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FACULTAD DE ZOOTECNIA

DEPARTAMENTO ACADMICO DE CIENCIA ANIMAL


TINCION SIMPLE y COMPUESTA

CURSO

: MICROBIOLOGA ANIMAL

PROFESOR

: Med.Vet: TAFUR ZEVALLOS, Lizandro

ALUMNO

: GUEVARA TAPUIMA, Miguel

CICLO

: 2015- II

TINGO MARIA PERU


I.- INTRODUCCION

En su mayor parte los microorganismos son demasiado pequeos para


observarse a simple vista: protozoos, algas, hongos, bacterias y virus.
Estos microorganismos difieren en caractersticas tales como forma de
nutricin, estructura, tamao, composicin entre otros aspectos; es por ello que
se emplea el estudio microscpico el facilita notablemente la observacin;
principalmente en las bacterias se facilita al tratarlas con colorantes o tintes los
cuales facilitan tambin la observacin de ciertas estructuras celulares.
En este informe vamos a distinguir la estructura intracelular de algunos
microorganismos, tal es el caso de la sarcina, Klecciela, Bacilo Serium entre
otros. Desarrollamos los mtodos de tincin y damos a conocer un anlisis de
los resultados obtenidos en la prctica.

La tincin simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes


celulares. La tincin puede ser uniforme o presentar algunos grnulos en su
interior. Utiliza un solo colorante (violeta de genciana, azul de metileno, fuscina
diluida).
La tincin simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que
se vean las formas y las estructuras celulares bsicas. En las tinciones
simples se usa un nico reactivo, que preferentemente es de tipo bsico y
contiene un cromgeno (compuesto que da color al tinte) con carga positiva, ya
que la pared celular de las bacterias posee componentes con carga negativa
que atraen y enlazan el cromgeno. Se utilizan solamente para incrementar el

contraste; todas las clulas absorbern el colorante y quedarn teidas del


mismo color. Por tanto, la tincin simple mejora la observacin de la clula
completa. Se fija el espcimen, se aade el colorante y se deja el tiempo
adecuado para que se absorba, se retira el exceso de colorante y la
preparacin ya est lista para ser observada. Si se utiliza un mordiente
(sustancia qumica utilizada para intensificar la coloracin), hay que aadirlo
justo antes del colorante.

Objetivos:
El presente trabajo practico tiene por objetivo brindar al alumno
herramientas bsicas en laconfeccin y el manejo de extendidos y la
tincin de los mismos de acuerdo a la observacin que se desee
realizar.
El alumno aprender y aplicar las tcnicas bsicas de tincin ms
frecuentes.

II.- REVISIN BIBLIOGRAFICA


2.1.- TINCIN SIMPLE
La tincin simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes
celulares. La tincin puede ser uniforme o presentar algunos grnulos en su
interior. Utiliza un solo colorante (violeta de genciana, azul de metileno, fuscina
diluida).La tincin simple se utiliza para destacar el microorganismo completo
para que se vean las formas y las estructuras celulares bsicas.
En las tinciones simples se usa un nico reactivo, que preferentemente es de
tipo bsico y contiene un cromgeno (compuesto que da color al tinte) con
carga positiva, ya que la pared celular de las bacterias posee componentes con
carga negativa que atraen y enlazan el cromgeno. Se utilizan solamente para
incrementar el contraste; todas las clulas absorbern el colorante y quedarn
teidas del mismo color. Por tanto, la tincin simple mejora la observacin de

la clula completa. Se fija el espcimen, se aade el colorante y se deja el


tiempo adecuado para que se absorba, se retira el exceso de colorante y
la preparacin ya est lista para ser observada. Si se utiliza un mordiente
(sustancia qumica utilizada para intensificar la coloracin), hay que aadirlo
justo antes del colorante.

2.2.-TINCIN DE BACTERIAS
La clula bacteriana intacta se tie fcilmente con colorantes bsica
como el cristal, azul de metileno y fucsina bsica, pero relativamente mal
con colorantes cidos como la eosina.
Un colorante bsico es aquel constituido por un agrupamiento de tomos
orgnicos con carga positiva que ser la parte activa del colorante ya
que tendr afinidad por los cidos nucleicos. Un colorante cido es aquel
que se encuentra constituido por tomos orgnicos con carga neta
negativa por lo cual tiene afinidad por el citoplasma.

2.3.- Tinciones

2.4.- TIPOS DE TINCIN


2.4.1.- Tincin simple. Conocida con ese nombre ya que solo nos sirve
para hacer ms fcilmente visibles a las bacterias sin resaltar ninguna
caracterstica en especial. Una tincin simple se lleva a cabo cubriendo con
colorante bsico un frotis seco y fijado al calor. El frotis se deja reaccionar
con las clulas por un minuto y se lava suavemente con agua. El frotis se
puede dejar secar o usar papel secante para que quede listo para
observarse.
Se utiliza un solo tinte, afinidad por carga con componentes de la
superficie de la clula.
Ejemplo: azul de metileno

2.4.2.-

Tincin

Negativa. Este mtodo de tincin utiliza colorantes neutros o cidos ya que


tienen poca afinidad por la clula bacteriana por lo tanto como no se
absorben se colorea el fondo en el que estn las bacterias pero la clula
queda incolora y transparente, as pues las bacterias aparecen como
pequeas reas iluminadas en un fondo oscuro. La tincin acdica con
nigrosina, o neutral (con tinta china) son las ms usadas.
2.4.3.- Tincin simple-negativa
La tincin se logra mediante una mezcla del tinte y el cultivo de
bacteria.
El tinte utilizado es IndiaInk (Se puede utilizar tambin eosina o
nigrosina).

Se le conoce como efecto de cielo estrellado.

2.4.4.- Tincin Diferencial. Las bacterias se diferencian unas de otras tanto


fsica como qumicamente, por lo cual su reaccin ante algunos colorantes
tambin ser diferente dando lugar as a grupos tintoreales caractersticos.
Entre estos grupos estn los que se originan por la tincin descubierta por
Hans Christian Gram, esta tincin divide a las bacterias en Gram positivas o
Gram negativas lo cual no solo sirve para diferenciarlas sino an para elegir
la terapia adecuada en algunos casos. Existen otras tinciones diferenciales
de utilidad en microbiologa clnica como la de Ziehl- Neelsen.

2.4.5.- Tincin estructural. Existen diferentes tipos de colorantes que de


acuerdo a su afinidad se utilizan para teir y detectar ciertas estructuras de
la clula bacteriana como son las esporas, los flagelos y las cpsulas.

Otras tinciones de uso habitual

RODAMINA-AURAMINA
Los cidos miclicos de las paredes celulares de las mico bacterias poseen
afinidad para los fluorocromos auramina y rodamina. Estos colorantes se fijan a
las bacterias, que aparecen de color amarillo o naranja brillante contra un fondo
verdoso. El permanganato de potasio, empleado como contraste, evita la
fluorescencia

inespecfica.

Todos

los

microorganismos

cido-alcohol

resistentes, incluyendo los esporozoarios parsitos, se tien con estos


colorantes.
Un aspecto importante de la coloracin rodamina-auramiria es que luego los
frotis pueden ser reteidos con la coloracin de Ziehl-Neelsen o Kinyoun
directamente sobre la tincin con el fluorocromo, si se elimina antes el aceite
de inmersin. De esta forma, los resultados positivos pueden ser confirmados
con las coloraciones tradicionales, que adems permiten la diferenciacin
morfolgica.
NARANJA DE ACRIDINA
El fluorocromo naranja de acridina se une al cido nucleico ya sea en su forma
nativa o desnaturalizada. En algunas preparaciones de naranja de acridina, el
color de la fluorescencia puede variar, dependiendo del pH y de la
concentracin. El naranja de acridina ha sido empleado como colorante vital,
que da una fluorescencia verde si el microorganismo est vivo y roja si est
muerto. De todos modos, como el colorante se intercala en el cido nucleico, el
germen viable se inactivar poco tiempo despus de la tincin.
El uso de naranja de acridina para detectar la presencia de bacterias en los
hemocultivos ha sido ampliamente aceptado. De hecho, una gran cantidad de
estudios han demostrado que la tincin de hemocultivos con naranja de
acridina es tan sensible como el subcultivo ciego para la deteccin inicial de
hemocultivos positivos.
ZIEHL-NEELSEN (BAAR)

Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos


(cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les
confieren la propiedad de resistir la decoloracn con alcohol-cido, despus de
la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol
resistentes. Las micobacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los
parsitos

coccdeos

como Cryptosporidium se

caracterizan

por

sus

propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de ZiehlNeelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared
bacteriana que contiene ceras.
Se ha desarrollado una coloracin de cido-alcohol resistencia modificada que
diferencia las especies de Nocardia (bacterias ramificadas filamentosas cuyas
paredes celulares contienen cidos-grasos de unos 50 tomos de carbono), de
los actinomiceos (muy semejantes pero no cido-alcohol resistentes). Nocardia
spp son decoloradas por la mezcla cido-alcohol estndar pero no por un
tratamiento ms suave con cido sulfrico 0,5 a 1%. Estos microorganismos se
denominan cido-alcohol resistentes parciales o dbiles.
El frotis se tie durante unos 5 min con Carbolfucsina aplicando calor suave.
Lavar con agua. Decolorar con alcohol etlico 95% con un 3% de ClH
concentrado. Lavar y teir durante 30-60 seg con Azul de Metileno (color de
contraste). Lavar y secar
BLANCO DE CALCOFLOR
Las paredes celulares de los hongos fijan el colorante blanco de calcoflor
aumentando considerablemente su visibilidad en los tejidos y otras muestras.
Segn fue descrito por Hageage y Harrington, este colorante se emplea en
lugar de KOH al 10% para el examen inicial de los materiales clnicos. Tambin
se emplea para aumentar la visualizacin de los elementos morfolgicos de los
cultivos puros de los hongos. En algunos laboratoros ha suplantado al azul de
lactofenol en muchas aplicaciones. Los organismos fluorescen con luz blancoazulada o verde manzana, segn la fuente luminosa que se utilice.

III.- MATERIALES Y MTODOS


3.1.- Lugar y fecha
La presente prctica se desarroll en el laboratorio de SANIDAD
ANIMAL de la facultad de ZOOTECNIA de la UNAS, En la ciudad de
Tingo Mara, provincia de Leoncio Prado, departamento de Hunuco, a
coordenadas geogrficas: latitud sur: 09 17` 08, latitud oeste: 75 59
52 a 660 m.s.n.m. con una temperatura promedio de 27 C
aproximadamente.
3.2.- Materiales

2 portaobjetos
Asa bacteriolgica
Aceite de inmersin
Microscopio
Mechero
Azul de metileno de Leffler
Cepa de staphylacocos
Cepa de streptococos
Agua estril
Guates

3.3.- Metodologa
La metodologa que utiliz el profesor fue terico y prctico, en lo terico realizo
una amplia explicacin de los diferentes tinciones y basndonos ala tincin
simple y que bacterias debemos utilizar y como lo debemos de utilizaren el
transcurso de la prctica de los resultados explicaremos con detalle cmo se
realiza.
IV.- RESULTADOS.

FIGURA 2: Esterilizacin del asa de siembra


FIGURA 1: Se toma un portaobjeto
para tomar la muestra.

FIGURA 3: Toma de muestra con el asa de


siembra esterilizada

FIGURA 4: Realizamos un frotis sobre el


porta objeto conjuntamente con el agua
esterilizada.

FIGURA 6: Tincin de la muestra fijada y


secada con violeta de genciana durante 2
minutos

FIGURA 5: Secado y fijacin de la muestra


en el mechero bunsen.

FIGURA 7: lavado de la muestra con agua


destilada despus de Los 2 minutos de tincin

FIGURA 9: aadir una gota de aceite de

FIGURA 8: Secamos la muestra y ya estar en


disposicin de ser vista al microscopio.

FIGURA 10: poner la muestra en el microscopio,


enfocar y observar con el objetivo de 100 aumentos.

FIGURA 11: Resultados de la observacin del proceso


de tincin simple: estreptococos y estafilococos

V.- DISCUSIN

Para hacer esta prctica en lo personal fue como una recapitulacin de lo ya


visto anteriormente en el lapso del curso, pero enfocndonos al ttulo de
nuestra practica primero para hacer cualquier tcnica, estudio, etc., se debe
tener una muestra del paciente, la tincin simple nos ayuda a ver la morfologa
de cualquier bacteria que se encuentra en el cuerpo humano que nosotros
mismos las tenemos pero algunas son patgenas y hay otras que son
normales.

VI.- CONCLUSIN

se entiende por tincin (o coloracin) simple al teido de los microorganismos


aplicando slo
Una solucin colorante. Este tipo de tinciones pueden ser positivas o negativas.
Una tincin simple es una solucin acuosa de un colorante bsico nico.,
el propsito

general de

esta

tincin

es

destacar

por

completo

el

microorganismo completo para que se vanlas formas y las estructuras


bsicas. El colorante se aplica al extendido fijado durante un determinado
tiempo y luego se lava y al final se seca. En ocasiones se agrega una sustancia
qumica a la solucin para intensificar la coloracin, este aditivo se denomina
mordiente.

VII.- BIBLIOGRAFA

Generales (segunda edicin). Facultad de Farmacia. Universidad Central de

Venezuela.
https://es.scribd.com/doc/80998594/Tincion-Simple
Pelczar and Chan. 1977.Laboratory Exercises in Microbiology. Fourth

edition. McGraw-Hill Book Company.


www.uv.es/~jjmateo/microb/tincionsimple.doc

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