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Capítulo 5.

Crecimiento Microbiano

CAPITULO

5

Crecimiento
microbiano
5.1 Crecimiento de
poblaciones
5.2 Curva de crecimiento
5.3 Medidas directas del
crecimiento
microbiano
5.4 Medidas indirectas del
crecimiento
microbiano
5.5 Cultivo continuo:
Quimiostato

Los filtros de membrana son
usados para el conteo de
microorganismos.

5.6 Efectos ambientales
sobre el crecimiento
microbiano
5.7 Control del
crecimiento
microbiano
5.8 Control físico del
crecimiento
microbiano
5.9 Control químico del
crecimiento
microbiano
5.10 Referencias
bibliográficas

58 . Durante el ciclo de crecimiento. Algunas bacterias tienen tiempos de generación comprendidos entre 1 a 3 horas. cada una de las cuales a su vez forma otras dos y así sucesivamente. y la segregación real de las dos copias es facilitada por la formación del septo. se observa una curva de crecimiento típica en donde se distinguen las fases de latencia. de modo que cada célula hija recibe un cromosoma completo y suficientes copias de todas las macromoléculas.2 Curva de crecimiento En un sistema cerrado o cultivo en medio no renovado. el crecimiento exponencial no se puede prolongar de modo indefinido debido a que un nutriente esencial del medio de cultivo se agota y llega a ser un factor limitante del crecimiento o se acumulan en el medio algunos productos de desecho hasta nivel inhibitorio. un proceso que se denomina fisión binaria (Figura 5. No hay aumento ni descenso neto en el número de células. monómeros e iones inorgánicos. alcanzándose la fase estacionaria. El intervalo para la formación de dos células a partir de una supone una generación y el tiempo transcurrido para que esto ocurra se llama tiempo de generación (tiempo que se requiere para que la población se duplique por lo que también se llama tiempo de duplicación).1 Crecimiento de poblaciones El crecimiento se define como un aumento en el número de células microbianas de una población y también puede medirse como un incremento de la masa celular.1). Crecimiento Microbiano El crecimiento es un componente esencial de la función microbiana.Capítulo 5. pero otras células mueren y los dos procesos se equilibran de modo que no hay aumento ni disminución en el número de células. ya que en la naturaleza cualquier célula tiene un período finito de vida y la especie se mantiene como resultado del crecimiento de la población. la cual puede ser breve o larga dependiendo de la procedencia del cultivo y de las condiciones de crecimiento. b. el crecimiento de una célula individual continúa hasta que se divide en dos células nuevas. Fase exponencial: Es una consecuencia de que cada célula se divide para formar dos. exponencial. El reparto del ADN replicado entre las dos células hijas depende de la unión del ADN a la membrana durante la división. Los tiempos de generación varían. se observa que las células se alargan hasta aproximadamente el doble de la longitud de la célula más pequeña y luego forman un tabique que separa la célula en dos células hijas. estacionaria y de muerte (Figura 5. todos los constituyentes celulares aumentan. El modelo de incremento de la población en el que en cada período fijo de tiempo se duplica el número de células se denomina crecimiento exponencial y una de sus características es que la velocidad del incremento del número de células es inicialmente lenta pero aumenta cada vez más con el tiempo. a. Fase de latencia: Cuando se inocula una población microbiana en un medio fresco. unas cuantas crecen muy rápidamente y se dividen en sólo 10 minutos mientras que otras requieren de varios días. Fase estacionaria: En un sistema de cultivo cerrado o batch. En la mayoría de los procariotas. Este tabique se conoce como septo y es el resultado del crecimiento hacia dentro de la membrana citoplasmática y la pared celular desde direcciones opuestas hasta que las dos células hijas se separan. 5. también conocido como cultivo batch o monofásico.2). En algunos casos puede ocurrir un lento crecimiento. para existir como célula independiente. La velocidad de crecimiento es el cambio en el número de células o en la masa celular experimentado por unidad de tiempo. En un cultivo en crecimiento de Escherichia coli. c. por lo general el crecimiento no comienza inmediatamente sino tras un período de tiempo que constituye la fase de latencia. 5.

Figura 5. 59 .2 Curva de crecimiento bacteriano.1 Proceso de división binaria de una bacilo.Capítulo 5. Crecimiento Microbiano Figura 5.

5. las células pequeñas son difíciles de ver en el microscopio y algunas posiblemente se pierden en el recuento. Crecimiento Microbiano d. Cuanto más células estén presentes.6).5).3). Ambos instrumentos se diferencian en que un fotómetro emplea un filtro simple para generar luz incidente en longitud de onda relativamente corta. por tanto mayor la turbidez (Figura 5. mayor será la luz dispersada y. En este procedimiento se supone que cada célula viable forma una colonia (Figuras 5. pero también pueden morir. 5. en ocasiones la precisión es difícil y el método no es adecuado para suspensiones con baja densidad celular (Figura 5.3 Contaje de células totales utilizando cámara de Neubauer. El recuento directo de células o recuento de células totales se puede hacer en muestras secas en porta objetos o en muestras líquidas. La turbidez puede medirse con aparatos como el fotómetro y espectrofotómetro que hacen pasar la luz a través de suspensiones celulares y detectan la cantidad de luz emergente no dispersada. 60 . Figura 5. sin embargo.Capítulo 5. mientras que un espectrofotómetro emplea un prisma o red de difracción para generar luz incidente en una banda muy estrecha de longitud de onda. Fase de muerte: Si la incubación prosigue después que la población alcanzó la fase estacionaria. el recuento de células viables también es llamado recuento en placa o recuento de colonias y se puede realizar a través de los métodos de extensión en placa y vertido en placa. Una suspensión celular aparece turbia porque las células dispersan la luz que atraviesa la suspensión. En el recuento de células viables o células capaces de dividirse y originar una descendencia se cuenta el número de células de la muestra que es capaz de formar colonias sobre un medio sólido adecuado. Si ocurre esto último se dice que la población está en fase de muerte que en algunos casos se puede acompañar de lisis celular.4 Medidas indirectas del crecimiento microbiano : Turbidez Un método muy rápido y útil de obtener estimaciones del número de células es la medida de la turbidez. las células pueden continuar vivas y metabólicamente activas. no se pueden distinguir las células vivas de las muertas.3 Medidas directas del crecimiento microbiano: recuento de células totales y viables El crecimiento de poblaciones se mide estimando los cambios en el número de células a través del recuento de células totales y recuento de células viables. Por esta razón.4 y 5.

5 Procedimiento para contar células viables utilizando diluciones de la muestra.Capítulo 5. Figura 5.4 Métodos para realizar contaje de células viables. Crecimiento Microbiano Figura 5. 61 .

Crecimiento Microbiano Figura 5. 62 . el número de células y el estado metabólico permanecen constantes y se dice entonces que el sistema está en equilibrio (Figura 5.6 Turbidez: determinación de la masa microbiana por la medida de absorción de luz. que controla la densidad de la población celular y la velocidad de crecimiento del cultivo de modo independiente. 5.5 Cultivo continuo: Quimiostato Cultivo continuo es un sistema abierto.Capítulo 5.7). con volumen constante al que se añade continuamente medio fresco y del que se retira continuamente medio con células a una velocidad constante. or Figura 5. Si se eleva la concentración de este nutriente en el medio entrante. En el quimostato se puede obtener cualquier velocidad de crecimiento deseada simplemente variando la velocidad de dilución y análogamente la densidad de población puede definirse variando la concentración de un nutriente conocido como factor limitante. Una vez que se alcanza el equilibrio en el sistema. manteniendo la velocidad de dilución.7 Esquema de un sistema de cultivo continuo: quimiostato. la densidad celular aumentará. El aparato más común que se utiliza para obtener un cultivo continuo es el quimiostato.

Los organismos que crecen a 0 ºC pero tienen temperaturas óptimas de 20 a 40 ºC se llaman psicrotolerantes. Generalmente los ambientes tienen un valor de pH entre 5 a 9. 4 ºC). 63 . La mayoría crece en un margen de pH de 2 a 3 unidades. mesófilos. 39ºC). Con relación a la temperatura óptima se distinguen cuatro grupos de microorganismos: psicrófilos. con temperaturas óptimas bajas (Polaromonas vacuolata. Unos cuantos extremófilos presentan un pH óptimo de crecimiento muy elevado. a veces tan alto como pH 10 y se denominan alcalófilos. termófilos con temperaturas óptimas elevadas (Bacillus stearothermophilus. Los microorganismos cuya temperatura óptima está por encima de 45 ºC (45 a 80 ºC) se llaman termófilos y aquellos cuya temperatura óptima está por encima de 80 ºC son los hipertermófilos. El grupo de los hongos son más acidófilos que las bacterias. Ferroplasma y Thermoplasma. Se usa para la automatización de los pasos repetitivos que tienen lugar en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizada para la amplificación de secuencias específicas de ADN. y los organismos con pH óptimo de este orden son los más comunes. 106 ºC). b. Algunos tienen aplicaciones industriales porque producen enzimas hidrolíticas como proteasas y lipasas que funcionan a pH alcalino y se usan como aditivos de los detergentes domésticos. La temperatura óptima está siempre más cerca de la máxima que de la mínima. Las enzimas de microorganismos termófilos e hipertermófilos catalizan reacciones a temperaturas elevadas y por ser más estables que las de los mesófilos. Para cada organismo existe una temperatura mínima por debajo de la cual no es posible el crecimiento.6 Efectos ambientales sobre el crecimiento microbiano a. en particular por la composición del medio. Un ejemplo de enzima termorresistente es la ADN polimerasa aislada del termófilo Thermus aquaticus. 88 ºC. Los organismos que crecen mejor a pH bajo constituyen un tipo de extremófilos llamados acidófilos. y conocida como Taq polimerasa. Pyrolobus fumarii. Muchos hongos crecen de forma óptima a pH 5 o inferior e incluso algunos crecen bien a pH 2. Algunas bacterias también son acidófilas: Thiobacillus y algunos géneros de Archaea como Sulfolobus. y una temperatura mínima por encima de la cual no es posible el crecimiento.Capítulo 5. Temperatura La temperatura es uno de los factores más importantes que afectan el crecimiento y la supervivencia de los microorganismos. con temperaturas óptimas moderadas (Escherichia coli. la vida media de estas preparaciones enzimáticas es más prolongada. Estos microorganismos ofrecen importantes ventajas en procesos industriales y biotecnológicos. Estas tres temperaturas denominadas temperaturas cardinales o fundamentales son características de cada tipo de microorganismo pero no son completamente fijas y pueden ser ligeramente modificadas por otros factores del ambiente. pH Cada organismo tienen un rango de pH dentro del cual es posible el crecimiento y normalmente posee un pH óptimo bien definido. una temperatura máxima por debajo de 20 ºC y una mínima de 0ºC o más baja. Crecimiento Microbiano 5. 60 ºC) e hipertermófilos con temperaturas óptimas muy elevadas (Thermocossus celer. una temperatura óptima a la que se produce el crecimiento más rápido. Los microorganismos cuyos hábitats pueden ser extremadamente calientes o fríos se conocen como extremófilos. Un organismo psicrófilo es definido como un organismo que tienen una temperatura óptima de crecimiento de 15 ºC o inferior.

sino que también depende de la concentración de solutos.6 %) y moderado (6-15 %) de NaCl respectivamente. donde solutos como la sal y sacarosa se emplean frecuentemente como conservantes para inhibir el crecimiento microbiano. Los microorganismos marinos tienen una dependencia del ion sodio. además de tener un crecimiento óptimo al valor de actividad de agua propio del agua de mar. Muchos aerobios son facultativos (Escherichia coli). Oxígeno Los microorganismos son muy variados en cuanto a la necesidad o tolerancia al oxígeno. Los aerobios (Micrococcus luteus) son especies capaces de crecer a tensiones de oxígeno normales (21 % del aire es oxígeno).750). Tales microorganismos se llaman halófilos discretos y halófilos moderados.800. pero generalmente crecen mejor en ausencia de solutos añadidos. La mayoría de microorganismos son incapaces de existir en ambientes con actividad de agua muy baja y mueren. Crecimiento Microbiano c. de la humedad o sequedad de un determinado hábitat. Los microaerofílicos. Streptococus y Escherichia en sangre: 0. Actividad de agua El agua es el solvente de la vida. Penicillum en pastel : 0. Los organismos capaces de crecer en ambientes muy salinos se llaman halófilos extremos (Halobacterium salinarium) y según la especie requieren 15 a 30 % de NaCl para su crecimiento óptimo. Los organismos capaces de crecer con alta concentración de azúcares se denominan osmófilos y aquellos que pueden crecer en ambientes muy seos se llaman xerófilos. como sales. El agua difunde desde una región con alta concentración (baja concentración de solutos) hasta una región con menor concentración de agua (mayor concentración de solutos) per el proceso denominado ósmosis. Por el contrario. 64 . La disponibilidad de agua no sólo es función del contenido que está presente en un medio. existe una tendencia del agua a salir de la célula. cuando una célula está en un medio con baja actividad de agua.995. azúcares y otras sustancias que pueden estar presentes en el agua.90 a 1. En la mayoría de los casos el citoplasma tiene una concentración de solutos mayor que el medio. Halococcus en pescado salado : 0. por lo que el agua tiende a entrar en la célula. La disponibilidad de agua se expresa en términos físicos como actividad de agua (a w) y es el cociente entre la presión de vapor del aire en equilibrio con una sustancia o solución y la presión de vapor del agua pura a la misma temperatura. diciéndose entonces que existe un balance de agua positivo.980. sin embargo. sólo cuando está presente en niveles más bajos que en el aire. d. (Spirillum volutans) son aerobios que pueden usar el oxígeno.Capítulo 5. es decir. El agua de mar contiene aproximadamente 3 % de cloruro de sodio además de pequeñas cantidades de minerales y elementos. o se deshidratan y pasan a un estado de latencia en tales circunstancias. Los organismos halotolerantes (Staphylococcus aureus) pueden soportar alguna reducción en el valor de aw del medio. con requerimientos bajos (1. Los valores de a w varían entre 0 y 1 (actividad de agua de terrenos agrícolas: 0. y éstos son de gran interés desde el punto de vista aplicado en la industria alimentaria. lo que significa que en condiciones nutritivas y de cultivo apropiadas pueden crecer tanto en condiciones aerobias como anaerobias. algunos organismos se desarrollan con muy baja actividad de agua. Pseudomonas y Vibrio en agua de mar : 0.

Es frecuente añadir al medio un colorante indicador redox como la resarzurina. Aerobio estricto Facultativo Aerotoloerante anaerobio Anaerobio estricto Microaerófilo Figura 5. 65 . se añade a un medio caldo de tioglicolato un agente reductor tioglicolato. los facultativos crecerán en todo el tubo. muerte o eliminación de todos los organismos viables de un medio de cultivo. donde el oxígeno no penetra (Figura 5. Los aerobios estrictos crecerán sólo en la parte superior del tubo. que cambia de color en presencia de oxígeno y por lo tanto señala el grado de penetración del oxígeno en el medio de cultivo. superóxido dismutasas y superóxido reductasas. En estado basal normal se llama triplete de oxígeno. Los microaerofílicos lo harán cerca del extremo superior. distinguiéndose dos clases: los anaerobios aerotolorenates (Streptococcus pyogenes). capaz de reaccionar con el oxígeno y reducirlo (agua). proceso llamado inhibición o destruyendo los organismos por esterilización.7 Control del crecimiento microbiano El control de microorganismos puede realizarse limitando su crecimiento. cada uno de los cuales se produce durante la reducción del oxígeno hasta agua en la respiración. Los agentes que destruyen o matan bacterias son bactericidas. pero con preferencia en la parte superior. el oxígeno atmosférico sólo puede penetrar en la parte superior donde el medio contacta con el aire. una forma tóxica importante es el singlete de oxígeno.Capítulo 5. que crecen en su presencia aunque no pueden usarlo y los anaerobios estrictos (Methanobacterium formicium) que son inhibidos o incluso mueren en su presencia.8). Crecimiento Microbiano Algunos microorganismos no pueden respirar oxígeno y se les llama anaerobios. Después que el tioglicolato reacciona con el oxígeno a lo largo del tubo. Frente a estas formas tóxicas los organismos han desarrollado enzimas que los destruyen como las catalasas y peroxidasas.8 Oxígeno y crecimiento bacteriano El oxígeno es un poderoso oxidante y un aceptor de electrones en la respiración. 5. sin embargo. Para conocer cuáles son los requerimientos de oxígeno de un microorganismo en laboratorio. el peróxido de hidrógeno (H202) y el radical hidroxilo (OH-). pero no en la superficie del tubo y los anaerobios crecerán fundamentalmente cerca del fondo del tubo. Otras formas altamente tóxicas son el anión superóxido (02-). en la que la capa electrónica externa que rodea al núcleo es muy reactiva y capaz de llevar a cabo oxidaciones indeseables en la célula.

a. pero en muchos casos se puede inhibir el crecimiento rápido de los microorganismos mediante métodos de descontaminación y desinfección. Esterilización por radiación En condiciones apropiadas. Filtración La esterilización por filtración consiste en la eliminación de microorganismos vivos en muestras líquidas. No es la presión del autoclave lo que mata a los microorganismos. seguida de un enfriamiento rápido (pasteurización alta). la desinfección y la esterilización. la radiación y la filtración son métodos estándar que se emplean para destruir o eliminar microorganismos no deseables. La radiación ultravioleta no penetra las superficies sólidas. sino la elevada temperatura que puede alcanzar cuando el vapor de agua se somete a presión. La pasteurización también impide el crecimiento de organismos alterantes e incrementa considerablemente la vida media de los líquidos perecederos. También se puede realizar a 63-66 ºC durante 30 minutos (pasteurización baja). Crecimiento Microbiano En la práctica. La radiación ha sido aprobada por la Organización Mundial de la Salud como medida de descontaminación para alimentos particularmente susceptibles de contaminación microbiana. absorbentes de luz y su utilidad se limita a la desinfección de las superficies expuestas. la radiación electromagnética (microondas. Los filtros de membrana se utilizan generalmente para esterilizar volúmenes pequeños de muestras termosensibles en el laboratorio. aire y agua. El calor. lo que permite alcanzar una temperatura de 121 ºC. Impide la transmisión de patógenos como algunas especies de Salmonella y Escherichia coli 0157:H7 a través de fuentes comunes como leche y zumos. b. 66 . Las medidas de control de los microorganismos son la descontaminación. c. Esterilización por calor Los microorganismos son eliminados con vapor de agua bajo presión en el autoclave (1. Pasteurización La pasteurización es un proceso que reduce la población microbiana en leche y otros alimentos sensibles al calor. a veces la esterilidad no se puede alcanzar. radiaciones gamma y electrones) controla eficazmente el crecimiento microbiano. La pasteurización de la leche se realiza a 71 ºC durante 15 segundos. rayos x. Los agentes que inhiben el crecimiento bacteriano se dice que son bacteriostáticos. 5. aunque el proceso es menos satisfactorio porque la leche debe mantenerse a temperaturas altas por largos períodos de tiempo.8 Control físico del crecimiento microbiano Los métodos físicos se usan a menudo para lograr la descontaminación microbiana. desinfección y esterilización. como especias y productos cárnicos frescos (hamburguesas y pollo) y está aprobada para la descontaminación de carne molida.1 kilogramos / centímetro cuadrado o 15 libras por pulgada de presión de vapor. La radiación ionizante penetra los materiales absorbentes sólidos o ligeros y es muy eficaz para esterilizar y descontaminar. opacas. El tiempo de esterilización es de 15 a 20 minutos. radiación ultravioleta. d.Capítulo 5.

 Prescott. Crecimiento Microbiano 5.) Madrid. J. ácido per-acético o peróxido de hidrógeno. D. y Parker.9 Control químico del crecimiento microbiano Un agente antimicrobiano es un compuesto químico. H. Los agentes esterilizantes son desinfectantes que en condiciones apropiadas. aunque puede matar o no otros microorganismos. Microbiología General (9ª. S. a fin de eliminar los organismos potencialmente patógenos.Capítulo 5. Los agentes que no matan pero inhiben el crecimiento se denominan agentesestáticos. M.). que mata o inhibe el crecimiento de los microorganismos. (1997). Harley J. España: Parson Educación. y se usan para esterilizar objetos inanimados y superficies. y Klein. pero emplean un agente químico como el óxido de etileno. España: Ediciones Omega. La esterilización fría se lleva a cabo en dispositivos cerrados parecidos a los autoclaves. Los antisépticos son aquellos agentes químicos que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos y pueden aplicarse en tejidos vivos dada su escasa toxicidad . fungistáticos y virustáticos. España: McGraw Hill Interamericana.. 67 . Martinko. Los desinfectantes químicos frecuentemente denominados microbicidas tienen una gran aplicación en los casos en donde no se puede usar calor o radiación. agentes bactericidas. J. (1999). ed.ed. matan todos los tipos de vida microbiana.  Madigan. Un agente bactericida mata baterías.10 Referencias bibliográficas  Schlegel.. Así tenemos. El agua se desinfecta con lejía o con derivados de cloro. fungicidas y viricidas. L. (2004). S. Brock. Biología de los Microorganismos (10ª.A. Los agentes que matan se denominan agentes–cida. 5.La mayoría de los compuestos que se encuentran en esta categoría se utilizan en el lavado de manos para tratar heridas superficiales. así se habla de agentes bacteriostáticos. Los desinfectantes son productos químicos que matan microorganismos y se usan en objetos inanimados. con un prefijo que indica el tipo de microorganismo que mata.A. natural o sintético. Microbiología. formaldehido.