28.03.

2016
Reacii de neutralizare

Reaciile de neutralizare sunt reacii antigen-anticorp, n care ambele

componente se afl n stare solubil.
Exist un exces de antigen care are o aciune biologic nociv.
n urma formrii complexelor antigen-anticorp, aciunea nociv dispare.
Reacia de neutralizare pozitiv este aceea n care efectul nociv al antigenului
dispare.
Antigenele pot fi, n acest tip de reacii, toxine, enzime, virui, lecitina,
hemolizina.
Hemolizina este o substan de natur vegetal sau animal, sau de natur
imun, avnd proprietatea de a descompune i a dizolva globulele roii, elibernd
hemoglobina.
Lecitina este o lipid fosforat care se gete mai ales la nivelul esutului
nervos.
Reacia de neutralizare depinde de viteza cu care anticorpii se pot combina
cu antigenele, ct i de gradul de stabilitate a legturii antigen-anticorp.

n funcie de tehnic, reacia de neutralizare se poate realiza:

I. in vivo, pentru identificarea anticorpilor i antigenelor, direct pe animalele
de experien sau pe om. Se urmresc 2 efecte nocive:
1. letal, la cobai
2. dermonecrotic, la om
1. Reacia de indentificare a toxinei difterice prin efect letal la cobai, reacie
folosit pentru a afla dac tulpina este rezistent.

Difteria este o boal infecioas, determinat de bacilul difteric, se

localizeaz la nivelul faringelui, formnd membrane false, mpiedicnd astfel
respiraia i nghiirea alimentelor.
Tehnic: se inoculeaz ser antitoxin la cobai.
Antitoxina este o toxin microbian atenuat prin metode chimice sau fizice,
fiind folosit la producerea de vaccinuri. Aceste toxine produc imunitate fa de
toxinele din care au fost derivate.
Se ia ca martor un cobai neprotejat, cu ser antitoxin difteric.
La amndoi se inoculeaz filtrat din cultura de Corynebacterium diphtheriae.
Dac animalul neprotejat moare, iar cellalt triete, nseamn c filtratul
conine toxin difteric.
2. Evidenierea efectului dermonecrotic, care nseamn apariia, la locul
inoculrii pe derm, a unei zone eritematoase cu edem.
Se folosete pentru testarea eficienei la vaccinri cu antitoxin difteric.
Reacia evideniaz anticorpi antitoxina difteric.
Se injecteaz o mic cantitate de antitoxin difteric sub piele. Dup 24 de
ore, dac exist anticorpi specifici, nu apare efectul dermonecrotic, reacia este
negativ.
Dac nu exist anticorpi specifici, apare efectul dermonecrotic, iar reacia
este pozitiv.

II. in vitro
Reacia ASLO se efectueaz n cazul infeciilor streptococice, evideniind
anticorpi antistreptolizina O.
Streptolizina este o hemolizin produs de streptococii de grup A, iar la
pacienii infectai, streptolizina O acioneaz ca un antigen, fa de care organismul
dezvolt un rspuns umoral specific.
Efectul nociv al acesteia const n liza hematiilor.
Tehnic: peste serul de cercetat se adaug streptolizina O.
Se las un pic n contact, iar dac exist anticorpi specifici antistreptolizina O,
acetia se unesc cu antigenul, neutraliznd efectul hemolitic al acesteia.

Se adaug o suspensie de hematii, iar reacia se citete dup 3 ore.

Dac lichidul este incolor i hematiile sunt depuse pe fundul vasului, intacte,
reacia este pozitiv.
Anticorpii neutralizeaz efectul hemolitic al streptolizinei O deoarece atunci
cnd se realizeaz reacia antigen-anticorp este mascat i zona nociv (situsul
nociv).

Reacii ce utilizeaz complementul

Exist 4 tipuri de reacii:

1. Reacia de fixare a complementului este o reacie antigen-anticorp,
folosit n diagnosticul serologic (RFC), este util n imunocomplexe, sunt foarte mici
i nu se vd cu ochiul liber.
Este folosit n diagnosticul unor ricketsioze i n diagnosticul sifilisului.
Complementul are 2 proprieti: se fixeaz pe complexele antigen-anticorp i
odat activat, dac sistemul antigen-anticorp este hemolitic, produce liza hematiilor.
Sistemul hemolitic este format din hematii cu rol de antigen i anticorpi
antihematii cu rol de anticorpi.
Dac pe hematii se fixeaz anticorpii, acetia nu lizeaz hematiile.
n schimb, dac pe complexul antigen-anticorpi antihematii se fizeaz
complementul, atunci hematiile vor fi lizate.
Tehnica reaciei are 2 timpi:
n primul timp serul de cercetat se pune n contact cu antigenul cunoscut i
cu complementul.
Complementul este luat din serul de cobai.
Se las un timp n contact, iar dac exist anticorpi corespunztori
antigenelor se formeaz complexe antigen-anticorp pe care se fixeaz
complementul.

Complementul se leag de complexele imune.

Dac nu exist anticorpi corespunztori, nu se formeaz imunocomplexe, iar
complementul rmne n stare liber.
n timpul 2 al reaciei se adaug sistemul hemolitic, complexul antigenanticorp.
Dac exist anticorpi corespunztori antigenelor, hematiile nu sunt lizate (nu
apare hemoliza), reacia fiind negativ.
Absena hemolizei indic prezena anticorpilor.
Dac nu exist anticorpi corespunztori, complementul rmas liber se fixeaz
pe sistemul hemolitic i apare hemoliza, reacia fiind pozitiv.
Apariia hemolizei indic absena anticorpilor n serul de cercetat.

2. Testul de inhibare a hemolizei imune pasive n prezena

complementului
Acest test este analog testului de inhibare a hemaglutinrii, diferena
constnd n desfurarea reaciei n prezena complementului.
n cazul n care n prima etap a reaciei se formeaz complexul antigenanticorp, nu mai rmn disponibil anticorpi care s reacioneze cu hematiile
sensibilizate, astfel nct n ultima etap, complementul nu este cuplat de hematiile
sensibilizate i acestea nu sunt lizate.
n acest caz, rezultatul testului este considerat pozitiv.
n cazul n care nu se formeaz complexul antigen-anticorp, anticorpii liberi
reacioneaz cu hematiile sensibilizate i are loc liza acestora, rezultatul fiind
considerat negativ.
Interpretarea rezultatului se face n funcie de gradul hemolizei obinute,
lund n considerare i dimensiunile sedimentului de hematii.
Acest test investigheaz prezena antigenului n ser, n timp ce testul clasic
investigheaz prezena anticorpilor n ser.

3. Testul de imunohemoliz pasiv n prezena complementului

Ca i n cazul testului de hemaglutinare pasiv, antigenul este fixat pe
hematie i reacioneaz cu anticorpii specifici.

n acest fel se formeaz complexe antigen-anticorpi.

Realizarea acestui complex n prezena complementului determin liza
hematiilor sensibilizate cu antigen.

4. Determinarea imunohemolitic a complementului

Se refer la reacia antigen-anticorp, numai n msura n care se folosete ca
indicator sistemul hemolitic.
Reacia msoar activitatea hemolitic total a sistemului complement.