Terapia gnica o terapia celular para la

enfermedad

TRATAMIENTO DE LOS TRASTORNOS

MITOCONDRIALES
Todos los tratamientos ensayados aportan actualmente escasos beneficios
para mejorar la disfuncin mitocondrial, pero actualmente tenemos algunas
opciones.
Terapia gentica preimplantacional
Trasplante nuclear de vulos in vitro, fertilizacin in vitro de donacin de
vulos. Se realizan tcnicas de preimplantacin gentica, en madres
portadoras de mutaciones del ADNmt. Consisten en un transplante del ncleo
a un ovocito de una donante y a continuacin hacer una fecundacin in vitro
con esperma paterno.

Xenoexpresin. Terapia gnica mediante expresin en clulas de

mamferos(ratones) de enzimas sustitutivos presentes en otras especies Se ha
demostrado que la oxidasa monopeptdica AOX permite transferir electrones
de la ubiquinona al oxgeno, rescatando parcialmente mutantes de complejo
III (CIII) y CIV y es capaz de regular la produccin de ROS en clulas con
defectos mitocondriales.
La expresin de AOX en ratones KO para complejo IV especficos de msculo puede mejorar el
fenotipo.

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Publicado por Verito Gallegos Zambrano en 18:33 No hay comentarios:

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mircoles, 27 de noviembre de 2013

Ventajas y desventajas de Animales

Transgnicos
TRANSGNICOS QUE PUEDEN SER LA CURA DE CIERTAS ENFERMEDADES
Ejemplos:
Cerdos transgnicos como modelo de rinitis pigmentosa y enfermedades de
Alzheimer
Ovejas transgnicas como modelo de fibrosis qustica
Ventajas

Xenotrasplantes: obtencin de rganos procedentes de animales

aptos para ser trasplantados en humanos
Modelos de enfermedades humanas
Biorreactores, es decir, como medio de obtencin de grandes
cantidades de un producto biolgico
Desventajas
La compleja tarea de generar un animal de granja transgnico
Los costos de su desarrollo
Los minuciosos controles a los que deben ser sometidos los
productos obtenidos por esta va, hacen que todava no se vea reflejado en
el mercado todo el potencial de esta tecnologa.
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Publicado por Verito Gallegos Zambrano en 18:06 No hay comentarios:

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domingo, 24 de noviembre de 2013

ADN recombinante relacionado a

Enfermedades Mitocondriales

ERITROPOYETINA

HUMANA RECOMBINANTE

Gracias a su produccin por mtodos de ingeniera gentica se ha podido

obtener Epo- HR (Eritripoyetina Humana Recombinate) pura por tcnicas de
DNA recombinante, lo que ha permitido su uso en otras investigaciones y el
tratamiento de algunas enfermedades como las mitocondriales.

En presencia de insuficiencia pancretica que se observa en el sndrome de

Pearson se

deben administrar extractos pancreticos, y para compensar la anemia,

transfusiones o bieneritropoyetina recombinante.
Administrar la EPO-Hr se incrementan los niveles sricos de Epo endgeno y
estimulan los receptores de los progenitores Eritroides en los momentos
ptimos de su maduracin.
En algunos pacientes la respuesta inicial puede durar de 2 a 6 semanas. En la
respuesta a la EPO influyen la disponibilidad del hierro y enfermedades
concomitantes.

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Publicado por Verito Gallegos Zambrano en 7:15 No hay comentarios:

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viernes, 15 de noviembre de 2013

ADN recombinante en la naturaleza

TRANSFECCIN BACTERIANA
Los virus transfieren ADN entre bacterias a travs de plsmidos, durante la
infeccin. Dentro de la clula infectada, los genes se replican y dirigen la
sntesis de protenas virales. Los genes replicados y las nuevas protenas
virales se ensamblan dentro de la clula y forman nuevos virus que, a su vez,
son liberados para infectar a otras clulas. Por lo general, un virus determinado
solo infecta y se replica en las clulas de ciertas especies bacterianas,
animales o vegetales. Durante muchas infecciones virales, las secuencias del
ADN viral se incorpora a uno de los cromosomas de la clula husped. Este
ADN puede permanecer ah durante das, meses o incluso aos. Cuando se
producen nuevos virus a partir del ADN incorporado, estos pueden integrar por
error genes humanos en el genoma del virus; de este modo se crea un virus
recombinante.

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Publicado por Verito Gallegos Zambrano en 11:17 No hay comentarios:

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domingo, 10 de noviembre de 2013

TCNICAS DE HIBRIDACIN UTILIZADAS PARA

EL ESTUDIO DE ESTAS ENFERMEDADES

Artculo: "HIBRIDACIN EN MUTACIONES DEL GENOMA

MITOCONDRIAL"
Tcnica de Hibridacin Southern blot
Muestra biolgica: msculo estriado
El ADN es digerido con una enzima de restriccin Pvu II y los fragmentos son
separados por tamaos
mediante una electroforesis en un gel.
Tincin: con bromuro de etidio (fig.1)
Hidrolisis parcial: con un cido dbil y desnaturalizados con NaOH para
permitir la transferencia.
Posteriormente, el ADN es transferido a un filtro de nitrocelulosa, con lo que en
el filtro queda representada una rplica de la disposicin de los fragmentos de
ADN presentes en el gel.
A continuacin el filtro se incuba durante 50 minutos con la sonda marcada
(radiactivamente o con un
fluorocromo); durante la incubacin la sonda se va hibridando a las molculas
de ADN de cadena sencilla de secuencia complementaria (o muy parecida).

Heteroplasmia entre 34.2% a 60,3% ; con grandes delecciones del mtDNA

( 8483 a 13483 pares de bases)

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Publicado por Verito Gallegos Zambrano en 14:21 No hay comentarios:

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mircoles, 30 de octubre de 2013

PCR para Enfermedades Mitocondriales

"Uso de la tcnica SSCP para detectar

mutaciones puntuales del ADN
mitocondrial humano"
ARTCULO
En el presente trabajo se evala la tcnica de SSCP (polimorfismo de
conformacin de cadena individual de ADN) para detectar mutaciones
puntuales, tanto por su sensibilidad en la deteccin (alrededor 80% en
condiciones ideales), como por su implementacin fcil y econmica. Se
utilizaron como controles positivos y negativos, ADN de voluntarios
caracterizados previamente para las mutaciones puntuales de 5 RFLPs
mitocondriales. Para la optimizacin de la prueba fueron ensayadas
concentraciones variables del tampn TBE (1X y 0,5X) y del glicerol (10%, 5%
y 0) en geles de poliacrilamida. Cuatro de los 5 RFLPs fueron detectados en las
condiciones utilizadas y pueden ser usados en estudios de rutina sin usar
enzimas de restriccin. Adems, la tcnica SSCP permiti determinar
mutaciones desconocidas en un segmento de 394 nucletidos de la regin
hipervariable (HVI) del ADNmt. Diferencias en correspondencia a los distintos
haplotipos fueron detectados e incluso permiti discernir grupos dentro del
mismo subtipo. La secuenciacin de dos muestras del subtipo B1 con
migracin diferencial en SSCP, corrobor la existencia de siete nucletidos
distintos.

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Publicado por Verito Gallegos Zambrano en 20:59 No hay comentarios:

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domingo, 27 de octubre de 2013

EXTRACCIN DE MUESTRAS Y DIAGNSTICO

Diagnstico Gentico
Para su estudio se deben escoger los tejidos ms afectados, por la mayor probabilidad de
encontrar mitocondrias mutadas.
Se investiga la existencia de:
- Mutaciones puntuales.
- Delecciones.
- Duplicaciones.
- Depleccin del ADNmt.
Los estudios genticos se pueden realizar en sangre (5/10 ml sangre con EDTA)
y tejidos(fibroblastos,
msculo, hgado y otros tejidos congelados)
AMPLIFICACIN DEL ADNmt
PCR
intervienen tres segmentos de ADN: el segmento de doble cadena que queremos amplificar,
los oligonucletidos (primers u oligos), enzima Taq polimerasa (Taq), deoxinucletidostrifosfato (dNTPs), sales, y un tampn. PROCESO de Desnaturalizacin, Anexin,
Amplificacin; en un promedio de 30 ciclos.

SECUENCIACIN DEL ADNmT

Mtodo de Sanger
Tiene por objeto determinar el orden de nucletidos que componen el fragmento de ADNmt a
estudiar.
La clave en este mtodo esta en la utilizacin de nucletidos modificados llamados
dideoxinucletidos (ddNTPs). Estos son idnticos a los nucletidos normales o
deoxinucletidos (dNTPs) utilizados durante la sntesis del ADN, exceptuando la falta de un
grupo OH en la posicin 3 de la molcula de desoxirribosa.

QU PASA CON LA TRADUCCIN?

La sntesis de las protenas mitocondriales tiene lugar en ribosomas especficos de la
mitocondria, cuyos componentes estn codificados en el ADNmt (ARNr 12S y 16S) y en el
genoma nuclear (84 protenas ribosomales). En este sistema de traduccin se sintetizan las trece
protenas codificadas en el ADNmt utilizando un cdigo gentico que difiere ligeramente
del cdigo gentico universal. As, UGA codifica el aminocido triptfano (Trp) en vez de
ser un codn de terminacin, y los codones AUA y AUU se utilizan tambin como codones de
iniciacin.
Actualmente se han descrito ms de 50 mutaciones puntuales, que se localizan en los tres tipos
de genes codificados en el ADNmt (ARNr, ARNt y polipptidos del OXPHOS). Segn su efecto
patognico, distinguimos las mutaciones que originan el cambio de un aminocido por otro,
afectando a alguno de los 13 genes codificantes de protenas, y las mutaciones que afectan a
losgenes de los ARNr ARNt, que tienen efectos globales en la sntesis de las protenas
mitocondriales.

VIDEO
DE

ILUSTRATIVO
GENOMA

MITOCONDRIAL
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Publicado por Verito Gallegos Zambrano en 12:58 No hay comentarios:

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jueves, 10 de octubre de 2013

QU SUCEDE EN LA TRANSCRIPCIN?
En la transcripcin del ADNmt intervienen una polimerasa de ARN, al menos un factor de
transcripcin implicado en la iniciacin (mtTFA), y uno de terminacin (mTERF). Las dos
cadenas del ADNmt se transcriben completamente a partir de tres puntos de iniciacin
diferentes, dos para la cadena pesada (H1 y H2) y uno para la cadena ligera (L), originando
tres molculas policistrnicas que se procesan posteriormente por cortes endonucleolticos
precisos en los extremos 5 y 3 de las secuencias de los ARNt, para dar lugar a los ARNr, ARNt
y ARNm maduros. De esta forma los ARNt, situados entre los genes de los ARNr y ARNm,
actan como seales de reconocimiento para los enzimas de procesamiento.
En general, la delecin es nica, pero tambin se han descrito casos de deleciones mltiples. La
gravedad de la enfermedad depende del porcentaje de DNA mutado en el individuo. En general
estn localizadas en el arco grande comprendido entre los orgenes de replicacin del DNA y
mantienen siempre las secuencias requeridas para la replicacin del DNA y los promotores de la
transcripcin.
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Publicado por Verito Gallegos Zambrano en 11:31 No hay comentarios:
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sbado, 5 de octubre de 2013

EPIGENTICA DE LA ENFERMEDAD
Las mutaciones patolgicas se pueden encontrar tanto en los genes de tRNA, de rRNA, como en
los codificantes de protenas, y responden siempre a un tipo de herencia materna.
En si las principales causas epigenticas de las enfermedades mitocondriales son el EXCESO
DE RADICALES LIBRES DE PERXIDO DE HIDRGENO Y EL ENVEJECIMIENTO Y
ALTERACIONES
A
NIVEL
DE GLNDULA TIROIDES

Por qu se produce un defecto hereditario en la produccin de energa?

Cada una de las protenas que constituyen el sistema OXPHOS est determinada
genticamente (codificada).
Cuando se produce una mutacin en un gen que codifica alguna de estas protenas, sta
muestra alteraciones en su concentracin o estructura que pueden alterar su funcin.
Tambin el ensamblaje de los componentes de la cadena respiratoria est determinado
genticamente y puede mostrar alteraciones que comprometen la sntesis de ATP.
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Publicado por Verito Gallegos Zambrano en 8:45 No hay comentarios:
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sbado, 28 de septiembre de 2013

BASES MOLECULARES
Caractersticas del ADN mitocondrial:
Mitocondrias es poseer un sistema gentico propio para replicar, transcribir y traducir la
informacin gentica que contiene.
(ADNmt) humano es una molcula bicatenaria, circular, cerrada, no se asocia con historias, se
replica a partir de un solo punto de origen y es muy pequeo.
El ADNmt tiene informacin para 37 genes: 2 (rARN), 22 de transferencia (tARN), que son y 13
polipptidos que forman parte de la Fosforilacin oxidativa.

Qu caractersticas tiene el mDNA?

Las mutaciones del mDNA tienen caractersticas especiales:

Herencia materna: Las mitocondrias se heredan de la madre, solo las mujeres lo

transmiten de nuevo a la siguiente generacin.
2.
Heteroplasmia: Las copias mutadas del mDNA suelen estar en las mitocondrias
mezcladas junto con copias normales.
1.

3.

Alta tasa de mutacin: El mDNA es muy vulnerable y presenta una tasa de

mutacin muy superior al nDNA.
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Publicado por Verito Gallegos Zambrano en 9:56 No hay comentarios:

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viernes, 20 de septiembre de 2013

CONCEPTO
Es una enfermedad causada por un defecto en la produccin de energa dentro de las
clulas del organismo.
Todos los seres vivos necesitan energap ara crecer, moverse, pensar y cualquier otra actividad.
Tambin necesitamos energa para que funcionen todas las reacciones metablicas que
permiten la vida.
La energa se produce dentro de unos orgnulos contenidos en las clulas,
llamados mitocondrias.

Por qu se produce un defecto en la produccin de energa?

Puede producirse un defecto en la produccin de energa cuando alguna de las protenas que
constituyen el sistema OXPHOS no se genera correctamente o bien cuando los componentes
de la cadena no se ensamblan bien entre ellos.
Estos defectos pueden serhereditarios o adquiridos.