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FICHE TECHNIQUE

GELOSE TRYPTO-CASEINE SOJA (TSA)


BK047HA BM05008
BM01708 BM17808
BM04908

MILIEU NUTRITIF

DOMAINE DUTILISATION

La glose Trypto-casine soja (TSA) est un milieu universel convenant pour un large ventail demplois. Du fait de
son excellente nutritivit, elle peut tre utilise, dune part pour les culture et isolement des bactries arobies et
anarobies, dautre part pour favoriser la croissance des germes particulirement exigeants. Sa composition est
conforme la formule dcrite dans les chapitres harmoniss des pharmacopes europenne et amricaine. Coule
en botes fond quadrill ou sur languettes, elle convient pour les tests rapides dexamen des surfaces. Enfin, sous la
dnomination TSA, elle constitue le milieu de rfrence utilis pour lvaluation des critres de productivit et slectivit
dans le cadre de lapplication de la Spcification Technique CEN ISO/TS 11133-2/A1.

PRINCIPES

Lassociation entre la Tryptone et la peptone papanique de soja ralise une synergie entre l'apport protidique de la
casine et l'apport glucidique du soja, permettant ainsi d'obtenir une croissance optimale pour un nombre lev de
germes exigeants et non exigeants.
Le chlorure de sodium maintient l'quilibre osmotique.

PREPARATION

Prparation du milieu dshydrat :


Mettre en suspension 40,0 g de milieu dshydrat (BK047) dans 1 litre deau
distille ou dminralise.
Porter lentement le milieu bullition sous agitation constante et ly maintenir
durant le temps ncessaire sa dissolution.

Reconstitution :
40,0 g/L
Strilisation :
15 min 121 C

Rpartir en tubes ou en flacons.


Striliser lautoclave 121 C pendant 15 minutes.
Note : Une liqufaction partielle de lagar entranera invitablement une altration significative de la consistance du
gel du milieu solidifi, aprs strilisation et refroidissement.
Prparation du milieu prt--liqufier :
Faire fondre le milieu ainsi prpar ou prt--liqufier (BM017 ou BM049) pendant le minimum de temps
ncessaire sa reliqufaction totale.
Refroidir et maintenir le milieu 44-47 C.
Couler en botes de Petri striles et laisser solidifier sur une surface froide.
Faire scher les botes ltuve, couvercle entrouvert.

MODE DEMPLOI

Culture des souches de rfrence :


A la surface des botes pr-coules (BM050 ou BM178) ou du milieu prpar
en botes, transfrer 0,1 mL de lchantillon analyser et de ses dilutions
dcimales.
Etaler linoculum en surface laide dun taleur strile.

Ensemencement :
En surface
Incubation :
18 24 h 32,5 2,5 C

Incuber 32,5 2,5 C pendant 18 24 heures.

Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B.P. 10245 60002 Beauvais Cedex France
Tl : + 33 (0)3 44 14 33 33 Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 www.biokar-diagnostics.fr

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Chapitres harmoniss des pharmacopes (dnombrement des germes arobies)


- Ensemencement en surface :
A la surface du milieu pr-coul (BM050 ou BM178) ou du milieu prpar en
botes, transfrer 0,1 mL de lchantillon analyser et de ses dilutions
dcimales.
Etaler linoculum en surface laide dun taleur strile.

Ensemencement :
En surface
En profondeur
Par filtration
Incubation :
3 5 j 30-35 C

Incuber 30-35 C pendant 3 5 jours.


- Ensemencement en profondeur :
Transfrer 1 mL de la suspension et, si ncessaire, de ses dilutions dcimales successives dans une bote de
Petri strile.
Couler environ 15 mL de milieu.
Homogniser parfaitement et laisser solidifier sur une surface froide.
Incuber 30-35 C pendant 3 5 jours.
- Aprs filtration sur membrane :
Filtrer strilement sur membrane un volume dtermin de l'chantillon tester (correspondant 1 g de produit).
A la surface des botes ainsi prpares ou du milieu pr-coul (BM050 ou BM178) ramen pralablement
temprature ambiante, dposer la membrane en veillant ce que le contact soit parfait.
Incuber 30-35 C pendant 3 5 jours.
Note : Pour dautres utilisations, se reporter au rfrentiel en vigueur.

LECTURE

Aprs incubation, observer la croissance bactrienne.


Dans le cas dun dnombrement, tenir compte des botes contenant un nombre de colonies compris entre 30 et 300.
Pour lidentification des microorganismes, mettre en place les tests biochimiques et immunologiques ncessaires.

FORMULE-TYPE

Cette formule-type peut tre ajuste de faon obtenir des performances optimales.
Pour 1 litre de milieu :
- Tryptone .................................................................................................................... 15,0 g
- Peptone papanique de soja ....................................................................................... 5,0 g
- Chlorure de sodium ..................................................................................................... 5,0 g
- Agar agar bactriologique ......................................................................................... 15,0 g
pH du milieu prt--lemploi 25 C : 7,3 0,2.

CONTROLE QUALITE

Milieu dshydrat : poudre blanc crme, fluide et homogne.


Milieu prpar : glose ambre.
Rponse culturale typique :
Microorganismes
1

Escherichia coli
Staphylococcus aureus
1
Bacillus subtilis
1
Listeria monocytogenes
2
Candida albicans
2
Aspergillus brasiliensis
1
Incubation pendant 48 heures 32,5 C
2
Incubation pendant 72 heures 20-25 C
1

WDCM 00012
WDCM 00032
WDCM 00003
ATCC 19115
WDCM 00054
WDCM 00053

Croissance
(Rapport de productivit : PR)
PR 70%
PR 70%
PR 70%
PR 70%
PR 70%
PR 70%

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Tl : + 33 (0)3 44 14 33 33 Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 www.biokar-diagnostics.fr

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CONSERVATION

Milieu dshydrat : 2-30 C.


Milieu prpar en tubes ou en flacons : 6 mois 2-25C ( titre indicatif).
Milieu en botes : 1 mois 2-8C ( titre indicatif).
Milieu prt--liqufier en flacons : 2-25 C, labri de la lumire.
Milieu pr-coul en botes de Petri : 2-8 C, labri de la lumire.
Les dates de premption sont mentionnes sur les tiquettes.

PRESENTATION

Milieu pr-coul en botes de Petri :


Coffret de 20 botes 90 mm ............................................................................................................................. BM05008
Coffret de 120 botes 90 mm ........................................................................................................................... BM17808
Milieu prt--liqufier en flacons :
Pack de 10 flacons de 100 mL .......................................................................................................................... BM01708
Pack de 10 flacons de 200 mL .......................................................................................................................... BM04908
Milieu dshydrat :
Flacon de 500 g ................................................................................................................................................. BK047HA

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REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

NF EN ISO 9308-1 (T 90-414). Septembre 2000. Qualit de leau. Recherche et dnombrement des Escherichia coli
et des bactries coliformes. Partie 1 : Mthode par filtration sur membrane.
NF EN ISO 10273 (V08-027). Dcembre 2003. Microbiologie des aliments - Mthode horizontale pour la recherche
de Yersinia enterocolitica prsumes pathognes.
NF EN ISO 20645 (G 39-014). Aot 2005. Etoffes. Contrle de lactivit antibactrienne. Essai de diffusion sur
plaques de glose.
NF T 72-901. Dcembre 2008. Antiseptiques et dsinfectants. Evaluation de la dure dutilisation des bains des
dsinfectants base dacide peractique.
NF EN ISO 18416 (T 75-607). Septembre 2009. Cosmtiques. Microbiologie. Dtection de Candida albicans.
NF EN ISO 21149 (T 75-602). Septembre 2009. Cosmtiques. Microbiologie. Dnombrement et dtection des
bactries arobies msophiles.
NF EN ISO 21150 (T 75-604). Septembre 2009. Cosmtiques. Microbiologie. Dtection dEscherichia coli.
NF EN ISO 22717 (T 75-603). Septembre 2009. Cosmtiques. Microbiologie. Recherche de Pseudomonas
aeruginosa.
NF EN ISO 22718 (T 75-605). Septembre 2009. Cosmtiques. Microbiologie. Dtection de Staphylococcus aureus.
NF EN 15784 (V 18-237). Dcembre 2009. Aliments des animaux. Isolement et dnombrement des souches de
Bacillus spp. prsumes.
NF EN 1276 (T 72-173). Mars 2010. Antiseptiques et dsinfectants chimiques. Essai quantitative de suspension pour
lvaluation de lactivit bactricide des antiseptiques et des dsinfectants chimiques utiliss dans le domaine de
lagro-alimentaire, dans lindustrie, dans les domaines domestiques et en collectivit. Mthode dessai et prescriptions
(phase2, tape 1).
NF EN 1656 (T 72-174). Mars 2010. Antiseptiques et dsinfectants chimiques. Essai quantitatif de suspension pour
lvaluation de lactivit bactricide des antiseptiques et des dsinfectants chimiques utiliss dans le domaine
vtrinaire. Mthode dessai et prescription (phase 2, tape 1).
XP CEN ISO/TS 11133-2/A1 (V 08-104-2/A1). Fvrier 2011. Microbiologie des aliments. Guide pour la prparation et
la production des milieux de culture. Partie 2 : Guide gnral pour les essais de performance des milieux de culture.
Amendement 1 : micro-organismes pour essai recommands pour les milieux de culture les plus usuels.
NF EN ISO 18415 (T 75-606). Aot 2011. Cosmtiques - Microbiologie - Dtection des micro-organismes spcifis et
non spcifis.
NF EN ISO 11930 (T 75-600). Juin 2012. Cosmtiques - Microbiologie - valuation de la protection antimicrobienne
d'un produit cosmtique.
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NF EN 14349 (T 72-194). Dcembre 2012. Antiseptiques et dsinfectants chimiques. Essai quantitatif de surface pour
lvaluation de lactivit bactricide des antiseptiques et dsinfectants chimiques utiliss dans le domaine vtrinaire
sur des surfaces non poreuses sans action mcanique. Mthode dessai et prescriptions (phase 2, tape 2).
Pharmacope Europenne 2.6. Mthodes biologiques. 2.6.1. Strilit. Milieux de culture et tempratures dincubation,
153-157.
Pharmacope Europenne 2.6.13. Contrle microbiologique des produits non
microorganismes spcifis. Solution et milieux de culture recommands, 4679-4682.

striles :

Recherche

de

United States Pharmacopeia. Microbiological Tests / Microbial Limit Tests. Buffer Solution and Media. 84-86.
Microbiological Tests / Microbiological Examination. Recommended Solutions and Culture Media, 96-97.
Microbiological Tests / Sterility Tests. Media, 98.
United States Pharmacopeia. Dietary Supplements / Microbial Enumeration Tests. Media. 713.

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AUTRES INFORMATIONS

Les mentions portes sur les tiquettes sont prdominantes sur les formules ou les instructions dcrites dans ce
document et sont susceptibles dtre modifies tout moment, sans pravis.
Code document
Date cration
Date de rvision
Motif de rvision

:
:
:
:

BK047/F/2003-06 : 10.
06-2003
03-2013
Rvision gnrale (Dnomination ; 4 : Mode demploi; 9 : Prsentation;
10 : Rfrences bibliographiques)

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