Alasmanuallabomicrobiologã A PDF

UAP
E.A.P.: ESTOMATOLOGA
MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA GENERAL Y ESTOMATOLGICA
SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Toda sustancia qumica debe ser considerada un txico en potencia, por lo que la
manipulacin de estas sustancias se debe realizar con mucho cuidado y conociendo, de
antemano, las consecuencias de dicha manipulacin. Adems, aunque los laboratorios han
sido diseados y construidos para que los riesgos sean mnimos (campanas extractoras de
gases, alarma para gas, extintores, lavaojos o duchas), se deben tener siempre en cuenta una
serie de precauciones y seguir unas normas de seguridad bsicas:
Conocer las salidas de emergencia y la localizacin y utilizacin de los extintores,
lavaojos y equipos de emergencia.
Mantener el rea de trabajo limpia y ordenada. Todos los equipos debern ser
instalados en lugares apropiados, con buena iluminacin, ventilacin y los sistemas de
seguridad correspondientes.
Utilizar una bata de laboratorio que deber estar siempre abrochada.
Evitar el contacto con fuentes de electricidad y de calor.
Apagar los instrumentos elctricos antes de manipular las conexiones.
Utilizar guantes y gafas de seguridad cuando se requieran. No es conveniente

el uso de lentes de contacto en los laboratorios de qumica y microbiologa.
No se deben guardar ni consumir alimentos y bebidas dentro del laboratorio.
Todos los productos inflamables se deben almacenar en un lugar adecuado, separados de los
cidos y las bases y de los reactivos oxidantes.
DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS
UAP
LOS TRABAJOS EN EL LABORATORIO
Se enuncia seguidamente un conjunto de normas que se deba de tener en cuenta antes, durante
y despus de un trabajo de laboratorio. El habituarse a elles le permitir participar activamente
en la actividad cientfica, aprender a hacer preguntas as como tambin a responder, a
observar y a realizar mediciones exactas, a analizar, interpretar y resumir resultados.
1.- PARA LA REALIZACIN DE EXPEDIENTE.

Lea previamente el expediente a realizarse.
Espere las instrucciones antes de comenzar a utiliza los materiales y equipos.
Ordene y rotule los materiales antes de comenzar cada experimento.
Seguir las instrucciones en forma precisa.
Registrar las actividades consignadas en el experimento en un cuaderno especial para
ello.
2.- PARA EL REGISTRO DE LOS DATOS EXPERIMENTALES.

Cada experimento debe registrarse en forma organizada y lgica. La utilizada con mayor
frecuencia corresponde al siguiente esquema:
a. Ttulo y nmero e experimento.
b. Objetivos: se les define como aquellos que se pretenden alcanzar con la realizacin del
experimento.
c. Materiales y equipo: se describir el material y equipo a utilizado.
d. Procedimiento: se refiere al mtodo experimental, de anlisis o de cualquier otro tipo
que se haya utilizado durante el experimento.
e. Observaciones y mediciones.
f. Anlisis e interpretacin de datos; se analiza la informacin obtenida y se le confronta
con otros hallazgos con el fin de modificarlos en virtud a las pruebas experimentales o
tericas que se presentan.
g. Conclusiones y generalizaciones.
a. La redaccin debe ser clara y sencilla.
b. Expresa los resultados siempre que le sea posible en forma cuantitativa.
Expresa los resultados, cuando sea necesario, en grficos, cuadros y dibujos
UAP
PRACTICA N 1
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
1.1
INTRODUCCIN
En el laboratorio, al igual que en diferentes lugares, nos exponemos a diversos peligros
que debemos considerar para disminuir los riesgos de accidentes. Se puede clasificar a
estos riesgos en Riesgos Biolgicos (virus, bacterias, clamidias, rickettsias, parsitos u
hongos) y en No Biolgicos. En los riesgo no biolgicos incluyen los riesgos qumicos
(ejemplo uso de alcohol y solventes inflamables o custicos), fsicos (ejemplo
cortaduras), elctricos (ejemplo descargas elctricas por enchufes o cables en mal
estado) y el fuego (ejemplo quemaduras), que son comunes en los laboratorios.
El estudio de los microorganismos que pueden ser patgenos para el hombre, los
animales u otras formas de vida, trae ciertos riesgos que varan segn el agente
infeccioso y los procedimientos utilizados.
1.2
SEGURIDAD BIOLGICA
Las Normas de Seguridad Biolgica pretenden reducir a un nivel aceptable el riesgo
relacionado con la manipulacin de material peligroso, y su rigurosidad vara con la
peligrosidad de los agentes.
La seguridad biolgica se fundamenta en:
Tcnicas de Laboratorio. Se refieren a todas aquellas prcticas y tcnicas
microbiolgicas que se realizan dentro y fuera del laboratorio. Un buen seguimiento
de las mismas ayuda a contener los riesgos biolgicos.
Equipo de seguridad (Barreras Primarias). Se incluyen los dispositivos o aparatos
que garantizan la seguridad (por ejemplo, las cabinas de seguridad biolgica), como
las prendas de proteccin personal (guantes, mascarillas, batas, calzado, etc.).
Diseo y Construccin de la Instalacin (Barreras Secundarias). La magnitud de
las barreras secundarias depender del tipo de agente infeccioso que se manipule en el
laboratorio. Dentro de ellas se incluyen la separacin de las zonas donde tiene acceso
el pblico, la disponibilidad de sistemas de esterilizacin (autoclaves), filtrado del aire
de salida al exterior, flujo de aire direccional, etc.
El equipamiento y el diseo del laboratorio de microbiologa contribuyen a la seguridad slo

si las personas que trabajan en l estn motivadas, conocen las normas de seguridad y las
aplican. La actitud y el modo de proceder de sus colaboradores determinan su propia
seguridad, as como la de sus compaeros y la de la colectividad.
UAP
1.3 EL FACTOR HUMANO EN LA PREVENCIN DE ACCIDENTES

Un accidente puede ocurrir por diferentes causas, pero casi siempre, se deben a errores
humanos y pueden ser evitados. Por ello, es que debe tenerse especial atencin en
aquellos factores humanos que intervienen en la prevencin de accidentes:
Prestar atencin a los estados de ansiedad, irritabilidad y apresuramiento.
Reflexionar sobre las actitudes de negacin ante situaciones de riesgo.
Considerar que las crisis de cambio pueden ser un factor especfico en la produccin
de accidentes.
Detenerse a investigar un accidente menor como predecesor de otro de mayor
importancia.
Detectar el desplazamiento de las crisis a las actividades laborales.
Estar alerta frente a situaciones de crisis familiares y/o laborales.
Atender los estados de tensin que genera la rutina.
Una vez ocurrido el accidente su consecuencia vara segn su gravedad, por ello es
importante que el accidente no ocurra, dado que pueden ser evitados.
El riesgo de que se produzca un accidente puede disminuirse a niveles muy bajos
siempre y cuando se tenga en cuenta que se debe:
Conocer los elementos de riesgo.
Conocer la forma de manejarlos.
Contar con los elementos necesarios para aplicar tcnicas que disminuyan los
riesgos.
Aceptar consejos de aspectos tcnicos, de personas con experiencia en el trabajo
de laboratorio.
Transmitir dichos aspectos a quienes recin ingresan al laboratorio.
Exigir de los superiores la implementacin de medidas de proteccin.
Restringir el acceso de visitantes.
Si a pesar de todo lo antes expresado, el accidente igual ocurre, es muy importante saber
lo que se debe hacer y a quin hay que recurrir para comenzar en forma inmediata una
tarea de reparacin.
Para disminuir los riesgos es importante mantener buenos hbitos de trabajo, respetar las
normas de seguridad y conocer los peligros potenciales dentro del laboratorio.
El riesgo puede ser alto o muy limitado y depende de la motivacin del personal, de la
infraestructura y de la metodologa.
UAP
1.4 ELEMENTOS DE RIESGO. HBITOS DE HIGIENE

1.4.1 Manos: tocan la suciedad (contaminacin), las fuentes de infeccin y sin que
tengamos una nocin clara de sus movimientos, las llevamos a la boca o a los ojos
que son, a su vez, la puerta de entrada de muchas infecciones. Cuando estamos
trabajando en un laboratorio, tenemos que cambiar ciertas costumbres, como la de
llevarnos lpices a la boca, ya que normalmente se dejan en cualquier lugar
pudindonos infectar con cualquier microorganismo all presente.
En el laboratorio no se debe:
Fumar
Comer
Beber
Maquillarse
Como una prctica diaria y en forma repetida, deben lavarse las manos con jabn
(preferentemente lquido), cuantas veces sea necesario. Dado que las manos son
susceptibles de recibir pinchazos, heridas y abrasiones, para realizar algunas
tareas conviene utilizar guantes, dado que la posibilidad de que lo anterior ocurra
se encuentra muy disminuida. Dos prcticas son necesarias cuando utilizamos
guantes, el lavado con jabn y el sacrselos cuando se vayan a realizar otras tareas
diferentes a las que estamos realizando.
1.4.2 Cabello: Es conveniente usarlo corto o recogido durante el trabajo.
1.4.3 Uso de ropa protectora: el uso de guardapolvo impide daos mayores, por
ejemplo salpicaduras con material infeccioso o contaminado. Esta ropa debe ser
higienizada peridicamente y permanecer siempre dentro del rea del laboratorio.
1.4.4 Proteccin de ojos. Cuando se trabaja con sustancias corrosivas, es conveniente
usar anteojos protectores o mscaras para disminuir el riesgo de lesionar la crnea
con salpicaduras o por exposicin a vapores qumicos.
1.4.5 Otras protecciones. En las operaciones comunes del laboratorio se generan
aerosoles y dado que la mayora de las bacterias y virus tienen como puerta de
entrada al organismo la va area, hay que evitar la produccin de stos y es
necesario usar mscaras de proteccin. Debe evitarse el pipeteo directo con la
boca, por ello es conveniente usar aquellos dispositivos apropiados como lo son
las pipetas automticas, las propipetas (peras de goma), dispensadores, etc.
UAP
Otra regla importante, considerada la segunda regla de oro de la bioseguridad es

Considerar que toda muestra es potencialmente peligrosa y tratarla como tal.
1.5 OTRAS RECOMENDACIONES:
Proteger de sobrecargas los circuitos elctricos, usando disyuntores y polos a tierra.
Utilizar una toma a tierra en la instalacin elctrica interior.
Usar tomacorrientes simples en lugar de tomacorrientes mltiples.
Colocar los interruptores y disyuntores en lugares accesibles.
Usar calefactores con vlvula de seguridad.
Revisar peridicamente los extinguidores.
Mantener los corredores y pasillos libres de obstculos que puedan entorpecer las
salidas.
Controlar las plagas y artrpodos.
En general la labor del microbilogo en el laboratorio, consiste en aislar e identificar
microorganismos que, en algunos casos, pueden resultar patgenos. Para aislar el
microorganismo de inters, se debe trabajar con elementos estriles (ansas, medios de
cultivo, recipientes, etc.) y manipular las muestras con sumo cuidado, como potenciales
vehculos de microorganismos patgenos.
En el laboratorio docente, se deben tomar las medidas mnimas de bioseguridad y stas
debern extremarse cuando se trabaje con microorganismos potencialmente letales.
1.6 PRECAUCIONES EN EL MANEJO DE MATERIAL BIOLGICO:
Tratar de realizar las operaciones dentro de una cabina de seguridad biolgica (si se
dispone de la cabina).
Reducir al mnimo la produccin de aerosoles.
Utilizar dispositivos mecnicos para el pipeteo.
Tener en el laboratorio desinfectantes para piel y mesas de trabajo.
Colocar el material contaminado en recipientes con tapa, para esterilizarlos antes del
lavado.
Esterilizar o incinerar el material contaminado antes de su eliminacin.
CLASIFICACIN DE LOS AGENTES BIOLGICOS POR GRUPOS DE RIESGO
Segn la peligrosidad de los microorganismos infectantes, existe una clasificacin por grupos
de riesgo:
Agente Biolgico del Grupo I. Es aqul que resulta poco probable que cause una
enfermedad en el hombre y en la comunidad.
UAP
Agente Biolgico del Grupo II. Es aqul que puede causar una enfermedad en el hombre
y puede suponer un peligro para los trabajadores, siendo poco probable que se propague a
la comunidad y existiendo generalmente profilaxis o tratamiento eficaz.
Agente Biolgico del Grupo III. Aqul que puede causar una enfermedad grave en el
hombre y presenta un serio peligro para los trabajadores, pudiendo causar la muerte con
riesgo de que se propague a la comunidad y existiendo frente a l generalmente profilaxis
o tratamiento eficaz.
Agente Biolgico del Grupo IV. Aqul que causando una enfermedad grave en el
hombre supone un serio peligro para los trabajadores, con muchas posibilidades de que se
propague a la comunidad y sin que exista generalmente frente a l profilaxis o
tratamiento eficaz.
CLASIFICACIN DE LOS LABORATORIOS SEGN SU NIVEL DE SEGURIDAD

BIOLGICA
Nivel 1. Microorganismos no patgenos para el hombre.
Es el nivel de seguridad requerido para los agentes biolgicos del grupo I, los que no
producen enfermedad en el ser humano sano y de susceptibilidad conocida y estable a los
antimicrobianos. Es el habitualmente utilizado en los laboratorios de prcticas de
universidades o centros docentes donde se emplean cepas no patgenas.
Se debe trabajar en condiciones mnimas de asepsia y esterilidad. Ejemplos tpicos son
Escherichia coli, como as tambin todos aquellos microorganismos que se utilizan en la
industria alimenticia, para la elaboracin de quesos, cerveza, embutidos, etc.
Nivel 2. Microorganismos y procedimientos de riesgo moderado.
En l se trabaja con agentes del grupo II, como as tambin con algunos que,
perteneciendo a la propia flora habitual del hombre, son capaces de originar patologa
infecciosa humana de gravedad moderada o limitada. Deben ser manipulados por personal
especializado y son los que con ms frecuencia se estudian en laboratorio de microbiologa
clnica: Salmonella typhi, Mycobacterium tuberculosis, Virus de la Hepatitis B, etc.
Otros aspectos que se deben considerar en este nivel son:
- El rea de riesgo debe restringirse al personal, no permitindose el acceso a personas que
tengan aumentado, por alguna causa, el riesgo de infeccin (Ej: inmunosuprimidos).
- En el acceso al laboratorio figurarn seales de riesgo biolgico, condiciones de ingreso y
responsables del mismo (nombre, telfono y domicilio).
UAP
- El personal debe estar vacunado (si correspondiera) y entrenado para prevenir accidentes y
actuar correctamente en caso de que ocurriere.
- Control permanente de roedores e insectos.
- Uso de guardapolvo en el rea de trabajo exclusivamente (considerar que el guardapolvo es
potencialmente un elemento contaminante).
- Evitar el uso de jeringas o cualquier otra prctica que genere aerosoles.
Las muestras deben tratarse siempre como potencialmente infectadas y tenerse en
cuenta las precauciones citadas.
Nivel 3: Microorganismos que pueden causar la muerte o aquellos de riesgo moderado En
este nivel se trabaja con agentes biolgicos del grupo III, microorganismos que causan
patologa grave, de difcil y largo tratamiento, que pueden dejar secuelas y ocasionalmente
producir la muerte, en cuya manipulacin es peligrosa. Las principales medidas a tomar en
este caso son la correcta manipulacin y la utilizacin de cabinas de seguridad. En los
laboratorios de microbiologa clnica los ejemplos ms tpicos de este tipo de
microorganismos son el virus, Brucella spp, Histoplasma capsulatum, etc.
Solo pueden ser procesados por personal calificado, por ello se debe restringir el acceso al
personal del laboratorio y llevar un registro de las visitas, del personal de servicio y de
accidentes.
Nivel 4: Microorganismos exticos y/o altamente peligrosos y procedimientos de alto
riesgo.
Este nivel se requiere cuando se sospecha de un agente especialmente patgeno e
infectocontagioso, extico o no, que produce alta mortalidad y para el que no existe
tratamiento o es poco fiable. Normalmente son microorganismos de dosis infectiva baja y
alta contagiosidad. Este nivel tambin puede utilizarse para trabajar con animales de
experimentacin infectados con microorganismos del grupo IV.
Debe trabajarse en laboratorios especiales de mxima seguridad (contencin mxima), en
los que es necesario ducharse y cambiarse de ropa tanto a la entrada como a la salida del
mismo y en donde existen barreras de aire con el exterior. El manejo del material limpio y
contaminado se realiza por canales altamente controlados.
Ejemplos de este nivel son el virus Hepatitis B, virus bola, el virus de la fiebre aftosa, el
virus del HIV, el Machupo y el Marburg. Deben incluirse en este nivel de contencin los
microorganismos propios del grupo 3 que adquieren propiedades patgenas que los elevan
UAP
al grupo 4. Un ejemplo sera Mycobacterium bovis multirresistente que puede causar

fallecimiento por fracaso teraputico.
En general, la naturaleza infecciosa del material clnico es desconocida y al Laboratorio de
Microbiologa suelen remitirse muestras muy diversas. Es responsabilidad del Jefe del
laboratorio, el establecimiento de prcticas normatizadas que de forma realista permitan su
manipulacin.
Para que se produzca un accidente por agente biolgico deben concurrir bsicamente cuatro
elementos:
Husped - hospedador susceptible,
Agente infeccioso,
Concentracin suficiente del agente infecciosos y
Ruta de transmisin apropiada.
De todos ellos, el que mejor se puede controlar en el laboratorio es la ruta de transmisin.
Las rutas de transmisin ms comunes en el laboratorio son la area y la inoculacin directa,
muy por encima de todas las dems, aunque la oral, la percutnea y el contacto directo con la
piel o las mucosas tambin son posibles.
PREGUNTAS A DESARROLLAR
1. Defina bioseguridad?
2. Elabore 4 lista de agentes biolgicos clasificndolos en: Virus, bacterias, hongos, parsitos,
que cada lista deben haber agentes biolgicos.
3. Elabore una lista de 10 agentes biolgicos de nivel I, II, III y IV.
4. Segn lo ledo en sobre agentes biolgicos el virus Ebola (Zaire) es catalogado como
agente biolgico de nivel IV, cree Ud. que el pas en el aspecto de salud estara preparado
para enfrentar un posible ingreso del virus al pas.
5. Si en la en la prctica de enterobacterias se trabaja con un cultivo de Vibrio cholerae, que
medidas de bioseguridad realizara y como eliminara el cultivo cuando termine la prctica.
BIBLIOGRAFA EMPLEADA PARA EL DESARROLLO DE LAS PREGUNTAS:
UAP
PRACTICA N 2
RECONOCIMIENTO DEL MATERIAL DE LABORATORIO
2.1. OBJETIVOS
Reconocer y manejar el material de uso comn en el laboratorio de microbiologa.
Reconocer y aplicar las reglas de bioseguridad en el laboratorio de microbiologa.
2.2. INTRODUCCIN
Adems de un ambiente apto para el trabajo microbiolgico, el laboratorio de
microbiologa requiere de una instrumentacin bsica de uso corriente en microbiologa,
como la siguiente:
2.2.1. Tubos de ensayo: destinados a conservar medios de cultivo en pequeos
volmenes. Se utilizan tubos de vidrio de diversos tamaos, con tapa a rosca o a
presin. El vidrio debe ser de buena calidad (prex), neutro, transparente e
inalterable a los tratamientos.
2.2.2. Placas de Petri: cajas de vidrio de seccin circular, con tapa. Existen de diferentes
tamaos segn su uso, aunque las ms frecuentemente utilizadas tienen 10 cm de
dimetro.
2.2.3. Pipetas graduadas: para su uso en el laboratorio de microbiologa se les coloca un
tapn de algodn en el extremo superior, de manera de impedir que el operador
aspire lquidos potencialmente contaminados, o que contamine el medio de cultivo
al aspirarlo. Se utilizan para realizar inoculaciones y diluciones.
Para manejar pequeos volmenes (menores de 1 ml) se recomienda el uso de
pipetas automticas que miden exactamente el volumen deseado (500, 150, 50 Ul
etc.); en el extremo se colocan puntas o tips estriles que se reemplazan cuando se
desea.
2.2.4. Pipetas Pasteur: son tubos de vidrio terminados en capilar. Se usan para
transportar pequeos volmenes de lquido o para sembrar a partir de medios de
cultivo lquidos.
2.2.5. Esptula de Drigalsky: Se construye con una pipeta Pasteur larga o con una varilla
de vidrio. Se calienta el extremo en la llama del mechero y se dobla en ngulo recto
unos 4 cm, esta ltima porcin se dobla nuevamente del mismo modo. Se utiliza
para distribuir una muestra lquida que se siembra sobre la superficie de un medio
de cultivo slido.
10
UAP
2.2.6. Mango o asa de Koll: sirve para sujetar al ansa, aguja o esptula de platino o
aleaciones metlicas de lenta oxidacin y rpido enfriamiento. Est compuesto por
un mango de un material aislante, que se prolonga en un vstago metlico que
sostiene mediante una tuerca un alambre. Cuando el extremo del alambre tiene
forma de anillo se denomina ansa; si se deja el extremo recto se llama aguja y si se
dobla en ngulo recto al extremo libre se lo llama gancho.
2.2.7. Marcador permanente al solvente: son marcadores resistentes al agua, se utilizan
para marcar o escribir sobre superficies de vidrio.
2.2.8. Portaobjetos: lmina rectangular de vidrio incoloro de 2,5 cm x 7,5 cm y
aproximadamente 1 cm de espesor. Se utilizan para hacer observaciones
microscpicas de los microoganismos, ya sea en fresco o fijados.
2.2.9. Portaobjetos excavados: se utilizan para realizar exmenes con gota pendiente,
para ello presentan una depresin de unos 10 a 12 mm de dimetro. En este caso el
material a observar es una gota de lquido suspendido.
2.2.10.
Cubreobjetos: pequeas lminas de vidrio transparente, de poco espesor (0,11
a 0,23 mm), usados para cubrir los preparados realizados sobre el portaobjetos para
su posterior observacin microscpica.
2.2.11.
Tubos o campanitas de Durham: pequeos tubos (de unos 5x30 mm) que
son colocados en forma invertida dentro de los tubos de ensayo que contienen
medio de cultivo lquido, sirven para verificar la produccin de gas por parte de los
microorganismos.
2.2.12.
Erlenmeyer: se utilizan para preparar los medios de cultivo, o para el
desarrollo de microorganismos en medio lquido con agitacin o aireacin.

2.2.13.
Otros elementos y aparatos: Al material citado debe agregarse por su uso
frecuente, mecheros y gradillas. Los equipos ms comnmente usados en el

laboratorio de microbiologa son: microscopios, cuenta colonias, autoclave, estufas
de esterilizacin y cultivo, bao termorregulable, balanzas, espectrofotmetro,
centrfuga, heladeras, etc.
TRAER AL LABORATORIO EL MATERIAL INDICADO EN DIAPOSITIVA
INIDCANDO LA FUNCIN DE CADA UNA DE ELLOS. SE EXPONDRA EN EL
AULA
Colocar el nombre en cada uno de los materiales:
11
UAP
2.3. NORMAS GENERALES PARA EL TRABAJO EN LABORATORIO DE

MICROBIOLOGA
2.3.1. Todos los estudiantes deben usar guardapolvo durante las clases prcticas con el
objeto de proteger su ropa de posibles contaminaciones. Deben proveerse de
escobilla para uas, jabn de tocador, detergente, alcohol y marcador para vidrio.
2.3.2. Tener siempre a mano sobre la mesa de trabajo: a) una probeta o similar llena con
solucin desinfectante para introducir las pipetas luego de ser utilizadas; b) una olla
o recipiente metlico para colocar el material contaminado o sucio; c) mechero.
2.3.3. Lavarse las manos antes y despus de trabajar.
2.3.4. Limpiar su sector de la mesa de trabajo con un algodn embebido en solucin
desinfectante.
12
UAP
Para ello se puede emplear bicloruro de mercurio, solucin de lega al 5%, alcohol
50-70 grados, etc. (no corrosivas para la piel).
2.3.5. Tener en cuenta que el cultivo con el que se trabaja puede ser patgeno, razn por
la cual hay que manejarlo siempre como si lo fuera.
2.3.6. Al recibir el cultivo NO LO DESTAPE, tome el tubo/placa Petri por su parte
media apoyado sobre la palma de la mano de manera de ver fcilmente el contenido
y la inscripcin que lo identifica.
2.3.7. Cualquier accidente con los cultivos, como rotura de tubos/placa Petri sembrados,
actu con cautela no se desespere, evitando la diseminacin del material.
Comunique el hecho al profesor o personal del laboratorio.
2.3.8. En caso de heridas por accidentes durante el manipuleo del material infectado, debe
prevenirse la posibilidad de infeccin. Comunique el hecho al profesor o personal
del laboratorio.
2.3.9. Realice las tcnicas bacteriolgicas donde no haya corrientes de aire, con
movimientos pausados, poco amplios y sin brusquedad. Evite hablar mientras
realiza maniobras microbiolgicas a fin de evitar que se contaminen los cultivos.
2.3.10.
Debe siempre llevarse el asa bacteriolgica (asa de Koll) al rojo antes y
despus de toda operacin que se realice con ella.

2.3.11.
No deben depositarse los tapones sobre la mesa de trabajo, para evitar
contaminaciones de y con los cultivos de trabajo.

2.3.12.
Los tubos con medio de cultivo, ya sean lquidos o slidos, sembrados o no,
deben colocarse siempre sobre una gradilla y nunca sobre la mesa de trabajo.
2.3.13.
Los cultivos de descarte deben colocarse siempre en recipientes adecuados para
luego ser esterilizados.

2.3.14.
Tanto las placas Petri como los tubos deben ser identificados con marcas o
rtulos.
2.3.15.
Los papeles de envoltura de material de vidrio deben arrojarse en los cestos
destinados a tal fin.

2.3.16.
Anotar concisamente todo lo nuevo que se observe en cada experiencia,
completando con dibujos.

2.3.17.
Al abandonar el laboratorio, debe controlar que los mecheros y llave de gas
queden cerrados, as como las luces y la llave de agua, de manera de evitar

accidentes.
13
UAP
2.3.18.
SOLICITE LA PRESENCIA DEL DOCENTE PARA QUE LO
ASESORE CORRECTAMENTE TODA VEZ QUE TENGA DUDAS SOBRE

LA REALIZACIN DE UNA TCNICA.
2.4. LIMPIEZA Y PREPARACIN DEL MATERIAL
El material que se emplea en microbiologa debe estar perfectamente limpio y estril. La
limpieza es importante ya que restos de sustancias que permanecen en los tubos, placas y
dems elementos, pueden impedir el posterior desarrollo de los microorganismos; la
esterilizacin es fundamental para evitar la presencia de microorganismos extraos o
contaminantes. Para ello el material deber ser acondicionado de tal forma que mantenga
estas condiciones por tiempo indeterminado.
2.4.1. Tubos de ensayo. Para su uso deben estar perfectamente limpios. Si en ellos se ha
realizado algn cultivo deben esterilizarse previamente a su limpieza, para lo cual
deben colocarse boca abajo y sin tapn en un recipiente para favorecer que escurran
los medios de cultivo en ellos contenidos.
Se lava con agua caliente jabonosa o con detergentes neutros con la ayuda de
cepillos limpia tubos. Luego se enjuaga abundantemente con agua potable y
finalmente con agua destilada. Posteriormente se colocan en canastos u otros
recipientes para su escurrido y secado.
2.4.2. Placas de Petri. Se las esteriliza (si estn con medio de cultivo) y lava con
detergente neutro, esponja suave luego se enjuaga con abundante agua potable y
finalmente con agua destilada, se las coloca boca para abajo para su secado. Luego,
cada caja con su respectiva tapa, se envuelve individualmente en papel,
realizndose un doblez con el mismo en la parte superior para evitar que entre
polvo hacia el interior. Luego pueden envolverse de a grupos para garantizar la
esterilidad ante una eventual rotura del papel. As preparadas se esterilizan en
autoclave y se secan en estufa.
2.4.3. Pipetas. Para su uso deben estar limpias desengrasadas, estriles y secas. Luego de
ser utilizadas se deben colocar en probetas u otro recipiente destinado a tal fin, que
contenga solucin desinfectante (hipoclorito, formol 4%, fenol 5%); se quita el
trozo de algodn colocado en la boquilla con un alambre. Se colocan luego en
solucin de detergente para asegurar su limpieza. Se enjuagan primero con agua
corriente y luego con agua destilada, y posteriormente se secan.
14
UAP
Para volver a prepararlas se coloca en la boquilla un pequeo tapn de algodn lo

suficientemente ajustado como para aspirar con facilidad sin que se salga. Luego se
colocan en portapipetas metlicos o se envuelven individualmente, y luego en
paquetes, y posteriormente se esteriliza.
2.4.4. Portaobjetos. Para lograr que estn limpios y desengrasados se los sumerge en
soluciones de detergentes en las que se hierven, luego se enjuagan y dejan secar.
2.5. PREPARACIN DE LA MEZCLA SULFOCROMICA.
En algunas ocasiones el uso de solucin de detergente puede no ser suficiente para
limpiar correctamente el material, para lo cual se utiliza la MEZCLA SULFOCROMICA.
2.5.1. Reactivos a emplear:
Dicromato de potasio
cido sulfrico (grado tcnico)
2.5.2. Material de vidrio:
Vaso de precipitados de 250 ml
Vaso de precipitados de 1000 ml
Varilla de vidrio
Baln o recipiente en donde se preparar y almacenar la mezcla
Tapa para el recipiente
2.5.3. Indumentaria para la proteccin personal:
Guantes de goma
Mandiln de tela
Delantal de goma encima del anterior
Lentes de bioseguridad
Mascarilla de bioseguridad
2.5.4. Soluciones requeridas en caso de accidentes:
Bicarbonato de sodio
Hidrxido de sodio
2.5.5. Preparacin:
a) Pesar 30 g de dicromato de potasio en el vaso de precipitados de 250 ml,
disolver en un pequeo volumen de agua con ayuda de la varilla y colocar en el
recipiente.
b) Llenar el vaso de precipitados grande con cido sulfrico.
15
UAP
c) Colocar el recipiente con el dicromato en el lavadero en la que debe correr el

agua, con la tapa colocada de manera que permita seguir agregando el cido.
d) Agregar el cido de a pequeos volmenes, evitando respirar los vapores que se
desprenden y cuidando que la cuba no se recaliente. Al finalizar la operacin,
tapar totalmente el recipiente.
e) En caso de que ocurra algn accidente, se debe volcar una buena cantidad de
bicarbonato de sodio (hasta que deje de formarse espuma) sobre la piel o prendas
de vestir. Sobre el material de vidrio, mesadas, piso, etc. volcar hidrxido de
sodio para neutralizar el cido.
Figura 2.1: Los instrumentos bsico de uso corriente en el laboratorio de Microbiologa son: a
y b) Tubo de ensayo con tubo o campana Durham, c) Placa de Petri, d) Pipeta graduada con
tapn de algodn, e) Pipeta Pasteur, f) Esptula de Drigalsky, g) Aguja, h)Ansa, i) Portaobjeto
y j) Erlenmeyer
16
UAP
PRACTICA N 03
MICROSCOPIA
EL MICROSCOPIO es un instrumento ptico de mucha utilidad en la prctica biolgica; por

ello el estudiante debe conocerlo perfectamente, saber manejarlo y sobre todo, cuidarlo.
OBJETIVOS:
Conocer el microscopio compuesto y sus partes.
Determinar el tipo de imagen que proporciona.
Conocer el manejo y cuidado.
Estimar el tamao de los objetos que se observan en el microscopio.
MATERIALES:
Microscopio compuesto.
Papel milimetrado.
Papel impreso con letras A, E y F mayscula.
Gotero y agua.
Porta y cubre objetos.
Fotografa de revistas.
Agua de pecera o estancada
MICROSCOPIO COMPUESTO.
Es un instrumento sumamente delicado que sirve para observar objetos muy pequeos,
generalmente invisibles a simple vista. Su invento data de 1590 y se les atribuye a las
holandesas ZACARIAS Y JANNSEN:
Partes del microscopio compuesto.
El microscopio compuesto, consta de tres partes:
Sistema mecnico.
Sistema de iluminacin.
Sistema ptico.
A.- Sistema mecnico.
Tiene por funcin sostener a los otros dos sistemas y costa de las siguientes partes:
Base, pie o soporte.
Columna, brazo o agarradera.
Platina.
Tornillos macro y micrmetros.
17
UAP
Pinzas de ajuste al objeto.

B.- Sistema de iluminacin.
Tiene por funcin recoger los rayos de luz y llevarlo hasta el objeto. Formado por:
Focos.
Diafragma
Condensador
C.- Sistema ptico.
Es el sistema que tiene por funcin la formacin de la imagen del objeto.
Ocular.
Objetivos (generalmente 4, contenidos en el revolver)
MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO
1) Compruebe que las lentes del ocular y de los objetivos estn limpias: de no ser as,
lmpielas cuidadosamente con papel especial para ptica. No tocar las lentes con los dedos.
2) Coloque la preparacin (sin cubreobjetos y con la muestra en la parte superior) sobre la
platina sujetndola con el dispositivo mvil. Compruebe previamente, que el objetivo de
menor aumento est en posicin de empleo.
3) Para bacteriologa, iluminar la preparacin bajando el condensador (ms contraste), y con
el diafragma abierto.
4) Ajuste los binoculares a la distancia interpupilar y ajuste el foco de cada ocular si el
microscopio lo permite.
5) Coloque el objetivo de 10 aumentos (x10) y enfocar:
a) Acerque al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando para ello el
macromtrico. No realizar dicha operacin mirando por el ocular, pues correra el
riesgo de clavar el objetivo en la preparacin con el consiguiente destrozo de ambos.
b) Enfoque con el micromtrico observando por el ocular hasta obtener un enfoque
ntido.
6) Pase al objetivo de 40 aumentos (x40). Suba ligeramente el condensador. La imagen debe
estar casi enfocada, afine el foco con el micromtrico. Si la imagen no est ni
medianamente enfocada, es preferible volver a un enfoque con el objetivo de x10. El
objetivo de x40 trabaja muy cerca de la preparacin y por ello es susceptible de dos tipos
de accidentes: ser clavado en la preparacin y resultar manchado con aceite de inmersin
si se observa la preparacin ya usada con ste ltimo.
7) Empleo del objetivo de inmersin:
18
UAP
a) Gire el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y
el objetivo de x40
b) Coloque una gota de aceite de inmersin sobre el punto de la luz.
c) Termine de girar el revlver hasta la posicin del objeto de inmersin, asegurndose
de que ste no toca la preparacin, pero s la gota de aceite.
d) Enfoque cuidadosamente con el micromtrico. Recuerde que la distancia entre el
objetivo y la preparacin es mnima.
e) Una vez que ya ha puesto aceite de inmersin sobre la preparacin ya no puede
volverse a colocar los objetivos de x10 y de x40 sobre ese campo. Por lo tanto, si
desea enfocar otro campo, debe retirar el objetivo de inmersin girando el revlver
hacia el objetivo de menor aumento (x10), seleccionando otro campo y empezando a
enfocar desde ste ltimo.
f)
Finalizada la observacin de una preparacin, y antes de retirarla de la platina, se

colocar el objetivo de menor aumento girando el revlver en el sentido hacia la lupa.
Nunca retire la preparacin con el objetivo de inmersin en posicin de
observacin.
g) Retire la preparacin y limpie el objetivo de inmersin cuidadosamente con un papel

especial para ptica. Compruebe tambin que el objetivo de x40 est limpio.
CUIDADOS DEL MICROSCOPIO
MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1) Nunca tocar las lentes con las manos, sino con pauelos especiales para lente.
2) No dejar nunca una preparacin sobre la platina cuando no est usando el microscopio.
3) Para cambiar el objetivo, utilice siempre el revlver.
4) Despus de utilizar el objetivo de inmersin lmpielo. En caso de que el aceite se haya
secado, avise al docente para limpiarlo con xilol.
5) No fuerce nunca los dispositivos giratorios del microscopio (macro y micromtricos,
platina, revlver y condensador).
6) No cambie nunca de objetivo mientras est observando a travs del ocular.
7) Cuando finalice el trabajo ponga el objetivo de menor aumento en posicin de observacin.
8) Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin de prctica.
9) Toda vez que se tenga que trasladar el microscopio de un lugar a otro, se tomara al mismo
de su base con la mano izquierda y de su columna con la derecha.
19
UAP
10)
Terminado el trabajo con el microscopio, ste deber quedarse con el objeto de menor
aumento, con el condensador en su parte ms baja y el sistema de pinzas en su lugar y con

la plantilla en su parte mas baja.
PARTES DEL MICROSCOPIO
A continuacin encontrars las partes bsicas de un microscopio de luz.
A. Ocular Sostiene los lentes que aumentan la magnificacin
B. Revlver- Est debajo del cabezal, contiene los objetivos
C. Brazo-Sostiene el tubo
D. Pinzas- Sostienen la muestra a observarse
E. Ajuste grueso o tornillo macromtrico- Mueve el tubo o la platina hacia arriba o hacia
abajo
F. Ajuste fino o tornillo micromtrico- Enfoca la imagen
G
Interruptor- Para encender o apagar la fuente de luz
H. Base- Sostiene el microscopio

I.
Fuente de luz
J.
Diafragma- Regula la cantidad de luz que pasa a travs del espcimen
K. Cabezal- Est sobre el revlver, debajo del tubo que contiene el ocular
L. Platina- Base horizontal que sostiene las laminillas
M. Objetivos-Tienen lentes de diferente magnificacin y pueden rotar de posicin.
N. Tornillo del carril- sirve para mover el carril a la derecha, izquierda, arriba o abajo
20
UAP
21
UAP
PASOS A SEGUIR EN EL USO DE MICROSCOPIO A MENOR AUMENTO.

1. Colocar el objetivo de menor aumento.
2. Iluminar el microscopio, para lo cual se debe bajar el condensador hasta su parte mas
baja; abrir el diafragma y acercar el ojo al ocular. Mediante movimiento del espejo,
buscar un campo visual perfectamente iluminado.
3. Colocar la lmina porta objeto sobre la platina o mesa y ajustarla con lasa pinzas luego
tratar de controlar, el objeto en el agujero de la platina.
4. Subir la platina hasta que llegue a un tope (aprox. 0.5 cm. del objetivo de menor
aumento.
5. Colocar el ojo en el ocular ir bajando lentamente la platina utilizando el macromtrico
hasta encontrara la imagen del objeto.
6. Trate de aclarar la imagen moviendo el micrmetro.
INVESTIGACIN SOBRE LA ESTIMACIN DEL TAMAO DE LOS OBJETOS

QUE SE VEN EN EL MICROSCOPIO.
1. Corte un pedazo de papel milimetrado y haga un montaje en hmedo. Enfoque con el
menor aumento. Determine el dimetro del campo visual a pequeo aumento
exprselo en micras.
2. Corte un pedazo de fotografa de una revista y haga un montaje en hmedo. Observe
en pequeo aumento cuente el numero de puntos que pasa por el dimetro del campo
visual ya que cuando el dimetro de su campo visual, estimo el tamao de puntos y
especies en micras.
3. Suma el tamao de todos los puntos y de todos los espacios que pasen por el dimetro
del campo visual. Si la suma corresponde al dimetro de su campo visual, su estimado
es correcto; en caso contrario, estime nuevamente el tamao de los puntos y espacios.
4. Enfoque la porcin de fotografa con el mayor aumente y cuente el nmero de
nmeros de puntos y espacios que pasan pro el dimetro del campo visual, ya que
conoce el tamao de los puntos y de los espacios, determine el dimetro del campo
visual con el mayor aumento.
5. A manera de prctica, determine el dimetro de su cabello. Quitese un cabello y
crtelo en cedazos muy pequeos y trate de unirlos. Haga un montaje en hmedo y
determine su dimetro a mayor aumento.
22
UAP
MICROSCOPIO ESTEREOSCOPIO DE DISECCION.

Es un instrumento ptico constituido por un sistema simple de lentes convergentes con gran
poder de amplificacin.
VENTAJAS DEL MICROSCOPIO ESTEREOSCOPIO DE DISECCION.
Ampliacin directa sin invertir la imagen del objeto observado.
Permite la visin tridimensional del objeto.
La distancia de trabajo es grande, por lo que permite la manipulacin del objeto
problema.
Emplea luz directa o reflejada.
Permite la observacin de objetos que son muy grandes para el microscopio compuesto.
PARTES DEL MICROSCOPIO ESTEREOSCOPIO DE DISECCION.
La base con platina de cristal y pinza de fijacin.
El soporte para el cuerpo del microscopio.
Los objetivos contenidos en un revolver que puede ser una caja o una cpsula fija.
Los oculares contenidos en los tubos del mismo nombre y que se encuentran ubicados
en el extremo superior del cuerpo.
El tornillo de enfoque ubicado a un costado del soporte.
CUESTIONARIO
1.
Qu entiende por poder de ampliacin?
2.
Qu entiende por poder resolucin?
3.
Con qu factor o factores est relacionado el poder de resolucin?
4.
Qu diferencias encuentra cuando observa un mismo objeto a travs del microscopio

compuesto y del microscopio de diseccin?
5.
Qu entiende por apertura numrica?
6.
Qu tipo de imagen da el ocular y el objetivo?
7.
Cul es la mxima capacidad de resolucin que tiene un microscopio ptico?
8.
Cmo se calcula el nmero de aumento de una muestra?
9.
Explique el fundamento del microscopio electrnico, cuantas clases de microscopio

electrnico se conocen, explique cada uno de ellos.
10. Explique la diferencia que hay entre equipo y material

11. Esquematice el equipo y material de uso ms frecuente en el laboratorio de microbiologa
12. Esquematice lo observado en el microscopio (observaciones microscpicas)
23
UAP
DESARROLLO DE LA PRCTICA
Material biolgico:.
Observacin:..
Objetivo:..
Aumento:.
Material biolgico:.
Observacin:..
Objetivo:..
Aumento:.
Material biolgico:.
Observacin:..
Objetivo:..
Aumento:.
Material biolgico:.
Observacin:..
Objetivo:..
Aumento:.
BIBLIOGRAFA EMPLEADA PARA EL DESARROLLO DE LAS PREGUNTAS
24
UAP
PRACTICA N 04
PREPARADOS. COLORANTES. COLORACIONES. COLORACIN GRAM

I. Objetivos:
El propsito de esta prctica es hacer una introduccin preliminar al conocimiento de
los colorantes y las tcnicas bsicas de coloracin, quedando reservadas las
coloraciones especiales. La finalidad de las coloraciones, entre otras, hacer visible los
grmenes y revelar su estructura. El estudio microscpico de un germen puede ser
realizado de diversa manera, incluidos los preparados en fresco. Pueden adems
utilizarse tcnicas especiales. Como el contraste de fases, el campo oscuro, la
fluorescencia, etc.
II. Materiales:
Del Laboratorio:
Microscopio compuesto
Colorantes bsicos, cidos, neutros y

Gram.
Alcohol
Aceite de cedro o de inmersin
De los alumnos:
Lminas
porta objetos y laminillas
cubre objetos.
Goteros,
Aguja
palillos mondadientes
N 21
Muestra
biolgica para coloracin
Gram.
III. Actividades del Alumno

1. Lea cuidadosamente la informacin que se da a continuacin, para que est en
condiciones de resolver la prctica.
2. Si bien es posible el examen microscpico de clulas y queden preservadas, esto es,
fijadas y coloreadas para un mejor estudio.
3. Un preparado ideal, deber mostrar las clulas con la misma organizacin morfolgica
y composicin qumica que cuando estaban vivas, sin embargo esto no es posible y
presentan imperfecciones, debido a las tcnicas utilizadas.
IV. Fundamento
Para la obtencin de un preparado se debe tener en cuenta las siguientes
consideraciones:
Fijar: Es dar muerte a la clula
La fijacin tiene por objeto:
a)
Evitar la autlisis, que es la destruccin de la clula por sus propias enzimas.
25
UAP
b)
Impedir la actividad y proliferacin de las bacterias.
c)
Aumentar la afinidad de las estructuras celulares a los colorantes citolgicos,

hacindolos as, ms fcilmente coloreables..
La fijacin puede efectuarse por medio de agentes fsicos como el calor, esto es
muy utilizado para fijar bacterias, comnmente se emplea la fijacin qumica,
mediante sustancias llamadas fijadores, como las protenas son las principales
molculas estructurales de las clulas, los fijadores deben actuar sobre ellas,
hacindolas insolubles..
Algunos fijadores como el Cloruro de mercurio y el cido pcrico precipitan las
protenas, mientras otros solamente causan su coagulacin como el aldehdo
frmico, tetrxido de osmio y aldehdo glutmico glutaraldehido estos ltimos
son los ms utilizados en microscopa electrnica, porque coagulan las protenas,
lo que causan modificaciones mnimas en la estructura celular.
Colorear: La coloracin es el proceso mediante el cual, un cuerpo toma color bajo
la accin de otro cuerpo o sustancia llamada colorante.
La coloracin de la estructura celular se basa en el principio de afinidad. Especificar
entre ciertos colorantes y la estructura particular de la clula.
Casi todas las organelas e inclusiones son transparentes o incoloras, lo que dificulta
su estudio microscpico; para superar esta dificultad se han ideado numerosos
procedimientos de coloracin, que hacen visible los diversos componentes celulares.
La mayora de colorantes citolgicos se comportan como bases o como cidos.
En los colorantes bsicos: el grupo qumico responsable de la coloracin es
catinico, por lo tanto lleva carga elctrica positiva, es decir que el grupo qumico o
cromforo se combina con los grupos cidos o aninicos de las molculas celulares.
En los colorantes cidos: el grupo cromforo es aninico, por lo tanto lleva carga
elctrica negativa, tiende a combinarse con los componentes celulares bsicos que
son elctricamente positivos.
La coloracin de las clulas se debe principalmente a la combinacin de los
colorantes con las protenas. La disociacin inica de las protenas depende del pH,
por ello su afinidad por un colorante cambia segn sea el pH de la solucin.
Se llama punto isoelctrico de una protena al valor del pH en el cual su disolucin
inica es mnima, esto es, que en su punto isoelctrico, la protena tiene el mnimo
de afinidad por los colorantes. En un pH superior al punto isoelctrico, los grupos
26
UAP
COOH de la protena ionizan y esta presta basoflia, en un pH inferior al punto

isoelctrico, predomina la disociacin de los grupos NH2 de la protena y esta se
comporta como acidfila.
Coloraciones Bacterianas: En general las bacterias y otros microorganismos son
transparentes lo que dificulta su estudio cuando los exmenes se realizan en fresco.
Por tal razn, cuando se quiere conocer los detalles morfolgicos, es necesario
recurrir a tinciones.
Colorante: es aquella sustancia que tiene la propiedad de comunicar color a otros
cuerpos de cualquier naturaleza. Para que una sustancia sea colorante debe estar
compuesta por:
Molcula incolora + Cromforo + Auxocromo = Colorante
Cromgeno
Cromgeno: Son las molculas que poseen potencialidad de coloracin; esta
potencialidad est conferida por un radical llamado cromfero.
Cromfero: Son grupos de tomos no saturados, susceptibles de dar coloracin a las
molculas de las cuales forman parte: la fuerza de los cromferos vara con la
naturaleza de sus tomos y de su estructura.
Algunos de estos grupos dan reaccin bsica. Ejm:
Grupo Azo: -N = N- : Grupo indemnico N=
Otros dan reaccin cida. Ej:
Grupo Nitro
: -NO2
Auxocromo: son grupos no saturados debido a esta instauracin influyen en le color.

Pueden ser:
a)
Simples: Cuando cada uno encierra un tomo no saturado.

Ejm: -OH
b)
SO3H; NH2
Compuestos: Cuando cada uno encierra dos tomos no saturados.

Ejm: Grupo hidroxilaminados NHOH
Grupo hidroxinicos NHNH2
Grupo thiohidroxilaminado SNH2
Los colorantes de mayor aplicacin son los derivados de alquitrn de hulla (anilinas)
ej: Cristal violeta, violeta de genciana, fucsina bsica, safranina, azul de metileno y
verde de malaquita. Actan mejor mediante la adicin de mordientes, porque aumenta
la permeabilidad de la pared celular y la membrana citoplasmtica. En general las
27
UAP
bacterias tienen afinidad por los colorantes derivados de la anilina o especialmente por
aquellos de carcter bsico estos colorantes llevan en su parte cromfera carga electropositiva, la que tendra una fuerte afinidad por los grupos electro-negativos que
normalmente presentan las bacterias en su protoplasma, entre los cuales se encuentran
los cidos nucleicos y derivados.
Colorantes:
Pueden ser:
A)
NATURALES: Carmn, hematoxilina, tornasol.
B)
ARTIFICIALES: estos a su vez pueden ser:

a) Bsicos: como la timidina, violeta de genciana, fucsina bsica.
b) cidos: cida pcrica, fucsina cida, eosina.
c) Neutros: eosinato azul de metileno.
d) Indiferentes: Sudn III.
Soluciones empleados en coloraciones comunes

a)
Azul de metileno de Leffler:

Azul de metileno..0.31 gr
Alcohol etlico..30 gr
Solucin de KOH al 0.01%.......................100 ml
b)
Violeta de genciana fenicada

Violeta de genciana1 gr
cido fnico cristalizado.....2 gr
Alcohol etlico.10 ml
Agua destilada100 ml
c)
Violeta de genciana de Hucker

(Cristal violeta oxalato de amonio)
Cristal violeta..2 gr
Oxalato de amonio0.8 gr
Agua destilada...80 ml
d)
Fucsina fenicada de Ziehl

Fucsina bsica..0.3 gr
cido fnico..5 gr
Alcohol etlico10 ml
28
UAP
Agua destilada 100 ml.100 ml

e)
Solucin Yodo-yodurada (lugol dbil)

Yodo..1gr
Yoduro de potasio..2 gr
Agua destilada.300 ml
f)
Solucin Yodo-yodurada (lugol fuerte)

Yodo..1gr
Yoduro de potasio..2 gr
Agua destilada.200 ml
g)
Solucin de safranina
Safranina O (sol. al 2.5% en alcohol etlico).10 ml
Agua destilada100 ml
h)
Alcohol ter (licor de Hoffman)

Mezcla a partes iguales de alcohol de 95 con ter.
i)
Alcohol acetona
Alcohol 95..80 ml
Acetona20 ml
j)
Alcohol clorhdrico
cido clorhdrico3 ml
Tcnicas de Coloracin
Pasos generales de una coloracin
a) Extensin en lmina porta objeto con aza bacteriolgica (micrn) u otro instrumento.
El aza debe ser esterilizada al rojo en el mechero, antes y despus del empleo.
b) Fijacin su objeto es adherir firmemente la preparacin sobre la lmina. Se emplea
para este fin el calor suave o el alcohol ter; este ltimo es indispensable cuando se
trata de muestras serosas.
c) Tincin con el colorante o con el grupo de colorantes elegidos.
d) Lavado a chorro moderado (que el lquido no saque la muestra a analizar).
e) Secado puede utilizarse el calor suave o el aire.
f)
Observacin
Nota: Nunca observe una lmina coloreada, antes de que seque, sobre todo cuando va
a utilizar lente de inmersin.
29
UAP
A. Coloracin Simple
Es aquella que emplea un solo colorante que puede ser cido o bsico. Ejm: la coloracin
con el azul de metileno, con el Ziehl u otros colorantes.
Procedimiento
e) Extensin de un frotis (sustancia examen mucosa bucal).
f) Fijacin (alcohol, calor, otros fijadores)
g) Coloracin de 01 a 15 minutos (con colorante cido o bsico)
h) Lavado en agua de cao.
i) Secado al medio ambiente o calor moderado.
j) Observacin con el objetivo de mayor aumento o de inmersin
B. Coloracin Neutra
Es aquella en la que se emplea un solo colorante, que en su constitucin entra una parte
cida y otra bsica.
Procedimiento
a) Extensin o frotis (sustancia examen sangre).
b) Coloracin con un colorante neutro (wright).
c) Agregar doble cantidad de agua destilada.
d) Dejar en reposo durante 05 minutos aproximadamente.
e) Lavar con agua de cao.
f) Secado al medio ambiente o calor moderado.
g) Observacin con el objetivo de mayor aumento o de inmersin.
C. Coloraciones compuestas:
Aquellas que se emplean ms de 1 colorante. La ms comn es de Gram, que fue creada
por Christian Gram estudiante dans entre 1884 y 1886.
Tincin Diferencial de Gram
La tcnica de coloracin de Gram es de gran utilidad en Bacteriologa, ya que permite
diferenciar las bacterias en Gram Positivas y Gram Negativas. Casi la mitad de las
bacterias, son Gram positivas y el resto Gram negativas.
El mtodo fue descubierto por Christian Gram (Dans), en 1884, quien observ que en
cortes histolgicos que contenan bacterias coloreadas con violeta de genciana y tratadas
con solucin acuosa de yodo, este colorante podra ser removido del corte histolgico con
el empleo de alcohol, pero no de las bacterias.
30
UAP
Posteriormente descubri que no todas las bacterias retenan al violeta de genciana sino
que algunas eran decoloradas por accin del alcohol. A las primeras las llam Gram
positivas y a las segundas Gram negativas. Estas que quedan incoloras son teidas luego
mediante el empleo de un colorante de contraste como la safranina, para hacer posible su
observacin. Existen muchas modificaciones de esta coloracin, pero fundamentalmente
es lo mismo.
Material y reactivos
Material
Reactivos: Set de Gram
Gradilla.
Cristal violeta (colorante inicial).
Mechero de alcohol,
Lugol (mordiente).
Papel absorbente,
Alcohol decolorante: alcohol de 95% (decoloracin).
Fosforo,
Safranina (colorante contraste).
Hisopos,
Aceite de inmersin
Asa bacteriolgica.
Lpiz para vidrio.
Portaobjetos - lminas
Muestras biolgicas: hisopado nasal, bucal o secrecin contaminada
Tcnica
1. Previa la fijacin de la muestra, preparar 3 extensiones (esparcir con el aza
bacteriolgica delimitando el rea) en la forma ya indicada.
2. Cubrir la extensin con cristal violeta y dejar actuar durante 01 minuto.
3. Lavar con agua corriente, cuidando que no se arrastre la preparacin y sacudir para
eliminar el exceso de agua.
4. Cubrir la extensin con lugol y dejar actuar por dos a 03 minutos.
5. Lavar con agua corriente.
6. Decolorar con alcohol al 95 96% o alcohol acetona, aproximadamente 10 segundos
hasta observar el alcohol transparente.
8. Contrastar con safranina, para esto cubrir la extensin con safranina y dejar actuar por
10 a 30 segundos.
10. Secar la preparacin al aire o colocndola entre papel absorbente.
31
UAP
11. Colocar una gota de aceite de inmersin sobre la preparacin y observar al

microscopio con objetivo de inmersin.
Interpretacin:
Las bacterias Gram positivas retienen el cristal violeta y se teirn en azul morado.
Las Gram negativas se tien en rojo o rosa - fucsia.
Los grmenes Gram negativos, son los que han cedido (perdido) al color violeta por
accin del alcohol acetona y por haber quedado sin coloracin, han estado aptos para
tomar el segundo colorante que es la safranina (color rojo rosa - fucsia).
La accin del lugol en esta coloracin, es conseguir una mayor fijacin del violeta por
parte de los grmenes gran positivos, por unin del colorante con el yodo del lugol.
ESQUEMATICE LO OBSERVADO EN PRCTICA: PROCEDIMIENTO Y

RESULTADOS
32
UAP
OBSERVACIONES
Material biolgico:.
Observacin:..
Objetivo:..
Aumento:.
Material biolgico:.
Observacin:..
Objetivo:..
Aumento:.
CUESTIONARIO
1. Cul es comportamiento ms usual de los cocos y cul es el de los bacilos en la
coloracin de Gram?
2.
Cul es el fundamento de la tincin diferencial de Gram?

6. Cul es la funcin que desempea el lugol en esta coloracin?
7. Podra remplazarse la safranina con el azul de metileno u otro colorante, como colorante
contraste en la coloracin de Gram.
8. Escribir el nombre cientfico (gnero y especie), de 5 bacterias Gram positivas y 5 Gram
negativas.
9.
Explicar: por qu algunos microorganismos Gram positivos en un cultivo joven pueden

volverse Gram negativos cuando ste envejece?
10. Qu otras coloraciones bacterianas se utilizan en el laboratorio hable y fundamente las

que son para bacilos cido alcohol resistentes, esporas y cpsulas.
B.A.A.R
Esporas
Cpsula
BIBLIOGRAFIA UTILIZADA PARA EL DESARROLLO DE LAS PREGUNTAS
33
UAP
PRACTICA N 05
INMUNIDAD CELULAR
OBJETIVOS
Que cada alumno y alumna del grupo conozca las clulas encargadas de nuestra defensa
celular.
Presenciar la tcnica que se utiliza para la observacin de las clulas de defensa.
Adquirir destreza en la ejecucin de la coloracin de clulas hemticas.
MATERIAL
Laminas portaobjeto
Material biolgico: Sangre capilar o venosa
Colorante wrigth
Algodn
Material punzante estril
Alcohol yodado
TCNICA
1. Colocar una gota de sangre en la lmina portaobjeto, en el extremo derecho (parte interna)
y con la ayuda de otra lmina portaobjeto realizar un frtis (extendido).
2. Fijar la muestra a la lmina a temperatura ambiente (dejar secar).

3. Realizar la coloracin wright
Procedimiento
Colocar una o dos gotas del colorante
Agregar doble cantidad de agua destilada.
Dejar en reposo durante 05 minutos aproximadamente.
34
UAP
Lavar con agua de cao.

Secado al medio ambiente o calor moderado.
Observacin con el objetivo de mayor aumento o de inmersin.
FUNDAMENTO
LEUCOCITO
Los leucocitos (tambin llamados glbulos blancos) son un conjunto heterogneo de clulas
sanguneas que son los efectores celulares de la respuesta inmune, as intervienen en la
defensa del organismo contra sustancias extraas o agentes infecciosos (antgenos). Se
originan en la mdula sea y en el tejido linftico.
Los leucocitos son clulas mviles que se encuentran en la sangre transitoriamente, as,
forman la fraccin celular de los elementos figurados de la sangre. Son los representantes
hemticos de la serie blanca.
A diferencia de los eritrocitos (glbulos rojos - hematies), no contienen pigmentos, por lo que
se les califica de glbulos blancos.
Son clulas con ncleo, mitocondrias y otros orgnulos celulares. Son capaces de moverse
libremente mediante seudpodos. Su tamao oscila entre los 8 y 20 m (micrmetro). Su
tiempo de vida vara desde algunas horas, meses y hasta aos. Estas clulas pueden salir de
los vasos sanguneos a travs de un mecanismo llamado diapdesis (prolongan su contenido
citoplasmtico), esto les permite desplazarse fuera del vaso sanguneo y poder tener contacto
con los tejidos al interior del cuerpo.
35
UAP
Clasificacin
Segn la forma del ncleo se clasifican en:
Polimorfonucleares: Su ncleo suele estar lobulado (generalmente en tres segmentos):

-Neutrfilos
-Eosinfilos
-Basfilos
Monomorfonucleares: Presenta un ncleo compacto e individualizado:

-Linfocitos
-Monocitos
La observacin a travs del microscopio permite clasificarlos segn sus caractersticas

tintoriales en:
Granulocitos: presenta grnulos en su citoplasma, con ncleo redondeado y lobulado,

formados en las clulas madres de la mdula sea: eosinfilos, basfilos y neutrfilos.
Neutrfilo
Eosinfilo
Basfilo.
36
UAP
Agranulocitos: No presenta grnulos en su citoplasma: linfocitos, monocitos y

macrfagos.
Linfocito
Los leucocitos se relacionan con los mecanismos defensivos del organismo. Los
granulocitos y los monocitos destruyen a los microbios fagocitndolos mientras que los
linfocitos producen anticuerpos contra ellos.
ANLISIS DE LA SERIE BLANCA
El anlisis de la serie blanca constituye el recuento de leucocitos, la frmula
leucocitaria (Schilling) y las alteraciones cualitativas y cuantitativas en el frotis.
El nmero normal de leucocitos en el adulto oscila entre 4.0 y 0.9 x 109/l. Nmero que
no vara significativamente con la edad y el sexo, salvo en etapas muy tempranas de la vida.
FRMULA LEUCOCITARIA
Corresponde al estudio diferencial de los diversos tipos de leucocitos. Ellos corresponden:
a) Polimorfonucleares (PMN) neutrfilos, eosinfilos y basfilos;
b) Mononucleares, representados por linfocitos, monocitos y plasmocitos.
Los neutrfilos maduros circulan en forma de segmentados y baciliformes. Ocasionalmente
circula un juvenil o un mielocito.
Basfilos Eosinfilos Mielocitos Juveniles Baciliformes Segmentados Linfocitos Monocitos
0-1
2-4
0-1
1-5
50-68
21-35
4-8
El valor de porcentaje de los leucocitos es el siguiente:

Neutrfilos: 60-70 %
Linfocitos. 25- 30%
Monocitos: 5-10%
Eosinfilos; 1-4%
Basfilos: 0.5 %
En el recin nacido el porcentaje de neutrfilos oscila entre 45-85% y el de linfocitos 20-25%.
37
UAP
Posteriormente y hasta los 8 aos o ms se asiste a una inversin de la frmula, estando los
linfocitos francamente elevados y con predominio sobre los granulocitos neutrfilos (nios
hasta 5 aos: neutrfilos segmentados 30-40%; 5 aos 40-50% para ambos, nios mayores,
segmentados 50-60%, linfocitos 20-35%).
ALTERACIONES EN LA SERIE BLANCA
Alteraciones de la serie blanca y ejemplos clnicos.
Leucocitosis. Corresponde al aumento de los leucocitos por encima de 11 x109/l.
Habitualmente se debe a un aumento de los neutrfilos, pero tambin puede deberse a
eosinofilia, linfocitosis o monocitosis. Cifras mayores de 25 x 109/ se denominan
hiperleucocitosis, superior a 50 x 109/l y acompaadas de clulas inmaduras corresponden a
una reaccin leucemoide o leucemia. Leucocitosis sobre 100 x109/l generalmente son
malignas. Siempre debemos verificar si estamos frente a una leucocitosis relativa o absoluta.
Algunos ejemplos de leucocitosis fisiolgica son ejercicio intenso, crisis convulsiva,
adrenalina y trastornos emocionales.
Leucopenia. Corresponde a la disminucin de leucocitos por debajo de 4 x 109/l.
Generalmente obedece a disminucin de los granulocitos neutrfilos, que si llega a menos de
0,5 x 109/l se denomina severa.
Podemos encontrar leucopenia en enfermedad infecciosa tal como tifoidea, brucelosis, sepsis
y en cuadros bacterianos por Gram negativos, enfermedades hematolgicas tales como
anemia perniciosa, cirrosis heptica, hipertensin portal y shock anafilctico.
Basofilia y basopenia. Son cuadros raros, la basofilia se define por un recuento mayor a 0.05
x 109/l y la basopenia por menor a 0.02 x 109/l. La basofilia se relaciona con trastornos
mieloproliferativos y la basopenia puede estar asociada hipertiroidismo, sndrome de
Cushing y terapia esteroidal prolongada.
Eosinofilia. Todo aumento sobre la cifra lmite de 0.45 x109/l se considera una eosinofilia. La
antigua prctica de referirse a los niveles de eosinfilos como porcentajes ha sido modificada
por poco segura y no informativa. Siempre deben usarse valores absolutos determinando el
recuento de eosinfilos.
Un valor de eosinofilia menor a 1.5 x109/l se presenta en rinitis alrgicas, enfermedades
parasitarias, algunas enfermedades infecciosas, neoplasias y enfermedades dermatolgicas.
Eosinofilias mayores a 1.5 x 109/l son frecuentes en: reacciones a drogas, eosinofilia
pulmonar, vasculitis, enfermedades granulomatosas, etc. Los cuadros parasitarios causan
eosinofilias mayores ms que menores.
38
UAP
Las infecciones bacterianas y virales rara vez causan eosinofilia.

Eosinopenia. Corresponde a una disminucin absoluta de eosinfilos por debajo de 0.05 x
109/l y ocurre despus de situaciones de stress, sndrome de Cushing, administracin de
corticoides. Otros ejemplos son: fiebre tifoidea, quemaduras mayores, shock elctrico,
eclampsia y parto.
La aneosinofilia se observa en perodos agudos de enfermedades infecciosas, perodo ms
grave de enfermedades hematolgicos (anemia perniciosa) y perodo mximo de
intoxicaciones; uremia, diabetes.
Neutrofilia. Se refiere a una concentracin perifrica de neutrfilos superior a 7.5 x 109/l. La
desviacin a izquierda, designa un aumento de las formas neutrfilas jvenes, aumento de los
baciliformes sobre 12%. Las desviaciones a izquierda ms marcadas se ven en la fiebre
tifoidea, sepsis graves, gripe y enfermedades exantemticas por virus.
En la denominada desviacin a la derecha, aparecen neutrfilos con un nmero de segmentos
mayor que lo normal (neutrfilos hipersegmentados, polisegmentados). Se observan en las
anemias megaloblsticas y tienen el significado de alteracin madurativa de por dficit de
factores madurativos (Vitamina B12 cido flico).
Granulacin txica. Corresponde a una granulacin primaria y es de tamao muy superior al
normal. Se encuentra presente en casi todas las infecciones graves. La vacuolizacin
citoplasmtica corresponde a vacuolas fagocticas. Los cuerpos de Dohle son reas basfilas
circunscritas en el citoplasma, presentes en la escarlatina, sepsis graves, quemaduras,
trastornos del embarazo y uso de ciclofosfamida.
La granulacin txica tambin se observa en los sndromes mielodisplsicos
Neutropenia. Corresponde al descenso en la sangra perifrica de los granulocitos neutrfilos,
este descenso puede ser leve o medianas cuando estn comprendidas entre 1.5 y 3 x 109/l o
severas cuando son menores a 1.5 x109/l. La agranulocitosis son los recuentos por debajo de
0.05 x 109/l.
Linfocitosis. Es un aumento en el nmero absoluto de linfocitos circulantes mayor que 4.0 x
109/l en adultos, mayor a 9.0 x 109/l en nios menores y mayor de 7.0 x 109/l en nios
mayores.
Cuando se desarrolla una linfocitosis absoluta, el recuento linfocitario rara vez se eleva por
encima del rango normal. La excepcin ocurre con la linfocitosis y leucocitosis que ocurre
frecuentemente en la mononucleosis infecciosa y leucemias linfocticas entre otras. En
39
UAP
infecciones virales aparece una moderada linfocitosis, casi siempre relativa, con linfocitos
atpicos. Las linfocitosis malignas pueden ser relativas y absolutas.
Hay una serie de entidades que pueden cursar con linfocitos hiperbasfilos. Entre ellas debe
diferenciarse la mononucleosis infecciosa de los "sndromes mononuclesicos". Estos
sndromes habitualmente presentan menos de un 20% de linfocitos grandes hiperbasfilos.
Linfopenia. Es habitualmente relativa y por aumento de neutrfilos. La linfopenia absoluta
marcada es menor de 1.4 x 109/l en nios y menor de 1 x 109/l en los adultos y es un signo de
mal pronstico espeiclamente en las infecciones graves. En el SIDA los hallazgos
hematolgicos ms frecuentes son anemias y leucopenia en base a linfopenia absoluta.
Monocitosis. Se habla de ella cuando el recuente absoluto excede 0.8 x 109/l. Es una
alteracin frecuente, pero inespecfica. Una monocitosis absoluta superior a 1 x 109/l debe
hacer sospechar un sndrome mielodisplsico y si hay presencia de clulas atpicas de
morfologa intermedia entre mielocitos y monocitos (clulas paramieloides), una leucemia
mielomonoctica crnica.
Monocitopenia. Corresponde a un recuento absoluto menor de 0.2 x 109/l, y se observa en
infecciones agudas, leucemias agudas, terapia cortico esteroidal y citostticos.
Plasmocitosis. Normalmente no se observan plasmocitos en sangre perifrica, por lo tanto su
observacin indica generalmente malignidad. Se presentan en mieloma mltiple, leucemia de
clulas plasmticas, anemia aplstica, TBS e infecciones severas.
Reaccin leucoeritroblstica. Este trmino se utiliza para describir la presencia de clulas
inmaduras de las series mieloide y eritroide en sangre perifrica, acompaadas de plaquetas
gigantes o bizarras con o sin anemia. El grado de eritroblastos circulantes es excesivo
comparado con el grado de anemia. En la mayora de los casos, no se observa reticulocitosis.
Reacciones
leucemoides.
Constituyen
varios
sndromes
caracterizados
por
cambioshematolgicos que semejan una leucemia. Se observan leucocitosis de 20-50 x 109/l

con ocasional, moderada o mnima inmadurez celular. La afeccin de otras series celulares
orienta a una patologa maligna.
Algunas enfermedades infecciosas que pueden simular una leucemia mieloide crnica o aguda
son: neumonia, meningitis meningoccica y TBC diseminada. Leucemia linfoide puede ser
simulada por: coqueluche y mononucleosis infecciosa.
40
UAP
RESULTADOS:
Muestra biolgica:
Observacin:
Coloracin:
Objetivo:
Aumento:
Muestra biolgica:
Observacin:
Coloracin:
Objetivo:
Aumento:
Muestra biolgica:
Observacin:
Coloracin:
Objetivo:
Aumento:
Muestra biolgica:
Observacin:
Coloracin:
Objetivo:
Aumento:
Muestra biolgica:
Observacin:
Coloracin:
Objetivo:
Aumento:
41
UAP
Muestra biolgica:
Observacin:
Coloracin:
Objetivo:
Aumento:
Muestra biolgica:
Observacin:
Coloracin:
Objetivo:
Aumento:
CUESTIONARIO
1.
Cules son los mecanismos de defensa de un individuo, de 4 ejemplos en cada caso?
2.
Explique la defensa celular y como se origina?
3.
Explique que es un hemograma completo?
4.
Qu tipo de clulas se observan en un hemograma y cul es la funcin de cada uno de

ellas?
5.
Cul es la importancia mdica del hemograma y cules son los valores normales?
6.
Explique el significado de una eosinofilia, basofilia, linfopnia, trombocitopenia y en

qu casos se presenta?
7.
Explique sobre: hematocrito y hemoglobina
8.
Qu forma tienen los glbulos? Presentan ncleo porque?
BLIOGRAFA UTILIZADA PAARA EL DESARROLLO DE LAS PREGUNTAS
42
UAP
PRACTICA N 06
DETERMINACIN DE GRUPO SANGUNEO
Objetivos
Determinar los grupos sanguneos y el factor Rh por aglutinacin de los glbulos rojos al
enfrentarlos a los antisueros.
Establecer su tipo sanguneo y determinar la distribucin del tipo de sangre de los alumnos.
Interpretar dicha tcnica.
Material
Solucin anti-A
Solucin anti-B
Solucin anti-D(anti Rh)
Material biolgico: sangre capilar o venosa.
Material punzante estril.
Algodn
Alcohol yodado
Tcnica
1. Con un plumn de tinta indeleble dibuje tres crculos obre una lmina portaobjeto y debajo
de cada una de ellas, rotule respectivamente: anti-A, anti-B y anti Rh. Ponga una gota de
los antisueros respectivos dentro de cada crculo.
2. Lvese y squese bien las manos. Dese un masaje suave en la punta del dedo anular
izquierdo y desinfctelo con un algodn empapado en alcohol yodado. Haga una puncin
con una aguja N 21 o con una lanceta estril.
3. Con un agitador, coloque una gota de sangre en cada uno de los crculos, utilizando para
ello un agitador diferente para cada una de las gotas.
4. Rpidamente homogenice cada una de las gotas en los respectivos antisueros haciendo un
movimiento circular en un solo sentido. Utilice palitos mondadientes para llevar a cabo el
homogenizado.
5. Dejar reposar durante 60 segundos y observe si hay aglutinacin.
6. Realice las lecturas respectivas, teniendo en cuenta que:
Si aglutina con anti-A y no aglutina con anti-B la muestra pertenece al grupo A.
Si aglutina con anti-B y no aglutina con anti-A, la muestra pertenece al grupo B.
Si aglutina con ambos sueros la muestra pertenece al grupo AB.
Si no aglutina con ninguno la muestra es del grupo O.
43
UAP
Si aglutina con anti-D (anti-Rh) es del factor Rh+.

Si no aglutina con anti-D (anti-Rh) es del factor Rh7. Esquematice los tipos de aglutinacin observados y en la TABLA 1 anote su tipo de sangre
en el espacio adecuado, tambin anote el nmero de alumnos de la clase de cada tipo.
Nota: se recomienda trabajar con rapidez y seguridad para evitar coagulacin de la
sangre antes de la reaccin con el suero especfico. Para efectuar la lectura
incline ligeramente la lmina. Observar al microscopio si la reaccin no es
ntida. Es importante no interpretar hilos de fibrina como aglutinacin.
Fundamento
Grupo sanguneo, es el sistema de clasificacin de la sangre humana basado en los
componentes antignicos de los glbulos rojos. La tipificacin de grupo es un requisito
necesario para las transfusiones de sangre.
A principios del siglo XX, los mdicos descubrieron que el fracaso frecuente de las
transfusiones era debido a la incompatibilidad entre la sangre del donante y la del receptor. En
1901, el patlogo austriaco Karl Landsteiner estableci la clasificacin de los grupos
sanguneos y descubri que se transmitan segn el modelo de herencia mendeliano (en
funcin de las leyes de Mendel).
El grupo sanguneo ABO
El ms importante de los diversos sistemas de clasificacin de la sangre es el del grupo
sanguneo ABO. Los cuatro tipos sanguneos que se contemplan en esta clasificacin son el
A, el B, el AB y el O.
Las clulas sanguneas del grupo A tienen el antgeno A en su superficie. Adems, la sangre
de este grupo contiene anticuerpos contra el antgeno B presente en las clulas rojas de la
sangre del grupo B.
La sangre de este ltimo grupo (grupo B) tiene la composicin inversa al grupo A.
En el suero del grupo AB no existe ninguno de los dos anticuerpos previos, pero los glbulos
rojos contienen los antgenos A y B.
El grupo O carece de estos antgenos en los eritrocitos, pero este suero es capaz de producir
anticuerpos contra los hemates que los contengan.
Si se transfunde sangre del grupo A a una persona del grupo B, los anticuerpos anti-A del
receptor destruirn los glbulos rojos de la sangre transfundida. Como los eritrocitos de la
sangre del grupo O no contienen ningn antgeno en su superficie, la sangre de este grupo
puede ser empleada con xito en cualquier receptor.
44
UAP
Las personas del grupo AB no producen anticuerpos, y pueden por tanto recibir transfusiones
de cualquiera de los cuatro grupos. As, los grupos O y AB se denominan donante universal y
receptor universal respectivamente.
Factor sanguneo Rh
Este sistema se basa en la existencia o no de diversos aglutingenos, los factores Rh, en los
glbulos rojos.
Es otro grupo sanguneo de transmisin hereditaria que tiene gran importancia en obstetricia y
que tambin hay que tener muy en cuenta en las transfusiones sanguneas.
Al igual que en el sistema ABO, tambin est implicado un antgeno que se localiza en la
superficie de los eritrocitos. El grupo Rh+ posee este antgeno en su superficie; el Rh- no lo
posee y es capaz de generar anticuerpos frente a l, por tanto, se puede desencadenar una
respuesta inmune cuando se hace una transfusin de sangre de un individuo Rh+ a uno Rh-,
aunque no al contrario.
Tambin puede aparecer respuesta inmune entre la madre y el feto: la madre Rh- se inmuniza
por va placentaria contra los antgenos del hijo Rh+.
La inmunizacin resulta del paso de los glbulos rojos fetales a la madre, y, al igual que en el
caso de las transfusiones, no ocurre cuando la madre es Rh+, de ah su importancia en
obstetricia.
La inmunidad en la madre se mantiene durante toda la vida. En posteriores embarazos, si el
feto es Rh+, se genera la denominada incompatibilidad feto - materna, de forma que los
anticuerpos maternos atraviesan la placenta y se fijan a los antgenos que portan los glbulos
rojos fetales. El resultado es una enfermedad denominada eritroblastosis fetal o anemia
hemoltica del recin nacido.
El "centro" de esta prctica se encuentra en los glbulos rojos. Los glbulos rojos o hemates
son clulas sanguneas, por lo tanto todos los tenemos. Sin embargo, en la membrana de los
glbulos rojos pueden existir unas protenas especiales: son las glucoprotenas A y B. As, un
glbulo rojo puede tener protena A, protena B, tener ambas o no tener ninguna. De manera
que un individuo tendr grupo sanguneo A si sus glbulos rojos tienen la glucoprotena A en
su membrana, siguiendo el mismo criterio para el resto de los grupos (si no existe protena,
entonces ser de grupo sanguneo O).
Estas protenas corresponderan a lo que denominan antgenos. Ahora bien, en el plasma
sanguneo tenemos anticuerpos. Evidentemente, un individuo del grupo A no podr tener
anticuerpos anti-A, pues esto no sera viable (la sangre coagulara). As:
45
UAP
Los individuos A tendrn anticuerpos anti-B
Los individuos B tendrn anticuerpos anti-A
Los individuos AB no tendrn anticuerpos de este tipo
Los individuos O tienen los dos tipos de anticuerpos.
Grupo sanguneo
AB
Glbulos rojos
En la membrana
En el plasma
Antgeno A
Anti-B
Antgeno B
Antgenos A y B
Anti-A
No anticuerpos
No antgenos
Anti-A y
Anti-B
Grupos sanguneos
ANTICUERPOS
A
Anti-B
Tipo de anticuerpos
B
Anti-A
AB
Ninguno
O
Anti-A y anti-B
COMPATIBILIDAD ENTRE TRANSFUSIONES

Donante
Receptor
A
S
No
No
S
A
B
AB
O2
B
No
S
No
S
AB1
S
S
S
S
O
No
No
No
S
S: compatible
No: incompatible
1 Receptor universal
2 Donante universal
46
UAP
El factor Rh es otra protena que existe en los glbulos rojos de algunas personas. Su nombre
viene del mono en el que fue descubierta, el Macacco rhesus. El factor Rh positivo es un
factor hereditario dominante. Este asunto tiene especial importancia en donaciones de sangre.
Un individuo A tiene en su plasma anticuerpos anti-B, as que no podr recibir sangre de un
individuo B, pues estos anticuerpos provocaran la coagulacin de la sangre del donante en los
vasos sanguneos de la persona receptora.
En la siguiente tabla vemos las compatibilidades a la hora de donar y recibir sangre. Como
vemos, el grupo AB puede recibir de cualquier otro grupo y de s mismo, as que se llama
"receptor universal". El grupo O, sin embargo, puede donar a cualquier grupo, as que se
conoce como "donante universal"
RECEPTOR
grupo A grupo B grupo AB grupo O
D
O
N
grupo A
SI
NO
SI
NO
grupo B
NO
SI
SI
NO
grupo AB
NO
NO
SI
NO
grupo O
SI
SI
SI
SI
A
N
T
E

RESULTADOS
47
UAP
TABLA 1 GRUPO SANGUNEO

TIPO DE
ANTGENO
ANTICUERPO
Su tipo
Distribucin
SANGRE
(Ag)
(Ac)
(grupo)
en la clase
AB
AB
----
----
ab
Porcentaje
CUESTIONARIO
1. Porque al plasma sanguneo no se le designa un tipo?
2. Quin y cmo se determin el sistema de grupo sanguneo. Adems indique como se
llama este sistema utilizado?
3. Explique porque al grupo O se le considera donador universal?
4. Explique porque al grupo AB se le considera receptor universal?
5. Qu contienen cada uno de los de los reactivos del set de grupo sanguneo?
6. Qu tipos de reacciones inmunolgicas conoce Ud.?
7. Explique qu reaccin inmunolgica se dio al determinar el grupo sanguneo?
BLIOGRAFA UTILIZADA PARA EL DESARROLLO DE LAS PREGUNTAS
48
UAP
PRACTICA N 07
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
I. Objetivos:
Aprender cmo se preparan los medios de cultivo en laboratorio.
Reconocer los nutrientes necesarios para el crecimiento bacteriano.
Aplicar algunas (autoclavado) tcnicas de esterilizacin para los medios de cultivo.
II. Materiales:
Del Laboratorio:
De los alumnos:
Medios de cultivo (agar nutritivo y
Agua destilada
MacConkey)
Pabilo,
Matraz, pipeta, probeta, vaso de
Pomitos
precipitacin, gradillas,
Algodn,
Balanza de triple brazo o elctrica
Alcohol
Cinta para medir el pH.
Ron
Cocina de una hornilla elctrica
Lpiz
papel kraf
de penicilina limpios
jabn, detergente, leja.
yodado
para los mecheros
Fundamento:
MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el desarrollo de
microrganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar
sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microrganismos van a crecer y
multiplicarse para dar colonias.
Los microrganismos son los seres ms abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones
extremas de pH, temperatura y tensin de oxgeno, colonizando una amplia diversidad de
nichos ecolgicos. Entre los requerimientos ms importantes para su desarrollo estn el
carbono, el oxgeno, nitrgeno, dixido de carbono e hidrgeno. Muchas bacterias sin
embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento especficos en forma de suero,
sangre y extracto de levadura entre otros.
CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO (1)
Segn su origen:
a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o
vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se
conoce exactamente.
49
UAP
b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica definida cuali y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c) SEMISINTTICOS son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento
bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.
SEGN SU CONSISTENCIA
a) Lquidos: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solucin acuosa.
b) Slidos: se preparan aadiendo un agar a un medio lquido (caldo) a razn de 15g/litro. el
agar es una sustancia inerte polisacrido (hidrato de carbono) que se extrae de las algas.
como esta sustancia no es digerida por las bacterias no constituye ningn elemento
nutritivo. este conjunto convenientemente esterilizado puede ser vertido en placas de petri
o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias, "procesos
que antes no eran posibles en medio lquido".
c) Semislidos: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar la
motilidad de las especies en estudio.
Actualmente se encuentran disponibles comercialmente con el agregado de agar.
SEGN SU COMPOSICIN: A causa de los requerimientos qumicos del mundo
microbiano, a veces es necesario agregar o eliminar componentes qumicos del medio.
a) Comunes o universales: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los
microorganismos poco existentes. es el medio ms frecuentemente utilizado para mantener
colonias microbianas. por ejemplo: agar comn o caldo comn.
b) Enriquecidos: estn compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se
le puede agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos, por ejemplo:
sangre, suero, lquido asctico, etc. se utiliza para microorganismos que tienen grandes
exigencias nutricionales.
c) Selectivos: son slidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones
fsicas del medio o aadiendo o suprimiendo componentes qumicos especficos con el fin
de inhibir el crecimiento de especies qumicas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de
medio slo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibiendo el de
otros. Se utiliza para seleccionar y aislar microorganismos a partir de poblaciones mixtas.
Por ejemplo Agar salado-manitol o Chapman (permite el crecimiento de ciertos
estafilococos).
Entre los factores selectivos que alteran las condiciones del medio tenemos:
50
UAP
Cambio de pH: por ejemplo agregando cido actico para favorecer el crecimiento de
Lactobacillus (pH final: 5,4 que es hostil par la mayora de las especies que crecen
entre 6,5 y 7,2). Los hongos crecen entre pH 4 y 6 y S. faecalis a pH 9,6.
Cambio de temperatura: la mayora de las bacterias crece ptimamente entre 20 C y
40 C. Los cultivos tpicos de S. faecalis requieren 60 C de temperatura y los de
Listeria son capaces de desarrollarse y crecer a 4 C.
Alteraciones osmticas: se acrecientan las propiedades osmticas un medio con el
agregado de cloruro de sodio. Estos medios intensifican la seleccin de bacterias
halfilas como Staphylococcus spp. (7,5%).
Ajuste en la tensin de oxgeno: es importante en la seleccin de aerobios y
anaerobios.
Ajuste en la tensin de anhdrido carbnico: muchos patgenos importantes pueden
ser cultivados a menos que se eleve la tensin ms all de la atmosfrica.
Entre los factores que inhiben el crecimiento de bacterias indeseables tenemos:
Antispticos: sustancias antibacterianas inespecficas que pueden actuar como
inhibidores. Por ejemplo: el medio de cultivo comercial S - S (Salmonella - Shigella)
que contiene verde brillante (inhibe
Las bacterias grampositivas) y sales biliares (que inhiben un gran nmero de
gramnegativas menos enterobacterias). Otro ejemplo es el medio de Mc Conkey que
contiene cristal violeta (inhibe las grampositivas pero no las enterobacterias)
Antibiticos: sustancias antibacterianas especficas que impiden el crecimiento de
aquellos microorganismos que no nos interesa que crezcan en ese medio. Un ejemplo
es el medio de Thayer - Martin con VCN (vancomicina, colistina y nistatina) que se
utiliza para el aislamiento de gonococos. La penicilina en una concentracin de 5,50
unidades/ ml inhibe la mayora de las grampositivas. Otro ejemplo es el medio de
Sabourand - cloranfenicol para el aislamiento de Cndida albicans.
d) Diferenciales: son medios de cultivos que nos permiten distinguir entre varios gneros y
especies de microorganismos. Por ejemplo si al medio se le ha aadido un carbohidrato y
un indicador y la bacteria que se cultiva es capaz de fermentar dicho carbohidrato, se
produce una acidificacin del medio con el consiguiente viraje de color del indicador por el
cambio de pH.
El citrato de Simmons es un medio cuya nica fuente de carbono es el citrato sdico,
entonces en l solo crecern las bacterias capaces de desarrollarse utilizando como nica
51
UAP
fuente de carbono ese componente. A menudo la separacin se basa en la diferencia de

color de las colonias aisladas, como en el agar con azul de metileno - eosina que permite
diferenciar E. coli (colonias oscuras y de brillo metlico) de Enterobacter aerogenes
(colonias rosadas de centro azul sin brillo). Estos dos microorganismos en agar nutritivo
producen colonias de color gris blancuzco.
Suelen ser a la vez selectivos, por lo tanto solo crecern determinadas bacterias (pueden ser
dos o ms tipos) que al actuar sobre alguno de los componentes especficos del medio,
demuestran algunas de sus propiedades o caractersticas y nos permite diferenciar entre
ambos tipos.
e) De enriquecimiento: son medios lquidos que contienen un agente que inhibe las especies
no deseadas pero que favorece el crecimiento irrestricto del agente infeccioso. El medio de
Muller - Kauffman, Permite el crecimiento de Salmonella inhibiendo a su vez el de
numerosos coliformes. Esto es de gran importancia ya que en ciertas muestras, por ejemplo
fecales, el agente infeccioso (Salmonella) es frgil y puede ser superado en nmero por
agente bacterianos indgenas como E. coli; por lo tanto antes de realizar las pruebas de
laboratorio es necesario aumentar su nmero con respecto a sta en un caldo de
enriquecimiento. Ejemplo de este tipo son los caldos de tetrationato y selenito. El agua de
peptona alcalina se utiliza para Vibrio cholerae.
El enriquecimiento es una tcnica que utiliza un medio selectivo lquido para permitir el
desarrollo de un microorganismo a partir de una muestra que contiene una gran variedad de
microorganismos. As, aquellos microorganismos para los que el ambiente sea ms
favorable crecern ms que los otros.
f) De transporte: son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin multiplicacin
significativa de los microorganismos desde el momento de su extraccin hasta su posterior
estudio. Se utilizan generalmente cuando las muestras deben ser enviadas de un laboratorio
a otro. Se recomienda un lmite de dos horas desde la recoleccin de las muestras y su
estudio en el laboratorio, pero este lmite de tiempo es superado (frecuentemente cuando se
trata de muestras tomadas en un consultorio). Esta demora hace necesario el uso de medios
de transporte adecuados. Los medios de transporte ms frecuentemente utilizados son los
de Stuart, Amies y Carey - Blair.
52
UAP
CLASIFICACION MEDIOS DE CULTIVO (2):

Segn contenido:
- Sintticos o definidos: conocimiento de la composicin qumica. Los componentes que lo
integran y su cantidad son tambin conocidos.
- No sintticos: no se conoce la composicin exacta Ej. Agar cerebro corazn
Segn su estado:
- lquidos (caldo de cultivo), usos: obtencin de masa bacteriana, etc.
- semislidos: agar o gelatina (<1%) usos: motilidad, transporte
- slidos (15-2%) usos: aislamiento, test sensibilidad o antibitico
Segn su utilizacin
- Bsicos: crecimiento de la mayora de las bacterias cultivables
- Enriquecidos bsicos suplementos o sustancias nutritivas Ej. Sangre suero
- Selectivos: crecimiento de alunas especies bacterianas e inhibe otras
- Diferenciales: diferencian las caractersticas bioqumicas de una especie bacteriana
identificada
MEDIOS DE CULTIVO PARA TRANSPORTE: TIPOS DE TRANSPORTE:
Medios slidos o lquidos que mantiene la viabilidad temporal de los microrganismos
presentes en una muestra clnica sin inhibir, ni favorecer el crecimiento de algunas especies.
- No contiene elementos nutritivos o solo indispensables (pre-reductores)
- Condiciones fsico-qumicas oprimas solo para la supervivencia
- Finalidad es la preservacin de la proporcin de microrganismo de la muestra (lugar de
infeccin)
- Para transporte de una muestra clnica al laboratorio
En las muestras clnicas microrganismos hay otras especies bacterianas adems del patgeno
responsable de la infeccin, la mayora pertenecen a la microbiota.
El microbilogo debe reconocer cul de esas especies es la causante de la infeccin mediante
el uso de diversas tcnicas.
CULTIVO DE MICROORGANISMOS:
- Inoculo microbiano: nmero indeterminado de microorganismos introducido en medio de
cultivo.
- Cultivo puro: obtencin de una poblacin de microorganismos procedentes de una sola
clula viable.
- Contiene solo una especio o una cepa
53
UAP
- En medios slidos obtenemos colonias aisladas que proviene de una unidad formadora de
colonias (UFC) o clulas viables.
- Colonia = clon
- TCNICAS PARA LA OBTENCIN DE UN CULTIVO PURO:
- Aislamiento en placa:
- Por estra
- Por dilucin
CONDICIONES DE CULTIVO:
- TEMPERATURA:
- Generalmente entre 36C a 37|C, se utiliza incubadora o estufa de cultivo
- TIEMPO:
- Generalmente entre 18 a 24 horas
- ATMSFERA:
- Segn el tipo de respiracin de microorganismos
- Cultivos en anaerobiosis o aerobiosis (con o sin O2)
- PRESIN OSMTICA:
- Los medios de cultivo contienen NACL
HUMEDAD:
- Favorece el crecimiento en medios slidos
- pH:
- se ajusta el pH del medio de cultivo, prximo a 7.
CULTIVO ANAEROBIOS, MEDIOS REDUCIDOS:
- Medios reducidos
- Obtenidos por la inclusin de elementos que se combinan con el O2 (triglicolato - oxyrase)
- Obtenidos por catamiento que elimina el gas atmosfrico de la masa liquida
Se pueden incluir un indicador qumico de ausencia de O2.
JARRA DE ANEROBIOSIS
- Cierre hermtico
- Ambiente sin O2 conseguido mediante compuestos reactivos sin el O2.
CMARA DE ANAEROBIOS
- Cabina cerrada que permite la manipulacin de los cultivos

- Atmsfera formada por una mezcla de gases N2 (85%), CO2(5%), H2(10%)
54
UAP
- Utilizada para la manipulacin y cultivo de anaerobios a una temperatura ptima para

su crecimiento.
CAPNOFILOS:
- Capnofilos; necesitan CO2 (5%) para crecer en los medios de cultivo
- Generacin de atmsfera de CO2 mediante:
- Una vela que elimine O2 y genere CO2
- Kit que incluye un generador de O2.
III. Actividades del Alumno
2. Trabaje en grupo, siempre teniendo en cuenta la limpieza, el orden y compaerismo.
3. Se prepararn dos tipos de medios de cultivo: agar Nutritivo donde van a crecer
diferentes bacterias y agar McConkey que es para bacterias gramnegativas.
4. Se tendr en cuenta los mililitros que se deseen preparar para cada medio.
Aproximadamente para casa placa Petri se necesitan 15 ml de medio. Por los tanto el
alumno deber tener en cuenta cuantas placas Petri va ha trabajar; si trabaja 10 placas (9
cm. de dimetro) entonces deber preparar 150 ml del medio de cultivo.
5. Despus de saber cuantos ml va a preparar se procede a realizar una regla de tres simple
para que sepa cuantos gramos de medio de cultivo va a utilizar. En la parte externa
(indicaciones) viene la cantidad de gramos del medio de cultivo para un litro (1000 ml).
Ejemplo:
Para agar Nutritivo. Si se suspenden (disuelven) 20 gr. de medio de cultivo en 1000
ml. en agua destilada Cuntos gramos del medio de cultivo se necesitarn para preparar
150 ml. del mismo medio?
20gr._______________________ 1000 ml
X gr.________________________150 ml
X = 20 gr. (150 ml.)
X = 3 gr. para 150 ml
1000 ml
Por lo tanto el alumno deber emplear 3 gr. de agar Nutritivo y lo suspender en 150
ml. de agua destilada.
i.
AGAR NUTRITIVO. Bacto Nutrient Agar (MerK)

Fundamento:
55
UAP
Es un medio para fines generales utilizado en el examen de agua y productos

lcteos; tambin para el cultivo de la mayora de microrganismos, as tambin para
el transporte de cepas, para el cultivo preliminar de muestras sometidas a
exmenes bacteriolgicos; y para aislar microrganismos en cultivos puros.
Frmula:
Composicin por litro.
Extracto de carne
3g
Peptona
5g
Agar
15 g
pH final: 6.8 0.2 a 25 C.

Mtodo de preparacin:
1) Suspender 20 g en 1 litro de agua destilada o desmineralizada.
2) Calentar a ebullicin para disolver completamente.
3) Servir en los viales (frasquitos de penicilina) el medio de cultivo.
Colocarlos en los tarros forrados.
4) Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 15 libras de presin (121C).
5) Distribuir en la forma deseada.
6) Los viales ponerlos en forma inclinada (pico de flauta) para que se
solidifique (tener mayor rea de sembrado)
6) La superficie del medio debe estar seca para sembrar.
Interpretacin (Rpta. tpica despus de 18 24 hrs. a 35C)
ii.
AGAR MACCONKEY (BBLO)

Fundamento:
Generalmente es usado para el aislamiento selectivo de bacilos gramnegativos
procedentes de fuentes clnicas y no clnicas: tambin para el examen
microbiolgico de embutidos; para siembra directa de muestra de agua para
contaje de coniformes y para aislamiento de bacterias patgenas en queso y otros
productos lcteos.
Las colonias fermentadoras de lactosa producen una cada localizada de pH, lo
cual seguido por la absorcin del rojo neutro, imparte un color rojo a ala colonia.
Las sales biliares y el cristal violeta inhiben a las grampositivas. La lactosa y el
indicador rojo neutro presentes, permiten diferenciar a las bacterias fermentadoras
de lactosa de las no fermentadoras de lactosa.
56
UAP
Frmula:
Composicin por litro
Peptona proteosa
3g
Cristal violeta
0.001 g
Peptona
17 g
Rojo neutro
0.03 ml
Lactosa
10 g
Agar
13.5 ml
Sales biliares
1.5 ml
Cloruro de sodio
7.1 ml
pH final: 7,1 0.2 a 25 C

Rehidratar 50 g/lt.
Mtodo de preparacin
1. Suspender 50 g en 1 litro de agua destilada o desmineralizada.
2. Calentar a ebullicin para disolver completamente.
3. Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 15 libras de presin (121C).
4. Distribuir en la forma deseada.
5. La superficie del medio debe estar seca para sembrar
Interpretacin: (Despus de 18 24 hrs. a 35C)
Las bacterias grampositivas son inhibidas a excepcin de Enterococos que
crecen en pequeas colonias translucidas y ligeramente rosadas.
Las gramnegativos lactosa positiva dan coloracin rojiza (degradan la lactosa y
producen cidos).
Organismo
Crecimiento
Color de la colonia
Enterobacter aerogenes
de bueno a excelente
de rosa a rojo
Escherichia coli
de rosa a rojo con

pp biliar
Proteus vulgaris
incolora
Salmonella enteritidis
incolora
Shigella dysenteriae
de aceptable a bueno
incolora
Staphylococcus aureus
inhibido
--------
57
UAP

RESULTADOS
58
UAP
CUESTIONARIO
1. Explique para que se utilizan los medios de cultivo en el laboratorio?
2. Cul es el fundamento del agar MacConkey, que accin tiene los componentes de este
medio explique cada uno de ellos?
3. Explique porque se dicen que algunas bacterias son fermentadoras y degradan la lactosa
y quienes son estas bacterias.
4. Qu otro tipo de nutricin bacteriana hay?
5.
Explicar: por qu se tiene que medir el pH del medio de cultivo y por qu no se puede
emplear agua de cao?
6. Explique y fundamente que tcnica de esterilizacin empleara Ud. para esterilizar el

medio de cultivo
7. Cite Ud. 10 medios de cultivos lquidos y 10 cultivos slidos de uso ms frecuente en
microbiologa especialmente los utilizados en los anlisis clnicos?
8.
Cite algunos medios de cultivo los cuales no necesitan esterilizacin y explique porque?
9.
A que se llaman microorganismos capnfilos de 5 ejemplos de estos
10. Cules son las rutas metablicas alternativas que usan las bacterias cuando las
condiciones del su entorno son adversas
59
UAP
PRACTICA N 08
AISLAMIENTO, SIEMBRA Y TRANSPLANTE DE BACTERIAS
I. Objetivos:
Conozca la forma como se puede sembrar una bacteria en un medio artificial.
Aplicar y fundamentar el crecimiento bacteriano en medios artificiales.
Identificar bacterias grampositivas y gramnegativas que crecen en los medios de cultivo
II. Materiales:
Asa bacteriolgica
Mechero de alcohol o cocinilla elctrica
Placas Petri con medios de cultivo McC y agar nutritivo
Viales con McC y agar nutritivo
Alcohol, algodn
Muestras biolgicas (grampositivas y negativas).
Estufa para la incubacin de los medios ya sembrados
III.
Actividades del Alumno

2. Cada uno de los asistentes a la prctica deber realizar las respectivas siembras en los
medios de cultivo.
FUNDAMENTO
Un mtodo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio lquido o en
la superficie de un medio slido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos
nutrientes que van, desde azcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el
extracto de caldo de carne.
Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos
tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las clulas que se
multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria
individual genera por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta por decenas de
millones de clulas similares a la original.
Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer como cultivo
puro de un solo tipo de bacteria.
60
UAP
Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que es imposible

diferenciarlas slo con el uso del microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de
bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo
especiales. As, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la
mayora de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si est
presente. Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azcares especiales que
slo pueden utilizar algunas bacterias.
En algunos medios se aaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los
nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolitos cidos. Si las bacterias son
capaces de producir fermentacin, generan gases que pueden ser apreciados cuando el
cultivo se realiza en un tubo cerrado.
Con otros medios de cultivo se identifica si las bacterias producen determinadas enzimas
que digieren los nutrientes: as, algunas bacterias con enzimas hemolticas (capaces de
romper los glbulos rojos) producen hemlisis y cambios apreciables macroscpicamente
en las placas de agar-sangre.
Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de
microbiologa de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las
enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles esas bacterias.
SIEMBRA
Procedimiento que consiste en acondicionar el microorganismo a un medio de cultivo
frtil, de acuerdo a sus exigencias vitales, para que en condiciones ptimas de temperatura
y tiempo de incubacin, pueda desarrollar y multiplicarse IN VITRO. Se siembra con dos
finalidades:
a.
Para hacer un aislamiento y
b.
Para hacer un transplante.
PROCEDIMIENTO
Permite la separacin de los microrganismos al estado de pureza a partir de una muestra
problema. Se requiere un medio slido con gran superficie para que los microrganismos al ser
diseminados sobre el medio, generen su progenie (cepa) por formacin de colonias separadas.
Si se aslan especies distintas, cada colonia tendr caracteres especiales. La morfologa
bacteriana ser tambin distintiva.
61
UAP
TRANSPLANTE
Significa la separacin primaria de la cepa a un medio de cultivo apropiado en tubo, que
puede ser lquido o slido. Se conserva la cepa para y por subsiguientes transplantes en
medios especiales, se logra conocer las propiedades culturales y bioqumicas y como
resultado, la identificacin especfica.
1. AISLAMIENTO DE BACTERIAS AEROBIAS EN PLACAS DE AGAR
A.-AISLAMIENTO POR ESTRAS
La placa de estras se utiliza fundamentalmente par aislar cultivos puros de
muestra que contienen flora mixta. En este aislamiento podemos estudiar la
morfologa y coloracin de las colonias, susceptibilidad a los antibiticos, etc.;
conocimiento de gran valor para el diagnostico y la identificacin.
Las superficies del agar deben ser suaves y hmedas pero sin exceso de
humedad (podra haber superposiciones de colonias).
Todo el proceso se debe realizar junto al mechero para evitar contaminacin.
Procedimiento:
a) Con la mano derecha flamear el asa de siembra, al rojo, mantenindola
verticalmente en el mechero.
b) Utilizando los dados de la mano izquierda, quitar el tapn de algodn (o tapa
rosca) del tubo que contiene la muestra, y tomar una cantidad ligera de inculo,
enseguida se vuelve a tapar el tubo.
c) Con la mano izquierda se toma la placa petri de agar, se manipula con los
dedos para levantar parcialmente la tapa.
d) Con la mano derecha se toma el asa y se distribuye el inculo por estras en
Zig-Zag, con escasa separacin unas de otras (1 a 3 mm). La distribucin
puedes ser por estra simple (inculo descrito en un solo plano por todo el
medio) u estra en triangulo o cuadrado (estras descritas en 3, 4,5, planos en el
mismo medio). El numero se estras depende de la cantidad de inculo y los
planos de siembra ensayados. Se debe evitar romper el medio.
Sobre las primeras estras, desarrollara unas masas microbianas
indiferenciadas; en las estras internas, un desarrollo casi uniforme con una que
otra colonia pequea ligeramente aislada y en las ultimas, escasas colonias de
desarrollo normal y diferenciadas.
En caso de aislamiento por planos; las
62
UAP
ltimas son colonias definidas y diferenciadas. Estas deben ser las elegidas
para el trasplante y obtencin de cepas puras.
El aislamiento por torundas es idntico al del estriado.
B.- AISLAMIENTO POR DISEMINACIN

Procedimiento:
1. Mediante la pipeta pasteur estril se toma una mnima cantidad de inculo.
El dedo ndice de la mano derecha debe cubrir la abertura superior, para
evitar se vaci el contenido.
2. El inculo es depositado en un margen del agar.
3. Con la varilla horizontal de la esptula de Digralsky (o alambre doblado
del asa), se distribuye el inculo por toda la superficie del medio, evitando
pasar dos veces por el mismo plano. La tapa de la placa debe levantarse
slo lo necesario, para evitar contaminacin.
63
UAP
C.- AISLAMIENTO POR DIFUSIN (conteo en placas)

Esta tcnica se aplica de preferencia para anlisis cuantitativos
bacterianos. Por ejemplo para conocer el nmero de microorganismos por
mililitro en muestra de agua, leche alimentos, etc.
Para reparar las diluciones bsicas pueden utilizarse agua amortiguada
esterilizada, su locin esterilizada de NaCl al 0.85% o medio de cultivo
esterilizado.
Procedimiento:
1. De la muestra problema, con una pipeta Pasteur se saca 1 ml de inculo y
se lleva aun tubo que contiene 9 ml de dilucin bsica. Este tubo
corresponde a la dilucin 1:10 (1/10 10-1).
2. De la dilucin 1:10 se saca un 1 ml y se leva a otro tubo con 9 ml de
dilucin. Esta dilucin corresponde a 1:10.
3. De la dilucin 1:10 se saca 1 ml y se trasfiere a otro tubo con 9 ml de
dilucin bsica. Este tubo es la dilucin 1:1000. Las diluciones pueden
continuar o no, segn convenga al experimento.
4. De cada tubo de dilucin se trasmite 1 ml a una placa petri esterilizada.
5. Introduzca de 15 a 18 ml de agar fundido esterilizado y enfriado a 45C, en
cada una de las placas que contienen los diluyentes.
6. Mezclar el medio agar con el inculo haciendo girar la placa petri. Dejar
que solidifique el medio, con una superficie plana.
7. Ponga a incubar las placas, en posicin invertida de 24 a 48 horas.
8. Escoger una placa que contenga de 30 a 300 colonias, cuente el nmero de
colonias. Multiplique el nmero de colonias por la dilucin de la muestra.
Por ejemplo si la placa de dilucin 1:10 muestra 40 colonias tenemos 4 x
10 = 400; en clculo de poblacin bacteriana del espcimen original seria
400 microorganismos por mililitro y se registra como cuenta estndar de
placa por mililitro.
2. METODOS DE SIEMBRA O TRASPLANTE DE BACTERIAS AEROBIAS EN
TUBOS.
A. Transferencia de medios de cultivos puros lquidos a medios lquidos en tubos.
1) Flamear el asa de siembra y luego dejarla enfriar.
64
UAP
2) Quitar el tapn de algodn del tubo con la muestra y con el asa en aro tomar en
inculo, tapar el tubo y retirarlo.
3) Tomar el tubo con medio lquido (ejemplo: caldo de tioglicolato) e introducir en
asa, hasta aproximadamente de profundidad talar el tubo y agitarlo.
4) Incubar a 37C por 24 horas.
5) La turbidez del caldo cultivado indica la presencia de microorganismos; en caso
contrario el caldo es transparente.
B. Transferencia de cultivos puros en medios semislidos (medio CTA o base de Agar
Trypticasa), etc, para pruebas de motilidad y pruebas de fermentacin)
1) Utiliza el asa en punta (o aguja de Kolle), previamente esterilizada, tocar con la
punta la colonia escogida de la placa (introducir la aguja al medio, si la muestra es
lquida en tubo).
2) Quitar el tapn del tubo que se va a inocular y atraviese el medio aproximadamente
hasta la mitad, con un movimiento recto vertical, teniendo cuidado de retirar la aguja
a lo largo de la misma senda (siembra por puntura).
3) Incubar a 37 por 24 h oras. La Nisseria debe inocularse intensamente, y solo en
superficies del medio CAT.
Los cultivos inoculados por picadura muestran crecimiento fuera de la lnea de
inoculacin, mientras que el medio circundante permanece claro.
La fermentacin en medios semislidos que contienen carbohidratos puede determinarse
generalmente mediante un cambio de color del indicador incorporado.
C. Transferencia de cultivos puros en medios inclinados especiales. (Agar triple Azcar
Hierro o TSI, y el kliger Iron Agar o KIA con dos azcares), para pruebas de
fermentacin de SH2 y Co2.
Procedimiento:
1.- Examine la placa y escoja la colonia que se va a transferir.
2.- Esterilizar el asa en punta y dejarlo enfriar (para medios inclinados normales se utiliza
el asa en ero)
3.- Levantar la placa y tocar la colonia con la punta del asa.
4.- Quitar el tapn del tubo que contiene e l medio inclinado y atraviese la masa hasta la
mitad de su profundidad, con un movimiento recto, e inocule la superficie inclinada
pasmado la aguja a lo largo de la superficie inclinada desde el fondo hasta la parte
superior.
65
UAP
5.- Incubar a 37 C por 18 a 48 horas.

Medio Kliger (KIA)
Es un agar en tubo inclinado con mucho fondo, que contiene dos azucares (glucosa al 0.18
u lactosa al 18) con sulfato de hiero y rojo temol como indicador de pH.
Este medio presenta una dbil tonalidad rosada o salmn. Se siembra a la ves en
superficies y profundidad. (Por picadura).
Despus de la incubacin permite obtener 4 respuestas:
Fermentacin de la glucosa
(viraje al amarillo del fondo). Fermentacin de la lactosa (viraje al amarillo de la

superficie), producto de SH2 (precipitado negro de sulfato ferroso) y formacin de gas en
la fermentacin de la glucosa (burbujas o desprendimiento del agar).
Si la bacteria fermentada de glucosa, como este azcar a halado una pequea cantidad
(0.18), los cidos formados en superficie (en presencia de oxigeno) son rpidamente
neutralizados por las aminas voltiles producidas por la descarboxilacin oxidativa de las
protenas no modificando el pH de la superficie ni su color, pero en profundidad. Los
cidos formados en la fermentacin anaerbica de la glucosa hacen variar el pH del fondo
cuyo color vara al amarillo. Si se produce, adems, ola fermentacin rpida de la lactosa,
que se ala en mayor cantidad (1%), los cidos modifican en pH de la superficie del medio,
que vira a amarillo.
3. AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS ANAEROBIOS.
Los microorganismos anaerbicos constituyen la flora bacteriana predominante en el ser
humano y se halla constantemente en el tracto intestinal, vas respiratorias y aparato
genitourinario. Aun cuando los anaerbicos se encuentren comnmente en heridas y
abscesos, hay que tener presente que pueden participar en cualquier tipo de infeccin.
Para el trabajo de laboratorio con estos microorganismos es preciso obtener condiciones de
anaerobiosis. Esta atmsfera de anaerobiosis tiene doble finalidad: eliminar y reducir la
tencin de oxigeno y mantener el ambiente sin este o a la menor contraccin posible.
Algunos procedimientos son sofisticados, otros son ms sencillos.
Si bien la mayora puede detectarse en los cultivos a las 18 36 horas (prcticamente como
los aerobios), hay algunas especies, como Bacteroides nodosus o Enbacterius lentum que
pueden tardar varios das en crecer en medios habituales.
La va metablica utilizada por estos grmenes permite la liberacin de sustancias de
metabolismo intermediario, como cidos grasos voltiles de cadena corta, como el cido
butrico, etc. De olor desagradable y fcilmente detectable, que facilita el diagnostico.
66
UAP

RESULTADOS
CUESTIONARIO
1. Cul es tipo de siembra de bacterias se emplea con mayor frecuencia en la clnica y que
medios de cultivo se emplea?
2. Al iniciar la siembra porque Ud. debe gastar la muestra biolgica?
3. Qu tipo de bacterias Ud. siembra en agar sangre y debido a que fundamntelo
4. En cuanto a los resultados de la prctica fundamente los resultados en el McC y de que
bacterias se cree que son.
5. Explique qu medio o medios de cultivo empleara si, el paciente tiene una infeccin a
vas urinarias bajas.
6. La siembra de un microrganismo en un medio de cultivo es una prueba microbiolgica
confirmatoria para determinar la especie de microrganismo causante de la patologa
7. Explique a que se llaman: cultivo puro y cepa bacteriana.
67
UAP
Ver video sobre las bacterias:

https://www.youtube.com/watch?v=Tudhmd0Gjl0
68
UAP
69
UAP
PRCTICA N 09
ESTUDIO CUANTITATIVO DE BACTERIAS: RECUENTO DE BACTERIAS
OBJETIVOS
El alumno aprender a:
1. Utilizar correctamente pipetas y micropipetas preparando diluciones decimales seriadas de
una suspensin de bacterias
2. Determinar la concentracin bacterias viables (entendidas como unidades formadoras de
colonias) en una muestra
INTRODUCCIN
Es un mtodo muy utilizado cuando se necesita determinar el tamao de la poblacin
bacteriana de una muestra.
El recuento de microorganismos, en este caso, se basa en que cada uno desarrollar una
colonia visible. Pero debido a que una muestra no es totalmente homognea con respecto a su
composicin microbiolgica, es posible que una colonia se origine de un microorganismo o de
cientos de ellos, dando en este ltimo caso un recuento menor del real.
Tambin es posible que muchas de las bacterias presentes en la muestra no puedan crecer en
las condiciones elegidas (pH, temperatura, medio de cultivo, tiempo, etc.). En este caso el
recuento tambin ser inferior al real. Lo que si se sabe es que cada colonia observada se
form a partir de por lo menos un microorganismo.
Esta es una condicin necesaria y suficiente. Entonces la colonia es considera una unidad
formadora de colonia (UFC) a los efectos de los clculos.
Se admite, por lo tanto, que en los mtodos de recuento de microorganismos vivos, son
inevitables los errores. Especialmente cuando se examinan muestras pequeas, es posible
cometer grandes errores.
En diversos estudios microbiolgicos (como anlisis de alimentos, de agua de bebida, de
productos farmacuticos o del medioambiente entre otros), se requiere conocer el nmero de
microorganismos presentes en un material con objeto de determinar su calidad. El
procedimiento es esencialmente el mismo que para la medida del crecimiento de las
poblaciones de bacterias
El crecimiento de poblaciones microbianas puede determinarse mediante mtodos de medida
de la masa total celular, que generalmente es directamente proporcional al nmero de clulas,
(mtodos de determinacin del peso, de la actividad del cultivo o mtodos turbidimtricos) o
por la determinacin del nmero de clulas.
70
UAP
Conteo bacteriano
El conteo bacteriano seala la magnitud de la poblacin total bacteriana, en ese
sentido se puede determinar por muchas tcnicas que se basan en algunos de los siguientes
tipos de medida: cuenta celular (directamente al microscopio o mediante un contador
electrnico de partculas o indirectamente con la cuenta de colonias), masa celular (en forma
directa pesando el contenido celular del nitrgeno o indirectamente por turbidimetra,
proporcional al nmero de clulas) y actividad celular (indirectamente relacionando el grado
de actividad bioqumica al tamao de la poblacin bacteriana).Existen muchos medios
diferenciales, en la prctica rutinaria se usan los siguientes:
Tipos de conteo bacteriano
Conteo en caja de petri: Mtodo ms usado para contar bacterias. Un caldo de cultivo con
microorganismos es diluido y posteriormente muestras del mismo son distribuidas en la
caja de petri contenedora de agar. Es de suponerse que cada clula se dividir en sus
mltiples alrededores para producir colonias separadas en el agar. Cada clula es llamada
unidad formadora de colonias (UFC). Despus de la incubacin, el nmero de colonias se
reflejar en el nmero de clulas UFC originalmente presentes. Es importante considerar un
nmero limitado de colonias pues de no ser as, stas pueden sobrepoblarse y dificultar el
conteo de las mismas (rango sugerido de acuerdo a FDA 25-250 colonias). El conteo se
facilita utilizando un contador de colonias.
Este mtodo es deseable porque arroja el total de clulas viables (slo clulas vivas); en
contraste con el conteo microscpico y el conteo de peso seco. Una desventaja se encuentra
en el tiempo que requiere para producir las colonias, ya que se necesitan como mnimo 24
horas o ms. Por otra parte, no es 100% fiable porque regularme las colonias crecen unidas
en cadenas o en grupos.
Conteo por filtracin: Es realizado cuando la cantidad de bacterias es muy pequea, como
en casos de lagos y arroyos relativamente puros. En esta tcnica se necesitan al menos 100
ml. de agua que atraviesen una membrana delgada de un filtro, con poros tan pequeos que
no permitan el paso de bacterias, de esta forma stas son retenidas en la superficie del filtro.
Posteriormente el filtro es transferido a una caja de petri que cuenta con un caldo nutritivo,
en la cual las colonias surgen de las bacterias en la superficie del filtro. Las colonias
bacterianas formadas por este mtodo son distintivas cuando se ocupan un medio
diferencial.
Este mtodo es aplicado frecuentemente en la deteccin y enumeracin de bacterias
71
UAP
coliformes, las cuales son indicadores de contaminacin fecal en la comida o en el agua.
Mtodo del nmero ms probable (NMP): Es una tcnica de estimacin estadstica

basada en el hecho que a mayor nmero de bacterias en una muestra, mayor ser la dilucin
necesitada para reducir la densidad hasta el punto en que ninguna bacteria se le permita
crecer en la serie de tubos de dilucin. Muestras microbianas son aadidas a tubos con
caldos de lactosa y la presencia o ausencia de gas formado en la fermentacin y da un
estimado de nmero de clulas.
Este mtodo es ms til cuando las bacterias que estn siendo contados no crecern en
medios slidos, como en el caso de Chemoautotrof phic nitrifying bacteria. Tambin es
til cuando el crecimiento de la bacteria es en un medio lquido diferencial, usado para
identificar microbios, como en bacterias coliformes. El NMP es la nica afirmacin en la
cual existe 95% de probabilidad que la poblacin bacteriana sea de rango correcto, siendo
el nmero estadstico ms probable.
Determinacin directa por microscopio: Las clulas se pueden contar como un frote
teido colocando en la preparacin un volumen conocida de la suspensin de clulas sobre
un rea conocida del portaobjetos. Despus de haber fijado y teido el frote, es posible
contar con un microscopio las bacterias.
Como no es prctico recorrer toda el rea, se cuenta el nmero de clulas en unos
cuantos campos microscpicos seleccionados al azar. Si el dimetro del campo
microscpico se mide con micrmetro objetivo, se puede calcular fcilmente el rea,
entonces el nmero de campos en 1 cm2 se multiplicar por el promedio del nmero de
clulas por campo y despus por 100 (si se vierte .01 ml) el resultado ser igual al nmero
de clulas por mililitro. Este mtodo es susceptible a muchas crticas debido a su falta de
uniformidad al momento de hacer el frote.
Mtodo de turbiedad: Para algunos experimentos, es necesario estimar turbiedad, ya que

es una forma prctica de monitorear el crecimiento bacteriano. Como una bacteria se
multiplica en un medio lquido, ste se torna turbio o de aspecto nublado por las clulas.
El instrumento usado para medir la turbiedad es un espectrofotmetro (colormetro). En
el espectrofotmetro, un haz de luz es transmitido a travs de la suspensin bacteriana a un
detector sensible a la luz. Mientras incremente el nmero de bacterias, menor ser la luz
captada por el detector. Este cambio en la luz se registrar en la escala del instrumento
como el porcentaje de transmisin. Tambin se registra una expresin logartmica llamada
absorbancia (algunas veces nombrada densidad ptica), un valor derivado del porcentaje de
72
UAP
transmisin que puede ser reportado. Ms de un milln de clulas por milmetro deben estar
presentes para que la primera seal de turbiedad sea visible. Aproximadamente de 10
millones a 100 millones de clulas por mililitro son necesitadas para hacer una suspensin
suficientemente turbia para leer en el espectrofotmetro. La turbiedad no es til para medir
contaminacin en lquidos por la pequea cantidad relativa de bacterias.
Determinacin del peso seco en las clulas: Es el mtodo ms directo para las mediciones
cuantitativas de la masa celular y probablemente el ms fcilmente realizable y
reproducible, aunque se debe aplicar slo en suspensiones celulares muy densas y las
clulas deben ser lavadas muy bien para removerles todo material extra.
Se utiliza para bacterias filamentosas y mohos. En este proceso, el fungus es removido
del medio de crecimiento, filtrado para remover material extrao, drenado en un secador y
despus es pesado.
MTODOS DE RECUENTO
1.
Principales mtodos de El nmero de bacterias de una muestra puede determinarse

recuento
del
nmero directamente por recuento del nmero total de clulas o
bacterias en una muestra indirectamente por la estimacin del nmero ms probable,

por filtracin o por el recuento de viables en placa (Clulas
capaces de dividirse sobre o dentro de un medio slido,
tambin se refieren como unidades formadoras de colonias
UFC).
1.1.Recuento
directo
de
bacterias al microscopio
Es una tcnica para determinar o recontar el nmero total de

organismos de una muestra: Se utilizan cmaras de recuento
(Cmara de Petroff-Hauser) y visualizacin al microscopio.
Es un mtodo rpido del nmero total de clulas de una
muestra pero no distingue entre viables o no viables.
1.2.Recuento directo con
Se utiliza el contador Coulter recuenta el nmero de clulas
contadores electrnicos
suspendidas en un lquido, a su paso por un orificio por

donde fluye la corriente elctrica. Se puede determinar a su
vez el tamao de las clulas pero tampoco distingue entre
viables, muertas o partculas.
73
UAP
1.3. Recuento en filtros de
En este mtodo el recuento se realiza por filtracin de un

volumen de la muestra a travs de un filtro de membrana de
membrana
tamao adecuado para retener a las bacterias (0.22-0.45 m).

Una vez filtrada la muestra, el filtro se coloca sobre un
medio de cultivo slido y se incuba. El recuento del nmero
de colonias formadas sobre el filtro determina el nmero
total de bacterias en la muestra filtrada. Es un mtodo til
cuando el nmero de bacterias presentes en la muestra es
muy bajo. Se utiliza con frecuencia para determinar el
nmero de bacterias en agua.
2. Mtodos de recuento de
bacterias
viables
en
Estos mtodos ofrecen la ventaja de cuantificar solo a las

bacterias viables presentes en una muestra. Implican la
dilucin seriada de la muestra en agua, caldo o solucin
placa
salina, la inoculacin de la dilucin en medio de cultivo

slido y la incubacin durante 24-48 horas a la temperatura
apropiada y en placa son mtodos de estimacin de bacterias
viables en trmino de unidades formadoras de colonias
(UFCs).
El nmero de unidades formadoras de colonias de una
suspensin bacteriana puede determinarse mediante dos
tcnicas:
2.1. Recuento en placa
por
siembra
profundidad.
en
Consiste en aadir medio de cultivo fundido y enfriado a

50C sobre placa de Petri que contiene una cantidad
determinada de la muestra diluida. Se tapa la placa y se rota
para mezclar la muestra en el agar. Cuando el agar solidifica
se incuban las placas. Las colonias se desarrollan tanto
dentro del agar como en la superficie. Es un mtodo
generalmente utilizado para el recuento de microorganismos
anaerobios facultativos o microaerofilos.
74
UAP
2.2.Recuento en placa
por
siembra
en
superficie
Consiste en la siembra de un volumen conocido de la

dilucin de la muestra sobre la superficie de un medio de
cultivo en placa Petri. En este mtodo todas las colonias
crecen sobre la superficie del medio. Generalmente se utiliza
esta tcnica para el recuento de bacterias aerobias.
Antes de realizar la prctica realicemos:

Preparar una suspensin al 10 % de suelo en 50 ml. de agua destilada. La tierra debe estar
seca y recin recogida.
Mantener en agitacin la suspensin anterior durante 30 a 60 minutos. Puede utilizarse
agitacin manual o magntica.
Preparar diluciones seriadas de 1/10, 1/ 100, 1/ 1.000, 1/ 10.000 y 1/ 100.000 (10-1, 10-2, 10-3,
10-4 y 10-5) de la suspensin anterior respetando un volumen final de 5 ml.
Se rotulan 5 placas (una para cada dilucin) sembrar 0.1 ml (con pipeta limpia en cada una)
de cada dilucin en una placa de Petri con Agar Nutritivo y con ayuda de una asa de Digralski
extenderlo por toda la placa.
Incubar a 37 C durante 2- 3 das en estufa o incubadora.
Observar las placas en busca de efectos de inhibicin.
Realizar el recuento de los microorganismos presentes en la muestra del suelo. Para realizar el
contaje se escogen las placas que muestren entre 30 y 300 colonias. Para visualizar mejor es
conveniente ubicar la placa sobre una caja con tapa de vidrio y luz, dividiendo la superficie
total de la placa en sectores cuadriculados.
Dar el resultado en UFC/g (no en bacterias por gramo):
UFC/g = N de colonias en placa (entre 30 y 300) x inverso de la dilucin x 10
75
UAP
MATERIALES
Cultivo de Escherichia coli de 24 horas en caldo de tripticasa soja (TSB)
6 placas de TSA
6 tubos de ensayo con 4.5 ml de solucin salina 0.9% estriles.
Puntas de pipetas estriles de 1 ml
Pipeta automtica de 1ml
Esptula de Driglasky de acero
Placa con alcohol
TCNICA DE RECUENTO EN PLACA POR SIEMBRA EN SUPERFICIE
a)
Extensin en superficie con cayado (esptula Diglasky): depositar sobre la superficie

de una placa con agar nutritivo una gota o 0.1 ml de una determinada dilucin del
cultivo de microorganismos problema y extenderlo con la ayuda del cayado,
previamente esterilizado el cayado, en todas las direcciones hasta que est
completamente seco. Incubar la placa, en posicin invertida, a la temperatura deseada
(durante 24, 48 72 horas) segn el tipo de microorganismo. La posicin invertida
evitar que el agua de condensacin se deposite sobre la superficie del medio,
dificultando la obtencin de colonias aisladas. Es una tcnica usada para el aislamiento
de colonias, que permite igualmente el recuento de bacterias viables en la muestra, si
conocemos exactamente el volumen de muestra sembrado.
76
UAP
Resultados:
Extensin en superficie: tras el periodo de incubacin se examinarn las placas. Las
colonias aparecen sobre la superficie, distribuidas uniformemente si la siembra se ha
realizado de forma correcta. Podrn diferenciarse las colonias de acuerdo a su tamao,
forma, color, textura, etc.
Esta tcnica de siembra, adems, de permitir que se distingan las colonias por su
morfologa, permite el recuento de microorganismos viables. La expresin de este
recuento se hace en unidades formadoras de colonias (UFC) ya que cada una procede
de un solo microorganismo (o de un grupo de microrganismos, pues en algunos casos
stos tienden a formar agregados). A partir de las colonias aisladas, los
microorganismos pueden transferirse a otros medios de cultivo para su estudio.
b)
Estras mltiples en superficie: con una asa de siembra (asa de kolt), previamente
esterilizada, se toma una muestra de cultivo de microorganismos y se extiende sobre un
rea pequea de la superficie de la placa con agar nutritivo, en forma de estras muy
juntas, pero sin hacer presin para no daar el agar. Se flamea el asa, se enfra y despus
de rozar la siembra realizada previamente, se extiende de nuevo por otra zona de la
placa haciendo nuevas estras. Este proceso se repite sucesivamente, flameando y
enfriando el asa al comienzo de las sucesivas siembras en estra. Se lleva la placa a la
temperatura adecuada, siempre en posicin invertida. Mediante esta tcnica se obtienen
colonias aisladas a partir de una muestra que contenga un elevado nmero de bacterias.
Interpretacin:
Estras mltiples en superficie: tas la incubacin, se observarn las colonias aisladas
en algunas regiones de la placa inoculada. Con esta tcnica se logra la separacin de los
77
UAP
microorganismos que se encuentran en un cultivo mixto (heterogneo), o bien que

procedan de muestras homogneas, pero que existe un elevado nmero.
En las zonas donde existen colonias aisladas se puede estudiar la morfologa de las
colonias.
OBTENCIN DE DILUCIONES SERIADAS DEL CULTIVO
1. Marcar los 6 tubos de solucin salina con las diluciones 10-1, 10-2,.10-6
2. Utilizando la pipeta de 1 ml con punta estril, transferir aspticamente 0.5 ml del cultivo
de E. coli a un primer tubo de solucin salina estril de 4.5 ml. (dilucin 10-1). Retirar la
punta y echarla al contenedor.
3. Mezclar la suspensin con un vortex durante unos segundos.
4. Con una nueva punta de pipeta estril, transferir 0.5 ml al siguiente tubo de dilucin
(dilucin 10-2). Retirar la punta y echarla al contenedor.
5. ..Repetir el paso anterior hasta obtener la dilucin 10-6.
6. Marcar las placas con las tres ltimas diluciones 10-4, 10-5, 10-6 (2 placas por dilucin).
Comprobar que la superficie de las placas est bien seca
7. Cambiar el volumen de la pipeta a 0.1 ml. Tomar una punta de pipeta estril y transferir
0.1 ml de cada una de las tres ltimas diluciones a placas de TSA.
8. Esterilizar la esptula de Driglasky impregnndola en alcohol, escurrir el exceso de
alcohol y pasar por la llama del mechero.
78
UAP
9. Sembrar la dilucin sobre la superficie de la placa rotando y esparciendo la muestra en

todas las direcciones
10.
Incubar las placas en posicin invertida a 37C durante 24-48 horas
RESULTADOS
1. Tras la incubacin, se observan las colonias bacterianas sobre la superficie del agar. Cada
colonia representa a una unidad formadora de colonia (UFC). Usualmente una UFC se
corresponde con una clula viable.
2. Seleccionar las placas de la dilucin que haya producido un nmero de colonias
comprendido entre 30-300 y contar el nmero de colonias presentes.
3. Ejemplo: 125 colonias.
4. El resultado debe expresarse como UFC/ml para ello se multiplica el promedio del n de
colonias obtenido por el inverso de la dilucin final de la muestra por 10
UFC/ml= 125 x106 x 10= 125 x 107
GRAFIQUE LO REALIZADO EN LA PRCTICA:
79
UAP
ELABORE UNA TABLA COLOQUE E INTERPRETE LOS RESULTADOS

OBTENIDOS:
Ver video de aislamiento y siembra de bacterias:

https://www.youtube.com/watch?v=-TnHCd4sY24
80
UAP
CUESTIONARIO
1.
Qu es y para qu sirve, en microbiologa, la escala de Mac Farland?
2.
Elabore una tabla, coloque e interprete cada una de las concentraciones de la escala de
Mac Farland?
3.
De la escala de Mac Farland cul de las concentraciones es ms adecuada para los

trabajos microbiolgicos en salud.
4.
Qu significa CIM y CBM, cul es su utilidad en microbiologa?
5.
A qu se refiere con el Numero Ms Probable (NMP), cul es su importancia?
6.
Cul es la utilidad de esta prctica en su profesin?
7.
Cul es la diferencia de aislar y siembra?
8.
Defina con sus propias palabras: Colonia, axnico, cultivo puro, cepa, inoculo?
9.
Cmo se obtiene un cultivo axnico, esquematice y explique brevemente el

procedimiento?
10. Segn lo visto en el video, recomendado, explique y grafique cada una de los tipos de
siembra?
BIBLIOGRAFA UTILIZADA PARA EL DESARROLLO DE LAS PRCTICAS
81
UAP
PRCTICA N 10
ANTIBIOGRAMA O KIRBY BAWER
OBJETIVOS:
Determinar la sensibilidad a diversos antibiticos de un determinado microorganismo
Comprender el concepto de antibitico y su especificidad de accin sobre determinadas

bacterias.
Conocer el concepto de cepa sensible y resistente.
Entender el concepto de halo de inhibicin.
Ser consciente de la importancia de la higiene y el cuidado en la manipulacin de

materiales biolgicos.
Comprender la importancia de la eliminacin de los residuos orgnicos
Conocer el instrumental de laboratorio necesario en microbiologa y los procedimientos

para su utilizacin
MATERIALES
Placa problema (cultivada en agar-sangre)
Discos de diferentes tipos de antibiticos (4-6 tipos distintos - monodiscos)
Placa agar nutritivo o agar PCA o agar Miuller Hinton
Regla milimetrada
Rotulador de vidrio
Pinzas finas o agujas N 21
Contenedor con leja
Torunda estril
Tablas para determinacin de resistencias
INTRODUCCIN
Se entiende por antibiograma el estudio de la sensibilidad "in vitro" de las bacterias a los
antibiticos, aunque se extiende a algunos quimioterpeuticos. El antibiograma es un mtodo
de diagnstico rpido y preciso, ya que no se puede predecir la susceptibilidad de las
bacterias, hongos y virus a los agentes antimicrobianos, con frecuencia es necesario estudiar
la sensibilidad individual de cada patgeno a estas drogas, pudindose elegir entonces el
agente apropiado que provee mayores posibilidades de una evolucin favorable.
82
UAP
LOS ANTIBITICOS
HISTORIA
El escocs Alexander Fleming descubri la penicilina, un antibitico que
revolucion la medicina moderna, de un modo bastante accidental. Hasta Fleming el
nico tratamiento posible contra las infecciones bacterianas era la quimioterapia, usando
sustancias sintetizadas en el laboratorio que, si bien solucionaban parcialmente ciertos
efectos de la enfermedad, generaban efectos secundarios importantes. Gracias a la
penicilina, en el siglo XX, algunas enfermedades hasta entonces consideradas incurables
empiezan a tener solucin.
En 1921, Fleming haba observado la accin antibactericida de una sustancia
presente en las secreciones nasales, llamada lisozima.
En 1928, cuando estudiaba el virus de la gripe encontr que en la placa en la que estaba
cultivando unas bacterias haba crecido moho y que alrededor de este se haba formado un
rea libre de estafilococos. Esta capa contena alguna sustancia que inhiba el crecimiento
de la bacteria. A este principio activo lo llamo Penicilina, ya que proceda del hongo
Penicillium notatum. Sin embargo, problemas tcnicos no le permitieron purificar ni
producir la penicilina por lo que no lleg a usarla clnicamente.
En 1938, los britnicos Ernst Boris Chain y Howard Walter Florey iniciaron una
investigacin detallada y sistemtica de este antibitico y lograron, en 1940, tras su traslado a
EEUU, la fabricacin industrial y el empleo mdico de la penicilina, lo que supuso la
salvacin de incontables vidas durante la Segunda Guerra Mundial. En 1945 los tres
investigadores fueron galardonados con el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina.
El primer antibitico aislado fue la actinomicetina.
Los primeros antibiticos usados en clnica fueron la gramicidina y la tirotricina.
DEFINICIN
Un antibitico ha sido definido como una sustancia qumica producida por un
microrganismo capaz de inhibir el desarrollo de otros microrganismos. Los antibiticos
modificados por manipulaciones qumicas aun se consideran como tales. Un agente
antimicrobiano es activo contra los microrganismos y puede ser producido en forma natural
por microrganismos o sintticamente en el laboratorio. El trmino agente quimioterpico ha
sido empleado para referirse a agentes antimicrobianos sintticos o no y tambin se refiere a
agentes que actan contra clulas humanas como inmunomoduladores y drogas antitumorales.
83
UAP
Los trminos agente antiviral y agente antimictico son trminos ms especficos, incluidos
dentro de la categora ms general de agentes antimicrobianos.
El aislamiento de un agente infeccioso a partir de un paciente no es con frecuencia suficiente
para establecer la terapia adecuada. Muchas bacterias y algunos hongos presentan resistencia
a los agentes antimicrobianos y algunos virus han desarrollado resistencia a los agentes
antivirales ms actuales. Los patrones de resistencia cambian en forma constante y no importa
lo rpidamente que se introduzcan los nuevos agentes teraputicos porque los microbios
parecen siempre dispuestos a superarlos. Incluso entre los neumococos, que por dcadas han
permanecido invariablemente susceptibles a niveles de penicilina G menores de 0.04 U/ml,
han aparecido cepas que han desarrollado resistencia a esta droga.
No se puede predecir la susceptibilidad de las bacterias, hongos y virus a los agentes
antimicrobianos, con frecuencia es necesario estudiar la sensibilidad individual de cada
patgeno a estas drogas, pudindose elegir entonces el agente apropiado (el ms activo contra
el patgeno, el menos txico para el husped, con las caractersticas farmacolgicas
apropiadas y el ms econmico), que proporciona mayores posibilidades de una evolucin
favorable.
El resultado teraputico final depende de muchas otras variables. La enfermedad subyacente y
condicin clnica del husped, las propiedades farmacolgicas del agente antimicrobiano, la
administracin de otros agentes teraputicos adicionales y otros factores ejercern una fuerte
influencia sobre el desenlace final. Los microbilogos slo pueden recomendar agentes
teraputicos sobre la base de sus actividades in vitro. El clnico debe tomar la decisin final,
teniendo en cuenta su conocimiento sobre todos los factores pertinentes.
Un concepto importante sobre el que es necesario insistir es que no se pueden realizar pruebas
de sensibilidad in vitro con cultivos mixtos, slo los cultivos puros proporcionarn resultados
vlidos sobre la eficacia de un antibitico.
En la prctica diaria, una buena parte de los tratamientos efectuados tanto a nivel hospitalario
como ambulatorio, se establecen con arreglo a unos criterios derivados del estudio in vitro del
comportamiento de las distintas especies bacterianas frente a un determinado grupo de
antibiticos (tratamiento emprico). Ello se debe a que en muchas ocasiones, no puede
disponerse de la bacteria aislada del proceso infeccioso y la eleccin teraputica, en esos
casos, responde a criterios de empirismo derivados precisamente del conocimiento del
comportamiento de distintos tipos de antibiticos frente a las bacterias presuntamente
responsables de la infeccin.
84
UAP
Cada vez se hace ms necesario contar con un diseo de un programa de vigilancia de la

resistencia a los antimicrobianos, a nivel general, basado precisamente en el conocimiento que
tanto a nivel hospitalario como ambulatorio se tiene del comportamiento de los distintos
aislamientos de bacterias frente a los antimicrobianos para poder disear las actuaciones que
tiendan a superar la resistencia de las mismas a los antibiticos.
Es necesario tambin contar no solamente con criterios de tipo cuantitativo o cualitativo
(sensible, intermedio, resistente), sino que adems los resultados han de interpretarse
adecuadamente para evitar llegar a conclusiones errneas que pueden derivarse de atender
exclusivamente al dato que el sistema de realizacin del antibiograma nos ofrece ya que
existen muchas formas de interrelacin bacteria-antibitico que deben conocerse para llegar a
ese objetivo final que es la eleccin de la terapia ms adecuada.
En lneas generales y en funcin sobre su forma de actuar sobre los microrganismos,
hablamos de dos grandes grupos de antibiticos.
Antibiticos primariamente bactericidas: Ejercen una accin letal e irreversible

sobre el microbio (Fosfomicina Vancomicina. B-Lactmicos Polimixina.
Aminoglucsidos Rifampicina. Acid Nalidxico Quinoleinas. Nitrofurantoinas).
Antibiticos primariamente bacteriostticos: Inhiben el crecimiento pero no

matan al microrganismo, permitiendo que las propias defensas del husped
pueden eliminar a las bacterias (Tetraciclina Cloranfenicol. Sulfonamidas
Trimetroprim. Lincomicina Clindamicina. Macrlidos)
EL ANTIBIOGRMA
Por qu realizar un antibiograma?
El primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que
se sospecha es la responsable de una infeccin a uno o varios antibiticos. En efecto, la
sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia in vivo de un
tratamiento antibitico. El antibiograma sirve, en primer lugar, para orientar las decisiones
teraputicas individuales.
El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolucin de las resistencias
bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiolgico, a escala de un servicio, un centro de
atencin mdica, una regin o un pas, es como puede adaptarse la antibioterapia emprica,
revisarse regularmente los espectros clnicos de los antibiticos y adoptarse ciertas
decisiones sanitarias, como el establecimiento de programas de prevencin en los hospitales.
Hay pues un doble inters: Teraputico y epidemiolgico.
85
UAP
Cundo realizar un antibiograma?

Siempre que una toma bacteriolgica de finalidad diagnstica haya permitido el aislamiento
de una bacteria considerada responsable de la infeccin.
Establecer esta responsabilidad exige una colaboracin entre el bacterilogo y el clnico. En
efecto, en ciertas circunstancias, el microbilogo no podr determinar con certeza que el
aislamiento de una bacteria exige un antibiograma, sin los datos clnicos que le aporta el
mdico. Por ejemplo, una bacteria no patgena puede ser responsable de la infeccin de un
enfermo inmunodeprimido o en un lugar determinado del organismo. La presencia de signos
clnicos puede ser tambin determinante para la realizacin de un antibiograma (por
ejemplo: la infeccin urinaria con un nmero reducido de grmenes).
SENSIBILIDAD BACTERIANA A LOS ANTIBITICOS
La determinacin de la Concentracin Inhibidora Mnima (CIM) es la base de la medida de la
sensibilidad de una bacteria a un determinado antibitico. La CIM se define como la menor
concentracin de una gama de diluciones de antibitico que provoca una inhibicin de
cualquier crecimiento bacteriano visible.
Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una escala de actividad del
antibitico frente a diferentes especies bacterianas.
Hay diferentes tcnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de rutina, y de manera
semicuantitativa,
las
CIM
(mtodos
manuales
mtodos
automatizados
semiautomatizados).
Estos diferentes mtodos de rutina permiten categorizar una cierta cepa bacteriana en funcin
de su sensibilidad frente al antibitico probado. Esta cepa se denomina Sensible (S),
Intermedia (I) o Resistente (R) al antibitico.
Para un determinado antibitico, una cepa bacteriana es, segn la NCCLS:
o Sensible, si existe una buena probabilidad de xito teraputico en el caso de un tratamiento
a la dosis habitual.
o Resistente, si la probabilidad de xito teraputico es nula o muy reducida. No es de esperar
ningn efecto teraputico sea cual fuere el tipo de tratamiento.
o Intermedia, cuando el xito teraputico es imprevisible. Se puede conseguir efecto
teraputico en ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o aumento de la
posologa).
Ciertas molculas son representativas de un grupo de antibiticos. Los resultados (S, I, R)
obtenidos con estas molculas pueden ser ampliados a los antibiticos del grupo, que en ese
86
UAP
caso no es necesario ensayar (Ejemplo: Equivalencia entre la cefalotina que se ensaya y las
restantes cefalosporinas de 1 generacin que no es necesario probar, ya que el resultado
puede deducirse del obtenido en la cefalotina).
El antibiograma permite ensayar un nmero reducido de antibiticos (in vitro), sin limitar por
ello las posibilidades teraputicas.
INTERPRETACIN DE UN ANTIBIOGRAMA
Ciertos mecanismos de resistencia se expresan dbilmente in vitro, cuando se inscriben en el
DNA bacteriano. Su expresin en el organismo, en donde las condiciones en cuanto a medios
son diferentes, expondra al riesgo de fracaso teraputico.
Para evitar esto, el antibiograma debe ser interpretado de manera global a fin de descubrir, a
travs de la comparacin de las respuestas para cada antibitico, un mecanismo de resistencia
incluso dbilmente expresado. As, gracias a la interpretacin, una cepa que aparece como
falsamente sensible ser categorizada como I o R (Ejemplo: Una cepa de Klebsiella
pneumoniae productora de BLSE puede aparecer sensible in vitro a las cefalospornas de 3"
generacin.
El resultado de Sensible debe ser corregido a Intermedio o Resistente, ya que la
utilizacin de estos antibiticos correra el riesgo de provocar un fracaso teraputico).
RESISTENCIA BACTERIANA
Cada antibitico se caracteriza por un espectro natural de actividad antibacteriana.
Este espectro comprende las especies bacterianas que, en su estado natural, sufren una
inhibicin de su crecimiento por concentraciones de su antibitico susceptibles de ser
alcanzadas in vivo. A estas especies bacterianas se les dice naturalmente sensibles a dicho
antibitico. Las especies bacterianas que no se encuentran incluidas dentro de dicho espectro
se denominan naturalmente resistentes.
El antibitico no crea resistencia, pero selecciona las bacterias resistentes eliminando
las sensibles. Es lo que se conoce con el nombre de presin de seleccin. El aumento de la
frecuencia de las cepas resistentes va unido casi siempre al uso intensivo del antibitico en
cuestin.
o LA RESISTENCIA NATURAL es un carcter constante de todas las cepas de una misma
especie bacteriana. El conocimiento de las resistencias naturales permite prever la
inactividad de la molcula frente a bacterias identificadas (despus del crecimiento) o
sospechosas (en caso de antibioterapia emprica). En ocasiones, constituye una ayuda para
la identificacin, puesto que ciertas especies se caracterizan por sus resistencias naturales.
87
UAP
Ejemplos: Resistencia natural del Proteus mirabilis a las tetraciclinas y a la colistina.

Resistencia natural de la Klebsiella pneumoniae a las penicilinas (ampicilina, amoxicilina).
o LA RESISTENCIA ADQURIDA es una caracterstica propia de ciertas cepas, dentro de
una especie bacteriana naturalmente sensible, cuyo patrimonio gentico ha sido modificado
por mutacin o adquisicin de genes. Contrariamente a las resistencias naturales, las
resistencias adquiridas son evolutivas, y su frecuencia depende a menudo de la utilizacin
de los antibiticos. En el caso de numerosas especies bacterianas, y teniendo en cuenta la
evolucin de las resistencias adquiridas, el espectro natural de actividad no es ya suficiente
para guiar la eleccin de un tratamiento antibitico. En ese caso, se hace indispensable el
antibiograma.
o UNA RESISTENCIA CRUZADA es cuando se debe a un mismo mecanismo de
resistencia. En general, afecta a varios antibiticos dentro de una misma familia (Ejemplo:
La resistencia a la oxacilina en los estafilococos se cruza con todas los -lactmicos). En
ciertos casos, puede afectar a antibiticos de familias diferentes (Ejemplo: La resistencia
por impermeabilidad a las ciclinas se cruza con la resistencia al coloranfenicol y al
trimetoprima).
o UN RESISTENCIA ASOCIADA es cuando afecta a varios antibiticos de familias
diferentes. En general, se debe a la. asociacin de varios mecanismos de resistencia
(Ejemplo: La resistencia de los estafilococos a la oxacilina va frecuentemente asociada a
las quinolonas, aminoglicsidos, macrolidos y ciclinas).
Con el fin de tener en cuenta la evolucin de las resistencias adquiridas y, por
consiguiente, proporcionar a los mdicos datos tiles cuando deben proceder a la eleccin
emprica de una antibioterapia, la nocin de espectro clnico completa la de espectro natural.
Definido para cada antibitico, este espectro clnico se incluye en el Resumen de las
Caractersticas del Producto (RCP). Este espectro integra no solamente datos bacteriolgicos
(espectro natural, frecuencia de las resistencias adquiridas), sino tambin datos
farmacocinticos y clnicos (las especies descritas en el espectro son aquellas para las que se
ha demostrado la actividad clnica del producto). El espectro clnico se revisa regularmente
para tener en cuenta la evolucin de las resistencias adquiridas.
ANTIBIOGRMA REALIZADO POR EL MTODO DE DIFUSIN EN AGAR
En esta fotografa se muestra un ejemplo de antibiograma realizado por el mtodo de
difusin en agar por medio de discos.
88
UAP
En la imagen de la izquierda se muestra una vista general de una placa con crecimiento
bacteriano y con seis discos de antibiticos. La zona de color claro que ocupa la mayor parte
de la placa es el crecimiento bacteriano en las zonas no inhibidas. Los crculos negros que
rodean a cinco de los seis discos marcan las zonas en que los respectivos antibiticos han
inhibido, con mayor o menor eficacia, el crecimiento del microrganismo a estudio.
El sexto disco (AM-10) no tiene a su alrededor halo de inhibicin lo que indica la resistencia
del microrganismo a ese antibitico.
La imagen de la derecha, un plano ms cercano de la mitad superior de la placa, permite
observar con ms detalle lo sealado en el prrafo anterior. Puede verse adems, con gran
claridad, la especial disminucin de la intensidad de crecimiento del microrganismo en la
zona interior del halo de inhibicin del disco de CTX-30, debido probablemente a la aparicin
de mutantes resistentes de dicho microrganismo capaces de soportar en mayor medida que el
resto el efecto inhibitorio del antibitico.
El mtodo Kirby-Bauer (mtodo de difusin en agar) es empleado para determinar la
sensibilidad de un agente microbiano frente a un antibitico o quimioterpico. Este mtodo
comprende lo que se denomina un antibiograma o prueba de susceptibilidad bacteriana frente
a drogas especficas.
Sobre la superficie de una placa de agar Mller-Hinton (medio de cultivo rico, diseado
especialmente para hacer ensayos de sensibilidad) se inocula una cantidad estandarizada de
bacterias, sembrndolas de forma pareja para obtener despus de la inoculacin un "csped"
bacteriano. Se colocan discos de papel de filtro impregnados con concentraciones conocidas
de los diferentes antibiticos. La eleccin de los antibiticos a probar depende del germen y
del foco de infeccin.
89
UAP
El antibitico difundir desde el papel filtro al agar de forma radial. Se incuba la placa durante
18-24 horas a 37C (respetar este parmetro, porque temperaturas menores pueden disminuir
la velocidad del crecimiento del germen y la difusin del antibitico, dando halos irregulares
difciles de medir), y luego se miden los halos de inhibicin de desarrollo, interpretndose de
acuerdo a tablas confeccionadas previamente. Los resultados se expresan como: Sensible (S),
Intermedio o Moderadamente sensible (I) y Resistente (R).
El tamao del halo de inhibicin de desarrollo variar en base a los siguientes parmetros o
variables:
1. La concentracin de la droga.
2. Sensibilidad bacteriana.
3. Coeficiente de difusin de la droga en el agar.
4. Tiempo y temperatura de incubacin.
5. pH y composicin del medio. Se usan preparados comerciales que den resultados
reproducibles, por ejemplo: agar Mller-Hinton. Son cultivos aceptados por el comit
de la OMS para la normalizacin de las pruebas de susceptibilidad.
6. Profundidad del medio en las placas. Esto est estandarizado: se emplean placas de 9
cm de dimetro, y se agrega siempre el mismo volumen de medio de cultivo: 15 ml
por placa. De esta manera las placas poseen siempre la misma altura de agar.
7. Tamao del inculo. Debe estar estandarizado ya que si ste es muy pequeo dar una
sensibilidad mayor a la real, y si el inculo es muy denso pueden aparecer mutantes
resistentes.
En los mtodos de difusin de mutantes resistentes aparecen como colonias aisladas dentro
del halo de inhibicin, por lo tanto esto indica que no se puede usar ese antibitico y se debe
informar como resistente. La forma rigurosa de estandarizar un inculo es normalizando la
turbidez por un mtodo fotomtrico utilizando una suspensin de sulfato de bario como
estndar, segn la escala de Mac Farland.
ERRORES AL REALIZAR UN ANTIBIOGRAMA
Dentro de las posibilidades que se cuentan estn: densidad del inculo mal estandarizada,
utilizacin de cultivos no puros, humedad o sequedad excesiva del medio de cultivo que
puede conducir a un crecimiento demasiado confluente o pobre, y deterioro de los discos de
aplicacin.
90
UAP
LIMITACIONES DE ESTE MTODO

Es un mtodo solo cualitativo, orientado al tratamiento. No es aplicable a microorganismos de
crecimiento lento ni a microorganismos anaerobios. Antibiticos como la polimixina o la
vancomicina no tienen buena difusin en agar.
CIM
La Concentracin Inhibitoria Mnima (CIM), en microbiologa, es la concentracin ms
baja de un antimicrobiano que inhibe el crecimiento visible de un microorganismo despus de
la incubacin repentina. Las concentraciones inhibitoria mnimas son importantes en los
diagnsticos de laboratorio para confirmar la resistencia de microorganismos para un agente
antimicrobiano y adems para monitorizar la actividad de los nuevos agentes antimicrobianos.
En medicina, las concentraciones inhibitoria mnimas no solo se usan para determinar la
cantidad de antibiticos que recibir el paciente sino tambin el tipo de antibiticos usados,
que a su vez reduce la oportunidad de resistencia microbiana a agentes antimicrobianos
especficos.
DESARROLLO DE LA PRCTICA
Antes de empezar
No se puede tocar nada que vaya a tomar contacto con la muestra biolgica con las manos
(depresor, asa de siembre, torunda,...) para evitar contaminaciones.
Una vez utilizado este material ha de ser eliminado en un contenedor especial. Estos
contenedores sern llevados posteriormente a una planta de tratamiento de residuos
biolgicos, donde sern incinerados.
Todos los materiales o muestras tomadas deben estar perfectamente identificados: nombre,
grupo, fecha e indicativo del tipo de muestra.
Al acabar la prctica, se deben lavar bien las manos.
SIEMBRA EN CAMADA DEL MICROORGANISMO PROBLEMA
Tomamos con una jeringa una pequea cantidad de suero fisiolgico estril (2-5 ml) y lo
vertemos en un tubo de ensayo.
A partir de la placa problema, que contiene colonias del microrganismo cuya sensibilidad a
los antibiticos queremos determinar, tomamos una muestra superficial de una sola
colonia con un asa de siembra.
Introducimos el asa de siembra con la muestra en el tubo y agitamos el asa para realizar
una suspensin de las bacterias en el suero fisiolgico. Al acabar echamos al contenedor de
residuos el asa de siembra.
91
UAP
Introducimos una torunda estril en el tubo y se pasa muy suavemente por la superficie de
una placa agar-sangre nueva. En esta ocasin realizaremos una siembra en csped, es
decir, por toda la superficie de la placa, para conseguir que crezca bacterias de modo
masivo (no interesa aislar bacterias como en la prctica del frotis farngeo). Es importante
que la siembra sea superficial, sin profundizar en el medio de cultivo.
Se tapa la placa y se rotula indicando en el nombre, grupo y fecha y marcando con una A la
tapa (antibiograma)
COLOCACIN DE LOS DISCOS DE ANTIBITICO
Tomamos ahora con las pinzas o aguja N 21 (previamente se ha incinerado a la llama de
un mechero) nunca con las manos- un disco (monodisco) de cada uno de los
antibiticos que se facilitan (cada disco es un papel de filtro que contiene una suspensin
de uno o varios antibiticos a la concentracin teraputica).
Se deposita el disco suavemente sobre la placa, sin tocar con la superficie con las pinzas
(no suceder esto si lo hace con una aguja, solo debe esperar que el monodisco se adhiera
al medio). Es muy importante que el disco contacte con el medio de cultivo en un nico
sitio (si cae en otro sitio dejarlo ah) flamear la aguja.
Realizamos la misma operacin con los otros cinco antibiticos, colocando los nuevos
discos separados de los anteriores, formando un hexgono.
Evitar que en la placa, donde se realiza el antibiograma, colocar demasiados monodiscos,
debido que los halos de inhibicin del crecimiento bactriano se entrecruzarn y no podr
hacer una buena lectura.
C
C
l
R
f
P
S
t
T
E
INCUBACIN Y OBSERVACIN:
Se llevan las placas a incubar a 37C (temperatura corporal), durante 18 a 24 horas.
Luego de este perodo se recogen las placas y SIN ABRIR se observa el crecimiento
bacteriano.
92
UAP
MEDICIN DEL HALO DE INHIBICIN

Por la parte posterior de la placa incubada se medir el dimetro de los halos de inhibicin
que se han formado alrededor de los discos de antibitico a los que la bacteria problema
es sensible.
Anota los datos en la representacin (en la tabla anexa), indicando con un nmero del 1 al
6, el antibitico colocado en el disco y dibujando la presencia o ausencia de halos y su
tamao en mm
TRASLADA LOS DATOS A LA TABLA SIGUIENTE:

DISCO
ANTIBITICO
TAMAO DEL
HALO DE
INHIBICIN
mm
SENSIBLE
INTERMEDIO
RESISTENTE
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Con ayuda de las tablas que se te proporcionan determina si la bacteria es Sensible (S),
Intermedio (I) o Resistente (R) a cada antibitico y antalo en la tabla, en las columnas
correspondientes
Mediante un antibiograma podemos establecer qu tratamiento ser el ms adecuado para el
paciente afectado por una infeccin por la bacteria que estemos estudiando.
93
UAP
Qu son los halos de inhibicin?

Alrededor de cada disco de antibitico, las bacterias sensibles a ese antibitico no habrn
podido reproducirse y, por lo tanto, no forman colonias, dejando un hueco alrededor del
disco.
Por qu se miden los halos?
No basta con ver si las bacterias han crecido o no alrededor del antibitico para saber si son
o no sensibles. Hay que saber cunto no han crecido. Solo si el halo de inhibicin es
suficientemente grande, usando el antibitico a la CONCENTRACIN TERAPUTICA
la que el antibitico puede alcanzar en el lugar de la infeccin sin que se produzcan efectos
txicos o secundarios- se dice que la bacteria es sensible al antibitico. Por eso se mide el
efecto y se consultan las tablas.
CUESTIONARIO
1 Los antibiticos son sustancias de origen natural, producidas por bacterias y hongos, que
impiden el crecimiento o la reproduccin bacteriana. Es til emplear antibiticos contra la
gripe? Por qu?
2 Qu es y qu indica la presencia de un halo de inhibicin?
3 En nuestro intestino grueso existen bacterias: es lo que se conoce como flora intestinal.
Por qu son beneficiosas estas bacterias para nuestro organismo?
4 Qu ocurrira si empleramos un antibitico de amplio espectro es decir, que acta
contra un conjunto muy variado de bacterias- teniendo en cuenta lo contestado en la
pregunta anterior?
5 Uno de los problemas sanitarios ms graves en la actualidad es la aparicin de cepas
bacterianas resistentes a los antibiticos existentes. Esto se debe a la gran capacidad de
94
UAP
mutacin de las bacterias y a la costumbre de no cumplir los tratamientos con antibiticos

(5 das, generalmente) y suspenderlos cuando se nota cierta mejora. Podras explicar por
qu esta conducta puede provocar la aparicin de resistencias?
6. Investigar sobre la lectura de los dimetros de los halos de inhibicin del crecimiento
bacteriano e interprtelos
BIBLIOGRAFA UTILIZADA PARA EL DESARROLLO DE LAS PRCTICAS
95
UAP
PRCTICA N 11
MTODO DE CULTIVO Y DESCRIPCIN MORFOLGICA DE HONGOS
OBJETIVO
Que el alumno aprenda las tcnicas de cultivo y manipulacin de diferentes tipos de hongos.
Que el estudiante conozca las principales caractersticas morfolgicas de los hongos
(microscpicas y macroscpicas) de los hongos.
INTRODUCCIN
Los hongos son organismo eucarioticos de mayor tamao que las bacterias se caracterizan por
carecer de movimiento y no realizar la fotosntesis, es decir son organismos hetertrofos.
A ser organismos hetertrofos dependen de nutrientes orgnicos que son solubilizados
diferentes enzimas especficas y son absorbidos a travs de su pared celular y membrana
plasmtica. Por el nmero de clulas los hongos son unicelulares (levaduriformes) y
pluricelulares (filamentosos: mohos), algunos hongos presentan las dos formas, es decir, son
dimrficos generalmente este tipo de hongos son patgenos, para que sean dimorficos va a
depender de las condiciones ambientales como son nutrientes y temperatura.
Los hongos levaduriformes presentan una forma oval o esfrica, ampliamente distribuida en la
naturaleza, frecuentemente se encuentran en la superficie de algunas frutos y hojas (superficie
polvosa). Las levaduras se reproducen asexualmente por gemacin donde a partir de la clula
madre brota una protuberancia o yema que posteriormente se separa de la clula madre.
El cuerpo o estructura vegetativa propia de los hongos filamentosos mohos se denomina talo
que est constituido de hifas y al conjunto de hifas se le denomina micelio.
El mecanismo de reproduccin de los hongos es asexual donde las hifas vegetativas se
fragmentan o por la produccin de esporas en las estructuras de nominadas conidiforos y
esporangiosporas. Los hongos presentas estructuras de reproduccin sexual y sirve para
clasificar algunos hongos en 3 subdivisiones o phylum: Zygomicota, Ascomycota y
Basidiomycota.
Del total de hongos estudiados solo se conocen 150 especies patgenas para el humano pero
tambin hay hongos que causan patologas en plantas y animales. Los hongos tienen gran
importancia en el desarrollo de la vida, sobre todo en el proceso de degradacin de materia
orgnica (biorremediacin), produccin de: bebidas alcohlicas, medicamentos (penicilina),
cura de quesos, alimentacin, controladores biolgicos (bioinsecticida), adems es de
96
UAP
importancia en la asimilacin de nutrientes por la planta al formar las micorrizas que es la

asociacin de hongos con las races de las plantas.
MATERIALES:
4 placas Petri con 25 ml de PDA
4 placas Petri con 25 ml de medio Czapek Dox
3 tubos de cultivo inclinados con 7 ml de PDA
3 matraces Erlenmeyer de 250
1 probeta de 100 ml
1 vaso de precipitacin de 100 ml
1 mechero
5 portaobjetos y cubreobjetos
1 aguja de diseccin
1 asa de siembra
Cinta adhesiva transparente
Microscopio ptico de campo claro
Aceite de inmersin
Autoclave
Incubadora a 30C
Azul de lactofenol
PROCEDIMIENTO
Se proporcionara tubos de cultivo con Aspergillus niger, Penicillum chrysogenum, Rhizopus
oligosporum, Trichoderma viride y de levadura Saccharomyce cerevisiae.
El alumno inocular cada una de las cepas en las placas Petri con dos medios de cultivo: a)
Czapk Dox a base de sales y sacarosa y b) Agar Papa Dextrosa (PDA), que es un medio
complejo.
Para la descripcin macroscpica de cada especie en los dos medios de cultivo y la
observacin microscpica la realizar aplicando la tcnica de cinta Scotch con azul de
lactofenol.
SIEMBRA DE HONGOS:
1. Para la siembra de hongos filamentosos, se deber separar una parte del micelio de los
tubos de cultivo con aguja de diseccin, previamente calentada en la llama del mechero y
fra.
97
UAP
2. Colocar el micelio en el cetro de una placa Petri con PDA y de la misma manera inoculara
la caja con medio de Czapek Dox.
3. Las levaduras se inocularn por estra cruzada sobre la superficie de las placas, en forma
semejante a la realizada para la siembra de bacterias.
4. Colocar las placas envueltas en papel o bosas de plstico en forma invertidas dentro de una
incubadora a 28 30C durante 3 a 5 das.
DESCRIPCIN MACROSCPICA DE LEVADURAS Y MOHOS
1. Hacer la descripcin de la forma, tamao y aspecto, textura y color de las colonias de
Saccharomyse cerevisiae.
2. En los cultivos de mohos (hongos filamentosos) describir la forma, tamao y el tipo de
colonia, s como las caractersticas del micelio (algodonoso, aterciopelado, velloso, areo o
pegado al medio) el color del micelio, el color de esporas, cambios en el medio de cultivo
etc.
DESCRIPCIN MICROSCPICAS DE LEVADURAS
1. De las colonias de levaduras preparar un frotis fijado al calor y teirlo con azul de
metileno.
2. Hacer observaciones al microscopio con objetivo 40x y 100x.
Descripcin microscpica de mohos en montaje con cinta adhesiva
1. Se corta una cinta de 4 5 cm de cinta adhesiva transparente tomndola slo por los
extremos.
2. Cerca del mechero se abre la placa Petri y se presiona ligeramente la cinta adhesiva
transparente sobre la periferia de la colonia.
3. Colocar la cinta con la muestra adherida sobre la una gota de azul de lactofenol,
previamente colocada en el centro del portaobjeto (lmina). La cinta adhesiva
transparente har como si fuera el cubreobjetos (laminilla) por lo que deber presionar
evitando la formacin de burbujas, sin alterar demasiado la estructura.
4. Dejar reposar durante 3 5 minutos y hacer las observaciones en el microscopio con los
objetivos de 10x y 40x.
5. Localizar en las preparaciones hifas, estructuras especiales como conidiforos, conidios,
esporagioforos, esporangios y rizoides. Determine si las hifas presentan septos o no.
RESULTADOS
A. Reportar sus observaciones en el cuadro. Hacer los dibujos de las observaciones
morfolgicas de cada uno de los microorganismos y colorearlos.
98
UAP
B. Comparar las observaciones realizadas con los esquemas de la figura

C. Investigar en la bibliografa como se clasifican los hongos observados en la prctica.
Asperguillus niger
Saccharomyce
cerevisiea
Penicillum
Rhizopus
Descripcin
macroscpica
en
PDA
Color y tamao:
Aspecto:
Textura:
Descripcin
microscpica
en
PDA
Aumento Total:
Micelio con o sin
septos
Tamao:
Estructuras
de
reproduccin:
Clasificacin
(phylum):
99
UAP
CUESTIONARIO
1. Cules son las principales estructuras caractersticas de mohos y levaduras?
2. Elaborar un cuadro comparativo de caractersticas morfolgicas, nutricionales y
sensibilidad a antibiticos de hongos y bacterias. Mencione las diferencias que hay entre
las esporas de hongos y las esporas de bacterias.
3. Mencione y explique, brevemente, 4 problemas patolgicos causados por los hongos y 4
beneficios que tienen los hongos en el desarrollo de las actividades humanas y biolgicas.
BIBLIOGRAFIA
100
UAP
PRCTICA N 11
EXAMEN DE HECES APLICADO AL DIAGNOSTICO DE LA PARASITOSIS
INTESTINAL
Objetivo:
Este examen tiene importancia por la frecuencia en nuestro pas de las afecciones
parasitarias intestinales que producen enfermedad. El diagnstico se confirma nicamente
por los hallazgos parasitolgicos en el examen de heces. Todo tratamiento debe ser seguido
por el examen de heces a fin de confirmar, la desaparicin de los parsitos.
Material y mtodos:
El mtodo y material a usarse depende de las facilidades del laboratorio, del tipo de paciente
(hospitalizado, ambulatorio, de zona rural), del tipo de la muestra, de su consistencia y del
tipo de parasitismo a investigarse.
1. Recomendaciones para la obtencin de la muestra
a) Defecar en bacn u otro recipiente limpio y seco, no debe mezclarse con la orina.
b) Coger con un palito limpio una parte de las heces (sera conveniente que se coja de
diversos lugares) y colocarlo dentro del frasco de boca ancha (o frasco colector). Si la
deposicin es lquida se vierte parte de la misma en el frasco.
c) Eliminar el palito y lavarse las manos con agua y abundante jabn.
d) Llevar el frasco lo mas pronto posible al laboratorio (no debe transcurrir mas de media
hora) y es suficiente mantenerlo a la temperatura del bolsillo
Nota: el numero de muestras que se recomienda examinar por paciente vara de 3 a 6
da de por medio, por los periodos de negatividad, cantidad y calidad de quistes y
huevos de los parsitos.
2. OTRAS RECOMENDACIONES
Si el paciente est haciendo deposiciones lquidas, diarreicas o disentricas debe ser
remitidos al laboratorio inmediatamente despus de ser evacuadas y recomendar su
examen inmediato.
Sustancias fijadoras: en algunos casos las muestras deben ser fijadas por sustancias
preservadoras. El formol salino (950 cc de agua destilada, 50 cc de formol comercial y
5 gr de NaCl) es uno de los fijadores ms usados para quistes y huevos de parsitos.
Otro fijador muy utilizado es el alcohol polivinlico. Debe recordarse que para que
halla una buena fijacin debe disolverse bien la muestra en cualquiera de los fijadores
101
UAP
usados. Se utilizan para remitir muestras de sitios apartados en las encuestas o en casos
clnicos que as lo requieran.
No debe practicarse examen de heces en pacientes que hallan ingerido sales de bario,
bismuto (despus de radiografas del tubo digestivo) purgantes oleaginosos, vaselina,
etc. que impida realizar un buen anlisis. Deben esperarse 3 das para efectuar examen
en estos pacientes.
Identificacin y solicitud de la muestra. El frasco tiene adherido un papel donde se

colocarn el nombre completo, la edad, la direccin del paciente, hora y fecha en que
se evacan las heces.
3. TIPOS DE MUESTRAS
a) Muestra de heces evacuada espontneamente
b) Muestra de heces obtenida por purgantes y enemas salinos.
c) Muestras obtenidas por cucharilla rectal u otros procedimientos usados en lactantes o
nios pequeos.
d) Muestras obtenidas por rectosogmoidoscopa.
4. CONSISTENCIA DE LAS MUESTRAS
Pueden ser disentricas, diarreicas o lquidas y pastosas o formadas. Se llama muestra
disentrica aquella generalmente suelta que consiste en sangre y moco.
Cules son las caractersticas de las heces normales en: cantidad, color, olor, y nmero de
evacuaciones? A qu se debe el olor y el color de las heces normales?.
5. EXAMEN DE LAS MUESTRAS EN EL LABORATORIO
Las muestras en el laboratorio deben ser examinadas inmediatamente dando preferencia a
las muestras disentricas y/o diarreicas, por la labilidad que tienen los trofozotos de
protozoarios que pudieran contener estas muestras. Los pasos que se siguen en el
laboratorio son los siguientes:
5.1 Examen macroscpico: Este examen debe practicarse en toda muestra, pues permite
adems anotar la consistencia de la muestra, encontrar parsitos adultos que son
eliminados espontneamente y/o en forma provocada (Ascaris lumbricoides,
Enterobius vermicolaris, progltidos de tenias, etc.).
Estos parsitos en caso de ser observados por el paciente, el mdico o la enfermera,
deben ser remitidos al laboratorio para su identificacin. Si el laboratorio queda cerca,
es suficiente hacerlo en agua; si queda distante en formol al 10% (los progltidos de
tenias) y en alcohol al 70% (los nematodos).
102
UAP
5.2 Examen microscpico:

5.2.1. Directo:
a) El examen directo de la muestra y/o con suero fisiolgico sirve de
orientacin para observar trofozotos protozoarios y larvas de helmintos
movimiento. Se realiza en todas las muestras y es indispensable en las
muestras disentricas y/o diarreicas.
b) El examen directo coloreado con solucin yodada (lugol) o MIF se, utiliza
para la orientacin y bsqueda de huevos y quistes de parsitos.
5.2.2. Mtodos de enriquecimiento:
Pueden dividirse en mtodos de:
Centrifugacin,
Flotacin,
Sedimentacin o
Combinados.
Utilizando diversas sustancias. Sealaremos algunos de los mtodos:
A. MTODO DE TELEMAN
Es eficaz, rpido y de bajo costo.
Material:
Vasos (plstico o vidrio descartables)
Tubos de centrfuga
Colador o malla
ter
Formol salino
Palitos baja lengua
Tapones de jebe
Pipetas
Muestras de heces.
Procedimiento
1. Disolver la muestra con formol salino en un vaso. Debe evitase una
consistencia espesa
2. Se pasa a travs de un colador a otro vaso
3. Se vaca en tubo de centrfuga hasta sus partes
103
UAP
4. Se aade 1 cc de ter.
5. Se coloca un tapn de jebe y se agita por inversin.
6. Sacar cuidadosamente el tapn y centrifugarlo a 1800 rpm por cinco
minutos.
7. Sacar el tubo, vaciar el sobrenadante y extraer una gota del sedimento
con una pipeta Pasteur para colocarla entre lmina y laminilla con una
gota de lugol y observar al microscopio
EXPLIQUE: .Por qu se emplea ter?
B. MTODO DE FAUST
Material:
Vasos correintes
Tubos de centrfuga
Malla o colador.
Palitos baja lengua.
Sulfato de zinc al 33% (D= 1.0180)
Procedimiento:
1. Diluir la muestra con agua en un vaso.
2. Vaciar a travs de un colador a otro vaso.
3. Vaciar a un tubo de centrfuga hasta sus partes.
4. Centrifugar a 2,500 rpm durante un minuto.
5. Si el sobrenadante no est claro vaciarlo, aadir agua, remover el
sedimento, agitar, centrifugar. Repetir esta operacin hasta que el
sobrenadante quede claro.
6. Vaciar el sobrenadante, aadir un poco de sulfato de zinc al 33%,
remover el sedimento.
7. Centrifugar a 2,500 rpm durante un minuto.
8. Observar la pelcula que se ha formado en la superficie. Tomar con una
pipeta na muestra de la misma y haga una preparacin entre lmina y
laminilla con lugol.
Por qu se emplea sulfato de zinc al 33% en esta tcnica?
C) MTODO DE BAERMAN MODIFICADO EN COPA.
Material:
Copa cnica,
104
UAP
Colador o malla pequea,

Gasa,
Suero fisiolgico a 37C
Procedimiento
l. Colocar suero fisiolgico calentado a 37C en la copa.
2. Tomar 4 5 gr de heces y envolverlos en una gasa y colocara dentro
del colador.
3. Introducir el colador en una copa hasta que su borde inferior sea
cubierto, en algunos milmetros, por el suero fisiolgico.
4. Poner la copa en estufa a 37C durante media hora.
5. Tomar una muestra del sedimento con pipeta Pasteur y colocarla en una
lmina.
Esta tcnica se emplea, para concentrar trofozotos de Balantidium coli,
Trichomona hominis, y larvas de Strongyloides stercoralis.
6. MTODO DE GRAHAM (cinta scotch)
Para preparar el material a aplicarse, se coloca un trozo de la cinta adhesiva a una lmina
portaobjeto. Para obtener xito el mtodo, debe aplicarse en la maana antes del aseo.
PROCEDIMIENTO
1. Se despega la cinta adhesiva de tal manera que ella cubra por su superficie lisa el dedo
ndice de la mano derecha, quedando expuesta la parte adhesiva le la misma.
2 Con la mano izquierda se expone el ano separando los glteos.
3. Se aplica la cinta en la regin perianal, se retira y se adhiere a la lmina portaobjeto.
4. Se etiqueta y se observa al microscopio.
7. MTODO DE RECUENTO DE HUEVOS DE HELMINTOS EN HECES
No es suficiente el informe de huevos de Ancylostoma y/o Necator, Ascaris y de otros
helmintos por cualquiera de los mtodos sealados; tnto desde el puto de vista
epidemiolgico, clnico y de evaluacin de tratamiento es necesario medir el grado de
infeccin de las personas, lo que se logra con el recuento de huevos en heces; los mtodos
ms utilizados son los de STOLL y el de FERREIRA.
MTODO DE STOLL:
Se utiliza para la estimacin cuantitativa de huevos existentes en una muestra previamente
pesada de materias fecales.
105
UAP
PROCEDIMIENTO
Se pesan 4 gr de muestra fecal y se coloca en un pequeo frasco de erlenmeyer o en tubo
grande de ensayo que tenga una marco de 60 cc y se pone dilucin decinormal de soda
caustica hasta la marca; se introducen algunas pequeas cuentas de vidrio, se tapa el
recipiente con tapn de goma y se agita el contenido hasta que la materia fecal se descarga
por completo.
Si la muestra es materia fecal dura deber dejarse en el lquido durante toda la noche, para
facilitar su desintegracin. Una vez lograda esta mezcla se agita para hacerla homognea;
se toma 0.15 cc de la suspensin por medio de una pipeta capilar y llevar al portaobjetos y
cubrindola con una laminilla de 220X 40 mm.
Se cuentan los huevos en esta porcin de la muestra y el nmero total se multiplica por 100
para obtener el nmero de huevos por gramo de materia fecal.
La cantidad de huevos expulsados diariamente se obtiene multiplicando el nmero de
huevos por gramo por el peso total de las materias fecales evacuadas en 24 horas.
Este clculo tiene una aproximacin de 10 a 20%. El nmero de huevos por gramo vara
con: la consistencia de las heces, el nmero de gusanos infectantes y con la duracin de la
infeccin.
8. MTODO DE COLORACIN
Las preparaciones permanentes se emplean para suplementar a las preparaciones frescas.
Las preparaciones, de frotis son las que se usan ms frecuentemente, mientras que las
preparaciones de secciones son indispensables para estadios extensivos de los protozoos.
Se utilizan las tcnicas de Hematoxilina o la del PVA.
PROCEDIMIENTO:
1. Preparaciones de frotis
Se hacen sobre lminas o laminillas. Pero sobre la laminilla se fijan de una manera ms
adecuada y requiere pequea cantidad de reactivos. Los protozoos libres as no se
adhieren al cristal debido a la poca cantidad de sustancia albuminoide en el lquido de
cultivo, lo cual se corrige agregando en el dedo una pequea pelcula de clara d huevo
fresco emulsionado en agua destilada estril. La preparacin debe dejarse
horizontalmente por 5 a 10 minutos o ms.
En el caso de protozoos parsitos que viven en sustancias ricas en albunoides, por lo
tanto se adhieren fcilmente a la laminilla. No debe dejarse que el frotis se seque
excepto una zona marginal estrecha.
106
UAP
2. Coloracin por la hematoxilina frrica de Heindenhain:

2.1 Preparacin del frotis:
a) Distribuir la muestra en forma homognea sobre una laminilla.
b) El frotis hecho rpidamente para evitar la desecacin prolongada debe ser
puesto en contacto con el fijador de Shaudin durante 15 minutos.
c) Sacar los frotises a una solucin de alcohol yodado durante 5 minutos para
eliminar el exceso de bicloruro de mercurio.
d) Pasar los frotis a alcohol de 70% donde podrn mantenerse por largo tiempo
hasta el momento de la coloracin.
2.2 Coloracin:
1. Lavar en agua corriente
3 minutos
2. Mordiente (alumbre frrico al 4%)
15 minutos
3. Agua corriente
3 minutos
4. Coloracin Hematoxilina
10 minutos
5. Agua corriente
3 minutos
6. Diferenciador (alumbre frrico al 0.25%)
2 5 minutos
7. Agua corriente
3 minutos
8. Alcohol de 50 70 95% y absoluto respectivamente cada uno

9. Xilol
3 minutos
3 minutos
10. Montar en Blsamo de Canad y observar en inmersin.

9. MTODOS DE CULTIVO
Algunas veces las muestras de heces pueden ser cultivadas en medios apropiados para el
mantenimiento y desarrollo de Protozoarios. El medio ms utilizado por nosotros es el
medio Monofsico de Lumbreras, el que por su sencillez de preparacin y su fcil
manejo puede ser aplicado. Sirve adems para cultivar trozos de tejidos procedentes de
biopsia o de autopsia en los que se sospecha de Amebiasis o Balantidiasis.
MEDIO DE LUMBRERAS:
Pesar en un frasco:
Cloruro de sodio
0.765 gr.
Cloruro de potasio
0.0225 gr.
Bicarbonato de sodio
0.018 gr.
Cloruro de calcio
0.027 gr
Suero de caballo
0.120 gr
107
UAP
Adicionar 6 cc de clara de huevo de gallina y se completa hasta 109 cc con agua destilada.
Cuando no se use, debe guardarse a baja temperatura. Para hacer la siembra se colocan 2 cc
del medio en tubos de 10 X 100 y se agrega 0.3 cc de solucin de almidn de arroz (1 gr de
almidn de arroz disuelto en 100 cc de agua destilada).
COPROCULTIVO DE STRONGYLOIDES.
Se realiza en el laboratorio con dos fines fundamentales:
Diagnostico
Disponer de material de experimentacin para las infecciones experimentales.
En el caso de anquilostomiasis, puede ocurrir que el nmero de huevos en las heces sean
tan escasos, que hagan difcil su hallazgo en los exmenes coproparasitolgicos corrientes.
Este coprocultivo permite la eclosin de las larvas de los mismos y la concentracin de
dichas larvas, consiguiendo as el diagnstico positivo de dbiles infecciones, cuya
deteccin escapara al examen coproparasitolgico ordinario.
MTODO DE LOOS:
Consiste en mesclar una porcin de la materia fecal en estudio con polvo de carbn animal
o vegetal o con arena con tierra previamente esterilizada, hasta formar una pasta
homognea. Esta pasta se obtiene sobre varias hojas de papel de filtro o de papel secante
depositadas en el fondo de una caja Petri, se agrega agua hasta formar un ambiente
hmedo; se tapa y se coloca a una temperatura adecuada. Las larvas pueden ser estudiadas
desde larvas rabditoides hasta filariformes. Estas larvas filariformes se acumulan en las
gotas de agua de condensacin que se depositan en las tapas de las cajas Petri, de donde
pueden ser recogidas con una pipeta capilar para su reconocimiento e estudio.
108
UAP
PRINCIPALES NEMATODOS PARSITOS DE LA ESPECIE HUMANA

NOMBRE
COMN
NOMBRE
CIENTFICO
ENFERMEDAD
SNTOMAS DE LA
ENFERMEDAD
FORMA DE
INFECCIN
Anquilostoma Necator
americanus y
Ancylostoma
duodenale
Anquilostomiasis o Anemia, dolor

Contacto con las
uncinariasis
abdominal, diarrea y
larvas
trastornos del desarrollo
en los nios
Oxiuro
Enterobius
vermicularis
Enterobiasis u
oxiuriasis
Trastornos intestinales
Lombriz
intestinal
Ascaris
lumbricoides
Ascariasis
Molestias abdominales,
reacciones alrgicas y
bloqueo intestinal
Triquina
Trichinella
spiralis
Triquinosis
Filaria
Wuchereria
bancrofti y
otras especies
Filariasis
Ingestin de agua y
alimentos
contaminados
Ingestin de los
huevos en
alimentos
contaminados
Dolor abdominal, edema Ingestin de carne
facial y espasmos
de cerdo
musculares
contaminada
Inflamacin de vasos
linfticos y elefantiasis
Picadura de un
insecto con
microfilarias
109
UAP
FORMA EVOLUTIVA DE ALGUNOS PARSITOS INTESTINALES
Huevo de Enterobius vermicularis
Huevo de Hyminolepis nana
Huevo de Trichuris trichura
Huevo de Ascaris lumbricoides
REALICE EL PROCEDIMIENTO DE UN ANLISIS COPRO - PARASITOLGICO

Y LA PRUEBA DE GRAHAM
COPRO PARSITOLGICO:
110
UAP
PRUEBA DE GRAHAM:
OBSERVACIONES MICROSCOPICAS
Muestra biolgica:
Observacin:
Coloracin:
Objetivo:
Aumento:
Muestra biolgica:
Observacin:
Coloracin:
Objetivo:
Aumento:
Muestra biolgica:
Observacin:
Coloracin:
Objetivo:
Aumento:
111
UAP
Muestra biolgica:
Observacin:
Coloracin:
Objetivo:
Aumento:
Muestra biolgica:
Observacin:
Coloracin:
Objetivo:
Aumento:
Muestra biolgica:
Observacin:
Coloracin:
Objetivo:
Aumento:
112
UAP
GLOSARIO DE TRMINOS PARASITOLGICOS
AGENTE ETIOLOGICO: Factor o elemento de naturaleza viva o inerte, que inicia o

perpeta un proceso morboso.
AGENTE INFECCIOSO: Organismo (bacteriano, rickettsioso, viral, mictico, protozoario
o helmntico) capaz de producir una infeccin o una enfermedad infecciosa.
ANTROPOFILIA: Apetencia selectiva de ciertos artrpodos por la sangre humana. (Ej.:
Pediculus capitis).
ARACNIDO: Artrpodo con 4 pares de patas.
ARTROPODOS: Invertebrado con patas articuladas y esqueleto quitinoso.
AXOSTILO: Estructura rgida de posicin axial que constituye el sostn de algunos
protozoos flagelados.
BIOTOPO: Lugar o rea donde vive una especie. Est caracterizado por factores del suelo,
climticos y biolgicos.
BOTRIUM: Surco longitudinal que sirve como elemento de fijacin en el esclex de
cestodos seudofilideos. Plural: botria.
CALCIFICACION METASTASICA: Calcificacin patolgica que se produce en tejido
necrosado.
CICLO EVOLUTIVO: Etapas secuenciales del desarrollo de un parsito. Si existen fases
sexuales, comprende desde el cigoto hasta la generacin de gametos, o desde el huevo hasta el
estado adulto.
CICLO DE TRANSMISION: Etapas por las cuales pasa un parsito desde el husped
infectado hasta un husped susceptible.
COLONIA: Grupo de organismos unicelulares que viven en asociacin, a menudo derivado
de una sola clula.
COMENSALISMO: Relacin simbitica en la cual una especie, el comensal, vive a
expensas de otra especie, el hospedero, sin ocasionarle ningn dao.
CONTAMINACION: Presencia de agentes infecciosos en objetos (ropa, instrumentos,
juguetes), sustancias inanimadas (agua, leche, alimentos) o en la superficie de organismos
vivos.
CRUSTCEO: Artrpodo con 5 pares de patas.
CTENIDIO: Peine caracterstico de la cabeza y porcin anterior del trax en las pulgas.
113
UAP
CONTACTO: Individuo (humano o animal) que ha estado en asociacin con un individuo

infectado, teniendo la oportunidad de adquirir la infeccin.
CONTAGIO: Transferencia directa del agente infeccioso desde la fuente de infeccin al
nuevo husped.
CONTROL: Conjunto de medidas para reducir la prevalencia o incidencia de una
enfermedad o infeccin.
DEPOSICION: Evacuacin intestinal.
DEYECCION: Descarga o deposicin de materias excrementicias, especialmente fecales.
DIARREA: Eliminacin de deposiciones con mayor contenido de agua que lo normal
(contenido normal de agua: 85%).
DISENTERIA: Evacuacin frecuente de deposiciones, generalmente en escasa cantidad las
cuales contienen sangre y mucosidades. Por lo general traduce inflamacin del colon y se
acompaa de dolor abdominal, pujo y tenesmo.
ECTOPARASITO: Parsito que vive en la superficie externa del hospedero.
EMBRIOFORO: Cubierta que rodea a la oncsfera de los platelmintos.
ENDOPARASITO: Parsito que vive en el interior del hospedero.
ENFERMEDAD: Conjunto de fenmenos que se producen en un organismo a consecuencia
de la accin de una causa patgena, reaccionando contra ella.
ESCOLEX: rgano de fijacin o "cabeza" de un cestodo.
ESTROBILA: Conjunto de progltidas de un cestodo.
EXUVIA: Muda resultante de las ecdisis.
ECOLOGIA: Estudio de las relaciones recprocas entre los organismos y las regiones donde
viven.
EMBRIOFORO: Membrana (s) que envuelve (n) al estado embrionario de los cestodos
(oncosfra), cuyo conjunto constituye el huevo.
ENCUESTA: Conjunto de acciones destinadas a lograr una informacin sobre un objetivo
determinado.
ENCUESTA EPIDEMIOLOGICA: Conjunto de mtodos usados para obtener datos que
sirvan para caracterizar un fenmeno en una comunidad. Orienta y permite obtener
informacin sobre la prevalencia de casos clnicos, portadores, contactos y susceptibles, o
bien, sobre el factor o factores causales o vinculables al proceso que se investiga.
ENDEMIA: Prevalencia elevada y mantenida de una enfermedad humana determinada dentro
de un rea geogrfica.
114
UAP
ENZOOTIA: Prevalencia elevada y mantenida de una enfermedad animal determinada

dentro de un rea geogrfica.
EPIDEMIA: Produccin, en una comunidad o regin, de casos similares en un determinado
perodo, en nmero claramente superior a la frecuencia habitual y derivados de una fuente
comn o por diseminacin.
EPIZOOTIA: Lo mismo que epidemia, pero referido a animales.
ESPOROGONIA: Fase de reproduccin sexuada de los esporozotos.
ESPOROZOO: Protozoo parsito que se reproduce por esporogonia.
ESPOROZOITO: Elemento resultante de la esporogonia de los esporozoos.
ESQUIZOGONIA: Ciclo de reproduccin asexuada de los esporozoos.
ESQUIZONTE: Elemento resultante del ciclo esquizognico.
ESTROBILA: Conjunto total de progltidas que constituyen el cuerpo de un cestodo.
ESTENOXENO: Cuando los parsitos en algunas fases evolutivas, presenta una especificad
estricta para el hospedador correspondiente; los hematozoarios del paludismo son estenoxenos
durante su fase asexuada o esquizognica en la que son parsitos exclusivamente del hombre.
EURIXENOS: Cuando la especificidad del parsito es muy dbil y pueden alojarse en
variados tipos de hospedador, la Tenia equinococo en su fase de larva o hidtide parasita al
hombre, bovino, ovinos, quidos, suidos etc.
EXCRETAS: Productos de desperdicios lquidos y slidos procedentes de seres humanos y
de animales.
FOMITE: Objeto (agua, aire, toalla, etc.) que contiene elementos infectantes y pasivamente
puede ser vehculo mecnico en su transmisin indirecta.
FORMA INFECTANTE: Fase del parsito capaz de infectar el husped.
FRECUENCIA: Nmero de veces que se ha verificado o registrado un suceso o una
caracterstica determinada en una poblacin.
FUENTE DE INFECCION: Persona, animal, vegetal o sustancia desde la cual el agente
infeccioso pasa al husped.
FASE CRNICA: Es la fase que sigue a la fase aguda, se caracteriza por la disminucin de
los sntomas clnicos y existe un equilibrio relativo entre el hospedador y el agente infeccioso.
GAMETOGONIA: proceso de reproduccin sexuada de los esporozoos.
GEOHELMINTIASIS: Infecciones trasmitidas por helmintos que requieren del suelo y
ciertas condiciones ambientales favorables para llegar a ser infectantes.
HABITAT: Lugar donde en forma natural vive un ser biolgico.
115
UAP
HECES: Materias fecales.

HELMINTO: Nombre genrico de los vermes parsitos y que abarca acantocfalos,
nematodos, cestodos y trematodos.
HETEROXENO: cuando el parsito necesita ms de un hospedador para completar su ciclo
biolgico, se denomina hospedador definitivo en el que alberga la forma adulta o sexuada del
parsito y hospedador intermediario al que sirve de alojamiento a las formas larvarias o
asexuadas del parsito. Diheteroxeno: Cuando precisan de un hospedador intermediario y
uno definitivo ejem. Taenia saginata. Poliheteroxeno: cundo necesitan ms de dos
hospedadores intermediarios y uno definitivo ejem. Dyphyllobotrium pacificum.
HUESPED HOSPEDERO - HOSPEDADOR: Persona o animal que alberga a un agente o
comensal. Tambin suelen utilizarse los trminos hospedador, hospedero y mesonero.
HUESPED HOSPEDERO - HOSPEDADOR DEFINITIVO: Hospedero en el cual el
parsito alcanza su madurez sexual.
HUESPED HOSPEDERO - HOSPEDADOR INTERMEDIARIO: Hospedero en el cual
el parsito desarrolla parte de su ciclo evolutivo, sin alcanzar su madurez sexual.
IMAGO: Artrpodo adulto. Se usa especialmente en el caso de insectos.
INCIDENCIA: Nmero de casos nuevos de una enfermedad que se presentan durante un
perodo determinado, en relacin con la poblacin donde ocurren. Generalmente se expresa en
forma de tasa.
ICTIOFAGO: Animal que se alimenta de peces.
INFECCION: Entrada y desarrollo o multiplicacin de un agente infeccioso en el organismo
de una persona o animal.
INFESTACION: Alojamiento, desarrollo y reproduccin de artrpodos en la superficie del
cuerpo, pelos, ropas objetos e incluso ambientes. Se emplea tambin en el caso de roedores.
INSECTO: Artrpodo con 3 pares de patas.
INESPECIFICIDAD. Porcentaje de casos en que la reaccin resulta falsamente positiva
INSECTICIDA: Sustancia qumica, natural o sinttica, utilizada en el exterminio de
artrpodos. Se puede aplicar en forma de polvo, lquido, pulverizado, o aerosol.
INTRADERMORREACCION: Reaccin inmunodiagnstica que consiste en inyectar en las
capas superficiales de la piel del antebrazo del paciente un antgeno. Existe una
intradermorreaccin precoz que se lee habitualmente a los 30 minutos y una tarda cuya
lectura se efecta por lo general a las 24 horas.
LARVA: Forma inmadura en el ciclo evolutivo de helmintos y artrpodos.
116
UAP
LIENTERIA: Diarrea que contiene alimentos sin digerir.

LETALIDAD: Relacin entre el nmero de casos mortales y el nmero total de casos de una
determinada enfermedad.
LETRINA: Instalacin para la recepcin de excretas humanas.
MECANISMO DE TRANSMISION: Las circunstancias mediante las cuales el parsito
pasa de un husped a otro.
MEROZOITO: Clula resultante del proceso de esquizogonia o divisin mltiple que
presentan algunos protozoos.
METAZOO: Animal Pluricelular.
MONOXENO: Parsito que completa su evolucin en un solo hospedador, aunque pueden
permanecer en el ambiente en forma enquistada (amibas), de huevo (Ascaris lumbricoides) o
en estado de larvario libre (Ancylostoma duodenale).
MORBILIDAD: Relacin entre el nmero de afectados de una enfermedad determinada y la
poblacin total de una zona.
MORTALIDAD: Relacin entre el nmero de muertos por todas las causas y la poblacin
total de una zona.
MUDA: (ECDISIS): Vaina o tegumento que envuelve a artrpodos y a algunos gusanos
(nematodos) y que en las etapas juveniles, de crecimiento, se desprende dando lugar a una
nueva envoltura que puede desprenderse a su vez o ser definitiva.
MUTUALISMO: Tipo de simbiosis en la cual se benefician recprocamente hospedero y
simbionte.
MYASIS: Parasitacin de rganos o tejidos humanos o animales por larvas de mosca.
NEMATELMINTO: Son gusanos de seccin redonda (algunos son parsitos).
NINFA: Estadios juveniles tanto de insectos con metamorfosis incompleta como de caros y
garrapatas.
OLIGOXENOS: Cuando la especificidad del parsito es de grado intermedio, la Tenia
equinococo durante su fase adulta o intestinal se halla slo en el carnvoro (perro, lobo, zorro,
chacal, etc.) especies distintas, pero prximos entre s (todos son carnvoros).
ONCOSFERA: Larva con seis ganchitos que emerge de los huevos de los eucestodos.
Tambin se llama hexacanto.
OOQUISTE: Forma qustica que contiene el cigoto resultante de la esporogonia en los
Apicomplexa y los cuales pueden estar cubiertos por una envoltura translcida (Isospora) o
estar desnudos (Plasmodium).
117
UAP
OOTECA: Receptculo elaborado por las hembras de algunos artrpodos en cuyo interior
depositan sus huevos (Ej.: cucarachas y araas).
OPRCULO: Cubierta o tapa de los huevos de algunos platelmintos e insectos.
PARASITO: Ser que vive a expensas de otro de distinta especie llamado husped y al cual
puede producir dao de magnitud variable.
PARASITO ACCIDENTAL: Parsito que se encuentra en un husped no habitual.
PARASITO FACULTATIVO: Es aquel que desarrolla algunos protozoarios y hongos que
viven sobre materias orgnicas en descomposicin, pero en ocasiones parasitan sobre heridas,
ulceraciones, etc.
PARASITO OBLIGADO: Es aquel que necesariamente en alguna etapa o permanentemente
ejerce su accin parasitaria.
PARASITO PERIODICO: Parsito que cumple parte de su ciclo en el ambiente y en el
husped.
PARASITO PERMANENTE: Parsito que vive toda su existencia en o sobre su hospedero.
PARASITO TEMPORAL: Parsito que intermitentemente depende de un hospedero para
subsistir y luego lo abandona.
PATOGENICIDAD: es la capacidad de un agente infeccioso de producir dao (enfermedad)
en el husped hospedador hospedero.
PERIODO PREPATENTE: Etapa de la infeccin parasitaria comprendida desde el
momento de la infeccin hasta la aparicin de la sintomatologa o la presencia del parsito.
PERIODO DE INCUBACION: Intervalo que transcurre entre la infeccin de un sujeto
susceptible (persona o animal) y el momento que presenta las primeras manifestaciones de la
respectiva enfermedad.
PESTICIDAS: Sustancias qumicas que se usan para combatir distintas plagas (Ej.:
insecticidas, rodenticidas, moluscocidas, herbicidas).
PREDADOR: Ser que ataca y destruye animales o plantas para obtener alimento;
habitualmente organismos ms pequeos y ms dbiles que constituyen su presa.
PREVALENCIA: Nmero de casos de una infeccin o enfermedad que existe en un grupo
especfico de poblacin en un momento determinado.
PREVENCION: Medidas para proteger al hombre o animales contra una enfermedad.
Pueden ser independientes de las destinadas al control.
PLANCTON: Conjunto de organismos animales y vegetales diminutos que flotan libremente
en las aguas y son el alimento de peces y otros animales acuticos.
118
UAP
PLATELMINTO: Gusano de seccin plana, todos son parsitos (excepcin planarias).

PRE MUNICIN: es un tipo especial de estado inmunitario ligado a la necesidad de la
presencia del agente infeccioso en niveles asintomticos en el husped hospedador
hospedero.
PORTADOR (INFECTADO ASINTOMATICO): Individuo que alberga un agente
infeccioso especfico, sin presentar manifestaciones de enfermedad y que puede ser fuente de
infeccin para otros individuos.
PROFILAXIS: Conjunto de medidas que llevan a la prevencin, erradicacin o control de las
enfermedades.
PROGLOTIDA: Segmento del estrbilo de los cestodos, la cual contiene los rganos
reproductores masculinos y femeninos.
PROTISTA: Agente biolgico con caracteres del reino vegetal y animal (hongos, bacterias y
virus).
PROTOZOO: Animal unicelular.
PROFILAXIS: Conjunto de medidas que sirven para prevenir o atenuar enfermedades o
dolencias, o sus complicaciones o secuelas.
PUPA: Etapa en la metamorfosis de los dpteros, caracterizada por la existencia de un pupario
en cuyo interior se producen importantes cambios que culminan con la formacin del imago o
insecto adulto.
QUISTE: Forma inmvil de resistencia y de multiplicacin, envuelta por una doble
membrana formada por los protozoos.
RESERVORIO (DE AGENTES INFECCIOSOS): Hombre, animal, planta, suelo o
materia orgnica inanimada, en los cuales el agente infeccioso vive y se multiplica, y de los
que depende principalmente para su subsistencia, de manera que pueda ser transmitido a un
husped susceptible.
RESISTENCIA: Conjunto de mecanismos que algunas especies tienen para defenderse de la
invasin o multiplicacin de agentes patgenos, o contra los efectos nocivos que pueden
causar los productos txicos, ya sea producido por stos o de otra procedencia. (Ejs.:
resistencia del hombre a algunos microorganismos; resistencia de algunos microorganismos a
antibiticos y quimioterpico; resistencia de algunos artrpodos a insecticidas).
SANEAMIENTO: Aplicacin de procedimientos especiales para procurar que los factores
del medio resulten impropios para mantener o vehiculizar agentes o causas de enfermedades.
119
UAP
SANEAMIENTO AMBIENTAL BASICO: Adecuado suministro de agua potable,

disposicin de excretas y eliminacin de basura.
SENSIBILIDAD (DE UNA REACCION INMUNODIAGNOSTICA): Porcentaje de
resultados positivos encontrados en individuos afectados por una determinada infeccin.
SEROLOGIA (REACCION): Reaccin inmunodiagnstica de laboratorio que se practica
en el suero de un sujeto sospechoso con el objeto de detectar anticuerpos y/o antgenos
producidos frente a una determinada infeccin.
SIMBIOSIS: Condicin en la cual dos seres vivos de diversas especies, habitualmente (pero
no necesariamente) viven juntos, con beneficio para uno o para ambos.
SINANTROPISMO: Caracterstica de algunos animales, que aunque pueden llevar una
existencia silvestre, viven en el interior o en las proximidades de la vivienda humana. (Ejs.:
moscas, cucarachas. ratas).
SP: Trmino usado cuando se diagnostica el gnero de un parsito y no se puede identificar la
especie.
SUSCEPTIBLE: Persona o animal que carece de resistencia contra un agente patgeno y que
en consecuencia puede contraer la enfermedad si se expone a la infeccin por dicho agente.
TROFOZOITO: Forma vegetativa activa y que se alimenta, entre los protozoos.
VECTOR: organismo animal, generalmente artrpodo, que puede transportar activamente un
agente desde la fuente infectante hasta un susceptible.
VECTOR MECANICO: Es el vector que lleva en el exterior de su cuerpo o en interior
agentes patgenos.
VIA DE INFECCION: Sitio (s) a travs de los cuales se introduce el agente etiolgico en el
organismo del husped.
XENO: Husped.
ZOONOSIS: Infeccin que se transmite en forma natural entre el hombre y animales
vertebrados y viceversa.
120
UAP
BIBLIOGRAFA
1- Aquiahualt Ramos, M. Prez Chabela, 2004. M. Manual de prcticas del laboratorio de

microbiologa. 1era edicin. Editorial Universidad Autnoma Metropolitana. Mxico.
2- Botero, D., Restrepo, M. Parasitosis Humana.2013. 5ta ed. Medelln Colombia: Fondo
CIB.
3- Brooks y Geo F. Microbiologa Mdica. 25 edicin. Mc Graw Hill.
4- Ciencias Biolgicas. 2008. Manual de Microbiologa General. Dpto. Microbiologa.
5- Instituto Nacional de Salud. Manual de procedimientos de laboratorio para el
diagnstico de parsitos intestinales del hombre. 2003. Serie de Normas Tcnicas N
37. Lima.
6- Instrumentacin Cientfico Tcnica. CULTIMED. Manual Bsica de Microbiologa.
7- Jawetz, Melnick y Adelberg. Microbiologa Mdica. 2010. 25 edicin. Editorial el
Manual Moderno.
8- Madrid, V. Manual de Parasitologa Humana. 2012. 1 ed. Chile: Universidad de
Concepcin; 2012.
9- Romero, A. Parasitologa Humana. 2011.1era edicin. Editorial: Mc Graw Hill. 2013
10- Romero, R. Microbiologa y parasitologa humana. 2007. 3 ed. Mxico: Mdica
Panamericana.
121

Alasmanuallabomicrobiologã A PDF

Transféré par

Informations du document

Titre original

Copyright

Formats disponibles

Partager ce document

Partager ou intégrer le document

Options de partage

Avez-vous trouvé ce document utile ?

Ce contenu est-il inapproprié ?

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Alasmanuallabomicrobiologã A PDF

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

UAP

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA GENERAL Y ESTOMATOLGICA

Utilizar una bata de laboratorio que deber estar siempre abrochada.

Evitar el contacto con fuentes de electricidad y de calor.

Apagar los instrumentos elctricos antes de manipular las conexiones.

Utilizar guantes y gafas de seguridad cuando se requieran. No es conveniente

No se deben guardar ni consumir alimentos y bebidas dentro del laboratorio.

DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA GENERAL Y ESTOMATOLGICA

LOS TRABAJOS EN EL LABORATORIO

1.- PARA LA REALIZACIN DE EXPEDIENTE.

2.- PARA EL REGISTRO DE LOS DATOS EXPERIMENTALES.

DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA GENERAL Y ESTOMATOLGICA

El equipamiento y el diseo del laboratorio de microbiologa contribuyen a la seguridad slo

DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA GENERAL Y ESTOMATOLGICA

1.3 EL FACTOR HUMANO EN LA PREVENCIN DE ACCIDENTES

DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA GENERAL Y ESTOMATOLGICA

1.4 ELEMENTOS DE RIESGO. HBITOS DE HIGIENE

DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA GENERAL Y ESTOMATOLGICA

Otra regla importante, considerada la segunda regla de oro de la bioseguridad es

DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA GENERAL Y ESTOMATOLGICA

CLASIFICACIN DE LOS LABORATORIOS SEGN SU NIVEL DE SEGURIDAD

DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA GENERAL Y ESTOMATOLGICA

DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA GENERAL Y ESTOMATOLGICA

al grupo 4. Un ejemplo sera Mycobacterium bovis multirresistente que puede causar

DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA GENERAL Y ESTOMATOLGICA

DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA GENERAL Y ESTOMATOLGICA

Cubreobjetos: pequeas lminas de vidrio transparente, de poco espesor (0,11

Erlenmeyer: se utilizan para preparar los medios de cultivo, o para el

desarrollo de microorganismos en medio lquido con agitacin o aireacin.

Otros elementos y aparatos: Al material citado debe agregarse por su uso

frecuente, mecheros y gradillas. Los equipos ms comnmente usados en el

DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA GENERAL Y ESTOMATOLGICA

2.3. NORMAS GENERALES PARA EL TRABAJO EN LABORATORIO DE

DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA GENERAL Y ESTOMATOLGICA

Debe siempre llevarse el asa bacteriolgica (asa de Koll) al rojo antes y

despus de toda operacin que se realice con ella.

No deben depositarse los tapones sobre la mesa de trabajo, para evitar

contaminaciones de y con los cultivos de trabajo.

Los cultivos de descarte deben colocarse siempre en recipientes adecuados para

luego ser esterilizados.

Los papeles de envoltura de material de vidrio deben arrojarse en los cestos

destinados a tal fin.

Anotar concisamente todo lo nuevo que se observe en cada experiencia,

completando con dibujos.

Al abandonar el laboratorio, debe controlar que los mecheros y llave de gas

queden cerrados, as como las luces y la llave de agua, de manera de evitar

DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA GENERAL Y ESTOMATOLGICA

SOLICITE LA PRESENCIA DEL DOCENTE PARA QUE LO

ASESORE CORRECTAMENTE TODA VEZ QUE TENGA DUDAS SOBRE

DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS