Vous êtes sur la page 1sur 40

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD


ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

SEMESTRE 2016- I
I CICLO

GUA DE PRCTICA DE BIOLOGA


MOLECULAR

PROFESOR COORDINADOR:
Mg. EDITH RODRIGUEZ QUISPE

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGA MOLECULAR

PRCTICA N 1

APLICACIN DEL MTODO CIENTFICO

I.

OBJETIVOS

II.

MATERIALES

III.

Dar a conocer los lineamientos bsicos del mtodo cientfico y su aplicacin


Adiestrar al estudiante en el uso del mtodo cientfico en el campo de la medicina

Lectura seleccionada a partir de una revista cientfica especializada

PROCEDIMIENTO

Hacer una descripcin de las diferentes etapas que comprende el mtodo cientfico.
Leer el artculo seleccionado rpidamente para tener una idea general del mismo.
Proceder a leer el artculo cuidadosamente y analizarlo con el propsito de establecer lo
siguiente:
1.
2.
3.
4.
5.

IV.

Reconocimiento del problema planteado


Formulacin de la hiptesis
Formulacin de objetivos y mtodos
Prueba de hiptesis mediante la experimentacin
Anlisis de resultados y conclusiones

RESULTADOS
Entregar el reporte del artculo evaluado considerando todos los pasos del mtodo cientfico.

Rev Med Hered. 2015; 26:230-237.Frecuencia anticuerpos anti Toxoplasma gondii en gestantes de
Cucuta. Colombia.
Rev Med Hered. 2014; 25:208-214: .Eficacia del proceso de limpieza y desinfeccin de los
endoscopios de un hospital de nivel III

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGA MOLECULAR
PRCTICA N 2

RECONOCIMIENTO EN MATERIAL BIOLGICO DE LOS CARBOHIDRATOS

I.

OBJETIVO
Reconocer las unidades monomricas y macromoleculares en los carbohidratos como
componentes fundamentales de todos los seres vivos

II.

MATERIALES

III.

Solucin de Glucosa 1% (monosacrido)


Solucin de Fructosa 1% (monosacrido)
Solucin de Sacarosa 1% (disacrido, azcar comn)
Solucin de Maltosa 1% (disacrido)
Solucin de Almidn 1% (polisacrido)
Reactivo de Molisch
cido sulfrico (H2SO4) concentrado
Reactivo de Benedict
Solucin de Lugol
Tubos de 13x100 mm
Tubos de 16x150 mm
Gradillas
Pipeta de vidrio graduada de 5 mL
Pipetas Pasteur
Propipeta
Pinzas de madera
Mecheros, trpode, rejilla de asbesto
Guantes
Plumn marcador

PROCEDIMIENTO

3.1. Determinacin General de Glcidos (reaccin de Molisch)


Los Glcidos o Hidratos de carbono por accin deshidratante del cido sulfrico originan compuestos
derivados del furfural, los que en presencia del alfa-naftol presente en el reactivo de Molisch, formarn
un anillo de color prpura.

Preparacin:
1. En tubos rotulados de 13x100 mm colocar 1 mL de cada solucin del glcido 1%: Glucosa,
Fructosa, Sacarosa, Maltosa y Almidn.
2. Aadir a cada tubo 2 gotas del Reactivo de Molisch y agitar suavemente.
3. Agregar lentamente por la pared del tubo, sin agitar, 1 mL de cido sulfrico (H2SO4)
concentrado.
4. Observar la formacin de un anillo color prpura en la zona de interfase si la reaccin es
positiva.
5. Determinar si la reaccin de Molisch es positiva o negativa para cada uno de los glcidos.

3.2. Determinacin de Azcares Reductores (reaccin de Benedict)


Un azcar reductor es aquel que en su forma cclica tiene el grupo OH del carbono anomrico libre y
por tanto puede convertirse en su forma lineal abierta que contiene (potencialmente) el grupo aldehdo
con capacidad reductora. El azcar reductor al ser sometido a la accin del calor en el medio alcalino del
reactivo de Benedict, se isomeriza formando cuerpos fuertemente reductores para el ion cprico (Cu+2)
del reactivo que es reducido a ion cuproso (Cu+1) el que reaccionar con los iones OH - del medio
precipitando como xido cuproso (Cu2O) que es de color rojo ladrillo.
Preparacin
1. En tubos rotulados de 16x150 mm colocar 2 mL de cada solucin de glcido 1%: Glucosa,
Fructosa, Sacarosa, Maltosa y Almidn.
2. Aadir a cada tubo 1 mL de Reactivo de Benedict.
3. Someter los tubos a ebullicin en agua hirviendo en un beaker por 5 min. Retirarlos con ayuda
de una pinza.
4. Observar la formacin del xido cuproso que es color anaranjado hasta rojo ladrillo si la
reaccin es positiva.
5. Determinar si la reaccin de Benedict es positiva o negativa para cada uno de los glcidos.

3.3. Determinacin de Almidn (reaccin de Lugol)


El ion triyoduro (I3--) del Lugol es adsorbido por el almidn a nivel de las hlices de la amilosa formando
compuestos complejos de color azul negruzco (yoduro de almidn).

Preparacin
1.
2.
3.
4.
5.

En un tubo de 16x150 mm colocar 2 mL de solucin de Almidn al 1%.


Agregar 3 gotas de Lugol y agitar.
Observar la formacin de color azul negruzco si la reaccin es positiva.
Calentar el tubo hasta observar algn cambio de color y luego dejar enfriar el tubo.
Observar los cambios de color e interprete el efecto del calor y enfriamiento en el proceso.

IV.

CUESTIONARIO P#2
1. Diga cules son las principales fuentes de carbohidratos en nuestra dieta y cul es el
requerimiento diario.

2. Explique por qu la lactosa es un azcar reductor. Esquematice la molcula de lactosa


sealando el carbono anomrico libre que reduce al cobre en la reaccin de Benedict.
3. Explique brevemente por qu se produce la intolerancia la lactosa.
4. Establezca las semejanzas y diferencias (estructurales y funcionales) entre el almidn y el
glucgeno.

V.

INFORME
Cartula
Introduccin
Marco terico: 2pp: Carbohidratos y fundamentos de las 3 reacciones
Resultados: Esquemas y tablas simples de la reaccin (+) o (-) para
cada glcido evaluado en cada una de las 3 pruebas.
Conclusiones: Interpretacin de los resultados explicando por qu el glcido da una reaccin (+)
o (-)
Cuestionario
Referencias bibliogrficas (estilo Vancouver)

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGA MOLECULAR

PRCTICA N 3

RECONOCIMIENTO EN MATERIAL BIOLGICO DE LPIDOS Y PROTENAS

I.

OBJETIVO

II.

Reconocer compuestos orgnicos como los lpidos y las protenas que son constituyentes
importantes en todos los seres vivos

MATERIALES

Aceite comestible
Albmina al 2%
Leche
Alcohol
Cloroformo
ter etlico
Solucin alcohlica de Sudn III
Tinta roja
Hidrxido de sodio NaOH 20%
Hidrxido de sodio NaOH 40%
Sulfato de cobre CuSO4 1%
cido ntrico HNO3 concentrado
Tubos de 16x150 mm
Tubos de 13x100 mm
Beakers de 50 mL
Mechero
Pipetas Pasteur de plstico de 2,5 mL
Guantes
Pinza de madera
Gradilla para tubos

III.

PROCEDIMIENTO

3.1

DETERMINACIN DE LPIDOS

3.1.1 Solubilidad de los Lpidos


Los lpidos son insolubles en agua y solubles en solventes orgnicos como el ter y cloroformo.

Preparacin:
1. En cuatro tubos rotulados de 13x100 mm colocar 1 mL de aceite.
2. Agregar los solventes en el siguiente orden:
tubo N 1: agua destilada
tubo N 2: alcohol
tubo N 3: cloroformo
tubo N 4: ter etlico
1.
2.
3.

1 mL
1 mL
1 mL
1 mL

Agitar cada uno de los tubos con la misma intensidad.


Observar cada tubo y determinar el grado de solubilidad de mayor a menor.
Interpretar la diferencia de solubilidad del lpido en los diferentes solventes.

3.1.2 Solubilidad y Tincin en Sudn III


El Sudn III es un tinte diazo altamente soluble en lpidos tindolos en la gama del rojo cereza
al anaranjado.

Preparacin:
1. En dos tubos de 13x100 mm colocar 1 mL de aceite.
2. Agregar a un tubo 1 mL de Sudn III y al otro tubo agregar 1 mL de tinta roja, agitar y dejar
reposar.
3. Observar la coloracin producida en la zona del aceite en uno de los tubos e interpretar los
resultados.
3.1.3 Saponificacin
Las grasas (acilglicridos) reaccionan en caliente con hidrxido sdico descomponindose en
cidos grasos y glicerina. La saponificacin se produce cuando los cidos grasos se combinan
con los iones sodio del hidrxido para dar jabones, que son por ende las sales sdicas de los
cidos grasos.
Preparacin
1. En un tubo 16x150 mm colocar 2 mL de aceite y 2 mL de hidrxido de sodio NaOH 20%.
2. Agitar enrgicamente y colocar el tubo en bao mara en ebullicin por 20 a 25 min.
3. Observar la formacin de 3 fases en el tubo: una inferior, que contiene la solucin de soda
sobrante junto con la glicerina formada; otra intermedia, semislida, que es el jabn
formado; y la superior, que contiene el aceite inalterado.

3.2

DETERMINACIN DE PROTENAS
3.2.1 Reaccin de Biuret
Los compuestos que contienen dos o ms enlaces peptdicos forman un complejo con las sales
de cobre en un medio fuertemente alcalino, dando un color prpura o violeta, debido a la
formacin de un complejo de coordinacin entre los iones del Cu+2 y los pares de electrones no
compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos.

Preparacin
1. En dos tubos 16x150 mm colocar por separado 2 mL de la solucin de albmina 2% (o
solucin de clara de huevo al 10%) y 2 mL de leche.
2. Agregar a cada tubo 2mL de hidrxido de sodio NaOH 40% y mezclar.
3. Aadir a cada tubo 6 gotas de sulfato de cobre CuSO4 1%.
4. Incubar los tubos a 37 C por 10 min.
5. Observar la coloracin producida y determinar si la reaccin es positiva o negativa.
6. Interpretar los resultados.

3.2.2 Reaccin Xantoproteica


Se emplea para determinar la presencia de protenas solubles en una solucin, empleando cido
ntrico (HNO3) concentrado. Las protenas solubles que presentan aminocidos aromticos
(fenilalanina, tirosina y triptfano), dan derivados nitrogenados que se colorean de amarillo.
Preparacin
1. En un tubo de 16x150 mm colocar 2 mL de la solucin de albmina al 2% o clara de huevo
al 10%.
2. Agregar 2 mL de cido ntrico (HNO3) concentrado.
3. Observar la formacin de un precipitado blanco y hervir por 3 min.
4. Observar la coloracin producida y determinar si la reaccin es positiva o negativa.

IV.

CUESTIONARIO P#3
1.
2.
3.
4.
5.
6.

V.

Defina emulsin y micela.


Cul es la semejanza y diferencia qumica entre el cido araqudico y el cido
araquidnico?
Desarrolle la reaccin de saponificacin entre el cido oleico y el hidrxido de sodio.
Qu aminocidos presentan anillos bencnicos? Esquematice cada uno de ellos.
Qu supone la desnaturalizacin de una protena?
Qu es la proteinuria?

INFORME

Cartula- Introduccin- Marco terico- Resultados y Fundamentos- Conclusiones- CuestionarioReferencias bibliogrficas (estilo Vancouver).

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGA MOLECULAR

PRCTICA N 4

EXTRACCIN DE CIDO DESOXIRRIBONUCLEICO (ADN)

I. OBJETIVOS
Utilizar un mtodo sencillo de extraccin de ADN a partir de clulas eucariotas poniendo
de manifiesto la estructura fibrilar del cido nucleico
Reconocer algunos componentes estructurales del ADN

II. MATERIALES

Muestras de origen vegetal y animal


Solucin salina de NaCl 0,9% --- mantener a 4C
Solucin de lisis (EDTA, SDS, NaCl) --- mantener en fro
Acetato de sodio 3M
Etanol 96 --- mantener en fro
Solucin salina citratada
Azul de metileno
ADN extrado en la prctica
Reactivo de Bial
Tubos de ensayo 16x150 mm
Beakers de 20 mL
Beaker de 500 mL
Baguetas
Mortero y piln
Embudos
Mechero
Pinzas de madera
Pipetas de 5mL
Propipetas
Gasa de 10x15cm (3)
Gradilla para tubos
Tijeras

III. PROCEDIMIENTO
3.1 Extraccin de ADN
Las molculas de ADN en una clula eucariota se encuentran dispersas en el ncleo y enrolladas
alrededor de molculas de protenas para formar la cromatina. Para la extraccin del ADN de una
clula se requiere homogenizar la muestra del tejido para proceder al lisado de membrana, la
liberacin del ADN, la separacin de protenas asociadas a dicha macromolcula y su posterior
obtencin bajo la forma de fibras.

Preparacin
1. En un mortero colocar la muestra (3 fresas sin hojas y/o un trozo de pltano de 3 cm) e
incorporar 2 mL de NaCl 0,9% triturando por 1 min.
2. Aadir 10 mL de la solucin de lisis y seguir triturando (~5 min) hasta obtener una masa
homognea y semilquida.
3. Agregar 2 mL de acetato de sodio a la preparacin, mezclar, para luego dejar reposar por 5
min.
4. Filtrar la preparacin en un tubo de 16x150mm con la ayuda de un embudo cubierto con
gasa.
5. Trasvasar 5-8 mL del filtrado a un beaker pequeo e incorporar por las paredes 2 volmenes de
etanol frio e introducir rpidamente una bagueta delgada y girar sobre su mismo eje a fin
de recuperar el ADN bajo la forma de fibras.
6. Colocar la bagueta con el ADN extrado en un tubo 16x150 mm conteniendo 1 mL de solucin
salina citratada para resuspenderlo y reservarlo para su uso en el siguiente experimento.
7. Obtener ms fibra de ADN para reconocer su carcter cido. Para ello dejar caer en las
hebras un colorante bsico como el azul de metileno.
3.2 Identificacin de Pentosas (reaccin de Bial)
Las pentosas se deshidratan en una solucin cida dando furfural que al reaccionar con el orcinol
del reactivo de Bial y en presencia de FeCl3, dan un producto de condensacin de color verdeazulado.
Preparacin
1. En un tubo 16x150 mm colocar 1 mL de ADN extrado en el experimento anterior y en otro tubo
colocar 1 mL agua destilada.
2. Agregar a cada tubo 3 mL de Reactivo de Bial.
3. Calentar cuidadosamente cada tubo en la llama de un mechero hasta que la solucin
comience a hervir.
4. Observar y anotar el color que aparece en cada tubo de ensayo determinando si la reaccin
es positiva o negativa.
5. Interpretar el resultado sealando el nombre de la pentosa presente en el ADN.

IV. CUESTIONARIO P#4


1. Cul es la composicin bsica del ADN?
2. Qu protena est asociada al ADN, cules son sus caractersticas?
3. Por qu el ADN absorbe luz UV a 260 nm de longitud de onda?

V. INFORME:
Cartula- Introduccin- Marco terico- Resultados y Fundamentos- Conclusiones- CuestionarioReferencias bibliogrficas (estilo Vancouver).

10

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGA MOLECULAR
PRCTICA N 5

MICROSCOPA: ESTUDIO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO

I.

OBJETIVOS
Conocer e identificar correctamente las partes pticas y mecnicas del microscopio
ptico compuesto
Familiarizar al alumno con el uso correcto, cuidado y conservacin del microscopio
Calcular la magnificacin (aumento) total de la imagen del objeto observado

II.

MATERIALES

Microscopios
Lminas portaobjetos
Lminas cubreobjetos
Lminas preparadas de artrpodo (Pulex irritans pulga o Pediculus humanus piojo)
Suero fisiolgico
Pipeta Pasteur
Plumn indeleble
Papel lente
Hebra de algodn
Letra e en papel

.
III. PARTES DEL MICROSCOPIO
Reconocer cada una de las siguientes partes del microscopio:

PARTE MECNICA

11

Brazo y Pie
Tubo portalentes y cremallera
Tornillos macromtrico y micromtrico
Revlver
Platina

PARTE PTICA

Ocular
Objetivos
Diafragma
Condensador
Foco

IV. SISTEMAS QUE COMPRENDE EL MICROSCOPIO


1.
2.
3.
4.

Sistema de Soporte: comprende el brazo, el pie, el tubo ocular, el revlver y la platina.


Sistema de Iluminacin: comprende el foco, el condensador y el diafragma.
Sistema de Ajuste: comprende el tornillo macromtrico, el tornillo micromtrico y la cremallera.
Sistema de Aumento: comprende el ocular generalmente de 10x 15x y los objetivos de 4x,
10x, 40x, y 100x (objetivo de inmersin).

VI. PROCEDIMIENTO.
1. Preparar lminas hmedas (una gota de suero fisiolgico ms la muestra) con una hebra de
algodn y una letra e en posicin de lectura.
2. Observar dichas muestras con los objetivos 4x, 10x y 40x.
3. Verificar con la lmina de la letra e, que los movimientos en estos sistemas son invertidos.
4. Observar la lmina preparada de artrpodo con los objetivos de 4x y 10x.
5. Calcular el aumento total de acuerdo al objetivo utilizado multiplicando el aumento del ocular
por el aumento del objetivo: Ejm: para un ocular de 10x y un objetivo de 40x el aumento total
es de 400x (es decir, 400 veces).
VII. CUESTIONARIO P#5
1.
2.
3.
4.
VIII.

Defina qu es una imagen real y qu es una imagen virtual.


Cules son las unidades de medida de longitud empleadas en microscopa?
Defina aumento y resolucin del microscopio.
Cmo se define un microscopio electrnico y cules son sus aplicaciones mdicas?
INFORME

Cartula- Introduccin- Marco terico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripcinConclusiones- Cuestionario- Referencias bibliogrficas (estilo Vancouver).

12

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGA MOLECULAR
PRCTICA N 6

OBSERVACIONES CELULARES: PROCARIOTAS (BACTERIAS)

Existen dos tipos de clulas, las procariotas y las eucariotas, que difieren principalmente en la
organizacin de su material gentico. Las procariotas no poseen envoltura nuclear, su ADN circular
ocupa dentro de la clula un lugar llamado nucleoide y se halla en contacto directo con el protoplasma.
I.

OBJETIVOS

II.

MATERIALES

III.

Identificar distintos tipos de bacterias de acuerdo a su forma y tincin


Comprender el principio de la Coloracin de Gram

Palitos mondadientes
Solucin salina fisiolgica (NaCl 0,9%)
Solucin de Mercurio cromo
Solucin de Violeta de genciana
Colorante Azul de metileno
Yogurt natural
Lminas portaobjetos
Lamillas cubreobjetos
Varilla de coloracin
Lminas con tincin de Gram de Escherichia coli (bacilos) y Streptococcus (cocos)
Lminas con tincin de Ziehl-Neelsen de Mycobacterium tuberculosis
Aceite de inmersin
Alcohol isoproplico
Papel lente
Microscopios
Guantes
Recipiente para descarte

PROCEDIMIENTO

3.1 Observacin de Microflora bacteriana en cavidad bucal (Tincin de Vag)


1. Colocar una gota de solucin fisiolgica sobre una lmina.
2. Con el mondadientes obtener una muestra de sarro dental, colocarla sobre la gota de solucin
fisiolgica y esparcir con movimientos circulares.
3. Dejar secar a temperatura ambiente y luego cubrir con colorante mercurio de cromo, dejar
reposar por 5 min.
4. Enjuagar y aplicar inmediatamente el colorante violeta de genciana, dejar reposar por 3
min para luego lavar con agua de cao.
5. Dejar secar la muestra preparada por accin del calor o al medio ambiente.
6. Observar la preparacin con el objetivo de 100x y una gota de aceite de inmersin.
7. Identificar las diferentes formas bacterianas (vase la figura).

13

3.2 Observacin de Lactobacillus en una muestra de yogurt


1. Colocar una gota de yogurt en el extremo de una lmina portaobjetos y con ayuda
de otra lmina extender el material.
2. Dejar secar la lmina, colocar una gota de azul de metileno y cubrir con una
laminilla.
3. Observar la preparacin con los objetivos de 40x y 100x.
Formas Bacterianas: coco, bacilo, vibrin y espirilo

3.3 Observacin de Bacterias con Coloraciones diferenciales como Gram y ZiehlNeelsen


Para observar cada lmina preparada con la tincin Gram o la tincin Ziehl-Neelsen agregar
una gota de aceite de inmersin y usar el objetivo de 100x.

14

1.

Lmina de la bacteria Escherichia coli, procesada con la tincin Gram. Reconocer la


forma de bacilo y la coloracin roja de esta bacteria Gram negativa.

2.

Lmina de la bacteria Streptococcus sp. procesada con tincin Gram. Reconocer la


forma de coco, la agrupacin en cadenas y la coloracin violeta de esta bacteria Gram
positiva.

3.

Lmina de la bacteria Mycobacterium turbeculosis, procesada con la tincin ZiehlNeelsen. Reconocer la forma de bacilo y la coloracin fucsia de esta bacteria cido
resistente.

III. CUESTIONARIO P#6


1.
2.
3.
4.
IV.

Cmo es la estructura de una clula bacteriana?


Qu es la tincin o coloracin de Gram y cmo se realiza?
Defina microflora bacteriana. Cite 1 ejemplo.
Describa a la bacteria que infecta el epitelio gstrico Helicobacter pylori.

INFORME

Cartula- Introduccin- Marco terico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripcinConclusiones- Cuestionario- Referencias bibliogrficas (estilo Vancouver).

15

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGA MOLECULAR
PRCTICA N 7

OBSERVACIONES CELULARES: EUCARIOTAS: animal, vegetal y fungi

Existen dos tipos de clulas, las procariotas y las eucariotas, que difieren principalmente en la
organizacin de su material gentico. En las clulas eucariotas el ADN se asocia a protenas formando
unas estructuras complejas denominadas cromosomas, los cuales se encuentran dentro de un ncleo
verdadero rodeado por una complicada envoltura nuclear, a travs de la cual tienen lugar los procesos
de intercambio ncleo-citoplasmticos.
I.

OBJETIVOS
Observar clulas eucariotas unicelulares y pluricelulares.
Diferenciar al microscopio las caractersticas que presentan la membrana celular de la clula
animal y la pared celular de la clula vegetal.

II.

MATERIALES

III.

Muestra de clula epitelial de la mucosa bucal


Muestra de catfila de cebolla Allium cepa
Muestra de cultivo de levadura Saccharomyces
Lminas preparadas de hongos Penicillium y Aspergillus teidos con Azul de lactofenol
Microscopios
Lminas portaobjetos
Lminas cubreobjetos o laminillas
Bistur
Pinza de punta recta
Mechero de alcohol
Colorante Azul de metileno
Colorante Lugol
Alcohol yodado
Solucin fisiolgica (NaCl 0,9%)
Papel lente

PROCEDIMIENTO
3.1 Observacin de clula animal (raspado de mucosa bucal)
1.

Con la ayuda de un hisopo hacer un raspado de la mucosa bucal y colocar la muestra


obtenida sobre dos lminas.
2. A una lmina agregar una gota de suero fisiolgico y a la otra aplicar una gota del
colorante azul de metileno
3. Cubrir las preparaciones con una laminilla.
4. Observar las preparaciones con objetivos de 10x y 40x.

16

CLULA ANIMAL

1- Membrana plasmtica
3- Retculo endoplsmico rugoso
5- Nuclolo
7- Citosol (=hialoplasma)
9- Retculo endoplsmico liso

2- Mitocondria
4- Ribosomas
6- Cromatina
8- Diplosoma (= centriolos)
10- Aparato de Golgi

3.2 Observacin de clula vegetal (catfila de cebolla)


1. Separar una de las catfilas de la cebolla con una pinza y extenderla sobre una
lmina portaobjetos.
2. Con el bistur cortar cuadritos de 0,5 cm de catfila.
3. Disponer de 2 lminas y colocar en cada lmina un cuadradito de catfila.
4. Agregar a una de las lmina 1 gota de suero fisiolgico y a la otra agregar 1 gota del
colorante Lugol.
5. Cubrir las preparaciones con lminas cubreobjetos.
6. Observar las preparaciones con objetivos de 10x y 40x.
7. Reconocer la membrana celular, pared celular y el ncleo de esta clula vegetal.

17

CLULA VEGETAL

3.3 Observacin de clula fngica unicelular y pluricelular


1. En una lmina colocar 2 gotas de cultivo de levadura Saccharomyces (hongo
unicelular), cubrir con una laminilla y observar con el objetivo de 40x.
2. Observar lminas procesadas de Penicillium y Aspergillus (hongos pluricelulares)
teidas con Azul de Lactofenol usando los objetivos de 40x y 100x.
3. Reconocer la pared celular y morfolgicamente las partes (conidios o esporas,
filides y conidiforo) de los hongos filamentosos.

18

Saccharomyces

Aspergillus

Penicillium

IV. CUESTIONARIO P#7


1. Cules son las diferencias entre una clula animal y una clula vegetal?
2. Cules son los componentes y cmo estn estructuradas las paredes celulares de las bacterias,
hongos y vegetales?
3. Qu es el Lugol, cul es su frmula y cules son sus aplicaciones?

V.

INFORME

Cartula- Introduccin- Marco terico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripcinConclusiones- Cuestionario- Referencias bibliogrficas (estilo Vancouver).

19

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGA MOLECULAR
PRCTICA N 8

FENMENOS FSICOS DE LA CLULA: DIFUSIN, SMOSIS

I.

OBJETIVOS

II.

Observar los fenmenos de difusin y smosis y conocer su importancia para la clula


Reconocer si una clula animal o vegetal se encuentra en un medio hipotnico, isotnico o
hipertnico y nombrar el fenmeno producido en la clula de acuerdo al medio

MATERIALES

Bulbo de cebolla Allium cepa


Lminas portaobjetos
Laminillas cubreobjetos
Tubos de prueba
Lancetas hematolgicas estriles
Alcohol yodado
Algodn estril
Solucin salina de NaCl 0,4% (medio hipotnico)
Solucin salina de NaCl 0,9% (medio isotnico)
Solucin salina de NaCl 2,0% (medio hipertnico)
Agua destilada
Pipetas Pasteur para cada solucin
Gradillas
Microscopios
Papel lente
Recipiente para descarte

III. PROCEDIMIENTO
3.1 Experimento con eritrocitos (clula animal):
1.

Recibir tubos de prueba rotulados conteniendo solucin salina en diferentes


concentraciones:
tubo No 1: 3 mL de sol. NaCl 0,4 %
tubo No 2: 3 mL de sol. NaCl 0,9 %
tubo No 3: 3 mL de sol. NaCl 2,0 %

2. En lminas rotuladas colocar 1 gota de cada concentracin de solucin salina.


3. Desinfectar el dedo cordial (tercero) con algodn humedecido en alcohol yodado y con
ayuda de una lanceta descartable realizar una puncin en el pulpejo del dedo.
4. Dejar caer 1 gota de sangre a cada lmina y con la ayuda de una laminilla mezclar
suavemente la sangre con la solucin salina, dejar en reposo por 2 min.
5. Colocar la laminilla y observar en el microscopio con objetivo de 40x.
6. Observe detenidamente la forma de los eritrocitos (glbulos rojos) en vista frontal y lateral.
En condiciones normales los eritrocitos tienen forma de disco bicncavo.

20

3.2

Experimento con la catfila de cebolla (clula vegetal):


1. En lminas rotuladas colocar 1 gota de cada concentracin de solucin salina.
2. Con ayuda de una pinza colocar en cada lmina un trocito de catfila de cebolla
embebiendo el tejido en la respectiva solucin salina.
3. Dejar en reposo por 2 min para luego cubrir la lmina con una laminilla.
4. Observar al microscopio con objetivos de 10x y 40x.
5. Observe detalladamente la forma de la clula y la adherencia o separacin entre la
membrana plasmtica y la pared celular de la clula vegetal

.
IV. RESULTADOS:

MUESTRA

CONCENTRACIN / TONICIDAD DEL MEDIO

eritrocitos

NaCl 0,4 % /medio hipotnico

eritrocitos

NaCl 0,9 % / medio isotnico

eritrocitos

NaCl 2,0 % / medio hipertnico

clula vegetal

NaCl 0,4 % / medio hipotnico

clula vegetal

NaCl 0,9 % / medio isotnico

clula vegetal

NaCl 2,0 % / medio hipertnico

FENMENO CELULAR

VI. CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.

Qu tipo de difusin es la smosis y qu es presin osmtica?


Defina qu es Dilisis, Turgencia y Plasmlisis.
Qu significa homeostasis?
En qu consisten los fenmenos de crenacin y citlisis en las clulas animales?

V. INFORME
Cartula- Introduccin- Marco terico- Resultados: tabla y observaciones (esquemas) con su descripcin
e interpretacin- Conclusiones- Cuestionario- Referencias bibliogrficas (estilo Vancouver).

21

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGA MOLECULAR
PRCTICA N 9

ESTUDIO DE ORGANELAS CELULARES: MITOCONDRIAS, LISOSOMAS,


CLOROPLASTOS, PLSTIDOS Y VACUOLAS

I.

II.

OBJETIVOS:

Mediante el empleo de la tcnica de coloracin vital se observarn las mitocondrias


presentes slo en el citoplasma de las clulas eucariotas, que vienen a constituir las
centrales de energa porque producen y almacenan energa bajo la forma de ATP.

Las clulas tienen vesculas membranosas que contienen enzimas hidrolticas que
permiten la digestin intracelular y que corresponden a los lisosomas los cuales pueden
ser identificados en protozoarios con una tincin vital.

Con el uso de suero fisiolgico observar plstidos en las clulas eucariotas vegetales, los
que contienen pigmentos o pueden sintetizar y acumular diversas sustancias. As tenemos
los Leucoplastos que son plstidos incoloros como los Amiloplastos que acumulan
almidn, los Proteinoplastos que acumulan protenas, los leoplastos que acumulan
grasas y aceites esenciales. Los Cromoplastos son plstidos coloreados pues en su
estructura contienen pigmentos como el caroteno que es un pigmento de color naranja, el
licopeno de color rojo y la xantfila de color amarillo. Los Cloroplastos son plstidos
que presentan el pigmento de color verde clorofila cuya funcin principal es realizar la
fotosntesis.

Sin embargo, algunos pigmentos vegetales como la antocianina (color grosella) no estn
confinados en cromoplastos sino ms bien estn disueltos en una vacuola del citosol.

MATERIALES:

22

Clulas de epitelio bucal (Mitocondrias)


Hoja de Elodea (Cloroplastos)
Aj amarillo (Cromoplastos con Xantfila)
Zanahoria (Cromoplastos con Caroteno)
Papa (Amiloplastos con Almidn)
Betarraga (Vacuola con Antocianina)
Cultivo de protozoarios (Lisosomas)
Microscopios
Bistur
Pinza en punta
Lminas y laminillas
Colorante Rojo Neutro
Solucin Verde de Janus 1/10,000
Colorante Lugol
Hisopos
Mecheros de alcohol ,Guantes

III.

PROCEDIMIENTO:
3.1 Observacin de mitocondrias en epitelio bucal
1. Con un hisopo obtener una muestra de la mucosa bucal mediante un raspado suave.
2. Realizar un frotis extendiendo la muestra sobre una lmina.
3. Dejar secar la lmina con la muestra al medio ambiente.
4. Cubrir la muestra con Verde de Janus durante 5 min.
5. Eliminar el exceso de colorante y dejar secar al medio ambiente.
6. Observar la preparacin con objetivos de 10x y 40x.
7. Reconocer las mitocondrias teidas de verde y refringentes al movimiento del tornillo
micromtrico
3.2 Observacin de lisosomas en protozoarios
1. En una lmina colocar dos gotas de cultivo de protozoarios y una gota del colorante
rojo neutro, mezclar dejar reposar 2 min.
2. Cubrir con una laminilla y observar la preparacin con objetivos de 10x y 40x.
3. Reconocer los lisosomas, teidos de rojo, en el interior de los Paramecium.
3.3 Observacin de plstidos en clulas vegetales:

Cloroplastos: Son plstidos que localizan principalmente debajo de la epidermis


superior de las hojas.
1. Seleccionar una hoja joven de Elodea y colocarla sobre una gota de agua en una lmina
portaobjetos.
2. Cubrir la muestra con una laminilla.
3. Observar al microscopio con objetivos de 10x y 40x.
4. Reconocer los cloroplastos de color verde en el citosol de la clula.

Amiloplastos: Tipo de leucoplastos que contienen almidn como sustancia de reserva.


1.
2.
3.
4.

Sobre una lmina portaobjetos colocar una gota de Lugol.


Agregar un corte transversal fino de papa.
Cubrir la lmina con una laminilla y observar con objetivos de 10x y 40x.
Observar los amiloplastos teidos de violeta.

Cromoplastos: Son plstidos coloreados por la presencia de pigmentos y presentan


formas variadas (redondas, elpticas, o aciculares).
1.
2.
3.
4.

Realizar cortes finos de zanahoria y aj amarillo sobre lminas portaobjetos.


Colocar una gota de agua sobre cada corte.
Cubrir con una laminilla y observar con objetivos de 10x y 40x.
Reconocer los cromoplastos del color anaranjado o amarillo por el pigmento que contienen

3.4 Observacin de vacuolas en clula vegetal:


Las vacuolas pueden ocupar entre el 30-90% de la clula vegetal y en algunos casos
contienen pigmentos solubles en agua.
1. Sobre una lmina portaobjetos colocar una gota de agua.
2. Agregar un corte transversal fino de betarraga.
3. Cubrir con una laminilla y observar al microscopio con objetivos de 10x y 40x.
4. Observar la vacuola llena del pigmento disuelto betacianina de color grosella.

23

IV.

PROTOCOLO:

MUESTRAS

OBSERVACIN DE MITOCONDRIAS, CLOROPLASTOS, PLSTIDOS Y


VACUOLAS

10x

40x

ORGANELA

EPITELIO BUCAL

PROTOZOARIO

HOJA DE ELODEA

PAPA

AJ AMARILLO

ZANAHORIA

BETARRAGA

V. CUESTIONARIO P#9
1.
2.
3.
5.

Qu son las patologas mitocondriales?


Qu relacin tienen los lisosomas y la autofagia?
Por qu las mitocondrias fijan el colorante Verde de Janus?
Qu funcin cumplen los plstidos en la clula vegetal?

VI. INFORME
Cartula- Introduccin- Marco terico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripcinConclusiones- Cuestionario- Referencias bibliogrficas (estilo Vancouver).

24

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGA MOLECULAR
PRCTICA N 10
ACCIN ENZIMTICA

Las Enzimas son en su mayora protenas con actividad de catalizador biolgico que tienen
como funcin acelerar la velocidad de las cientos de reacciones qumicas que se producen en la
clula. El mecanismo de accin se realiza de la siguiente manera:
Unin especfica de un Sustrato(s) a la Enzima para formar un Complejo Enzima-Sustrato y
desdoblamiento del complejo formado para liberar los Productos.

E + S ES E + P
I. OBJETIVOS

Conocer el mecanismo de accin enzimtica estudiando dos de las enzimas del hgado de
pollo: la catalasa y la succinato deshidrogenasa
Conocer cmo actan las enzimas reconociendo especficamente a su sustrato para obtener
los productos de la reaccin

II. MATERIALES

25

Gradilla
Bistur
Mortero con piln
Hgado de pollo
Solucin salina de NaCl 0,9%
Tubos de prueba de 16 x150 mm/13x100 mm
Agua oxigenada = Perxido de hidrgeno = H2O2
Dixido de manganeso (MnO2)
Hisopos
Fsforos
Pipetas Pasteur
Pipetas de 1mL
Azul de metileno
Aceite
Succinato de sodio 0,1 M
Buffer Fosfato pH 7.4
Mechero de alcohol
Placas Petri

III. PROCEDIMIENTO

3.1 Comparacin de la Actividad Cataltica entre un Catalizador Qumico (MnO2) y un


Catalizador Biolgico (enzima Catalasa)

MnO2

+ 2 H2O2

2 H2O + O2 +

Catalasa + 2 H2O2

MnO2

2 H2O + O2 + Catalasa

Preparacin

1.
2.
3.
4.

En un mortero preparar un homogenizado de hgado con la solucin salina de NaCl 0,9%.


Rotular los tubos del 1 al 3.
Colocar en cada tubo 2 mL de Perxido de hidrgeno (H2O2).
Agregar al:
tubo 1: cucharadita de hgado de pollo entero
tubo 2: cucharadita de hgado de pollo triturado
tubo 3: 2 g dixido de manganeso (MnO2)

5. Colocar a cada tubo el palito de ignicin encendido en la boca del tubo.


6. Si el palito de ignicin aumenta la intensidad del fuego, la reaccin es positiva.
3.2 Actividad de la Enzima Succinato Deshidrogenasa (SDH) o Deshidrogenasa Succnica
1.
2.
3.
4.

En un mortero preparar un homogenizado de hgado con la solucin de NaCl 0,9%.


Disponer de 2 tubos de 13x100 mm y roturarlos (tubo 1 y tubo 2).
Colocar en cada tubo 1 mL de succinato y luego 1 mL de buffer fosfato.
Aadir 2 gotas de azul de metileno, agitar y anotar el color observado.

5. Al tubo 1 incorporar 0,5 mL de aceite por las paredes y dejar en la gradilla- NO MOVER.
6. Al tubo 2 agregar 1mL de homogenizado de hgado e inmediatamente incorporar 0,5 mL
de aceite por las paredes- NO MOVER.
7. Hacer el seguimiento de la decoloracin de los tubos por 20 min.
8. Interpretar los resultados comparando ambos tubos.
IV. CUESTIONARIO P#10
1)
2)
3)
4)

V.

Defina qu es un catalizador qumico y un catalizador biolgico.


Qu se entiende por el sitio activo de una enzima?
Qu tipo de enzima es la catalasa y cul es su importancia en el metabolismo?
Qu es la enzima deshidrogenasa succnica, qu reaccin cataliza y por qu se relaciona
con el sndrome de Kearns Sayre?

INFORME

Cartula- Introduccin- Marco terico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripcin


sealado para cada reaccin el sustrato(s) y el producto (s)- Conclusiones- CuestionarioReferencias bibliogrficas (estilo Vancouver).

26

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGA MOLECULAR
PRCTICA N 11

OBSERVACIN DE ELEMENTOS FORMES DE LA SANGRE

I.

OBJETIVOS

II.

Determinar la presencia de elementos figurados presentes en una muestra de sangre


perifrica humana, mediante el uso de una coloracin diferencial
Reconocer los eritrocitos, los glbulos blancos granulares (neutrfilos, basfilos y eosinfilos),
los glbulos blancos agranulares (linfocitos y monocitos) y las plaquetas
Aprender las diferentes funciones de los elementos formes de la sangre

MATERIALES

Lminas de sangre teidas con colorante Wright


Guantes
Alcohol yodado
Algodn estril
Lancetas hematolgicas estriles
Lminas portaobjetos limpias y desengrasadas con alcohol
Colorante Wright o Giemsa
Agua destilada
Varillas de coloracin
Papel lente
Aceite de cedro
Microscopios
Recipiente de descarte

III. PROCEDIMIENTO
3.1

Preparacin del frotis de sangre capilar


1. Desinfectar el dedo anular con una torunda de algodn embebida en alcohol yodado y
con una lanceta estril punzar el dedo.
2. Dejar caer una gota de sangre sobre un extremo de la lmina portaobjetos.
3. Inmediatamente con ayuda de otra lmina portaobjetos formar un ngulo de 45 y
realizar un frotis, tratando de extender homogneamente la gota de sangre sobre la
superficie de la lmina.
4. Dejar secar la preparacin y proceder luego a la coloracin.

27

3.2 Coloracin Wright o Giemsa


1. Cubrir el frotis con colorante Wright o Giemsa por 1 min.
2. Sin eliminar el colorante agregar agua destilada y dejar actuar por 10 min.
3. Eliminar luego el colorante y lavar suavemente con agua de cao.
4. Dejar secar la lmina coloreada.
5. Observar la preparacin con el objetivo de 100x y aceite de inmersin
IV. PROTOCOLO
Reconocer y esquematizar los siguientes elementos formes que sern
microscopio:
1.

observados con ayuda del

LEUCOCITOS GRANULARES:
a) Neutrfilo segmentado: presenta un ncleo con varios lbulos (2-5) unidos por bandas de
cromatina.
b) Neutrfilo en banda o abastonado: presenta un ncleo no dividido en forma de S o en
cayado O.
c) Eosinfilo: redondo, voluminoso, con granulaciones acidfilas de color anaranjado,
ncleo con dos lbulos.
d) Basfilo: es escaso, presenta un ncleo difcil de observar, pues se halla
cubierto por granulaciones basfilas gruesas de color violeta o morado
oscuro.

2.

LEUCOCITOS AGRANULARES:
a) Linfocito: De forma redonda o irregular, su ncleo es morado, voluminoso y ocupa la
mayor parte de la clula, el citoplasma es azul y sin granulaciones. Su nmero
aumenta con las infecciones.
b) Monocito: De forma redonda u ovalada, ncleo variable generalmente en forma de rin,
citoplasma sin grnulos. Presenta una gran actividad fagocitaria.

3.

PLAQUETAS:
Son los elementos formes ms pequeos de las clulas de la sangre, de forma redonda.
Son esenciales en la coagulacin sangunea.

4.

HEMATES O ERITROCITOS O GLBULOS ROJOS:


De forma generalmente redonda, sin ncleo, de color rosa intenso, contiene hemoglobina,
que es la protena que se encarga del transporte de oxgeno y anhdrido carbnico.

28

Neutrfilos

Eosinfilo

Basfilo

Monocito

29

Linfocitos

IV.

CUESTIONARIO P#11
1. Cul es la diferencia entre plasma y suero?
2. Diga qu es la frmula leucocitaria, cules son los valores normales en el adulto y qu
significado tienen los valores anormales.
3. Qu es la histamina y cul es su importancia?
4. Qu es la anemia y cul es su origen?
5. Qu es el colorante Wright y cul es su composicin?

V.

INFORME

Cartula- Introduccin- Marco terico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripcinConclusiones- Cuestionario- Referencias bibliogrficas (estilo Vancouver).

30

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGA MOLECULAR
PRCTICA N 12

CICLO CELULAR: DIVISN CELULAR: LA MITOSIS

I.

OBJETIVO:
Estudiar la mitosis y el ciclo de divisin celular en las clulas meristemticas de la raz de
Allium cepa (cebolla). En este sistema la poblacin celular est en equilibrio dinmico y los
cromosomas son relativamente grandes, con un nmero diploide de 2n =16.

II.

MATERIALES:

III.

Races de cebolla Allium cepa


Lminas fijadas de mitosis
Placas Petri
Estiletes y pinzas
Papel de filtro
Lminas portaobjetos
Laminillas cubreobjetos
Mechero de alcohol
Orcena actico-clorhdrica
Aceite de inmersin
Papel lente
Microscopios

PROCEDIMIENTO:
1. Cultivar los bulbos de cebolla en vasos pequeos conteniendo agua corriente, la que deber
cambiarse cada 24 h, mantenidos en oscuridad, a 25C y sometidos a aireacin constante.
2. Despus de 48 a 72 h, arrancar con ayuda de una pinza 2 a 3 races del bulbo, cortar 2 cm
de la parte apical y colocarla sobre una placa Petri que contenga Orcena.
3. Calentar la placa en la llama de un mechero de alcohol hasta aproximadamente los 60C y
observar la emisin de vapores blancos evitando la ebullicin del colorante.
4. Dejar enfriar y repetir esta operacin cuatro veces.
5. Enfriar y dejar reposar durante 15 min.
6. Colocar la raicilla en la lmina portaobjeto, cortar 2 mm de la punta, aadir una gota de
Orcena fra, cubrir la preparacin con laminilla.
7. Con la punta de un lpiz golpear suavemente la preparacin describiendo crculos
concntricos para permitir la extensin del tejido meristemtico.
8. Eliminar el exceso de colorante usando una tira de papel filtro.
9. Observar la preparacin con objetivo de 100x y aceite de inmersin.

31

IV.

PROTOCOLO
Reconocer y esquematizar las diferentes fases del ciclo celular que se observan:
Interfase:

Profase:
Metafase:

Anafase:
Telofase:

Los cromosomas no se observan al microscopio debido a que son demasiados


delgados y no pueden absorber suficiente colorante para ser visibles.
Nota.- La interfase no es una fase de la mitosis.
Fase en la cual los cromosomas se observan con sus dos cromtides hermanas.
Se observa el huso acromtico, los cromosomas estn ms condensados y
cortos y se ubican en el centro de la clula.
Los cromosomas (cromtides hermanas) se dirigen a los polos.
Los cromosomas (cromtides hermanas) estn en los polos, empieza la
formacin de la envoltura nuclear.

FASE DE LA MITOSIS

32

ESQUEMAS

V.

CUESTIONARIO P#12:
1.
2.
3.

VI.

Qu semejanzas existen entre la mitosis y la meiosis?


Qu es ndice mittico e ndice interfsico?
Defina cariocinesis y citocinesis.

INFORME

Cartula- Introduccin- Marco terico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripcinConclusiones- Cuestionario- Referencias bibliogrficas (estilo Vancouver).

33

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGA MOLECULAR
PRCTICA N 13
GRUPO SANGUNEO Y FACTOR Rh

I.

OBJETIVO:

II.

MATERIALES:

III.

Al finalizar la prctica el alumno debe saber qu es el grupo sanguneo, sus aplicaciones


en el campo de la medicina y el grupo sanguneo al que pertenece.

Guantes
Placas excavadas de porcelana
Lancetas hematolgicas estriles
Algodn
Alcohol yodado
Sueros comerciales Anti-A, Anti-B y Anti-D o Rh
Mondadientes
Recipiente de descarte

GENERALIDADES:
El serlogo Karl Landsteiner, en 1900-1901 fue el primero en demostrar la existencia de
grupos sanguneos y en 1938 el Comit de Higiene de la Liga de la ONU, el Congreso de
Microbiologa de 1930 en Londres y la Internacional de Transfusin Sangunea de Pars
adopt definitivamente la clasificacin de los grupos sanguneos humanos heredables,
designados como A, B, AB y O.

34

GRUPOS SANGUNEOS

GRUPO SANGUNEO

ANTGENO EN GLBULOS
ROJOS

ANTICUERPOS EN PLASMA O
SUERO SANGUNEO

(AGLUTINGENOS)

(AGLUTININAS)

Anti-B

Anti-A

AB

AB

Ninguno
(Receptor universal)

Ninguno

Anti-A + Anti-B
(Dador universal)

RECONOCIMIENTO DE GRUPOS SANGUINEOS Y FACTOR Rh


La tcnica de reconocimiento de grupos sanguneos se basa en la aglutinacin de los
glbulos rojos cuando se mezclan con aglutininas comerciales Anti-A, Anti-B y Anti-D.
IV.

PROCEDIMIENTO
1. Limpiar la yema del dedo anular con algodn embebido en alcohol yodado.
2. Realizar la puncin utilizando una lanceta de hematologa estril.
3. En una lmina #1 colocar 2 gotas de sangre y en la lmina #2 colocar 1 gota de sangre.
4. Agregar a la lmina #1 una gota de suero Anti-A y una gota de suero Anti-B sobre la
respectiva gota de sangre y mezclar usando palitos mondadientes separados.
5. Agregar a la lmina #2 una gota de suero Anti-D (Anti-Rh) y mezclar con la gota de sangre
usando otro palito mondadientes.
6. Observar la aglutinacin e identificar a qu grupo sanguneo y factor Rh pertenece.

35

MTODO DE RECONOCIMIENTO PRCTICO

GRUPO A
Anti-A

GRUPO B
Anti-B

GRUPO AB
Anti-A

Anti-B

GRUPO O
Anti-B

FACTOR Rh (+)
Anti-D

Anti-A

Anti-A

Anti-B

FACTOR Rh (-)
Anti-D

V. CUESTIONARIO P#13:
1.
2.
3.
4.

A quines se les llama receptores y donadores universales de sangre? Por qu?


Explique cmo se produce la Eritroblastosis fetal.
En qu se basa el reconocimiento de los grupos sanguneos?
Indique qu tipo de sangre pueden recibir y donar las personas de los grupos
sanguneos A, B, AB y O con Rh + y Rh -.

VI. INFORME;
Cartula- Introduccin- Marco terico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripcinConclusiones- Cuestionario- Referencias bibliogrficas (estilo Vancouver).

36

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGA MOLECULAR
PRCTICA N 14

EL CDIGO GENTICO

I. OBJETIVOS:

Comprender las bases moleculares del dogma de la biologa molecular


Usar el cdigo gentico y comprender el efecto de mutaciones y sus posibles causas

II. MATERIALES:

37

Secuencias problemas entregadas por el docente


Lpiz y borrador.
Tabla de cdigo gentico

III. PROCEDIMIENTO

Analice y complete las siguientes secuencias (en clase)

Ejemplo:

Pro
Reconocer:
Sitio de N-glicosilacin: Asparragina-X-Serina o Asparragina-X-Serina-Treonina.
Sitio de O-glicosilacin: Serina o Treonina

38

SECUENCIA I
Segmento A:
ADN 5
ADN 3
Mensajero
Aminocido

Segmento B
ADN 5
ADN 3
Mensajero
Aminocido
Segmento C
ADN 5
ADN 3
Mensajero
Aminocido

Analice y responda:

1.
2.
3.
4.

Nmero de codones:
Nmero de aminocidos empleados:
Secuencia usada por la ARN polimerasa:
Sitios de glicosilacin:
SECUENCIA II

Segmento A:
ADN 5
ADN 3

Mensajero
Aminocido
Segmento B
ADN 5
ADN 3
Mensajero
Aminocido
Segmento C
ADN 5
ADN 3
Mensajero
Aminocido

39

Analice y responda:

1.
2.
3.
4.

Nmero de codones:
Nmero de aminocidos empleados:
Secuencia usada por la ARN polimerasa:
Sitios de glicosilacin:
SECUENCIA III
(para el informe: preste atencin a las indicaciones que dar el profesor)

A continuacin se le entrega una secuencia de aminocidos: Halle la posible secuencia


nucleotdica y responda lo siguiente:

Analice y responda

1.
2.
3.
4.

Nmero de aminocidos:
Nmero de codones:
Por qu el primer aminocido no es la metionina?
Cmo podramos averiguar a qu protena pertenece esta secuencia?

FVNQHLCGSH LVEALYLVCG ERGFFYTPKS

IV. CUESTIONARIO P#14


1.
2.
3.
4.

Por qu el cdigo gentico es degenerado?


Qu mutaciones son cruciales en el gen de hemoglobina y cmo atae esto a la salud?
Explique por qu en el cdigo gentico se utilizan tres nucletidos por codn.
Por qu son importantes las mutaciones?

V. INFORME
Cartula- Introduccin- Marco terico- Resultados- Conclusiones- Cuestionario- Referencias
bibliogrficas (estilo Vancouver).

* * * * *

40