24/3/2011

Estrutura

Funo

1.

Funo proteica envolve a ligao reversvel com outras molculas.

A molcula que se liga reversivelmente proteina LIGANTE

2.

O ligante se liga na protena e um stio especfico, chamado STIO DE

LIGAO. Stio de ligao: complementar ao ligante em tamanho,
forma, carga, hidrofilicidade/hidrofobicidade, especfico

3.

A adaptao estrutural resultante da ligao da protena ao

ligante Adaptao Induzida ou Encaixe Induzido.

4.

No caso da ENZIMA,
Ligante = Substrato
Stio de ligao = Stio Ativo, Stio Cataltico

Enzimas

24/3/2011

Introduo
1. Duas condies fundamentais para a vida :
(1) capacidade de se autoreplicar
(2) capacidade de catalisar reaes qumicas eficiente e
seletivamente

Ex. : Acar pode ser estocado por anos, mas no organismo ele
libera energia qumica em segundos catlise

Energia

C6H12O6 + 6 O2

6 CO2 + 6 H2O + 2870 kJ of energy

Enzimas
ENZIMAS - Protenas altamente especializadas que
possuem as seguintes propriedades:
Eficincia cataltica extraordinria
Alto grau de especificidade
Podem ser reguladas

24/3/2011

Eficincia Cataltica
Eficincia cataltica: enzimas so catalizadores capazes
de aumentar enormemente a velocidade de reaes
qumicas especficas sem serem consumidos no
processo.

Especificidade
Stio Ativo: Regio especfica, em forma de fenda ou bolso, onde
cadeias laterais de aminocidos criam um ambiente
tridimensional complementar ao substrato.
SUBSTRATO (ligante)
STIO ATIVO

Quimotripsina

24/3/2011

Regulao
A concentrao e a atividade da enzima podem ser reguladas.

Regulao da expresso gnica

- pH, temperatura
-Interao com moduladores/reguladores
-Interao com inibidores

Isso permite que a clula ajuste o metabolismo de acordo com as

necessidades.

Classificao
So classificadas de acordo com o tipo de reao que catalisam

24/3/2011

Algumas enzimas precisam de

outras molculas alm da protena
para sua atividade enzimtica.
Grupos Prostticos

Cofatores e Coenzimas
Cofatores : compostos inorgnicos

24/3/2011

Cofatores e Coenzimas

Cofatores : compostos orgnicos

Enzimas: Como funcionam?

24/3/2011

Enzimas diminuem a energia de ativao

A funo termodinmica denominada de energia livre (G) importante

para compreender como as enzimas trabalham.
Parmetros termodinmicos que deve-se considerar:

1) A variao de energia livre (G) entre produtos e reagentes. G: indica

a espontaneidade da reao

2) A energia necessria (energia de ativao) para iniciar a converso dos

reagentes em produtos. Determina a velocidade da reao

Energia Livre de Ativao

24/3/2011

Estabilizao do estado de transio

O Stio Ativo funciona como um molde molecular flexvel,
que se liga ao substrato em uma estrutura geomtrica similar
ao estado de transio
Glicose

Stio de Ligao do Substrato

STIO ATIVO

A ligao do substrato ao stio ativo induz

alteraes na conformao da protena,
amoldando sua estrutura e a do substrato de
modo a favorecer a catlise.

Cintica
Enzimtica

24/3/2011

Cintica Enzimtica

Estuda o mecanismo de reaes catalisadas

enzimaticamente atravs do estudo da
velocidade da reao enzimtica e como
ela se altera em funo de mudanas nos
parmetros experimentais

Cintica Enzimtica

Fatores que afetam a velocidade da reao

enzimtica:
Temperatura
pH
Concentrao do Substrato

24/3/2011

1913: Teoria geral da ao das enzimas (Michaelis&Menten)

1913: Teoria geral da ao das enzimas (Michaelis&Menten)

E + S ES
1

E+P

1. Inicialmente a enzima (E) se combina reversivelmente

com o substrato (S) para formar o complexo ES, um
passo relativamente rpido;
2. A seguir, o complexo ES se rompe liberando o produto
(P) e regenerando a enzima livre (E) - uma etapa lenta.
ETAPA LIMITANTE DA REAO!

10

24/3/2011

Equao de Michaelis-Menten

E + S ES
1

E+P

As seguintes consideraes so feitas ao derivar-se a

equao de Michaelis & Menten:
1. A [S] muito maior do que a [E]
2. [ES] no varia com o tempo, isto a velocidade de formao
de ES igual ao da degradao (Estado Estacionrio).
3. Velocidade inicial: As velocidades iniciais (V0) so utilizadas na
anlise de reaes enzimticas. A Velocidade medida assim
que o substrato adicionado.

Equao de Michaelis-Menten

Onde:
Vo: velocidade no tempo inicial quando a [S] >>> [E]
Vmax: V mximo
[S]: concentrao do substrato
Km: constante de Michaelis

11

24/3/2011

Efeito da [S] sobre a Velocidade da Reao (Vo)

E + S ES E + P
[S] >>Km: Enzima est saturada com
S (todas as enzimas econtram-se
complexadas com o substrato). A
velocidade independe da [S]

[S] << Km: Grande quantidade

de enzimas livres. A velocidade
proporcional [S].

Grfico dos Duplos-Recprocos (Equao de Lineweaver- Burk)

Transformao da equao de Michaelis e Mentem

12

24/3/2011

Km

KM = [S] quando vo = 1/2 Vmax .

Em geral, quanto menor o KM, mais forte ligao do
substrato pela enzima.
KM usado como uma medida da afinidade da
enzima pelo substrato

13

24/3/2011

Inibio da Atividade Enzimtica

1.

Importncia Farmacutica do estudo da inibio enzimtica

Inibidores enzimticos so agentes moleculares que interferem na
catlise, diminuindo a velocidade da reao esse o mecanismo de
ao da grande maioria de agentes farmacuticos.
Ex. : Aspirina Inibidor da sntese de Prostaglandinas Antiinflamatrio

2.

Classificao:
1) Inibio Reversvel:

Inibio Competitiva
Inibio No-Competitiva
Inibio Inconpetitiva
Inibio Mista

2) Inibio Irreversvel

Inibio Competitiva
Inibidor compete (reversvelmente) com o substrato pelo stio ativo

14

24/3/2011

Inibio Competitiva
Cintica na presena de [I] crescentes

[I]
10 [I]

5[I]

1. Vmax no se altera
2. Km aumenta

Inibio Competitiva
Exemplos: Intoxicao por Metanol
Desidrogenase alcoolica converte metanol em formaldedo (txico!) que
pode resultar em cegueira.
Tratamento: ETANOL
O etanol compete com o metanol pelo stio ativo da enzima

Exemplos: Frmacos que reduzem o colesterol

- Lovastatina compete com a HMG-CoA pelo stio ativo da HMG-CoA
Redutase

15

24/3/2011

Inibio No-Competitiva
Inibidor e substrato ligam-se a stios diferentes!

Inibio No-Competitiva

1. Vmax diminui
2. Km no se altera

16

24/3/2011

Inibio IRREVERSVEL
Inibidores irreversveis LIGAM-SE COVALENTEMENTE enzima
So teis como ferramentas no estudo de mecanismo de reao,
principalmente para a identificao de aminocidos importantes para a
catlise no stio ativo.
Quimotripsina
Ligao covalente

(Diisopropylfluorophosphate)

17