Nama

: Irin Yuliyanti

Nrp

: 1110714038

Mata Kuliah : Analisis Zat Gizi (AZG)

PENENTUAN ASAM LEMAK DENGAN METODE KROMATOGRAFI GAS

1. Tujuan
Metode yang dilakukan untuk menentukan kuantitafi asam lemak dari makanan dan
metode ini mencakup prosedur untuk mengkonversi lemak hewani dan lemak nabati
menjadi metil ester asam lemak. Metode ini adalah metode kromatografi gas.
2. Keamanan
- Semua pelarut organik dan boron trifluorida harus digunakan di bawah asap papan
cangkir.
- kacamata keselamatan laboratorium dan sarung tangan harus digunakan selama
ekstraksi.
- Ada beberapa tindakan pencegahan pada beberapa bahan kimia seperti :
Boron trifluorida ( BF3 ), 14% dalam metanol, bersifat korosif : menghindari
kontak dengan mata, dan kulit, dan menghindari menghirup uap nya, memakai
sarung tangan dan pelindung mata, dan gunakan hanya saat dalam lemari asam.
Metanol AR : berbahaya jika tertelan.
Natrium hidroksida AR pellet, sifatnya kaustik : hindari kontak dengan kulit dan
mata.
Iso oktan (trimetil pentana) AR, atau n Heptane AR, inflamma ble :
menghindari kontak dengan kulit dan menghindari menghirup uap nya.
3. Definisi
Asam lemak adalah salah satu komponen dari lipid atau lemak yang ada dalam struktur
lemak yang disebut trigliserida. Asam lemak ini terbagi menjadi asam lemak jenuh dan
tidak jenuh. Di dalam asam lemak jenuh rantai alkil tidak mengandung ikatan ganda,
sedangkan asam lemak tak jenuh mengandung satu atau lebih ikatan ganda.
4. Prinsip
lipid diperoleh dengan cara ekstraksi dingin menggunakan campuran kloroform dan
metanol, ipid kemudian disaponifikasi , diderivatisasi asam lemak metil ester dengan
boron trifluorida / metanol , dan ditentukan dengan kromatografi gas menggunakan Api
ionisasi Detector ( FID ). Metode ini dilakukan untuk menentukan daerah presentase dari
asam lemak, dan untuk menentukan konsentrasi mutlak asam lemak yaitu dengan
diestimasi menggunakan asam lemak standar internal.
5. Reagen
- Boron triflourida (BF3), 14% atau 20% larutan metanol.
- Metanol, AR.
- Sodium hidroksida, AR pellet.

0,5 N Methanolic sodium hidroksida : larutkan 2 g NaOH dengan 100 mL AR

metanol.
Natrium klorida, AR : siapkan larutan jenuh dengan melarutkan approxima tely 36
g NaCl dalam 100 mL air.
Heksana.
Heptana.
Petrolium atau iso oktan, AR.
Chloroform, AR.
Na2SO4, anhidro, AR grade.
Standar asam lemak metil ester.
Standar internal asam lemak, (C11:0, C17:0, C19:0, C23:0).
Antioksidan : asam pyrogallic, AR grade.

6. Aparatur/perangkat
- Instrument penting
Gas kromatografi dengan FID detector, injetor split mode, oven dengan
program temperatur suhu yang dapat di gunakan untuk proses secara terusmenerus, injector suhu yang digunakan 225oC, suhu detector 285oC.
Kolom kapiler : 60 m x 0,20/0.25 mm, leburan silika kapiler, misalnya DB 5
(5 % phenyl methylpolysiloxane), DB 17 (50 % Phenyl methylpolysiloxane),
DB 23 (50 % sianopropil methylpolysiloxane).
Rotary evopator
Timbangan analitis yang akurat yakni 0,0001 g.
Air dengan suhu 100oC.
Centrifudge refigerator.
- Alat/barang kimia
Flatted atau lingkaran bawah termos 125 ml.
Corong kaca.
Saluran corong 100 atau 250 mL.
Tabung topi.
Pipet pasteur.
7. Prosedur
- Ekstrasi lemak :
Ekstrasi dingin untuk profil asam lemak
a. Menimbang sampel menjadi tepat 125 mL.
b. Tuangkan 50 mL kloroform / metanol (2 + 1) ke dalam labu ukur,
tambahkan bar magnet, dan aduk dengan pengaduk magnetik selama
minimal 30 menit.
c. Saring melalui kertas saring menjadi corong pisah
d. Bilas labu ukur dengan 2 x 25 mL kloroform / metanol (2 + 1) dan
tambahkan ke dalam corong yang sama.
e. Tuangkan 20 mL air suling kedalam corong pisah dan aduk perlahan.
f. Diamkan semalaman atau sampai lapisan benar-benar terpisah.
g. Kumpulkan lapisan kedalam termos bulat dan kemudian uapkan dari
pelarut menggunakan rotary evoporator sampai larutan hampir kering.

h. Larutkan minyak mentah dengan 1 2 ml iso - propanol (untuk

menghilangkan air), dan heksana (untuk menghapus iso propanol), dan
terus uapkan dari sol ventilasi sampai hampir kering.
i. Tambahkan juga 4 mL heksana dan uapkan pelarut kembali sampai
hampir kering.
j. Tiup residu dengan nitrogen bebas oksigen (OFN) sampai kering.
k. Sisa ekstrak lemak yang diperoleh siap digunakan untuk analisis asam
lemak.
Ekstrasi hidrolitik dengan antioksidan untuk lemak jenuh dari tanaman dan
pakan campuran
a. Mirip dengan analisis lemak kasar , tapi di tambahkan dengan 100
antioksidan mg ( asam pyrogallic ) ( AOAC Inter , 2000 , 41.1.28A )
untuk melindungi oksidasi asam lemak tak jenuh dan mempertahankan
konsentrasi asam lemak jenuh.
b. Lipid dalam sampel yang diambil dari sampel makanan oleh asam
pencernaan ( AOAC , 1990 , 922,06 ) fol - melenguh oleh organik
ekstraksi pelarut .
Saponifikasi dan metilasi
Timbang 0,05 0,1 g lemak, kemudian diekstraksi ke dalam tabung topi
sekrup lalu tes tabung berisi tersebut.
Tambahkan 1 4 ml 0,5 N NaOH dalam metanol ke dalam tabung lalu
kocok.
Tempatkan tabung dalam air dengan suhu 85 sampai 100 oC selama 5 10
menit.
Setelah tabung dalam keadaan dingin tambahkan 1 5 ml BF 3 (lakukan
prosedur tersebut dalam lemari asam).
Kocok dan panaskan pada suhu 85-100oC selama 10 sampai 15 menit.
Tunggu sampai keadaan dingin dan tambahkan 3 ml iso oktan atau pelarut
organik lainnya.
Tambahkan 3 mL larutan jenuh NaCl kocok dengan kuat centrifuge dengan
keadaan berdiri tegak (tidak terbalik) sampai terbentuk lapisan yang terpisah
iso oktan (atas) dan bagian air (bawah/lebih rendah).
Pindahkan lapisan atas menggunakan sedikit anhidrat Na2SO4 (tempatkan di
atas beberapa kapas dan penyaring) di tabung reaksi menggunakan pipet
pasteur.
Re ekstrak bagian air dua kali lebih banyak dengan 2 mL iso oktan dan
pidahkan lapisan iso oktan menggunakan Na2SO4 ke tabung reaksi yang
sama dengan pipa pasteur yang sama.
Tambahkan sedikit Na2SO4 anhidrat.
Uapkan pelarut dalam oven atau dengan rotavapor bawah beraliran OFN.
Larutkan dan cairkan standar asam lemak metilester sesuai dengan volume
iso oktan dalam labu volumetrik.
Kemudian, sampel siap untuk disuntikkan ke kolom GC.

8. Kalkulasi/perhitungan

Mengidentifikasi asam lemak metil ester dalam sampel dengan membandingkan

masing-masing waktu retensi dengan waktu retensi metil ester asam lemak standar.

9. Hasil
- Hasil harus tidak lebih berbeda dari mean 10 %.
- konsentrasi berart asam lemak jenuh dalam sampel kontrol harus dalam + 3SD di
control chart berdasarkan kriteria.

PENENTUAN VITAMIN C DENGAN METODE MICROFLUOROMETRIC

1. Tujuan
Metode yang digunakan untuk menjelaskan dan menentukan kuantitatif vitamin C
dalam bahan makanan (baik bahan makanan segar seperti sayuran, dan buah-buahan,
dan bahan makanan olahan yang harus langsung dikonsumsi seperti jus buah,
makanan lengkap, dll) batas kuantitasi ( LOQ ) adalah 1 mg/100 g.
2. Keamanan
Menangani o - phenyenediamine harus dengan hati-hati karena reagen ini merupakan
karsinogen.

3. Definisi
Vitamin C diketahui mengandung asam askorbat dan asam dehidroaskorbat, dimana
jika diperlukan vitamin C juga ditambahkan saat proses pembuatan makanan, dan
pada penelitian ini asam askorbat diberikan dengan perbandingan mg asam askorbat /
100 g sampel asli.
4. Prinsip
asam askorbat dioksidasi menjadi dehidroaskorbat asam dengan di berikan Norit
karbon aktif. Bentuknya teroksidasi direaksikan dengan o-phenylenediamine (1,2
phenylenediamine) untuk menghasilkan senyawa quinoxaline neon, yang intensitas
fluorescent nya sebanding dengan konsentrasi namun, Fluoresensi turunan dari
vitamin harus dihindari dengan cara membentuk asam dehidroaskorbat H3BO3
kompleks sebelum penambahan larutan diamina. Setiap fluoresensi yang tersisa
termasuk bahan asing dan berfungsi sebagai "0". Kurva kalibrasi standar ini
digunakan untuk perhitungan dimana, Fluoresensi diukur pada 350/430 nm.
5. Reagen
Tentukan tingkatan AR bahan kimia yang akan digunakan . Air yang digunakan harus
disuling dan diambil dengan wadah kaca agar tampak kemurniannya.
- Ekstrak solution
Larutan asam metafosfat, asam asetat
Larutkan dan kocok 15 g pellet HPO3 dalam 40 ml asam asetat dan 200 ml
H2O, encerkan sampai sekitar 500 ml dan saring dengan cepat
menggunakan kertas bergalur ke dalam botol kaca tertutup.
(HPO3 perlahan akan berubah menjadi H3PO4 jika disimpan dalam kulkas
dalam waktu 7 10 hari).
Larutan asam metafosfat, asam asetat, asam sulfat
Lakukan seperti prosedur diatas namun penggunaan 0,3 N H 2SO4 di
tempat H2O.
- Standar larutan asam askorbat
- Larutan O - Phenylenediamene.
- Thymol indicator biru pH 0,04 %
- Larutan sodium asetat.
- Larutan asam borat sodium asetat
- Pencuci asam (norit)

6. Aparatur / perangkat
- Spectroflourophotometer
- Timbangan analytical
- Mixer vortex
- Labu erlenmeyer
- Pipet
- Gelas saring corong dengan diameter 15-20 cm
- Kertas penyaring
7. Prosedur
- Glassware setup

Setup gelas - gelas berikut ini harus ditempatkan dalam garis dari depan ke
belakang labu 100 ml volumetrik dengan corong untuk sampel , 250 ml
Erlenmeyer ( dengan mulut lebar ) yang mengandung 2 gram asam dicuci Norit
dan labu Erlenmeyer 125 ml dengan corong dan filter untuk masing -masing
sampel dan standar.
- Mengekstrasi sampel
- Oksidasi asam askorbat dalam sampel yang sudah di ekstrak
- Flourometry (pembentukan Quinozaline)
8. Kalkulasi/perhitungan
- Standar nilai tes untuk konsentrasi standar asam askorbat dari asam askorbat per ml
dapat diplot atau dihitung dengan regresi linier.
- Nilai-nilai sampel di mikrogram asam askorbat per ml dapat dibaca off kurva
kalibrasi standar atau dihitung.
- Isi asam askorbat dalam 100 g bahan sampel diselidiki dan dihitung.
9. Hasil
- Sampel kontrol menggunakan bubuk jus jeruk
-

linearitas kurva kalibrasi di kisaran 5-150 ug asam askorbat per larutan uji
standar.

Perbaikan dalam penelitan ini dari 100 5 % harus di dapatkan melalui tes tambahan,

PENENTUAN IODIDA DALAM MAKANAN DENGAN METODE KOLORIMETRIK

TERBALIK DENGAN MENGGUNAKAN TECHNICON AUTOANALYZER
1. Tujuan
Metode ini berlaku untuk menentukan iodida dalam makanan.
2. Keamanan
- Selalu memakai alat pelindung yaitu masker, kacamata, dan sarung tangan saat
menangani bahan kimia beracun dan korosif.
- Siapkan larutan dengan bahan kimia beracun dan korosif di dalam lemari.
- Selalu memakai baju/jubah laboratorium saat di dalam laboratorium.

- Konsultasikan MSDS (Material Safety Data Sheet) bahan kimia kepala

laboratorium/pembimbing peneltian sebelum menggunakannya.
3. Definisi
Iodida dalam metode ini adalah jumlah yang diukur dengan penurunan absorbansi
warna kuning dari ion Ceric , yang berbanding terbalik dengan iodida konsentrasi
dalam sampel.
4. Prinsip
Penentuan iodida berdasarkan metode kolorimetri terbalik yaitu iodida mengkatalisis
reduksi ion Ceric menggunakan asam arsenious . penurunan absorbansi dari ion Ceric
kuning di 420 nm adalah berbanding terbalik sebanding dengan konsentrasi iodida
dalam sampel.
5. Reagent dan Material
- Kalium Iodida, A.R., Univar / AJAX
Larutan kalium iodida standar (larutan A), 100 mg/L
timbang tepat 130,8 mg kalium iodida dan larut dalam sekitar 800 mL air
yang diionisasikan . Encerkan sampai 1 L dengan diionisasikan.
Potassium iodide standar (larutan B), 2 mg/L
Pipet 2 ml larutan standar A ke 100 dalam labu ukur 100 ml, campurkan
dan encerkan dengan air deionisasi.
Potassium standar iodide (larutan C) 200 mg/mL
Pipet 10 ml larutan standar B ke dalam labu volumetrik 100 mL,
kemudian campurkan dan encerkan dengan air deionisasi.
- Brij 35, 30 %, Sigma
- Sodium hidroksida (NaOH), A.R., Baker
- Arsenik trioksida (As2O3), A.R., Baker
- Ceric Amonium
6. Aparatur / perangkat
7. Prosedur / action
8. Kalkulasi / perhitungan
9. Hasil