Seale los seis mayores factores que influyen en la separacin de los componentes de

una muestra mediante cromatografa de gases con columna capilar

La siguiente figura muestra un inyector split/splitless, identifique sus partes y seale

como es su funcionamiento.

Determine k, N y HETP para el tolueno en la siguiente separacin cromatogrfica:

Soluto
Aire
Benceno
tolueno
Longitud de la columna
Velocidad de flujo
Temperatura

TR min
1.5
7.45
10.6
10 metros
30 mL/min
constante

W min
1.05
1.45

3. Para determinar cromatogrficamente los componentes de una mezcla es necesario

optimizar tanto las condiciones instrumentales como metodolgicas. De acuerdo a lo
expresado, analice las secuencias preparativas para separar:
a) Los cidos grasos presentes en una muestra de aceite de oliva mediante CG
2. Se extrae el jugo de 500 g de naranjas, obtenindose un rendimiento de 42%. A 20,0
g del jugo extrado se le adicionan 20 mL de cido oxlico 1 % p/v y se llevan en
volumtrico a 100 mL con agua extra pura; una vez homogeneizados se filtran por
0,45 m y desgasifican por ultrasonido; por ltimo 30 L se inyectan al
cromatgrafo lquido. Posteriormente se inyectan 30 L de una solucin preparada
con 2,0 ml de la solucin de muestra, ms 2,0 ml de una solucin patrn que
contiene 25 g/mL de cido ascrbico y 100 g/mL de cido ctrico, ms 2,0 ml de
cido oxlico 1 % p/v, y se diluyen a 10,0 ml con agua extra pura.
Los parmetros cromatogrficos son:
Fase mvil: Buffer pH 2,5 fosfato dihidrgeno potsico
Flujo 0.8 ml/min
Presin : 655 psi
Columna: RP 18 250 mm x 4,6 mm
Los resultados se resumen en los siguientes cromatogramas, el cido ascrbico es el
menos retenido por lo que corresponde a la primera elucin; el 1 cromatograma
corresponde a la muestra y el 2 a la muestra adicionada de patrones.
Calcular el contenido de cido ascrbico y ctrico presente en 100 g de naranja

3. El siguiente cromatograma corresponde a una mezcla de cidos grasos disueltos en

CCl4, al separarlos en una columna de 150 cm de longitud y 0,4 cm de dimetro
interno. Asuma que la respuesta del detector es la misma por mol de cido y que la
muestra contena 240 g del cido C18. Qu masas de cidos estn presentes en la
mezcla? qu % de c/u hay presentes en la mezcla? qu eficiencia presenta la
columna para separar los componentes de la mezcla?

Se desea estudiar por HPLC la separacin de dos compuestos A y B con una columna
tipo RP 18. La fase mvil es una mezcla binaria de agua y acetonitrilo. Se admite que
existe una relacin lineal entre el logaritmo del factor de capacidad y el porcentaje de
acetonitrilo de la mezcla binaria agua/ acetonitrilo utilizado. Las ecuaciones de las
rectas obtenidas a partir de los dos cromatogramas que utilizan como fase mvil, uno
una mezcla agua/acetonitrilo 70/30 v/v y otro una mezcla agua/acetonitrilo 30/70 v/v,
son:
Para el compuesto A: log kA = -6,075*10-3 (% ACN) + 1,3283
Para el compuesto B: log kB = -0,0107 (% ACN) + 1,5235
a) Encontrar la composicin de la fase binaria que dar lugar a un factor de
selectividad de 1.
b) Se supone que para cada compuesto la anchura a media altura del pic
correspondiente en el cromatograma es la misma y que la eficacia de la columna no

se modifica siguiendo la composicin de la fase mvil. La resolucin entre los pic,

es mejor para la fase mvil que contiene un 70% de agua o un 30 % de agua?
Se estudia la separacin cromatogrfica para cuatro gases en una refinera, tres
temperaturas diferentes utilizando una misma columna capilar de 30 m y 250 m de d i
y un cromatgrafo con opcin criognica.
Los factores de capacidad encontrados se sealan en la siguiente tabla:
Compuesta T Ebullicin
k
k
k
C
T
Columna T Columna 25C T Columna 40C
-35C
Etileno
-104
0,249
0,102
0.0833
Etano
-89
0,408
0,148
0,1170
Propeno
-47
1,899
0,432
0,324
Propano
-42
2,123
0,481
0,352
a) Considerando el orden de elucin la fase estacionaria es polar o no es polar?
b) Calcule el factor de selectividad para la pareja propeno-propano a las tres
temperaturas.
c) Por qu k disminuye para un mismo compuesto cuando la temperatura aumenta?
d) Cul es la cantidad de platos tericos de la columna para el propano a 40C,
conociendo que para esta temperatura la resolucin para la pareja es 2?. Calcular la
AEDT (H).
e) Cul ser el valor terico mnimo de la AEDT (H) para el propano a 40C?
Si se obtienen los siguientes cromatogramas en la separacin de una misma mezcla de
componentes por HPLC. si la separacin se realiza con una misma fase estacionaria
Analice e interprete los cromatogramas, y explique las posibles causas para la diferencia
entre ellos.

4. Se extrae el jugo de 200 g de naranjas, obtenindose un 36% de jugo. A 12,00g del

jugo extrado se le adiciona 20 mL de cido oxlico 1 % p/v y se lleva en
volumtrico a 100 mL con agua extra pura; una vez homogeneizados se filtran por
0,45 m y desgasifican por ultrasonido; por ltimo 30 L se inyectan al
cromatgrafo lquido. Paralelamente se preparan soluciones patrones segn la tabla
resumen y de cada patrn se inyectan 30 L.
Solucin
Patrn
N

Volumen
Solucin
muestra,
mL

Volumen Solucin
Patrn
c.
Ascrbico 50 mg/L,
mL

Volumen Solucin
Patrn
cido
Ctrico 250 mg/L,
mL

Volumen
Solucin cido
Oxlico 1% p/v,
mL

Volumen
Final
mL

1
2.0
1.0
1.0
2.0
10.0
2
2.0
2.0
2.0
2.0
10.0
Los parmetros cromatogrficos usados son: Fase mvil: Buffer pH 2,5 fosfato
dihidrgeno potsico; Flujo 0.8 ml/min; Presin : 655 psi; Columna: RP 18 250 mm
x 4,6 mm.
Resultados:
Cromatograma 1: Solucin Patrn N 1

Cromatograma 2: Solucin Patrn N 2

Cromatograma N 3 Solucin de muestra

S el cido ascrbico es el menos retenido, calcular los mg de cido ascrbico y los

mg de cido ctrico presentes en 100 g de naranja.

Se extrae el jugo de 10 limones, se trasvasa a un volumtrico de 200 mL que contiene

20 mL de cido oxlico 5 %, se lleva a volumen con agua calidad cromatogrfica,
despus se centrfuga y filtra por 0.45 m, se desgasifica por ultrasonido y luego se
inyectan 100 L al cromatgrafo lquido de alta resolucin HPLC. Junto con la muestra
se preparan 4 soluciones estndares de cido ascrbico y cido ctrico, que se someten a
ultrafiltracin y ultrasonido para finalmente inyectar 100 L de cada uno de los cuatro
estndares, obtenindose los siguientes resultados:
Cromatografa
ac ascrbico,
ppm
Estndar 1
Estndar 2
Estndar 3
Estndar 4
Muestra

0
5
10
15
20

ac ctrico,
ppm
0
100
200
300
400

tR

tR

Ac.
Ascrbico

Ac.
Ctrico

2,03
2,03
2.02
2,03
2,03

3,68
3,60
3,55
3,52
3,57

rea,
cuentas
0
518236
1120113
1711039
2259509
1720297

rea,
cuentas
0
384306
732761
1095291
1440761
1096755

a) S los 10 limones pesaron 1326 g y eran de calibre similar, cuantos mg de cido

ascrbico proporciona un limn
b) Cuntos mg de cada cido estn presentes en 100 g de muestra
c) Si el rendimiento en jugo de los 10 limones fue de 24 % en peso, cuantos mg de
cada cido proporcionan 100 mL de jugo.