Tincin de muestras en el laboratorio.

Tincin de Gram es un mtodo de diferenciar especies bacterianas en dos grandes grupos. El nombre
proviene de su inventor, Hans Christian Gram.
Tincin de Gram diferencia bacterias por las propiedades fsicas de sus paredes celulares y qumica
mediante la deteccin de peptidoglicano, que est presente en una capa espesa en las bacterias Gram
positivas. Unos resultados Gram positivos en un color prpura/azul, mientras que un resultado Gram
negativos en color rosa/rojo.
La tincin de Gram es casi siempre el primer paso en la identificacin de un organismo bacteriano.
Mientras que la tincin de Gram es una herramienta de diagnstico valiosa, tanto en entornos de
investigacin clnica y, no todas las bacterias pueden ser clasificados definitivamente por esta tcnica.
Esto da lugar a grupos de Gram-variables y Gram-indeterminado as.
Historia
El mtodo es el nombre de su inventor, el cientfico dans Hans Christian Gram, que desarroll la tcnica
al trabajar con Carl Friedlnder en la morgue del hospital de la ciudad de Berln en 1884 - Gram ide su
tcnica no con el propsito de distinguir un tipo de bacteria de otro, pero para permitir que las bacterias se
vean ms fcilmente en las secciones teidas de tejido pulmonar. l public su mtodo en 1884, e incluy
en su informe resumen de la observacin de que el bacilo de la tifoidea no retuvo la mancha.
Utiliza
Tincin de Gram es una tcnica de laboratorio bacteriolgico utilizado para diferenciar especies
bacterianas en dos grandes grupos basados en las propiedades fsicas de sus paredes celulares. Tincin
de Gram no se utiliza para clasificar las arqueas, anteriormente arqueobacterias, ya que estos
microorganismos producen muy diversas respuestas que no siguen sus grupos filogenticos.
La tincin de Gram no es una herramienta infalible para el diagnstico, identificacin, o filogenia, y es de
uso muy limitado en la microbiologa ambiental. Se ha sustituido en gran medida por las tcnicas
moleculares, incluso en el laboratorio de microbiologa mdica. Algunos organismos son Gram-variable,
algunos organismos no son susceptibles a la mancha ya sea utilizado por la tcnica de Gram. En un
moderno laboratorio del medio ambiente o la microbiologa molecular, la mayora identificacin se realiza
utilizando secuencias genticas y otras tcnicas moleculares, que son mucho ms especfico e
informativo que la tincin diferencial.
La tincin de Gram ha demostrado ser como una herramienta de diagnstico eficaz como la PCR,
particularmente en lo que respecta al diagnstico gonorrea en Kuwait. La similitud de los resultados tanto
de la tincin de Gram y PCR para el diagnstico de la gonorrea fue de 99,4% en Kuwait.
Mdico
Tincin de Gram se realizan en fluido corporal o biopsia cuando se sospecha de una infeccin. Es
especialmente importante cuando la infeccin podra hacer una diferencia importante en el tratamiento y
el pronstico del paciente, son ejemplos de lquido cefalorraqudeo para la meningitis y el lquido sinovial
de la artritis sptica ..
Mecanismo de tincin
Las bacterias Gram-positivas tienen una pared celular similar a una malla gruesa hecha de
peptidoglicano, que se tie por prpura violeta de cristal, mientras que las bacterias Gram-negativas

tienen una capa ms delgada, que se tie de color rosa por el contador-mancha. Hay cuatro pasos
bsicos de la tincin de Gram:

La aplicacin de una tincin primaria a un frotis fijo de calor de un cultivo bacteriano. Fijacin de
calor mata algunas bacterias, pero se utiliza sobre todo para fijar las bacterias a la diapositiva para que no
se enjuagan durante el procedimiento de tincin.

La adicin de yodo, que se une a cristal violeta y se atrapa en la clula,

Decoloracin rpida con alcohol o acetona, y

Contratincin con safranina. Carbol fucsina es a veces sustituido por safranina ya que teir ms
intensamente bacterias anaerobias, pero es mucho menos comnmente empleada como contratincin.
Crystal disocia violeta en soluciones acuosas en iones CV y cloruro. Estos iones penetran a travs de la
pared celular y la membrana celular de las clulas tanto Gram-positivas y Gram-negativas. El CV de iones
interacta con los componentes de carga negativa de las clulas bacterianas y las clulas manchas de
color prpura.
Yodo interacta con CV y forma grandes complejos de cristal violeta y yodo dentro de las capas interior y
exterior de la clula. El yodo se refiere a menudo como un mordiente, pero es un agente de captura que
impide la eliminacin de la CV-complejo I y, por lo tanto, el color de la celda.
Cuando se aade un decolorante, tal como alcohol o acetona, que interacta con los lpidos de la
membrana celular. Una clula Gram-negativa perder su lipopolisacrido membrana externa, y la capa de
peptidoglicano interior est expuesto a la izquierda. Los complejos CV-I se lavan de la clula de Gramnegativa, junto con la membrana externa. En contraste, una clula Gram-positiva se deshidrata a partir de
un tratamiento con etanol. Los grandes complejos CV-I quedan atrapados dentro de la clula Grampositivos debido a la naturaleza de mltiples capas de su peptidoglicano. La etapa de decoloracin es
crtica y debe ser programado correctamente; la tincin de cristal violeta se eliminar de ambas clulas
Gram-positivos y negativos si el agente decolorante se deja durante demasiado tiempo.
Despus de la decoloracin, la clula Gram-positivas sigue siendo morado y la clula Gram-negativas
pierde su color prpura. Contratincin, que suele ser cargado positivamente safranina o fucsina bsica, se
aplica ltima para dar decolora las bacterias Gram-negativas un color rosa o rojo.
Algunas bacterias, despus de teir con la tincin de Gram, producen un patrn de Gram variable: una
mezcla de clulas de color rosa y morado se ven. El Actinomyces gneros, Arthobacter, Corynebacterium,
Mycobacterium, Propionibacterium y tienen paredes celulares particularmente sensibles a la rotura
durante la divisin celular, lo que resulta en la tincin de Gram-negativos de estas clulas Gram-positivas.
En los cultivos de Bacillus, Butyrivibrio, y Clostridium, una reduccin del espesor de peptidoglicano
durante el crecimiento coincide con un aumento en el nmero de clulas que mancha Gram-negativas.
Adems, en todas las bacterias tieron utilizando la tincin de Gram, la edad del cultivo puede influir en
los resultados de la mancha.
Ejemplos
Las bacterias Gram-positivas
Las bacterias Gram-positivas tienen generalmente una sola membrana rodeada por un peptidoglicano de
espesor. Esta regla es seguida de dos filos-Firmicutes y Actinobacteria. Por el contrario, los miembros de
la Chloroflexi son monoderms pero poseen un peptidoglicano delgada o ausente y pueden manchar

negativo, positivo o indeterminado. Los miembros del grupo Deinococcus-Thermus, tien positivamente,
pero son diderms con peptidoglicano espesor.
Histricamente, las formas Gram-positivas componen los filo Firmicutes, un nombre que ahora se utiliza
para el grupo ms numeroso. Incluye muchos gneros bien conocidos tales como Bacillus, Listeria,
Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus y Clostridium. Tambin se ha ampliado para incluir las
Mollicutes, bacterias como Mycoplasma que las paredes celulares de la falta y lo que no se pueden teir
por gramo, pero se derivan de tales formas.
Normalmente, si la tincin de Gram se realiza en bateria cido-alcohol resistentes se muestran como si
son Gram-positivas, sobre todo a causa de su gruesa pared celular.
Las bacterias Gram-negativas
Las bacterias Gram-negativas poseen generalmente una fina capa de peptidoglicano entre dos
membranas. La mayora de los phyla bacteriana son Gram-negativas, incluyendo las cianobacterias,
espiroquetas y bacterias verdes del azufre, y la mayora de Proteobacteria.
Las bacterias Gram-indeterminados
Las bacterias Gram-indeterminados no responden a la tincin de Gram y, por lo tanto, no pueden
determinarse ya sea como Gram-positivos o Gram-negativos. Algunos ejemplos son bacilos Gramvariables y cido.