FUNDAO UNIVERSIDADE REGIONAL DE BLUMENAU

CENTRO DE CINCIAS DA SADE

DEPARTAMENTO DE CINCIAS FARMACUTICAS
CURSO DE NUTRIO

BIANCA SCOLARO

EFEITOS DO CH MATE SOBRE O ESTRESSE OXIDATIVO EM RATOS

INTOXICADOS COM ETANOL

Blumenau
2009

BIANCA SCOLARO

EFEITOS DO CH MATE SOBRE O ESTRESSE OXIDATIVO EM RATOS

INTOXICADOS COM ETANOL

Trabalho de Concluso de Curso apresentado ao

Curso de Nutrio, do Centro de Cincias da Sade,
da Universidade Regional de Blumenau, como
requisito parcial para obteno do grau de
Nutricionista.
Orientadora: Profa. Dbora Delwing Dal Magro, Dra.
Co-orientadora: Profa. Joseane Freygang, Msc.

Blumenau
2009

AGRADECIMENTOS

Agradeo aos meus pais Liane e Antnio Scolaro pelo eterno apoio e confiana.
Ao meu namorado Gregory Thom e Silva pelo incentivo, encorajamento, amor e por
seu ombro reconfortante.
minha orientadora e amiga Dbora Delwing Dal Magro pela luz, pelo tempo
despendido, pelas risadas, desabafos e parceria. Ainda Daniela Delwing de Lima, pela
participao e altrusmo.
Agradeo aos professores do Laboratrio de Fisiologia Simone Wagner Rios Largura,
Jos Geraldo Pereira da Cruz e em especial, professora Alessandra Beirith, pela
oportunidade, apoio, compreenso diante dos momentos de ausncia e grande amizade.
professora Joseane Freygang por participar da minha formao profissional
compartilhando experincias e conhecimento.
Aos meus amigos pelo empurro e momentos de descontrao.

O futuro pertence queles que acreditam na beleza dos seus sonhos.

Eleanor Roosevelt

RESUMO
Os compostos fenlicos so antioxidantes capazes de proteger o organismo dos radicais livres
e do estresse oxidativo. A infuso de erva mate (Ilex paraguariensis) uma importante fonte
de polifenis como cido clorognico e flavonides (rutina, quercetina e kampferol), sendo
que sua ao antioxidante tem sido demonstrada por vrios estudos. O objetivo desta pesquisa
foi observar a atividade antioxidante do ch mate sobre o estresse oxidativo em ratos
intoxicados com etanol. Para tanto, realizou-se a determinao dos nveis de substncias
reativas ao cido tiobarbitrico (TBA-RS) e das enzimas antioxidantes catalase (CAT),
superxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GSH-Px) em hipocampo e sangue de
ratos tratados com ch mate por via oral, aps administrao aguda e crnica de etanol;
posteriormente, verificou-se a influncia do tratamento agudo e crnico de ch mate sobre as
alteraes provocadas. Os resultados demonstraram que as administraes aguda e crnica de
etanol induziram o estresse oxidativo, visto o aumento dos nveis de TBA-RS e alterao da
atividade das enzimas antioxidantes, tanto em crebro quanto em sangue de ratos. A
administrao aguda e crnica do ch mate foi capaz de prevenir o estresse causado pelo
etanol, comprovando sua ao antioxidante. Analisaram-se ainda a influncia do tratamento
com ch mate sobre os nveis de glicemia, no se observando diferenas significativas. Diante
dos resultados obtidos, sugere-se que o ch mate possa constituir uma fonte diettica
importante de antioxidantes, podendo auxiliar na preveno e tratamento de doenas crnicas
no transmissveis. Assim, denota-se a importncia da interveno nutricional voltada ao
incentivo de um maior consumo de vegetais fontes de antioxidantes pela populao,
promovendo hbitos alimentares saudveis, garantindo um estado nutricional adequado e
ainda uma melhor qualidade de vida.
Palavras-chaves: Estresse oxidativo. Antioxidantes. Doenas crnicas no transmissveis. Ch
mate.

LISTA DE ILUSTRAES

Grfico 1 - Efeitos da administrao aguda de etanol sobre as substncias reativas ao cido

tiobarbitrico (TBA-RS) em hipocampo e plasma de ratos. ............................................................22
Grfico 2 - Efeitos da administrao aguda de etanol sobre a atividade das enzimas antioxidantes
catalase, superxido dismutase e glutationa peroxidase em hipocampo de ratos. ..............................23
Grfico 3 - Efeitos da administrao aguda de etanol sobre a atividade das enzimas antioxidantes
catalase, superxido dismutase e glutationa peroxidase em eritrcitos de ratos. ...............................23
Grfico 4 - Efeitos da administrao crnica de etanol sobre as substncias reativas ao cido
tiobarbitrico (TBA-RS) em hipocampo e plasma de ratos. ............................................................24
Grfico 5 - Efeitos da administrao crnica de etanol sobre a atividade das enzimas antioxidantes
catalase, superxido dismutase e glutationa peroxidase em hipocampo de ratos. ..............................25
Grfico 6 - Efeitos da administrao crnica de etanol sobre a atividade das enzimas antioxidantes
catalase, glutationa peroxidase e superxido dismutase em eritrcitos de ratos. ...............................25
Grfico 7 - Efeitos da administrao aguda de etanol, ch mate e ch mate associado ao etanol sobre as
substncias reativas ao cido tiobarbitrico e as atividades da catalase e superxido dismutase em
hipocampo de ratos......................................................................................................................26
Grfico 8 - Efeitos da administrao aguda de etanol, ch mate e ch mate associado ao etanol sobre as
substncias reativas ao cido tiobarbitrico e sobre a atividade catalase em sangue de ratos. ...........27
Grfico 9 - Efeitos da administrao crnica de etanol, ch mate e ch mate associado ao etanol sobre
as substncias reativas ao cido tiobarbitrico e a atividade catalase e glutationa peroxidase, em
hipocampo de ratos......................................................................................................................27
Grfico 10 - Efeitos da administrao crnica de etanol, ch mate e ch mate associado ao etanol sobre
as substncias reativas ao cido tiobarbitrico, sobre a atividade da superxido dismutase, sobre a
atividade catalase, e sobre a glutationa peroxidase em sangue de ratos. ...........................................28

LISTA DE SIGLAS
ADP Adenosina 5-difosfato
AGEs Produtos Avanados da Glicao
AMP Adenosina 5-monofosfato
ATP Adenosina 5-trifosfato
CAT Catalase
COBEA Colgio Brasileiro de Experimentao Animal
DCNT Doenas Crnicas No Transmissveis
DCV Doenas Cardiovasculares
GSH Glutationa reduzida
GSH-Px Glutationa Peroxidase
HO- - Radical Hidroxila
H2O2 - Perxido de Hidrognio
LDLc Low Density Lipoprotein cholesterol
NADPH Nicotinamida Adenina Dinucleotdeo-P
O2 Oxignio
O2- - nion Superxido
O22- - nion Perxido
ROS Espcies Reativas de oxignio
SOD Superxido Dismutase
TBA-RS Substncias Reativas ao cido Tiobarbitrico

SUMRIO
1

INTRODUO ............................................................................................................. 9

REVISO BIBLIOGRFICA ................................................................................... 11

2.1

RADICAIS LIVRES E ESTRESSE OXIDATIVO ...................................................... 11

2.2

PROPRIEDADES DA ERVA MATE........................................................................... 13

OBJETIVOS ................................................................................................................ 16

3.1

OBJETIVO GERAL...................................................................................................... 16

3.2

OBJETIVOS ESPECFICOS ........................................................................................ 16

MATERIAL E METODOLOGIA ............................................................................. 17

4.1

CARACTERIZAO DA PESQUISA ........................................................................ 17

4.2

PROTOCOLO EXPERIMENTAL................................................................................ 17

4.2.1 Animais ........................................................................................................................... 17

4.2.2 Preparo do ch mate ......................................................................................................... 17
4.2.3 Administrao aguda de ch mate e etanol ......................................................................... 18
4.2.4 Administrao crnica de ch mate e etanol ....................................................................... 18

4.3

ANLISES BIOQUMICAS ........................................................................................ 19

4.3.1 Preparao dos eritrcitos e do plasma ............................................................................... 19

4.3.2 Preparao da estrutura cerebral ........................................................................................ 19
4.3.3 TBA-RS .......................................................................................................................... 19
4.3.4 Catalase (CAT) ................................................................................................................ 20
4.3.5 Glutationa peroxidase (GSH-Px) ....................................................................................... 20
4.3.6 Superxido dismutase (SOD) ............................................................................................ 20
4.3.7 Dosagem protica ............................................................................................................. 21
4.3.8 Dosagem de glicose sangunea .......................................................................................... 21

4.4

ANLISE ESTATSTICA............................................................................................ 21

RESULTADOS ............................................................................................................ 22

DISCUSSO ................................................................................................................ 29

CONCLUSO.............................................................................................................. 34

REFERNCIAS ..................................................................................................................... 35
APNDICE A ......................................................................................................................... 40

INTRODUO

A Nutrio Funcional uma cincia integrativa e profunda, baseada na pesquisa

cientfica e cuja aplicao prtica engloba, tanto a preveno, como o tratamento de doenas
crnicas no transmissveis (DCNT), buscando modular as reaes bioqumicas envolvidas
neste processo por meio de nutrientes e fitoqumicos (PASCHOAL; NAVES; FONSECA,
2008) como os compostos fenlicos, antioxidantes capazes de proteger o organismo dos
radicais livres e do estresse oxidativo. Compostos fenlicos so metablitos secundrios das
plantas que possuem um anel aromtico com um ou mais substituintes hidroxlicos, incluindo
outros grupos funcionais. Ocorrem naturalmente em frutas frescas, vegetais e chs, fazendo
parte da dieta humana (MATSUMOTO, 2008).
Estes compostos tm sido largamente associados proteo antioxidante do
organismo. Os antioxidantes podem ser divididos em duas classes: antioxidantes com
atividade enzimtica e antioxidantes no-enzimticos. Na primeira esto os compostos
capazes de bloquear a iniciao da oxidao, ou seja, as enzimas que removem as espcies
reativas ao oxignio (ROS). Na segunda classe, esto as molculas que interagem com os
radicais e so consumidas durante a reao, incluindo nesses os antioxidantes sintticos e
naturais como os compostos fenlicos. A sugesto da incluso destes compostos na dieta,
levando ao aumento de seu consumo, vem sendo muito discutida como forma de preveno s
DCNT (MOREIRA; MANCINI-FILHO, 2004).
Existem vrias maneiras pelas quais a alimentao pode interferir na formao e
defesa contra os radicais livres. O consumo de etanol a longo prazo, bem como, o excesso de
ingesto de lipdeos, induzem estresse oxidativo, principalmente no fgado, associado ao
desequilbrio entre os sistemas pr-oxidantes e antioxidantes. J uma dieta rica em
antioxidantes pode combater os radicais livres, como demonstrado por vrios estudos, alguns
destes envolvendo ervas, alho, azeite de oliva e frutas como a uva (TIROSH et al., 2009;
KASDALLAH-GRISSA et al., 2008; GORINSTEIN et al., 2006; KOUTELIDAKIS et al.,
2008; PREZ-JIMNEZ et al., 2008). Alimentos como frutas, vegetais e gros integrais
contm quantidades significativas de fitoqumicos bioativos, que podem promover inmeros
efeitos benficos desejveis sade, alm do equilbrio nutricional bsico (LIU, 2004).
Outras fontes de antioxidantes naturais podem ser representadas pelos chs, uma vez
que o consumo destes pode ser uma alternativa segura para aumentar a ingesto de
antioxidantes na dieta. Chs so a segunda bebida mais consumida no mundo,

10

correspondendo a uma ingesto per capita de 120 ml/dia (CAMARGO et al., 2006). Neste
contexto, o extrato aquoso da erva mate consumido a uma taxa de mais de 1 litro por dia por
milhes de pessoas na Amrica do Sul, constituindo a principal alternativa ao caf e chs
(BASTOS et al., 2007).
A infuso de erva mate (Ilex paraguariensis) uma importante fonte de polifenis.
Seu extrato aquoso uma bebida tpica de contedo antioxidante, consumida em vrios pases
da Amrica do Sul, incluindo Brasil, Uruguai, Paraguai e Argentina. A erva mate apresenta
alto valor nutricional, contendo praticamente todas as vitaminas e minerais necessrios para
manuteno da vida: vitamina A, B1, niacina, complexo B, C, E, potssio, magnsio, clcio,
mangans, ferro, selnio, fsforo, zinco, vrios aminocidos, polifenis (cido clorognico) e
flavonides (rutina, quercetina e kaempferol), embora alguns destes nutrientes sejam sensveis
ao calor (a vitamina C perdida atravs do aquecimento, enquanto as vitaminas do complexo
B podem ser parcialmente destrudas) (SILVA et al., 2008).
O estudo de nutrientes antioxidantes que possam reverter ou prevenir condies em
que h uma produo exacerbada de radicais livres importante para promover e encorajar
hbitos alimentares saudveis, combatendo, atravs da alimentao, o surgimento de
patologias e at mesmo o envelhecimento precoce, garantido uma melhor qualidade de vida
populao (PASCHOAL; NAVES; FONSECA, 2008).
Assim, o consumo de ch mate, produto derivado da erva mate, pode ser uma boa
alternativa para a ingesto de uma maior quantidade de antioxidantes na dieta, protegendo o
organismo contra o desencadeamento de DCNT. Por ser o ch mate uma bebida de baixo
custo, que pode ser consumido tanto na forma quente ou fria, e que possui compostos
bioativos com efeitos fisiolgicos positivos no organismo, convm avaliar seu potencial
antioxidante em estados patolgicos, utilizando-se como modelo o estresse oxidativo induzido
pelo etanol. Neste contexto, surgem algumas questes: O ch mate tem capacidade de
aumentar a atividade do sistema antioxidante enzimtico em ratos intoxicados com etanol?
Existe relao entre a ingesto de ch mate e reduo da glicemia?

11

REVISO BIBLIOGRFICA

2.1 RADICAIS LIVRES E ESTRESSE OXIDATIVO

Por definio, qualquer tomo, grupo de tomos ou molculas que contenham um

eltron solitrio numa rbita externa, criando um campo magntico, denominado radical
livre. Estes compreendem molculas instveis, potencialmente capazes de oxidar protenas,
lipdeos, organelas citoplasmticas e material gentico (LAMEU, 2005).
O metabolismo celular de todos os organismos aerbios acompanhado pela formao
de ROS. No entanto, contrabalanceada pelo consumo de defesas antioxidantes no
enzimticas (-tocoferol, carotenides, cido ascrbico, etc.) e pela atividade das enzimas
antioxidantes. Quando esse balano rompido em favor dos agentes oxidantes, diz-se que a
clula ou organismo se encontra sob estresse oxidativo (AUGUSTYNIAK et al., 2005;
BELL-KLEIN, 2002).
Os radicais livres podem ser formados no retculo endoplasmtico, no citosol e nas
mitocndrias. Estas ltimas so consideradas a maior fonte in vivo da gerao de ROS,
principalmente nos complexos I e III da cadeia respiratria, onde ocorre reduo incompleta
(2-5%) do oxignio (O2). Depois de formados, estes compostos produzem uma reao de
oxidao em cadeia resultando na destruio, modificao ou inativao de inmeras
molculas (LENAZ, 2001; LLESUY, 2002).
O O2 um timo agente oxidante e ao oxidar um composto, reduzido pelo ganho de
eltrons. Ao ganhar um eltron, o produto obtido o nion superxido (O2-); adicionando-se
outro eltron ocorre a formao do nion perxido (O22-) que no um radical livre j que no
possui eltrons desemparelhados. A reduo parcial do oxignio por aceitao de dois eltrons
d lugar produo de perxido de hidrognio (H2O2). Porm a ligao entre as molculas de
oxignio no H2O2 relativamente fraca, e pode se decompor dando lugar a formao de
radical hidroxila (HO-), que altamente reativo (LLESUY, 2002).
O estresse oxidativo pode ser definido como os efeitos adversos das reaes oxidativas
induzidas pelos radicais livres dentro dos sistemas biolgicos, ocasionando leso em
molculas como DNA, protenas, carboidratos e lipdeos. O componente lipdico da
membrana celular a primeira estrutura a ser atacada pelos radicais livres, fazendo da
peroxidao lipdica a leso mais frequentemente descrita como resultado da ao dos

12

reativos txicos do oxignio (LAMEU, 2005). Outro alvo celular para as ROS o DNA. No
entanto, a integridade do DNA vital para a diviso celular, sendo que alteraes oxidativas
podem interromper a transcrio, translao, replicao do DNA e dar incio mutaes e
morte celular (MIRANDA et al., 2008).
Em clulas saudveis, um ou vrios mecanismos regulatrios redox so ativados em
resposta a um aumento intracelular de ROS para prevenir o estresse oxidativo. O desequilbrio
entre a produo e eliminao de ROS, seja pelo acmulo dos mesmos ou pela deficincia de
sistema antioxidante, leva mudanas na transduo de sinais e expresso gnica, dando
incio ao aparecimento de estados patolgicos relacionados ao estresse oxidativo (ULRICHMERZENICH et al., 2009).
As ROS tm sido implicadas na fisiopatologia de vrias doenas. Os mecanismos
fisiopatolgicos das leses celulares pelos radicais livres so caracterizados em diferentes
condies clnicas agudas e crnicas: disfuno celular do paciente crtico; aterognese;
cardiopatias; senilidade; doenas neurolgicas; carcingenese; doenas reumticas; infeces
respiratrias e diabetes tipo 2. Um fenmeno comum em todas estas um desequilbrio entre
a produo e a eliminao dos ROS. Estas substncias tambm esto ligadas com processos
responsveis pelo envelhecimento do corpo (ULRICH-MERZENICH et al., 2009;
DEGSPARI, WASZCZYNSKYJ, 2004; MIRANDA et al., 2008; LAMEU, 2005;
AUGUSTYNIAK et al., 2005).
Alm destas, o estresse oxidativo tem sido relacionado com a patognese de algumas
condies que afetam o sistema nervoso central, tais como epilepsia, esclerose mltipla,
demncia e doenas neurodegenerativas como Alzheimer e Parkinson. Este fato torna-se
facilmente compreensvel, visto que o crebro altamente vulnervel ao estresse oxidativo,
em face de sua elevada taxa de atividade metablica oxidativa; do alto consumo de oxignio;
do alto contedo lipdico, principalmente de cidos graxos poliinsaturados, os quais so
facilmente oxidveis; da abundncia de ons metlicos de transio os quais favorecem a
lipoperoxidao; e da relativa reduo do sistema de defesa antioxidante (BARON et al.,
2007; HALLIWELL, GUTTERIDGE, 2007; HALLIWELL, 2006).
Com o intuito de evitar o desenvolvimento do estresse oxidativo, os nveis de ROS so
mantidos sob rgido controle atravs da atividade enzimtica de enzimas antioxidantes, como
superxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GSH-Px) e redutase
(ULRICH-MERZENICH et al., 2009; CAMARGO, et al., 2006; MATSUMOTO, 2008).
Neste contexto, a SOD decompe o nion superxido por uma sucessiva oxidao e reduo
de on cobre tendo como produto a formao de H2O2. J a CAT reage com o H2O2 para

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formar gua e O2 e a GSH-Px reduz hidroperxidos de cidos graxos e H2O2 custa de

glutationa reduzida (GSH) (MATSUMOTO, 2008; LLESUY, 2002).
Vrias evidncias indicam que a habilidade antioxidante do organismo diminui com o
avano da idade, aumentando assim a oxidao de macromolculas e levando a vrias
doenas relacionadas ao envelhecimento. Estas parecem estar associadas com a capacidade
antioxidante enzimtica e no enzimtica diminuda, ambos sistemas capazes de transformar
as ROS em espcies mais inertes. O estado redox celular, que pode ser modificado durante o
envelhecimento, pode tambm ser modificado pela dieta. Componentes alimentares podem
aumentar ou diminuir a habilidade antioxidante celular. A intoxicao crnica por lcool, por
exemplo, pode levar a uma intensa gerao de ROS e diminuio do status antioxidante,
condio conhecida por estresse oxidativo. J a introduo de antioxidantes por meio da dieta
pode auxiliar os mecanismos endgenos de defesa (sistema antioxidante enzimtico)
(AUGUSTYNIAK et al., 2005; DEGSPARI, WASZCZYNSKYJ, 2004; MIRANDA et al.,
2008).

2.2 PROPRIEDADES DA ERVA MATE

Antioxidantes so compostos que podem retardar ou inibir a oxidao de lipdios e

outras biomolculas, evitando o incio ou propagao das reaes de oxidao em cadeia. A
atividade antioxidante de compostos fenlicos principalmente devida s suas propriedades
de xido-reduo, as quais podem desempenhar um importante papel na absoro e
neutralizao de radicais livres (DEGSPARI, WASZCZYNSKYJ, 2004).
A erva mate (Ilex paraguariensis) rica em vrios compostos bioativos como cafena,
cidos fenlicos e saponinas, que so absorvidas pelo organismo e podem agir como
antioxidantes ou varredores de radicais livres. O principal polifenol encontrado na erva mate
o cido clorognico, o qual parece ter atividade anticarcinognica. Este um antioxidante
potente que pode agir como doador de hidrognio ou eltrons, e at mesmo como quelante de
metais de transio (MIRANDA et al., 2008; MARTINS et al., 2009).
Dentre os efeitos farmacolgicos associados erva mate esto: preveno a danos
celulares que podem desencadear doenas crnicas; propulso intestinal; vasodilatador;

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inibio da glicao e inibio do estresse oxidativo (BASTOS et al., 2007). A erva mate
utilizada ainda como estimulante do sistema nervoso central, diurtico e em preparaes para
reduo de peso, possuindo efeito termognico. Pang et al. (2008), demonstraram que extratos
de Ilex paraguariensis foram capazes de suprimir o apetite e prevenir obesidade induzida pela
dieta em ratos, observados pela reduo do ganho de peso, reduo do tamanho dos
adipcitos, da concentrao sangunea e heptica de lipdeos e da reduo de nveis
sanguneos de glicose e insulina.
O ch mate uma forma de consumo da erva mate, sendo obtido a partir da torrefao
da erva, sem passar por processo de fermentao, podendo ser denominada erva mate tostada.
constitudo somente de folhas ou de folhas e galhos triturados e tostados em equipamento
apropriado (SALDANHA, 2005; MATSUMOTO, 2008). As propriedades do ch mate vem
sendo amplamente estudadas. Neste cenrio, Saldanha (2005) relatou que o processo de
torrefao da erva mate, para produo do ch mate, no ocasiona perda nas caractersticas
antioxidantes, e possivelmente contribui para a formao de novas substncias com
propriedades semelhantes. Extratos de erva mate (tanto verde como tostada) apresentam
atividade antioxidante semelhante a do ch verde.
Corroborando com os estudos de Saldanha (2005), Miranda et al. (2008),
demonstraram que o ch mate aumenta a resistncia do DNA contra danos induzidos H2O2 e
Martins et al. (2009), observaram diminuio da peroxidao lipdica no plasma e fgado de
ratos, aps consumo de ch mate.
Lunceford e Gugliucci (2005) realizaram estudo comparativo sobre o efeito
antioxidante da erva mate e sua capacidade de inibio da glicao in vitro, em relao ao ch
verde e ao agente antiglicao padro (aminoguanidina). A glicao a formao no
enzimtica de produtos derivados da associao entre acares e protenas ou acares e
lipdeos, sendo a base molecular para as complicaes do diabetes devido hiperglicemia. Os
produtos finais da glicao so produtos estveis e irreversveis chamados produtos avanados
da glicao (AGEs) e acumulam-se com a idade, aterosclerose e diabetes mellitus. Protenas
glicadas acumuladas podem catalisar a formao de radicais livres, j que a glicao e
glicooxidao esto intimamente relacionadas. A infuso de erva mate (50 g/l de gua)
demonstrou inibio de 40% da acumulao de AGEs, induzido pelo emprego de
metilglicoxal, enquanto o ch verde no demonstrou atividade significativa.
Lanzetti et al. (2008), tambm observaram a atividade antioxidante do ch mate sobre
uma condio em que h produo exacerbada de radicais livres. No estudo em questo,
camundongos foram submetidos exposio da fumaa do cigarro por 5 dias consecutivos e

15

suplementados com ch mate, sendo um grupo por gavagem e outro grupo por injeo
intraperitoneal, ambos na dose 150 mg/kg. A fumaa do cigarro contm grande quantidade de
oxidantes, o que leva a crer que muitos dos efeitos adversos do cigarro podem aparecer
devido ao dano oxidativo s molculas biolgicas. Estes oxidantes so responsveis pela
inflamao aguda dos pulmes, devido ao recrutamento de macrfagos e neutrfilos e
liberao de mediadores pr-inflamatrios, que elevam a produo de radicais livres. Os
resultados demonstraram que o ch mate administrado por gavagem oral reduziu o dano
oxidativo, observado pelos nveis reduzidos de TBARS (61,33%) em comparao com o
grupo apenas exposto fumaa (150%). Alm disso, a administrao, tanto oral quanto
intraperitoneal, reduziu o influxo de macrfagos e neutrfilos alveolares.
Diante das aes hipotensivas da erva mate, Gorgen et al. (2005) examinaram seus
efeitos sobre a hidrlise de nucleotdeos no plasma de ratos aps a ingesto aguda e crnica
de extrato aquoso de Ilex paraguariensis. Os resultados demonstraram uma reduo
significativa da hidrlise de ATP, ADP e AMP plasmticos aps a ingesto crnica do extrato
(15 dias). Esses dados sugerem um efeito modulatrio de Ilex paraguariensis sobre o
metabolismo dos nucleotdeos, possivelmente devido ao dos flavonides. Esses induziram
um aumento na concentrao extra-celular de ATP, que pode causar vasodilatao.
Pesquisas envolvendo a ao antioxidante da erva mate em humanos ainda so
limitadas. Silva et al. (2008), demonstraram, em estudo com adultos saudveis, que aps a
ingesto de 500 ml de infuso de erva mate ocorre uma menor susceptibilidade a peroxidao
lipdica em plasma e LDL-c, associado ao aumento da capacidade antioxidante.
Por fim, o ch mate instantneo tambm foi objeto de pesquisa devido s suas
propriedades antioxidantes. Em estudo realizado por Matsumoto et al. (2009), mulheres
jovens saudveis receberam 5 g de ch mate instantneo diludo em 500 ml de gua por uma
semana, sendo que suas dietas foram avaliadas e calculadas a fim de evitarem-se alteraes na
ingesto de vitaminas e nutrientes. As amostras de sangue indicaram que tanto a ingesto
aguda como crnica do ch mate, reduziram a peroxidao lipdica (nveis de TBA-RS) e
aumentaram a expresso gnica das enzimas antioxidantes SOD, GSH-Px e CAT.

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OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GERAL

Observar a atividade antioxidante do ch mate sobre o estresse oxidativo em ratos

intoxicados com etanol.

3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

- Verificar os efeitos da administrao aguda e crnica de etanol sobre os nveis de

TBA-RS (formao de substncias reativas ao cido tiobarbitrico) em plasma e crebro de
ratos;
- Analisar os efeitos da administrao aguda e crnica de etanol sobre a atividade das
enzimas CAT, SOD e GSH-Px em eritrcitos e crebro de ratos;
- Observar a influncia da administrao aguda e crnica do ch mate sobre os efeitos
causados pelo etanol sobre os nveis de TBA-RS em plasma e crebro de ratos;
- Verificar os efeitos da administrao aguda e crnica do ch mate sobre os efeitos
causados pelo etanol sobre a atividade das enzimas CAT, SOD e GSH-Px em eritrcitos e
crebro de ratos;
- Dosar os nveis sanguneos de glicose antes e aps a administrao crnica do ch
mate.

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MATERIAL E METODOLOGIA

4.1 CARACTERIZAO DA PESQUISA

O presente estudo uma pesquisa de carter experimental, realizada no Laboratrio de

Biofsica, Departamento de Cincias Naturais, FURB, no perodo de abril a outubro de 2009,
aps aprovao pelo Comit de tica no Uso de Animais da Universidade (protocolo
1909/09), de acordo com o formulrio de coleta de dados (APNDICE A).

4.2 PROTOCOLO EXPERIMENTAL

4.2.1

Animais

Foram utilizados ratos Wistar machos de 60 (n = 40) e 45 dias (n = 25) de idade,

pesando aproximadamente 200 gramas, obtidos do Biotrio Central da Universidade Regional
de Blumenau. Os animais foram desmamados aos 21 dias de idade e mantidos em um ciclo de
12 h claro/escuro temperatura constante de 22C (2C) com livre acesso comida e gua,
sendo seguidas as normas do Colgio Brasileiro de Experimentao com Animais (COBEA).

4.2.2

Preparo do ch mate

Para o preparo do ch mate, foi preparada diariamente a infuso da erva tostada (Leo
Jr. Curitiba-PR) em gua fervente, sendo em seguida coada em papel filtro. O procedimento
foi realizado de acordo com o modo de preparo informado na embalagem (16,5 g/litro de
gua).

18

4.2.3

Administrao aguda de ch mate e etanol

Para a administrao aguda de ch mate e etanol foram utilizados 40 animais (60 dias
de idade) divididos em quatro grupos: 1) grupo controle (n = 10) que recebeu uma injeo
intraperitoneal de salina (soro fisiolgico) e gua destilada por gavagem orogstrica; 2) grupo
tratado (n = 10) que recebeu ch mate por gavagem orogstrica na dose de 0,5 g/kg
(MARTINS et al., 2009) e injeo intraperitoneal de salina (soro fisiolgico); 3) grupo
intoxicado (n = 10) que recebeu uma injeo intraperitoneal de etanol 35% na dose de 3 g/kg
(KASDALLAH-GRISSA et al., 2008) e gua destilada por gavagem orogstrica, e 4) grupo
intoxicado tratado com ch mate (n = 10) que recebeu ch mate por gavagem orogstrica na
dose de 0,5 g/kg, representando uma ingesto de 0,75 l/dia de ch mate (MARTINS et al.,
2009) e uma injeo intraperitoneal de etanol 35% na dose de 3 g/kg (KASDALLAHGRISSA et al., 2008). Os animais foram sacrificados 1 hora aps a administrao, por
decapitao na ausncia de anestesia, e o crebro foi removido e o sangue coletado.

4.2.4

Administrao crnica de ch mate e etanol

A administrao crnica de ch mate e etanol foi realizada por um perodo de 15 dias,

sendo que os animais (n = 25, 45 dias de idade) foram divididos em quatro grupos: 1) grupo
controle (n = 5) que recebeu uma injeo intraperitoneal de salina (soro fisiolgico) e gua
destilada por gavagem orogstrica diariamente; 2) grupo tratado (n = 8) que recebeu ch mate
por gavagem orogstrica na dose diria de 0,5 g/kg (MARTINS et al., 2009) e injeo
intraperitoneal de salina (soro fisiolgico); 3) grupo intoxicado (n = 5) que recebeu uma
injeo intraperitoneal de etanol 35% na dose diria de 3 g/kg (KASDALLAH-GRISSA et al.,
2008) e gua destilada por gavagem orogstrica, e 4) grupo intoxicado tratado com ch mate
(n = 8) que recebeu diariamente ch mate por gavagem orogstrica na dose de 0,5 g/kg,
representando uma ingesto de 0,75 l/dia de ch mate (MARTINS et al., 2009) e uma injeo
intraperitoneal de etanol 35% na dose de 3 g/kg (KASDALLAH-GRISSA et al., 2008). Ao
trmino os animais foram sacrificados por decapitao na ausncia de anestesia (evitando-se a
formao de compostos que possam interferir nas anlises) sendo ento o crebro removido e
o sangue coletado.

19

4.3 ANLISES BIOQUMICAS

4.3.1

Preparao dos eritrcitos e do plasma

Os eritrcitos e o plasma foram preparados a partir de amostras de sangue total obtidas

dos quatro grupos de ratos.
O sangue total foi centrifugado, em centrfuga Luguimac LC-10, a 1,000 x g, e o
plasma separado e utilizado para determinao do TBA-RS. Os eritrcitos foram lavados 3
vezes com soluo salina (0,153 mol/L cloreto de sdio). Os lisados foram preparados pela
adio de 1 mL de gua destilada para 100 L de eritrcitos lavados e congelados a -80C
para posterior determinao da atividade das enzimas antioxidantes.
Para determinao da atividade das enzimas antioxidantes, eritrcitos foram
congelados e descongelados 3 vezes e centrifugados a 13,500 g por 10 min. O sobrenadante
foi diludo para conter aproximadamente 0,5 mg/mL de protena.

4.3.2

Preparao da estrutura cerebral

Aps a decapitao, o crebro foi rapidamente removido. O hipocampo foi ento

homogeneizado em tampo adequado. O homogeneizado foi centrifugado a 1000 x g por 10
min, o sedimento descartado e o sobrenadante foi utilizado para a determinao da atividade
das enzimas antioxidantes e do TBA-RS.

4.3.3 TBA-RS

TBA-RS usado como um ndice de dano a lipdeos e foi determinado pelo mtodo de
Ohkawa et al. (1979). TBA-RS foi determinado fotometricamente, em espectrofotmetro
Metrolab 325-BD, a 535 nm. Os resultados foram expressos em nmol de malondialdedo por
mg de protena.

20

4.3.4

Catalase (CAT)

A atividade da CAT foi determinada pelo mtodo de Aebi (1984). A decomposio do

perxido de hidrognio foi monitorada em espectrofotmetro a 240 nm por 90 segundos. Uma
unidade de enzima definida como 1 mol de H2O2 consumido por minuto e a atividade
especfica foi expressa em unidade por mg de protena.

4.3.5

Glutationa peroxidase (GSH-Px)

A atividade da GSH-Px foi determinada pelo mtodo de Wendel (1981) com algumas
modificaes. O tert-butil-hidroperxido foi utilizado como substrato da reao. A
decomposio do NADPH foi monitorada em espectrofotmetro a 340 nm por 4 minutos.
Uma unidade de enzima definida como 1 mol de NADPH consumido por minuto e a
atividade especfica foi expressa em unidade por mg de protena.

4.3.6

Superxido dismutase (SOD)

A enzima SOD uma defesa importante contra o O2- e catalisa a reao de deste
radical em H2O2. A atividade da SOD foi determinada pelo mtodo de auto oxidao do
pirogalol, como descrito por Marklund (1985). A auto oxidao do pirogalol foi
continuamente monitorada com espectrofotmetro em 420 nm. A atividade especfica foi
expressa em unidade por mg de protena.

21

4.3.7

Dosagem protica

A dosagem de protenas foi realizada pelo mtodo de Lowry et al. (1951), utilizando
albumina bovina srica como padro.

4.3.8

Dosagem de glicose sangunea

As dosagens de glicemia foram realizadas com auxlio de fitas reativas glicose e

aparelho medidor de glicemia OneTouch Ultra. As dosagens foram realizadas atravs de
incises nas caudas dos animais, com o uso de agulhas hipodrmicas descartveis, nos grupos
em tratamento crnico antes e aps o trmino do experimento (15 dias).

4.4 ANLISE ESTATSTICA

Foi utilizado o teste T de Student ou ANOVA de uma via seguido pelo Teste Mltiplo
de Duncan quando indicado, assumindo-se P<0,05 como significativo.

22

RESULTADOS

Inicialmente verificou-se o efeito da administrao aguda de etanol sobre um

importante parmetro de lipoperoxidao, denominado formao de substncias reativas ao
cido tiobarbitrico (TBA-RS), em homogeneizado de hipocampo de ratos e em plasma de
ratos. O Grfico 1 mostra que a administrao aguda de etanol aumentou significativamente
os nveis de TBA-RS em hipocampo [t(8)=-3,644; p<0.01] e em plasma [t(8)=-5,698;
p<0.001] de ratos quando comparado aos grupos controle.

TBA-RS
nmol TBA- RS/ min. mg prot

6
5

Controle

Etanol

**

***

3
2
1
0
Hipocampo

Plasma

Grfico 1 - Efeitos da administrao aguda de etanol sobre as substncias reativas ao cido

tiobarbitrico (TBA-RS) em hipocampo e plasma de ratos. TBA-RS est expresso como nmol
de malondialdedo por mg de protena. Os dados correspondem a mdia DP para 5
experimentos independentes (animais) realizados em duplicata. **P<0,01; ***P<0,001,
comparado ao grupo controle (Teste t de Student).
A seguir observou-se o efeito da administrao aguda de etanol sobre a atividade das
enzimas antioxidantes CAT, GSH-Px e SOD em hipocampo e em eritrcitos de ratos. O
Grfico 2 mostra que a administrao aguda de etanol reduziu significativamente a atividade
das enzimas CAT [t(8)=2,931; p<0.01] e SOD [t(8)=4,510; p<0.001] em hipocampo de ratos,
mas no alterou a atividade da GSH-Px [t(8)=0,490; p>0.05] quando comparado aos
respectivos controles.

23

Controle

30

Etanol

unidades/mg protena

25
20
15
10

**

***

0
CAT

SOD

GSH-Px

Hipocampo

Grfico 2 - Efeito da administrao aguda de etanol sobre a atividade das enzimas

antioxidantes catalase, superxido dismutase e glutationa peroxidase em hipocampo de ratos.
A atividade das enzimas est expressa em unidades por mg de protena. Valores de mdia
DP de 5 animais (experimentos realizados em duplicata). **P<0,01; ***P<0,001, comparado
ao controle (Teste t de Student). CAT catalase, SOD superxido dismutase, GSH-Px
glutationa peroxidase.
Como pode ser observado no grfico 3 a administrao aguda de etanol aumentou
significativamente a atividade da CAT [t(8)=-3,633; p<0.01] em eritrcitos de ratos, mas no
alterou a atividade das enzimas GSH-Px [t(8)=0,60; p>0.05] e SOD [t(8)=-1,714; p>0.05] em
eritrcitos quando comparado aos grupos controle.

Controle

30

Etanol

unidades/mg protena

25
20
15

**
*

10
5
0
CAT

SOD

GSH-Px

Eritrcitos

Grfico 3 - Efeito da administrao aguda de etanol sobre a atividade das enzimas

antioxidantes catalase, superxido dismutase e glutationa peroxidase em eritrcitos de ratos.
A atividade das enzimas est expressa em unidades por mg de protena. Valores de mdia
DP de 5 animais (experimentos realizados em duplicata). **P<0,01; comparado ao controle

24

(Teste t de Student). CAT catalase, SOD superxido dismutase, GSH-Px glutationa

peroxidase.

Posteriormente, verificou-se o efeito da administrao crnica de etanol sobre TBARS em hipocampo e em plasma de ratos. O grfico 4 mostra que a administrao crnica de
etanol aumentou significativamente os nveis de TBA-RS em hipocampo [t(8)=-3,472;
p<0.01] e em plasma [t(8)=-2,682; p<0.05] de ratos quando comparado aos grupos controle.

TBA-RS
nmol TBA-RS/ min. mg prot

Controle

Etanol

2,5
2

**

1,5
1
0,5
0
Hipocampo

Plasma

Grfico 4 - Efeitos da administrao crnica de etanol sobre as substncias reativas ao cido

tiobarbitrico (TBA-RS) em hipocampo e plasma de ratos. TBA-RS est expresso como nmol
de malondialdedo por mg de protena. Os dados correspondem a mdia DP para 5
experimentos independentes (animais) realizados em duplicata. *P<0,05; **P<0,01,
comparado ao grupo controle (Teste t de Student).
Os efeitos da administrao crnica de etanol sobre a atividade das enzimas CAT,
GSH-Px e SOD tambm foram estudados. O Grfico 5 mostra que a administrao crnica de
etanol diminuiu significativamente a atividade das enzimas CAT [t(8)=2,785; p<0.05] e GSHPx [t(8)=2,439; p<0.05] em hipocampo de ratos, mas no alterou a atividade da SOD
[t(8)=1,471; p>0.05] quando comparado aos respectivos controles.

25

Controle

30

unidades/mg protena

Etanol

25
20
15
10

5
0
CAT

GSH-Px

SOD

Hipocampo

Grfico 5 - Efeito da administrao crnica de etanol sobre a atividade das enzimas

antioxidantes catalase, glutationa peroxidase e superxido dismutase em hipocampo de ratos.
A atividade das enzimas est expressa em unidades por mg de protena. Valores de mdia
DP de 5 animais (experimentos realizados em duplicata). *P<0,05, comparado ao controle
(teste t de student). CAT catalase, GSH-Px glutationa peroxidase, SOD superxido
dismutase.
O Grfico 6 mostra que a administrao crnica de etanol diminuiu significativamente
a atividade das enzimas CAT [t(8)=3,680; p<0.01] e GSH-PX [t(8)=6,443; p<0.001] em
eritrcitos de ratos e aumentou significativamente a atividade da enzima SOD [t(8)=-5,864;
p<0.001] quando comparadas aos seus grupos controle.

Controle

30

Etanol
unidades/mg protena

25

***

20
15
10

***

**

5
0
CAT

GSH-Px

SOD

Eritrcitos

Grfico 6 - Efeito da administrao crnica de etanol sobre a atividade das enzimas

antioxidantes catalase, glutationa peroxidase e superxido dismutase em eritrcitos de ratos.
A atividade das enzimas est expressa em unidades por mg de protena. Valores de mdia
DP de 5 animais (experimentos realizados em duplicata). **P<0,01; ***P<0,001 comparado
ao controle (Teste t de Student). CAT catalase, GSH-Px glutationa peroxidase, SOD
superxido dismutase.

26

Dando continuidade aos experimentos, verificou-se a influncia do ch mate sobre os

efeitos causados pela administrao aguda e crnica de etanol em hipocampo e em sangue de
ratos a fim de verificar o possvel envolvimento dos radicais livres, uma vez que a literatura
descreve propriedades antioxidantes ao ch mate. A anlise estatstica mostra que a
administrao aguda e crnica de ch mate no alterou nenhum dos parmetros estudados.
Como se pode observar no Grfico 7 A, B e C, a administrao aguda do ch preveniu o
aumento de TBA-RS [F(3,16)=12,895; p<0.001], bem como a reduo da CAT
[F(3,16)=4,795; p<0.01] e da SOD [F(3,16)=11,825; p<0.001] em hipocampo de ratos,
causados pela administrao aguda de etanol, respectivamente.
B

10

***

unidades/mg protena

nmol TBA-RS/min mg protena

A
6
5
4
3
2
1

9
8
7

**

6
5
4
3
2
1
0

Controle

Etanol

Ch

Controle

Ch + Etanol

Etanol

unidades/mg protena

Ch

Ch + Etanol

CAT

TBA-RS

7
6
5

***

4
3
2
1
0

Controle

Etanol

Ch

Ch + Etanol

SOD

Grfico 7 - Efeito da administrao aguda de etanol, ch mate e ch mate associado ao etanol

sobre as substncias reativas ao cido tiobarbitrico (A) e sobre as atividades da catalase (B) e
superxido dismutase (C) em hipocampo de ratos. Os dados correspondem a mdia DP para
5 experimentos independents (animais) realizados em duplicata. **P<0,01; ***P<0,001
comparado ao grupo controle (Teste Mltiplo de Duncan). TBA-RS - substncias reativas ao
cido tiobarbitrico, CAT catalase, SOD superxido dismutase.
O Grfico 8 A e B mostra que a administrao aguda do ch preveniu o aumento de
TBA-RS [F(3,16)=11,898; p<0.001], mas no preveniu o aumento da CAT [F(3,16)=5,809;
p<0.01] causados pelo etanol em sangue de ratos, respectivamente.

27

12

***

unidades/mg protena

nmol TBA-RS/min mg protena

A
3
2,5
2
1,5
1
0,5

**

10
8
6
4
2

Controle

Etanol

Ch

Ch + Etanol

Controle

Etanol

TBA-RS

Ch

Ch + Etanol

CAT

Grfico 8 - Efeito da administrao aguda de etanol, ch mate e ch mate associado ao etanol

sobre as substncias reativas ao cido tiobarbitrico (A) e sobre a atividade da catalase (B) em
sangue de ratos. Os dados correspondem a mdia DP para 5 experimentos independentes
(animais) realizados em duplicata. **P<0,01; ***P<0,001 comparado ao grupo controle
(Teste Mltiplo de Duncan). TBA-RS substncias reativas ao cido tiobarbitrico, CATcatalase.
No que se refere influncia do ch mate sobre os efeitos da administrao crnica de
etanol, o Grfico 9 A, B e C mostra que o pr-tratamento com o ch mate preveniu o aumento
de TBA-RS [F(3,16)=10,958; p<0.001], bem como a reduo da CAT [F(3,16)=3,247;
p<0.05] e GSH-PX [F(3,16)=4,882; p<0.01] em hipocampo de ratos, respectivamente.
B

unidades/mg protena

nmol TBA-RS/min mg protena

***

2
1,8
1,6
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0

4,5
4

3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0

Controle

Etanol

Ch

Controle

Ch + Etanol

Etanol

27

unidades/mg protena

Ch

Ch + Etanol

CAT

TBA-RS

26
25

**

24
23
22
21
20

Controle

Etanol

Ch

Ch + Etanol

GSH-Px

Grfico 9 - Efeito da administrao crnica de etanol, ch mate e ch mate associado ao

etanol sobre as substncias reativas ao cido tiobarbitrico (A) e sobre a atividade da catalase
(B) e da glutationa peroxidase (C), em hipocampo de ratos. Os dados correspondem a mdia
DP para 5 experimentos independentes (animais) realizados em duplicata. *P<0,05;

28

**P<0,01; ***P<0,001 comparado ao grupo controle (Teste Mltiplo de Duncan). TBA-RS

substncias reativas ao cido tiobarbitrico, CAT- catalase, GSH-Px glutationa peroxidase.
Finalmente, o Grfico 10 A, B, C e D mostra que o pr-tratamento com o ch mate
preveniu o aumento de TBA-RS [F(3,16)=9,043; p<0.001] em plasma de ratos, da atividade
da SOD [F(3,16)=9,032; p<0.001] em eritrcitos, bem como a reduo da atividade das
enzimas CAT [F(3,16)=10,261; p<0.001] e GSH-Px [F(3,16)=28,783; p<0.01] provocados
pela administrao crnica de etanol em eritrcitos de ratos, respectivamente.
B

unidades/mg protena

nmol TBA-RS/min mg protena

***

4,5

A
2,5

***
2
1,5
1
0,5

3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0

Controle

Etanol

Ch

Controle

Ch + Etanol

Etanol

Ch

4,5

unidades/mg protena

unidades/mg protena

26

5
4
3,5

***

Ch + Etanol

SOD

TBA-RS

2,5
2
1,5
1
0,5
0

25
24
23

**

22
21
20
19

Controle

Etanol

Ch
CAT

Ch + Etanol

Controle

Etanol

Ch

Ch + Etanol

GSH-Px

Grfico 10 - Efeito da administrao crnica de etanol, ch mate e ch mate associado ao

etanol sobre as substncias reativas ao cido tiobarbitrico (A), sobre a atividade da
superxido dismutase (B), sobre a atividade da catalase (C), e da glutationa peroxidase (D)
em sangue de ratos. Os dados correspondem a mdia DP para 5 experimentos independentes
(animais) realizados em duplicata. **P<0,01; ***P<0,001 comparado ao grupo controle
(Teste Mltiplo de Duncan). TBA-RS substncias reativas ao cido tiobarbitrico, SOD
superxido dismutase, CAT- catalase, GSH-Px glutationa peroxidase.
No houve diferenas significativas em relao glicemia dos animais avaliadas antes
e aps o tratamento crnico com ch mate (resultados no apresentados).

29

DISCUSSO

Doenas crnicas no transmissveis (DCNT), como doenas cardiovasculares (DCV),

diabetes e cncer, podem ser prevenidas ou postergadas por certo perodo, atravs de
mudanas na alimentao, como reduo da ingesto de gorduras saturadas e aumento do
consumo de frutas, gros e vegetais. A partir de uma dieta saudvel pode-se obter vrios
compostos, os quais podem agir diminuindo o dano oxidativo in vivo. Uma vez que o sistema
antioxidante endgeno no 100% eficiente, sensato propor que antioxidantes dietticos so
importantes na reduo dos efeitos acumulativos do dano oxidativo ao longo da vida humana,
e que estes representam alguns dos efeitos benficos da ingesto de frutas, gros e vegetais
(HALLIWELL, 1996).
Considerando que a erva mate rica em vrios compostos bioativos como cafena,
cidos fenlicos e saponinas, os quais so absorvidos pelo organismo podendo agir como
antioxidantes e que o ch mate uma forma de consumo da erva mate, no presente trabalho,
verificou-se a atividade antioxidante do ch mate sobre o estresse oxidativo em ratos
intoxicados com etanol, simulando-se um estado patolgico. Para tanto, inicialmente
verificou-se o efeito da administrao aguda e crnica de etanol sobre os nveis de TBA-RS,
um importante parmetro de lipoperoxidao, em hipocampo e plasma de ratos bem como o
efeito da administrao aguda e crnica de etanol sobre a atividade das enzimas antioxidantes
CAT, GSH-Px e SOD em hipocampo e eritrcitos de ratos, a fim de verificar se a dose de
etanol utilizada seria capaz de induzir o estresse oxidativo desejado.
Os resultados encontrados mostraram que a administrao aguda e crnica de etanol
proporcionou um evento estressor, mediado pela produo exacerbada de radicais livres, o
que pde ser observado atravs dos elevados nveis do marcador de lipoperoxidao (TBARS) encontrados tanto em hipocampo quanto em plasma de ratos. Com relao atividade das
enzimas antioxidantes, observou-se que a administrao aguda de etanol reduziu
significativamente a atividade da CAT e da SOD em hipocampo de ratos e aumentou a
atividade da CAT em eritrcitos de ratos. A administrao crnica de etanol diminuiu
significativamente a atividade da CAT e aumentou a atividade GSH-Px em hipocampo de
ratos. J em eritrcitos de ratos, observou-se diminuio na atividade das enzimas CAT e
GSH-Px e aumento na atividade da SOD.
Embora no se tenha conhecimento do exato mecanismo responsvel pelo aumento na
atividade da CAT em eritrcitos de ratos causado pela administrao aguda de etanol, bem

30

como o mecanismo responsvel pelo aumento na atividade da GSH-Px em hipocampo e da

SOD em eritrcitos de ratos, causados pela administrao crnica de etanol, sugerimos como
hiptese uma hiper-estimulao na sntese das enzimas, causada pela transcrio gnica, como
um efeito compensatrio ocorrido em consequncia do aumento da gerao de radicais livres
provocado pelo etanol. Dados na literatura mostram que as enzimas antioxidantes podem
responder ao aumento do estresse oxidativo aumentando suas atividades, a fim de reduzir o
dano (TRAVACIO; LLESUY, 1996). Cabe salientar que as enzimas antioxidantes
pesquisadas parecem responder de forma diferente aos ROS conforme o tecido em que se
encontram.
O estresse oxidativo definido como um desequilbrio entre a formao de espcies
reativas e as defesas antioxidantes. Considerando os resultados, pode-se sugerir que a
administrao aguda e crnica de etanol induz o estresse oxidativo, uma vez que provocou
lipoperoxidao e alterou a atividade de enzimas antioxidantes, tanto em hipocampo quanto
em sangue de ratos, permitindo assim verificar a possvel atividade antioxidante do ch mate.
Para tanto, investigou-se a influncia da administrao aguda e crnica de ch mate sobre os
efeitos causados pela administrao aguda e crnica de etanol em hipocampo e sangue de
ratos. Os resultados mostraram que a administrao aguda e crnica de ch mate preveniu o
aumento de TBA-RS causado pela administrao aguda e crnica de etanol em hipocampo e
plasma de ratos.
Em relao atividade das enzimas antioxidantes, verificou-se que a administrao
aguda de ch mate preveniu a reduo da atividade das enzimas CAT e SOD em hipocampo
de ratos, causada pela administrao aguda de etanol, mas no foi capaz de prevenir o
aumento da atividade da CAT causado pela administrao aguda de etanol em eritrcitos de
ratos. A administrao crnica de ch mate foi capaz de prevenir a reduo da atividade da
enzima CAT em hipocampo e eritrcitos de ratos, o aumento da atividade da GSH-Px em
hipocampo, a reduo da atividade da GSH-Px em eritrcitos, bem como o aumento da SOD
em eritrcitos de ratos.
Os resultados encontrados corroboram com a reviso da literatura, comprovando as
propriedades antioxidantes do ch mate, uma vez que a administrao aguda e crnica do ch
foi capaz de prevenir a lipoperoxidao e as alteraes na atividade das enzimas antioxidantes
causadas pelo etanol em hipocampo e em sangue de ratos.
A literatura prope que o uso de ch mate reduz os nveis de glicose sangunea (PANG
et al., 2008), no entanto, no encontramos diferenas significativas nos nveis de glicose aps
a administrao crnica de ch mate.

31

Estudos similares envolvendo antioxidantes naturais encontrados em alimentos

tambm foram realizados. Nestes, Montilla et al. (2006) investigaram os efeitos antioxidantes
do vinho tinto sobre o estresse oxidativo induzido por uma dieta hipercolesterolmica, em
crebro, rins e eritrcitos de ratos. Os autores observaram que a ingesto espontnea de 1,43
ml/dia de vinho tinto por animal durante quatro semanas, evitou a reduo da atividade das
enzimas SOD, GSH-Px e CAT, ocasionadas pela administrao da dieta hipercolesterolmica.
J, Ala et al. (2003) ao avaliarem os efeitos in vivo de uma dieta rica em antioxidantes
provenientes da uva (trs semanas de suplementao diettica com extrato de sementes de
uva) em ratos submetidos ao estresse oxidativo agudo induzido pela administrao de grandes
doses de paracetamol, no observaram preveno da reduo da atividade heptica das
enzimas CAT, GSH-Px, SOD e glutationa redutase.
Os compostos fenlicos so metablitos secundrios de plantas e esto presentes em
todos os vegetais consumidos como alimentos. A capacidade dessas substncias em sequestrar
radicais livres e metais pr-oxidantes explica, em parte, a correlao entre a ingesto de
compostos fenlicos e a reduo do risco de DCV, entre outras. Outro mecanismo responsvel
pela relao da ingesto de compostos fenlicos e reduo de riscos de DCV refere-se
modulao gnica que interfere em diferentes processos intracelulares envolvidos na resposta
inflamatria e na defesa contra o estresse oxidativo (BASTOS; ROGERO; AREAS, 2009).
Neste contexto, tanto a infuso da erva verde (chimarro) quanto de ervas tostadas
(ch mate) constituem fontes potentes de polifenis como cidos fenlicos (cido clorognico
e cido cafeico). No possvel afirmar o exato mecanismo pelo qual a administrao aguda e
crnica de ch mate foi capaz de prevenir o estresse oxidativo induzido pelo etanol, mas
provvel que os compostos fenlicos presentes no ch, desempenhem um importante papel
neste processo.
As propriedades biolgicas dos cidos clorognicos dependem da absoro intestinal e
de como so metabolizados. Gugliucci (1996) relatou que os antioxidantes da erva mate so
absorvidos

eficientemente

pelo

trato

gastrointestinal,

agindo

como

antioxidantes

hidrossolveis e podendo proteger o LDL-c do ambiente aquoso do plasma, j que a ingesto

de extrato aquoso de erva mate inibe a peroxidao lipdica. Gugliucci et al. (2009) afirmam
que o grande potencial antioxidante da erva mate deve-se sua combinao de diferentes
classes de substncias que agem sinergicamente. Essas substncias so seguras na
concentrao comumente encontrada nas infuses e at mesmo em alimentos, sendo que o
nvel sistmico alcanado no desencadeia efeitos adversos.

32

H um crescente aumento nas evidncias de que o estresse oxidativo tem um papel

determinante no desenvolvimento de doenas neurodegenerativas relacionadas idade, como
doena de Alzheimer, doena de Parkinson e esclerose lateral amiotrpica, uma vez que o
crebro particularmente vulnervel ao dano oxidativo (ESPOSITO et al., 2002).
Aliado a este fato, as evidncias epidemiolgicas que indicam a ao dos antioxidantes
naturais na preveno e atenuao das desordens neurolgicas tem tido confirmao
experimental em vrios estudos laboratoriais, alguns destes envolvendo polifenis
encontrados em vinhos tintos, no ch verde, em extratos de Ginkgo biloba, amoras e crcuma,
sugerindo que fontes dietticas naturais de antioxidantes podem retardar o incio e a
progresso das demncias neurolgicas (BUTTERFIELD et al., 2002).
Porm, uma possvel limitao da estratgia neuroprotetora que inclui administrao
de antioxidantes deve-se ao fato de que uma vez iniciados os sintomas neurolgicos, o dano
neuronal j teve incio. Assim, os antioxidantes podem ao mximo resgatar os neurnios
sobreviventes, o que pode no ser suficiente para atenuar a sintomatologia. Diante disto, fazse importante dar incio interveno teraputica nutricional no estgio inicial das doenas
levando a afirmar que os hbitos alimentares podem influenciar a incidncia de desordens
neurodegenerativas (ESPOSITO et al., 2002).
Alm das desordens neurolgicas, o estresse oxidativo acompanha o desenvolvimento
de outras inmeras doenas inclusive a obesidade, que est associada ao maior risco de
desenvolvimento de patologias como diabetes, inflamao, aterosclerose e doena
coronariana. Esta relao deve-se a inmeros desequilbrios metablicos acompanhados por
estresse oxidativo. Dietas ricas em antioxidantes podem ser aplicadas na terapia nutricional
da obesidade aumentando os benefcios da perda de peso alm de proteger contra doena
coronariana. A obesidade e suas morbidades associadas, tais como doenas cardiovasculares,
tem sido relacionadas inflamao, que pode ser beneficiada com a perda de peso e controle
antioxidante, j a que deficincia diettica de compostos bioativos e antioxidantes elevam a
ativao do fator de transcrio NFkB (nuclear factor kappa B), responsvel pelo aumento da
expresso dos genes pr-inflamatrios (PASCHOAL; NAVES; FONSECA, 2008;
CRUJEIRAS et al., 2006).
Assim, a ingesto insuficiente de compostos bioativos provenientes de vegetais
constitui importante componente de risco das DCNT, contribuindo na mesma magnitude do
consumo excessivo de energia e de gorduras totais e saturadas na dieta. Isso indica que os
compostos bioativos, da mesma forma que os demais nutrientes, so essenciais para que se

33

atinja a carga completa (geneticamente determinada) de longevidade (BASTOS; ROGERO;

AREAS; 2009).
Os efeitos somados e sinrgicos dos compostos bioativos encontrados em frutas e
vegetais so responsveis pelo seu potencial antioxidante, atuando na manuteno da sade e
conferindo efeito protetor s DCNT. O benefcio de uma dieta rica em frutas, vegetais e gros
integrais atribudo complexa mistura de fitoqumicos presentes nestes alimentos. Isso
explica porque nenhum antioxidante isolado, at o momento, capaz de substituir a
combinao natural de compostos bioativos encontrados nos alimentos ou alcanar os
mesmos benefcios sade. Diante disso, estudos sugerem que antioxidantes so mais
eficientemente adquiridos atravs da alimentao equilibrada ao invs da suplementao
diettica, indicando que outros fatores, como a biodisponibilidade, atuam neste processo
(LIU, 2004).

34

CONCLUSO
Atravs dos resultados obtidos no presente estudo, concluiu-se que a administrao

aguda e crnica de etanol induz o estresse oxidativo em hipocampo e em sangue de ratos e

que a administrao aguda e crnica de ch mate foi capaz de prevenir o estresse, o que foi
demonstrado pela alterao dos nveis de TBA-RS e das atividades das enzimas antioxidantes.
Estes dados sugerem que o ch mate possui propriedade antioxidante, provavelmente devido a
sua composio rica em vrios compostos bioativos como cafena, cidos fenlicos e
saponinas, que so absorvidas pelo organismo e podem agir como antioxidantes ou varredores
de radicais livres.
Diante dos agravos sade causados pelo estresse oxidativo e do potencial
antioxidante do ch mate, decorrente da combinao de diferentes classes de substncias que
agem sinergicamente, sugere-se que a ingesto do mesmo possa trazer inmeros benefcios,
principalmente no que diz respeito preveno e tratamento de DCNT e doenas
neurodegenerativas. Embora seja difcil extrapolar os resultados encontrados para a condio
humana, em que doenas decorrem de situaes caracterizadas por estresse oxidativo, pode-se
sugerir que a ingesto de ch mate poder ser considerada uma terapia nutricional adicional
ao combate de radicais livres, e consequentemente s doenas decorrentes do acmulo destes.
Porm, outros estudos envolvendo seres humanos so necessrios para que se possa afirmar a
atividade do ch mate na incidncia das determinadas patologias.
Assim, denota-se a importncia da interveno nutricional voltada ao incentivo de um
maior consumo de vegetais fontes de antioxidantes pela populao considerando o efeito
sinrgico dos alimentos, promovendo-se hbitos alimentares saudveis, garantindo um estado
nutricional adequado e ainda uma melhor qualidade de vida.

35

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39

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40

APNDICE A

FORMULRIO DE COLETA DE DADOS

TRATAMENTO CRNICO 15 DIAS

Anlise em plasma e eritrcitos
Animais

TBA-RS

CAT

SOD

GSH-Px

nmol de
malondealdedo
por mg de protena

Unidade por
mg protena

Unidade por
mg protena

Unidade por
mg protena

Controle 1
Controle 2
Controle 3
Controle 4
Controle 5
Tratado 1
Tratado 2
Tratado 3
Tratado 4
Tratado 5
Tratado 6
Tratado 7
Tratado 8
Intoxicado 1
Intoxicado 2
Intoxicado 3
Intoxicado 4
Intoxicado 5
Etanol + ch 1
Etanol + ch 2
Etanol + ch 3
Etanol + ch 4
Etanol + ch 5
Etanol + ch 6
Etanol + ch 7
Etanol + ch 8
Anlise em crebro
Animais

Controle 1
Controle 2
Controle 3
Controle 4

TBA-RS

CAT

SOD

GSH-Px

nmol de
malondealdedo
por mg de
protena

Unidade por
mg protena

Unidade por
mg protena

Unidade por
mg protena

41

Controle 5
Tratado 1
Tratado 2
Tratado 3
Tratado 4
Tratado 5
Tratado 6
Tratado 7
Tratado 8
Intoxicado 1
Intoxicado 2
Intoxicado 3
Intoxicado 4
Intoxicado 5
Etanol + ch 1
Etanol + ch 2
Etanol + ch 3
Etanol + ch 4
Etanol + ch 5
Etanol + ch 6
Etanol + ch 7
Etanol + ch 8
Valor da Glicemia
Animais
Controle 1
Controle 2
Controle 3
Controle 4
Controle 5
Tratado 1
Tratado 2
Tratado 3
Tratado 4
Tratado 5
Tratado 6
Tratado 7
Tratado 8
Intoxicado 1
Intoxicado 2
Intoxicado 3
Intoxicado 4
Intoxicado 5
Etanol + ch 1
Etanol + ch 2
Etanol + ch 3
Etanol + ch 4
Etanol + ch 5
Etanol + ch 6
Etanol + ch 7
Etanol + ch 8

Glicemia 1 dia
mg/dl

Glicemia 15 dia
mg/dl

42

TRATAMENTO AGUDO
Anlise em plasma e eritrcitos
Animais

Controle 1
Controle 2
Controle 3
Controle 4
Controle 5
Controle 6
Controle 7
Controle 8
Controle 9
Controle 10
Tratado 1
Tratado 2
Tratado 3
Tratado 4
Tratado 5
Tratado 6
Tratado 7
Tratado 8
Tratado 9
Tratado 10
Intoxicado 1
Intoxicado 2
Intoxicado 3
Intoxicado 4
Intoxicado 5
Intoxicado 6
Intoxicado 7
Intoxicado 8
Intoxicado 9
Intoxicado 10
Etanol + ch 1
Etanol + ch 2
Etanol + ch 3
Etanol + ch 4
Etanol + ch 5
Etanol + ch 6
Etanol + ch 7
Etanol + ch 8
Etanol + ch 9
Etanol + ch 10

TBA-RS

CAT

SOD

GSH-Px

nmol de
malondealdedo
por mg de
protena

Unidade por
mg protena

Unidade por
mg protena

Unidade por
mg protena

43

Anlise em crebro
Animais

Controle 1
Controle 2
Controle 3
Controle 4
Controle 5
Controle 6
Controle 7
Controle 8
Controle 9
Controle 10
Tratado 1
Tratado 2
Tratado 3
Tratado 4
Tratado 5
Tratado 6
Tratado 7
Tratado 8
Tratado 9
Tratado 10
Intoxicado 1
Intoxicado 2
Intoxicado 3
Intoxicado 4
Intoxicado 5
Intoxicado 6
Intoxicado 7
Intoxicado 8
Intoxicado 9
Intoxicado 10
Etanol + ch 1
Etanol + ch 2
Etanol + ch 3
Etanol + ch 4
Etanol + ch 5
Etanol + ch 6
Etanol + ch 7
Etanol + ch 8
Etanol + ch 9
Etanol + ch 10

TBA-RS

CAT

SOD

GSH-Px

nmol de
malondealdedo
por mg de
protena

Unidade por
mg protena

Unidade por
mg protena

Unidade por
mg protena