel clave en muchas biolgica procesos,
incluyendo el desarrollo, las respuestas inmunes, cicatrizacin de heridas, y
enfermedades malignas (37). La modulacin endgena LTGF-, como se muestra
en este estudio, podra proporcionar una herramienta poderosa para estudiar su

Pg. 17

papel en la fisiologa normal y patologa y podra ser explotado teraputicamente

en muchos de estos contextos.
Es prudente tener en cuenta que la induccin tejido mineralizado (dentina terciaria)
se observ en una rea extendida dentro de la pulpa despus del tratamiento LPL,
lo que lleva a la formacin de clculos de la pulpa, en lugar de un puente ideal
dentina reparadora. Esto fue probablemente un resultado de la gran rea de
interacciones tisulares lser biolgica y los efectos paracrinos del factor activado.
Buenas tcnicas quirrgicas que reducen al mnimo tanto la superficie pulpa
expuesta y escombros mecnica han demostrado ser factores clave en la
determinacin de la regeneracin de la dentina (38). Por lo tanto, mejores tcnicas
quirrgicas, que son posibles en animales y seres humanos ms grandes, as
como ptico enfoques centrados, como modalidades multifotnica, es probable
que le permiten a uno restringen laser biological interacciones en la interfaz de
tratamiento y para mejorar la LPL eficacia teraputica. Adems, es importante
destacar que los efectos a largo plazo sobre el tejido mineralizado regeneracin en
este estudio se inici mediante un nico tratamiento LPL; mltiple clnica
protocolos de tratamiento de dosificacin podran conducir a ms profundas,
terapias optimizados. Limitaciones de este estudio son los pequeos tamaos de
muestra en los estudios del ratn, debido a la limitada disponibilidad de estos
animales transgnicos, y las dificultades tcnicas de la instrumentacin de
muestras minutos diente y el mantenimiento de su integridad durante el proceso.
Los lseres se utilizan ampliamente en diversas aplicaciones biomdicas (por
ejemplo, microscopa y espectroscopia), y lser de alta potencia clnica
aplicaciones son comunes en oftalmologa, ciruga y dermatologa.
El uso del lser en imgenes pticas vivo tambin est ganando rpida
popularidad con tcnicas como la tomografa de coherencia ptica y formacin de
imgenes de moteado de lser. Estas aplicaciones de imagen ptica ltimos
tambin utilizan dosis muy bajas de photoillumination, plantear preguntas
interesantes sobre sus potenciales efectos secundarios teraputicos. El propsito
principal de este estudio fue explorar los mecanismos moleculares subyacentes
primarias del infrarrojo cercano, LPL tratamiento de regeneracin.
Estudios sobre los mecanismos moleculares que median
fotobiomodulacin
o terapia de luz de bajo
nivel han centrado previamente en su
papel en
modulacin de la enzima mitocondrial, el citocromo c oxidasa y la generacin de R
OS (39).Recientemente, un potente papel de ROS en la mediacin de regeneraci
n ha sido
descrita (40).
Aunque
la naturaleza precisa de la LPL foto
absorbente an no
est
clara en nuestro actual estudio,
los resultados
en este estudio sugieren un papel crtico para los
iones del metal y las
molculas de
agua; la
foto
absorbente
puede absorber fotones para formar un estado
excitado
triplete,

Pg. 18

que sufre ms transferencia de energa

con el oxgeno para formar diversos
ROS. Las expansin aplicaciones del lser en medicina
destacar la importancia de comprender las interacciones de fotones biolgicos.
Medicina regenerativa actualmente se
basa
en
un
predominante ex vivo manipulado clulas o la entrega de factores exgenos tales
como factores de crecimiento recombinantes (41, 42) y ambosenfoques tienen limi
taciones significativas. Los resultados del estudio actual sugieren que un
tratamiento mnimamente invasivo, LPL, puede utilizarse para activar seales end
genas que pueden conducir una
respuesta regenerativa de clulas residentes, potencialmente
evitando la
necesidad
de ofrecer
las
clulas exgenas o factores.
Estas observaciones en varios modelos
(ratones, ratas y primaria
hDSCs) sugieren que este mecanismo est conservado entre especies. Esto, cobi
nado con la simplicidad del tratamiento LPL, sugiere que la traduccin clnica sera
sencillo.Dada la amplia gama de papeles que ROS y TGF pueden mediar en vivo y la popularidad
de dispositivos lser en ajustes clnicos actuales, las ideas mecanicistas de este e
studio podra
tambin promover la traduccin clnica de los tratamientos de
la LPL para modular
el
dolor, inflamacin, o
respuesta inmune, promueve la regeneracin de los tejidos del hueso, neural,
vascular y muscular tejidos.

MATERIALES Y MTODOS
Diseo del estudio
hDSCs y una lnea de clulas odontoblsticas
los roedores fueron elegidos para recapitular linaje-especficas
respuestas de
la clula despus de tratamientos con lser.
Suero libre de clulas seutiliz para evaluar la activacin de LTGF-1
porque el suero es abundante en el medio hemosttico despus de lesin (exposic
in pulpar). En vivo
y
directamente
a
la
pulpa
del
roedor
roedor se utilizaron modelos de
capsula para recapitular la rutina humana dental clnica
escenarios despus de
la excavacin de caries profunda. Los estudios de condicionales
objeto de evaluar si los efectos del tratamiento LPL fueron mediados va TGF en vivo mediante la generacin de
una dentina formando la poblacin de
la clula. Dos sitios experimentales fueron aleatoriamente
asignado al control o prueba (LPL) grupos en cada animal para permitir asociado
comparaciones. Anlisis se realizaron de manera aleatorizada; los

Pg. 19

dientes fueron analizados

inmediatamente despus de
la recuperacin y el mismo individuo realiza el tratamiento de la LPL y CT.
Anlisis (P.R.A.). Mltiples ensayos, incluyendo proyeccin
de imagen in vivo e in vitro y molecular y
los anlisis bioqumicos, utilizados en este estudio tenan el objetivo de evaluar do
s
extremos claves en
reparacin de dentina clnicamente exitosa, es
decir, expresin de matriz especfica
de dentina y la posterior
reparacin de
los tejidos mineralizados.

Modelo de roedor para la reparacin de la dentina.

Las ratas y los ratones de la 4ta a la 6ta semana se utilizaron como modelos de la
reparacin de pulpa dental como se describe anteriormente en el Instituto Nacional
de Investigacin Dental y crneo facial.
Todos los procedimientos fueron aprobados por el comit de cuidado del uso de
los animales NIDCR y Universidad de Harvard.
Brevemente las rayas y los ratones fueron anestesiados con ketemina (80 a 120
mg/Kg) y xilacina (5-10 mg/kg), por va intraperitoneal y dos preparaciones de
cavidad se hicieron en el aspecto oclusal.
Exposicin de la pulpa del primer diente molar maxilar con una pieza
de mano convencional (NSK),#1 redondo carburo fresa (0,8 mm) (Dentsply) y port
til unidad dental (Dentport Dentala fuente). Tratamientos con lser fueron realizad
os con un sistema de diodo lser de 810nm GaAlAs.
Estudios de prdida
de
funcin en ratas, fueron dos dientes molares.
La
pulpa fue expuesta y embalada con microesferas de inhibidor

liberacin de TGF
RI seguidas de una restauracin. Al da siguiente, los dos dientes sere
instrumentados exposicin de la pulpa; uno de los sitios recibi el tratamiento de
la LPL, y ambos sitios fueron rellenados con
microesferas de inhibidor y restaurado.

Cultivo de clulas
HDSCs y clulas de pulpa de ratones
se aislaron de la pulpa
del diente las
muestras obtenidas, tras la aprobacin de la Junta de revisin institucional en el

Pg. 20

Hospital de Boston infantil, como se describi anteriormente (44). Brevemente, los

especmenes de
los diente eran
aspticamente disecada y se
incub con 4 ml de 0.25% tripsina EDTA a 37 C durante 30 minutos. Despus de
la neutralizacin con 4 ml de medio completo, las
Soluciones eran
enrgicas para liberar las
clulas y luego pasa a
travs de un tamiz celular (70 m, Corning),
y clulas resultantes fueron cultivadas en medio.
Completo suplementado con cidoascrbico (100M) y mercaptoetanol (50 M)
(ambos de Sigma).
Mv1Lu (clulas epiteliales delpulmn de
la visn)
las
clulas madre mesenquimales) y 7F2 (ratn osteoblastos) (Ambos de tipo cultura
las
clulas de
la coleccin) fueron cultivadas en medio completo compuesto
por 10% FBS, Dulbecco
Modificado de
guila medio GlutaMAX y penicilina (100 U/ml),
estreptomicina (100g/ml)b
(Todos de Gibco, Life Technologies) en una incubadora de 37
C con 5% de CO2. MEFs, estable
transfectadas con ya
sea integral o ROSinsensible (M253A) LTGF-1, se mantuvieron
en medio de cultivo suplementado con G418 (Gibco, Life Technologies).

MEFs LTGF-1 de la transfeccin

MEFs que expresan ya sea de tipo salvaje o M253A (ROS mutante insensible a)
LTGF-1 fueron permitido convertirse en el 80% de confluencia en placas de 10
cm (Nunc, Thermo Fisher Scientific) y cambiado a 0,2% de suero para el
acondicionamiento medio. El medio de algunos platos era evaluado para el total
de TGF-1 (rutina de activacin qumica: HCl 1 N durante 10 min, seguido por 1,2
NaOH N y 0,5 M Hepes durante 10 min) y H2O2 (100 mM) de activacin de LTGF1 con ELISA. En otras placas, se realiz tratamiento LPL a 3 J / cm2, y despus
de 15 min, las clulas se lavaron con solucin salina tamponada con fosfato, se
lisaron y se sometieron a inmunotransferencia para fosfato Smad2. Como
controles en estos experimentos, recombinante (activo) TGF-1 (2,5 ng / ml) (R &
D Systems) se aadi a clulas tanto para garantizar su capacidad de
sealizacin. En algunos casos, medio acondicionado se elimino y trato con H2O2
(100 mM) durante 5 min antes de ser vuelve a aadir a estas clulas.

Pg. 21

La deteccin de ROS en la presencia de clulas

Las clulas se sembraron en porta objetos de cmara de ocho pocillos (Nunc,
Thermo Fisher Scientific) en medio completo y dej que se unieran durante la
noche. El da siguiente, el tratamiento era LPL realizado a diferentes fluencias, y
las clulas se probaron con colorantes fluorescentes para evaluar especfica ROS,
a saber, MitoSOX Red colorante (5 M) para superxido y CM-H2DCFDA (10 M)
para H2O2. Para ambos experimentos, MitoTracker Green (500 nM) y MitoTracker
Red (500 nM) (Ambos de Molecular Probes, Life Technologies) se utilizaron para
contrateir mitocondrias.
La fluorescencia se visualiz usando un microscopio confocal (Olympus IX81) y
las imgenes software de laboratorio de IP (versin 4.0). El ensayo de Griess
(Promega) se realiz por protocolo del fabricante. Brevemente, las clulas se
incubaron con 50 l de sulfanilamida para 10 min, seguido de dihidrocloruro de N-1napthylethylenediamine (NED) en cido condiciones durante otros 10 minutos. Se
midi la absorbencia a 520 nm utilizando una microplaca lector.

Los tratamientos con lser

Los ensayos in vitro-A se utiliz lser en el infrarrojo cercano en todos los
experimentos. Especficamente, un 810- GaAlAs nm sistema de diodo lser
(controlador, controlador de temperatura, y el monte de refrigeracin) con una se
utiliz el sistema de suministro de fibra ptica (400 micras de fibra) (todos de
Newport) en onda continua modo. Dosis de lser se comprueba antes de cada
experimento con un medidor de potencia (Newport). La densidad de potencia
(irradiacin, W / cm2) se vari para conseguir diferentes densidades de energa
(fluencia,J / cm2) para el tratamiento de muestras. Por ejemplo, un tamao de
punto de 20, 30, o 50 mm por cuatro pozos en una placa de 96 pocillos, una placa
de 35-mm, o un plato de 60 mm, respectivamente, fue utilizado por la variacin de
la distancia al objetivo (divergencia del haz, 15 ) y el poder de ajuste (irradiancia,
W / cm2) evalu con un medidor de potencia. Se llevaron a cabo todos los
tratamientos como se ha descrito anteriormente, y el tiempo de tratamiento (5 min)
se mantuvo constante en todos los experimentos. Debido a las variaciones en la
salida del lser a muy baja niveles de potencia y atenuacin de plstico de cultivo
celular y medio, una variacin de dosis 10% era incluido en todos los
experimentos in vitro. Experimentos de soluciones libres de clulas se realizaron
en negro pozos, mientras que los tratamientos de clulas se realizaron con un
fondo negro (hoja para tarjetas) colocado por debajo de los platos o pocillos de
cultivo de fondo transparente.

Pg. 22

Los ensayos in vivo, la misma unidad de lser descrito anteriormente (Newport)

se utiliz para in vivo (Ratn y rata) experimentos. Esta unidad tiene un sistema de
suministro de fibra de 400 m, y el fin pieza se coloca directamente sobre el tejido
pulpar expuesto y se utiliza en 0,01 W / cm2 durante 5 min en modo continuo para
una dosis total de 3 J / cm2. La pieza final se mueve continuamente en una
movimiento suave y uniforme durante los tratamientos para asegurarse de que no
haba calefaccin apreciable. Los animales se trataron slo una vez y seguidos
durante 8 semanas (ratones) o 12 semanas (ratas).

Pre-dontoblastos en la cultura andamio 3D

Ratn MDPC-23 clulas (3 x 106 clulas / ml) se sembraron en los andamios de

PLG (apoyando mtodos) en medio completo. Las clulas se dejaron que se
unieran durante 30 min y luego flotaban en medio completos. Despus de la
incubacin durante la noche, LPL (por encima de la seccin) o TGF-1 (2,5 ng /
ml). Se realizaron tratamientos. Los andamios se colocaron en medio fresco en
una placa de 12 pocillos con los suplementos de mineralizacin (10 mM de glicerofosfato, 10 nM de dexametasona y 20 mM cido ascrbico). El medio se
cambi cada 3 das y se mantiene en cultivo durante 21 das. Los lisados celulares
de los andamios se analizaron para determinar la actividad de ALP y la matriz de
dentina induccin.

El anlisis histolgico
Las muestras de dientes fueron descalcificadas y se procesan de forma rutinaria
para embebido en parafina de 4 micras las secciones de serie. Debido a la
pequea (0,7 a 1 mm) tamao de las muestras y de los dientes relativamente
grande defecto creado, secciones en el sitio del defecto tenan mala integridad y
eran difciles de procesar para histologa. Por lo tanto, se opt por realizar
cuantitativa de alta resolucin CT de la totalidad diente de eludir estas
limitaciones tcnicas (mtodos complementarios). Para cualitativa anlisis
histolgico, las secciones de tejido adyacente al defecto (donde los restos de
llenado materiales eran evidentes) se utilizaron. Estas secciones fueron teidas
con H & E, Masson tricrmico, Azan azul y azul de toluidina y se examinaron con
microscopa de rutina o iluminacin polarizado (Nikon).

Pg. 23

Anlisis estadstico
Los datos se analizaron usando el software GraphPad Prism Microsoft Excel y.
Las medias y las se calcularon. Se realiz la prueba t de Student para todos los
datos, a menos que se indique lo contrario, donde P <0,05 fue considerado
estadsticamente significativo. En los ensayos que comparan mltiples medios,se
aplic la correccin de Bonferroni. Para los experimentos in vivo, los anlisis se
realizaron en de manera emparejada como dos sitios (dientes molares) en cada
animal fueron asignados al azar a cualquiera control o tratamiento LPL. Dado el
nmero limitado de puntos de datos para evaluar la distribucin de datos de una
manera vlida, se asumieron los datos a ser distribuidos de una manera no
gaussiana y la no paramtrico de Wilcoxon de pares relacionados firmados rank
test se utiliz para analizar los datos; P < 0,05 fue considerado estadsticamente
significativo. El tamao de la muestra para los estudios en animales se bas en
estudios previos descritos en la literatura, y los anlisis de potencia (intervalo de
confianza del 80%, = 0,05, para detectar un cambio del 10% entre los grupos de
tratamiento y control con una SD de 0,05) dado como resultado un tamao de la
muestra n = 4. Debido a la limitada disponibilidad de los ratones transgnicos y la
dificultades tcnicas de la instrumentacin de los dientes de ratn minutos con
eficacia y mantener su integridad durante el proceso, que no fueron capaces de
estudios del ratn para poder adecuadamente anlisis estadstico en ciertas
figuras (Fig. 6D e higueras. S9).

Pg. 24

BIBLIOGRAFIAS
Praveen R. Arany1,2,3,4,5, Andrew Cho5, Tristan D. Hunt1, Gursimran Sidhu1,
Kyungsup Shin1,3, Eason Hahm1, George X. Huang1, James Weaver2, Aaron
Chih-Hao Chen6, Bonnie L. Padwa7, Michael R. Hamblin6,8,9, Mary Helen
Barcellos-Hoff10, Ashok B. Kulkarni5 and David J. Mooney1,. (2014).
Photoactivation of Endogenous Latent Transforming Growth Factor1 Directs
Dental Stem Cell Differentiation for Regeneration. 23 de Junio 2016, de Science
Translational
Medicine
Sitio
web:
http://stm.sciencemag.org/content/6/238/238ra69.abstract?sid=305c2a5e-9034418d-9a2f-48bbf195331f.
Galvez-Gastelum, Francisco Javier; San Dobal- Rodriguez, Ana Soledad E
Armendariz-Borunda, Juan.. (Julio- agosto 2004). Factor de crecimiento
transformante B como blanco terapeutico. Salud Publica.. 25 de Junio 2016, de
Salud Publica Mxico Sitio web: http://eusalud.uninet.edu/apuntes/tema_03C.pdf
ANTHONY J. SMITH", NICOLA CASSIDY', HELEN PERRY', CATHERINE
BEGUE-KIRN2,
JEAN-VICTOR RUCH2and HERVELESOT2. Reactionary dentinogenesis. Int..I.
De\'. lJiol. 39; 273-2HO (1995). PDF.
S. Gronthos, M. Mankani, J. Brahim, P. Gehron Robey, and S. Shi. Postnatal
human
dental
pulp
stem
cells
(DPSCs)
in vitro and in vivo. Edited by Darwin J. Prockop, Tulane University, New Orleans,
LA, and approved September 26, 2000 (received for review July 5, 2000).
Zhiwei Yang, Zhenyu Mu, Branka Dabovic, Vladimir Jurukovski, Dawen Yu,
Joanne
Sung,
Xiaozhong
Xiong,
and John S. Munger. Absence of integrin-mediated TGF1 activation
in vivo recapitulates the phenotype of TGF1-null mice. Department of Cell
Biology, New York University School of Medicine, New York, NY 10016.
http://www.jcb.org/cgi/doi/10.1083/jcb.200611044.
Nimet Maherali1,2,3 and Konrad Hochedlinge. Tgfb Signal Inhibition Cooperates
in
the
Induction
of
iPSCs
and Replaces Sox2 and cMyc. Current Biology 19, 17181723, November 3, 2009

Pg. 25

Qiaoran Xi,1 Zhanxin Wang,2 Alexia-Ileana Zaromytidou,1 Xiang H.-F. Zhang,1

Lai-Fong
Chow-Tsang,1
Jing
X.
Liu,3
Hyesoo Kim,4 Afsar Barlas,5 Katia Manova-Todorova,5 Vesa Kaartinen,6 Lorenz
Studer,4
Willie
Mark,3
Dinshaw
J.
Patel,2
and
Joan
Massague

A
Poised
Chromatin
Platform
for TGF-b Access to Master Regulators. December 23, 2011
Laura A. Sena1 and Navdeep S. Chandel. Physiological Roles of Mitochondrial
Reactive
Oxygen
Species. 1Department of Medicine, Division of Pulmonary and Critical Care
Medicine
2Department of Cell and Molecular Biology.
October 26, 2012
http://dx.doi.org/10.1016/j.molcel.2012.09.025.
Justin K. Ichida,1,3,6 Joel Blanchard,1,6 Kelvin Lam,1,6 Esther Y. Son,1,2,3,5,6
Julia
E.
Chung,1,2,3
Dieter
Egli,1,3
Kyle M. Loh,1 Ava C. Carter,1,3 Francesco P. Di Giorgio,1,3 Kathryn Koszka,1,3
Danwei
Huangfu,1
Hidenori
Akutsu,4
David R. Liu,5 Lee L. Rubin,1,* and Kevin Eggan, Harvard Stem Cell Institute,
Department of Stem Cell and Regenerative Biology, Harvard University,
Cambridge, MA 02138, USA. A Small-Molecule Inhibitor of Tgf-b Signaling
Replaces Sox2 in Reprogramming by Inducing Nanog. November 6, 2009.
Harold L. Moses,2 Earl L. Branum, Jacqueline A. Proper, and Robert A. Robinson.
Transforming Growth Factor Production by Chemically Transformed Cells.
Received January 12, 1981; accepted March 19, 1981.

Pg. 26