CONSERVACIN DE CEPAS MEDIANTE

LIOFILIZACIN
OBJETIVO

El cultivo a conservar sea puro, evitando que se produzcan

contaminaciones durante el proceso de conservacin.

Durante el tiempo de conservacin sobrevivan al menos el 70-80% de las
clulas

INTRODUCCIN
Desde hace mucho tiempo los microorganismos han sido empleados como
materiales esenciales en la obtencin de medicamentos (antibiticos, vitaminas y
aminocidos), elaboracin de alimentos (pan, queso, leche, bebidas y licores) y
fabricacin de solventes y reactivos, entre otras aplicaciones. El creciente uso de
estos materiales biolgicos en la biotecnologa y la proteccin medioambiental han
fortalecido la necesidad de mantener cultivos microbianos a manera que las
propiedades que los hacen importantes, permanezcan estables (1).
La preservacin de cepas debe garantizar la viabilidad, pureza y estabilidad
gentica de dichos cultivos. El conocimiento de las peculiaridades de las dismiles
tcnicas de preservacin existentes para su correcta aplicacin, as como el
seguimiento contino de las propiedades de las cepas, propician su empleo como
inculo confiable en la industria, la docencia y la investigacin.
Con frecuencia la eleccin de la tcnica ms adecuada para conservar cultivos es
difcil, ya que deben tomarse en consideracin los criterios de viabilidad y pureza
de las cepas, cambios poblacionales y genticos, nmero y valor de los cultivos,
costo, suministro y transporte de cepas, as como la frecuencia del uso de los
cultivos.
El mtodo de conservacin que se elija debe garantizar la supervivencia de al
menos el 70 % de las clulas por un perodo considerable de tiempo, de forma tal
que la poblacin sobreviviente se asemeje a la original como sea posible,
conserve las propiedades de importancia de los cultivos y minimice la ocurrencia
de los eventos genticos. De igual manera debe reducir al mnimo el riesgo de
contaminacin y permitir que la pureza del cultivo permanezca inalterable (1).

LIOFILIZACIN:
La liofilizacin es un proceso de deshidratacin de productos bajo baja presin
(vaco) y moderada temperatura. En la liofilizacin no ocurre la evaporacin del
agua a partir del estado lquido - normal en procesos de secados - sino la
sublimacin del hielo. Por este motivo los productos deben permanecer
obligatoriamente solidificados (congelados) durante el secado.
La liofilizacin es un conjunto de procesos no solo el secado y en ello el
material resultante se presentar seco, pero con todas las caractersticas del
producto original - forma, color, aroma, sabor y textura estarn preservados en el
producto seco. Eso diferencia y destaca el proceso de liofilizacin de los otros
utilizados en deshidrataciones (2).
CONGELAMIENTO:
En las liofilizaciones, los congelamientos de los productos son las etapas
principales, pues interfieren directamente en las apariencias y en las cualidades de
los productos finales. No hay una regla general para la fase de congelamiento de
todos los productos que pueden ser liofilizados - es necesario determinar
experimentalmente cada producto.
En muchos casos, cuando una solucin acuosa es enfriada, la cristalizacin del
agua se inicia abajo de su punto de solidificacin. En este momento, en un
sistema en lo que haya falta de enucleacin, el producto se podr tornar super fro
(muy fro) y la cristalizacin se realizar precipitadamente por un simple choque
fsico.
Si un producto es rpidamente enfriado podrn ocurrir formaciones de cristales
irregulares que, fatalmente, imposibilitarn un secado uniforme. Esto
comnmente ocurre en los congelamientos realizados en los interiores de las
propias cmaras de secado de los liofilizadores y es uno de los motivos que nos
llev a preferir desarrollar y recomendar el uso de congeladores.

Congelamientos lentos llevarn que el agua contenida en el producto forme

grandes cristales de hielo con formacin de estructuras relativamente
abiertas despus del secado (sublimacin). Grandes cristales
(puntiagudos), tambin, pueden romper las membranas celulares de los
productos.
Congelamientos rpidos producirn cristales pequeos que aglomerados
dificultarn el pasaje y la retirada del vapor de agua, sublimndose durante
el secado.

La tcnica ms adecuada para cada producto deber ser individualmente

ensayada tomando en cuenta, entre otros factores, el perfil de la temperatura, el
recipiente que lo contiene, la conductividad trmica del recipiente y del producto y
el ambiente super fro (congelador). Tambin la concentracin y la viscosidad del
producto influenciarn decisivamente en todo el proceso. Evitndose disociaciones
y super fro las propiedades originales de los productos sern preservadas y, por
tanto, mtodos reproductivos y controlados debern ser utilizados (2).
En el proceso liofilizacin - el congelamiento del producto es un factor
determinante por definir la cualidad y el aspecto final del producto. Los principales
mtodos para ejecutarlo son:
1) Enfriamiento por contacto directo del producto con una superficie o ambiente
enfriado: es una tcnica esttica, en la cual el dispositivo enfriador debe permitir
una disminucin de orden de 1 a 4C/min hasta la temperatura segura. Para la
mayora de los productos un freezer comercial -18C/-20C ser suficiente,
adems de recomendable.
2) Enfriamiento rotacional en un bao refrigerante: es un mtodo dinmico ms

usado para grandes cantidades de lquidos y tiene dos variantes:

Spin freezer: el frasco montado (puesto) en un dispositivo es girado en su

eje longitudinal y el producto distribuido por la fuerza centrfuga, se solidifica
en las paredes (Ilustracin 1).

Ilustracin 1. Muestra las diferencias ente un spin freezer y un Shell freezer.

Shell freezing: es una tcnica similar a la del spin freezer, pero usando un
montaje horizontal (Ilustracin 1).

MATERIALES

Cant.
1
2

Material
Tubo para liofilizadora
Tubos ependor

Cant.

Cubeta de plstico
Liofilizadora
Micropipeta de 100L
Balanza
Microscopio

2
1

Material
Centrifuga
Puntas amarillas
estriles
Mecheros Fisher
Vaso de pp 250ml
Parafilm
Cmara de Neubauer

REACTIVOS
Cant.

Reactivo
Glicerol
Hielo seco
Cetona reutilizada

Cant.

Reactivo
Tubos Falcon con medio
LB (10ml)
Aceite de inmersin

Bibliografa
1. Weng Alemn Z.; Daz Rosa E.; lvarez Molina I; Conservacin de
microorganismos: Qu debemos conocer? Revista Cubana de
Higiene y Epidemiologa, vol. 43, nm. 3, 2005; Instituto Nacional de
Higiene, Epidemiologa y Microbiologa. Cuba. pp. 1-4
2. LIOFILIZADORES TERRONI. (2002). MANUAL BSICO DE
LIOFILIZACIN. Marzo 04, 2016, de TERRONI EQUIPAMENTOS LTDA
Sitio
web:
http://api.ning.com/files/r36cjGKKUjHiYZQHNMo80UEkCPVAiIYsidNyI15yUYlQDCH8ViroxVYM2kcxgYLQl1ef39s4YBgbVCytrkKVgvtRESq2U/ManualdeliofilizacinEsp..pdf