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RESUMO
A utilizao de biotecnologias reprodutivas como a fecundao in vitro, a inseminao artificial e a transferncia
de embries associadas tcnicas de criobiologia oferece uma oportunidade para aumentar e apoiar estratgias
para a conservao da biodiversidade. A presente reviso mostra os fundamentos bsicos, importncia, estado
atual e limitaes da criotecnologia para programas de reproduo, bem como os principais resultados da
criopreservao de ocitos oriundos de folculos pr-antrais.
PALAVRAS-CHAVE: criopreservao, crioprotetor, ocitos, tecido ovariano, folculos pr-antrais
ABSTRACT
The use of reproductive biotechnologies such as in vitro fertilization, artificial insemination and embryo transfer
associated with cryobiological techniques offers the opportunity to improve and support strategies for conservation
of biodiversity. The present review shows the fundamental aspects, importance, state-of-art and limitations of the
cryotechnology for assisted reproduction programmes, as well as the main results of the cryopreservation of
oocytes enclosed in preantral follicles.
KEY WORDS: cryopreservation, cryoprotectant, oocytes, ovarian tissue, preantral follicles
INTRODUO
Nas duas ltimas dcadas, estudos relacionados
biotecnologia reprodutiva tm permitido avanos
significativos na rea do conhecimento cientfico,
contribuindo de forma significativa para a conservao
da biodiversidade (HOLT, 1998). Uma prova disso
o atual crescimento da biotcnica de manipulao de
ocitos inclusos em folculos ovarianos pr-antrais
(MOIFOPA), que visa a otimizao do potencial
reprodutivo de animais de alto valor gentico e/ou em
via de extino. Alm das etapas de isolamento e cultivo
folicular in vitro, a biotcnica de MOIFOPA abrange
tambm a criopreservao dos ocitos inclusos nestes
folculos. Associada a outras biotecnologias
reprodutivas, como a fecundao in vitro e a
transferncia de embries, a criopreservao de ocitos
inclusos em folculos pr-antrais pode ser utilizada para
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Mtodos de Criopreservao
Na criotecnologia, o objetivo minimizar os
danos causados sobre as clulas durante as fases
envolvidas nos procedimentos de criopreservao.
Recentemente, dois principais mtodos tm sido
utilizados para a criopreservao de ocitos e tecido
ovariano (VAJTA, 2000). Esses mtodos so os
seguintes: congelao convencional ou lenta; e
congelao sem equilbrio ou vitrificao (BAUTISTA
& KANAGAWA, 1998).
A congelao lenta, na qual a reduo da
temperatura ocorre de modo gradual, um mtodo de
criopreservao que tem sido aplicado para a
conservao de embries (SHAW et al., 1995),
ocitos maturos (CARROLL et al., 1993; YOUNIS
et al., 1996) e imaturos (COOPER et al., 1998) e ainda
de tecido ovariano (CANDY et al., 1997) em vrias
espcies. Aps um perodo de equilbrio que pode variar
de 5 a 60 minutos (CANDY et al., 1997), o material
resfriado lentamente a uma velocidade de 2C/min at
- 4 a - 9C, mantendo-se nesta temperatura por um
curto perodo (10 a 15min) para a estabilizao trmica
e realizao do seeding (induo artificial da
cristalizao de gelo), no sentido de evitar o superresfriamento das clulas ou tecido (NIEAMANN,
1991). Em seguida, a amostra continua sendo resfriada
lentamente a uma velocidade de 0,3C/min. Neste
caso, o aumento dos cristais de gelo ocorre
extracelularmente, aumentando a concentrao de
soluto extracelular, causando uma desidratao
osmtica das clulas. Quando nesta fase a velocidade
de resfriamento maior do que 0,3C, alguns autores
denominam o processo de congelao rpida (DE LA
VEJA & WILDE, 1991). Uma vez que a desidratao
celular suficientemente atingida (entre -30 a -80C),
o material pode ser resfriado rapidamente sem
formao letal de gelo intracelular. Aps este
resfriamento rpido o material estocado em nitrognio
lquido. A congelao lenta uma tentativa de manter
o equilbrio entre as vrias fontes de danos, usando
uma baixa concentrao de crioprotetor e controlando
a formao de gelo (VAJTA, 2000).
A vitrificao, ao contrrio da congelao lenta
um mtodo mais radical, pois elimina totalmente a
formao de gelo (VAJTA, 2000), portanto, pode-ser
Crioprotetor
PROH/DMSO
DMSO
DMSO
Concentra
o
(M)
N0 etapas
p/ remoo
do
crioproteto
r
Material
biolgic
o
Animal
1,5
03
Ocito
maturo
Coelha
1,4
01
Ovrio
Camundong
a
1,5
03
Ovrio
Ovelha
1,5
03
Ocito
Vaca
3,5-8,0
03
Embrio
Camundong
a
1,5
03
Ovrio
Sagi
1,8
04
Ocito
imaturo
Vaca
1,5
03
FOPA
1,5
02
Ovrio
1,2
04
Ocito
imaturo
mulher
1,5
03
ovrio
camundonga
DMSO/PROH/GLI
PROH/DMSO
DMSO
ETG
DMSO
DMSO
PROH
DMSO/PROH/ETG/GL
I
Camundong
a
Camundong
a
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