UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA

VEGA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS

Y BIOQUMICA

Prctica N 3
CINETICA ENZIMATICA
Curso:

Bioqumica II

Docente:

Caldern Gmez, Javier Jack

Aula:

1 A Grupo 2

Fecha:

13 - 06 - 2016

Alumnos:
Retegui Quiroz Luis
Delgado Rodrguez Tania
Daz Palacios Carlos
Jara Tuesta Luis

OBJETIVOS

Al finalizar este laboratorio el estudiante podr:

-

Explicar qu es una enzima y cmo stas actan en reacciones

intracelulares.
Identificar factores que afectan la actividad enzimtica.

MARCOTERICO
Las enzimas son compuestos de naturaleza proteica que tienen la propiedad
de acelerar

las

reacciones

qumicas

sin

modificar

la

constante

de

equilibrio del sistema. Su actividad es afectada por diversos factores:

concentracin de sustrato,
pH,
concentracin de enzima,
temperatura,
inhibidores,
fuerza inica,
constante dielctrica, etc.
Concentracin de sustrato
En general a medida que aumenta la cantidad de reactivos o sustratos la
velocidad tambin aumenta. En el caso de las reacciones qumicas
conviene aclarar que la velocidad se mide como cantidad de producto
formado por unidad de tiempo, las unidades sern: gr/seg, moles/seg,
moles/min, etc. De este modo cuanto ms reactivo tenemos, ms
producto se formar. Cuando las reacciones estn catalizadas por
enzimas se produce primero un efecto complementario, es decir, la
velocidad va aumentando conforme al aumento de temperatura, sin
embargo la velocidad llega a un punto ptimo a partir del cual la
velocidad comienza a decaer. No nos olvidemos que las enzimas son

protenas, por lo tanto son susceptibles a la desnaturalizacin, es decir

que la velocidad decae porque las enzimas pierden su actividad biolgica
como consecuencia de la desnaturalizacin. Algunas enzimas son
termoestables, es decir su actividad biolgica permanece an a
temperaturas mayores a 90 C.
pH
Algunas enzimas no varan su actividad con el pH sino que esta se
mantiene constante en un amplio rango. Otras tendrn el pH ptimo
cido o bsico teniendo en cuenta el medio en donde actan.
Inhibidores
Aunque hay muchos ejemplos de inhibidores, los mecanismos de
inhibicin pueden ser de dos clases: reversibles e irreversibles, tambin
hay mecanismos intermedios.

-FIGURA. Perfil de una reaccin en presencia de inhibidor COMPETITIVO y

sin inhibidor

Inhibidores irreversibles: estos inhibidores se enlazan con

fuerza a la enzima, generalmente se unen covalentemente a algn
aminocido del sitio activo. Existen algunos inhibidores que se
conocen como sustrato suicida, que se enlazan al centro activo y
qumicamente se transforma en una especie reactiva que modifica
en forma irreversible al aminocido del sitio activo.
Inhibidores reversibles: este tipo de inhibidores se disocian
fcilmente de las enzimas, dentro de este grupo encontramos los
inhibidores competitivos y los no competitivos.
Los inhibidores competitivos compiten con el sustrato por
el sitio activo de la enzima, y si aumentamos la cantidad de
sustrato, el efecto inhibidor se revierte alcanzndose la
velocidad mxima.
Los inhibidores no competitivos se enlazan a un sitio
distinto del sitio activo, de manera que el inhibidor se puede
unir a la enzima libre o bien al complejo enzima sustrato, pero
en ninguno de los casos obtendremos productos. El efecto de
estos inhibidores no se revierte por el agregado de mayor
cantidad de sustrato, de manera que se llega a una velocidad
mxima menor que si no tuviera el inhibidor.

No es raro observar algunos inhibidores a los cuales no se les

puede comprobar el mecanismo exacto de inhibicin, siendo en
algunos casos un tipo de inhibicin mixta.

PARTE EXPERIMENTAL:
EXPERIMENTO N1: VELOCIDAD DE REACCION vs CONCENTRACION
Procedimiento:

1.- Realizar un enjuague bucal con 20 ml de agua destilada por 2

minutos para poder obtener de esta manera la amilasa:
PREPARACION DE AMILASA SALIVAL

SE COLOCO SALIVA MAS AGUA DESTILADA

PREPARACION DE ALMIDON

MAS ALMIDON Y POR ULTIMO 100 ml DE AGUA DESTILADA EN EBULLCION

2.-

Adicionar en 5 tubos la muestra

salival:

1 . Agregar 1 ml de amilasa salival y enrasar a agua destilada hasta

10 ml.

Los siguientes tubos continuar diluyendo del tubo 1, al tubo,etc

como muestra el esquema.

Luego coger 1ml de cada tubo y enrasar a 5ml con Almidn.

El BM a 38C simula la t del

Luego proseguimos a colocarlo reactivo
cuerpo. Lo que deseamos que la
de lugol a todas las muestras
amilasa este en su t ptima para
calculando el tiempo cada 10 minutos
hasta que el reactivo de lugol haya
diferencia.
Cuadro de resultados dependiendo el tiempo:

10'
20'
30'
40'

1/10
+++

1/20
+
++
++
+++

1/40
+

Prueba de la primera alcuota a 10:

1/80
-

1/160
-

La hidrolisis fue negativa a

excepcin del tubo de 1. Ya
que la cc de amilasa en esta
fue ptima para diluir el
almidn.

Esto demuestra la cc de la
enzima es inversamente
proporcional al tiempo ya
que a menor concentracin
mayor debe ser el tiempo de
catlisis de la enzima.

EXPERIMENTO N2: VELOCIDAD DE REACCION vs TEMPERATURA

Comprobamos la velocidad de reaccin frente a difentes pH

Agregamos amilasa, almidn, y sometemos a a diferentes temperaturas (hirviendo,

al tiempo y a bajas temperaturas.
Seguimos el orden de los esquemas.

Luego agregamos reactivo de lugol para comprobar la hidrolisis:

EXPERIMENTO N3: VELOCIDAD DE REACCION vs pH

RESULTADOS:
TUBO 1: Al infringir altas temperaturas la amilasa se desnaturaliza, pierde
todo su poder cataltico, es por ello que el lugol identifica con claramente
el almidon intacto(si hubiera sido negativo hubiera salido amarillo-claro).

En
este
caso

TUBO 2: La hidrolisis fue positiva, el amarillo-claro nos da entender que el

almidn hizo efecto catablico y se transform a su monmero: glucosa.
TUBO 3: la hidrolisis fue parcial, ya que aunque la enzima fue sometida a
temperatura extrema lo que hizo fue inhibirla mas no desnatulizarlo. A
pasar el tiempo y el tubo se calent a temperatura ambiente se complet
la hidrolisis.
sometemos a la amilasa frente a reactivos acidos/bases para comprobar el efecto
que tienen estos en la capacidad cataltica de la enzima.
Seguimos los procedimientos del esquema.

pH: INICIAL DE AMILASA= 7.6

COMPROBAMOS EL EFECTO DE LA HIDROLISIS CON EL REACTIVO DE

LUGOL

REACCION CON ALMIDON

DE TRIGO.

RESULTADOS:
TUBO1 : El almidon se encuentra intacto, ya que el pH del medio se alejo del
optimo y la enzima perdi la catalisis. Hubo desnaturalizacion total.
TUBO2: Al tener el pH optimo la enzima trabaja eficientemente dando una
hidrolisis total. En este caso el color normalmente es amarillo-claro, pero en este
caso usamos almidon de trigo, y este tiene como caracterstica de encubrir
resultados.
TUBO3 : En este caso se supone que el almidon esta intacto, pero la presencia del
NaOH el reactivo de lugol(IK) no reaccciona con el almidon sino con la base:
Rx:
Almidon + IK + NaOH -> Almidon + KOH + NaI
color blanco

KOH= es

Es por ello que el jamas esta reaccion se pintara de color azul caracterstico por la
perdidda de la catlisis, sino de color blanco (KOH) ya que el el NaoH y el
IK(reactivo de lugol) por preferencia hacen reaccin estas.

REACCION CON ALMIDON DE LABORATORIO

RESULTADOS:
TUBO1 : El almidon se encuentra intacto, ya que el pH del medio se alejo del
optimo y la enzima perdi la catalisis. Hubo desnaturalizacion total.
TUBO2: Al tener el pH optimo la enzima trabaja eficientemente dando una
hidrolisis total. Dando un color amarillo caramelo, caracterstico de su monmero.
TUBO3 : En este caso se supone que el almidon esta intacto, pero la presencia del
NaOH el reactivo de lugol(IK) no reaccciona con el almidon sino con la base:
Rx:
Almidon + IK + NaOH -> Almidon + KOH + NaI
color blanco

KOH= es

Es por ello que el jamas esta reaccion se pintara de color azul caracterstico por la
perdidda de la catlisis, sino de color blanco (KOH) ya que el el NaoH y el
IK(reactivo de lugol) por preferencia hacen reaccin estas.

GRAFICOS DE REPRESENTACIONES
Concentracin:

pH:

Temperatura:

Conclusiones

VELOCIDAD DE REACCIN VS. CONCENTRACIN: A mayor concentracin mayor

velocidad de reaccin.

VELOCIDAD DE REACCIN VS TEMPERATURA: A mayor temperatura las enzimas se

desnaturalizan, a bajas temperaturas se atenua o paraliza la actividad enzimtica, a
temperatura optima buena actividad enzimtica.

VELOCIDAD DE REACCIN VS PH: En PH acido dismunuyen radicales acidos

ionizados y a PH alcalino disminuye los radicales basicos ionizados.

EN EL CASO DE LA PRESENCIA DE NaOH EN LA REACCION TIENDE

A REACCIONAR CON EL LUGOL DANDO UN RESULTADOS
NEGATIVO, YA QUE EL LUGOL NUNCA SE UNE AL ALMIDON.

EL ALMIDON DE TRIGO NO ES UN PRODUCTO EFICIENTE PARA

DEMOSTRAR HIDROLISIS EN EL LABORATORIO YA QUE ENCUBRE
RESULTADOS.