GENTICA APLICADA

Licenciatura de Biologa
Curso 2010-2011

PROFESOR:
Mnica Bullejos Martn
Dpto. Biologa Experimental
rea de Gentica
Despacho: B3-358
Buzn: 123
Telfono: 953 212770
E-mail: bullejos@ujaen.es

Horario de Tutoras:
Lunes: 9:30-10:30/15:30-17:30
Mircoles: 8:30-9:30/15:30-17:30
Se recomienda confirmacin previa
por e-mail

GENTICA APLICADA

La asignatura consta de: 3 Crditos Tericos

3 Crditos Prcticos
Carcter: Troncal.
Curso: 2010-2011
Temporalidad: 2 Cuatrimestre.
Titulacin: Licenciatura en Biologa.

Descriptores de la asignatura (BOE n 282; 24 de Noviembre, 2000; pp.

40955):
Aplicaciones de la Gentica: Ingeniera Gentica. Metodologa del ADN recombinante.
Manipulacin gentica de microorganismos. Manipulacin gentica de clulas animales y
vegetales. Tcnicas moleculares de mejora gentica.

Objetivos generales:
Al final del curso el alumno debe de ser capaz de resolver problemas relacionados con el
contenido material del mismo utilizando los conocimientos adquiridos en la asignatura. Para ello
deber:
-

Conocer las principales tcnicas de manipulacin de cidos nucleicos, de manera que

sea capaz de aplicarlos a la manipulacin gentica de procariotas y eucariotas.

Obtener una perspectiva global de las aplicaciones que las tcnicas de manipulacin de
cidos nucleicos tienen hoy da.

Saber utilizar el mtodo cientfico, aprendiendo a sugerir hiptesis y explicaciones a

hechos observados, as como a evaluar, rechazar o aceptar hiptesis de forma objetiva
basndose en evidencias experimentales.

Programa de contenidos:
TEORA
BLOQUE I: Manipulacin de cidos nucleicos in vitro. Tcnicas bsicas.
1.

Introduccin a la Ingeniera gentica. Perspectiva histrica de las tecnologas de anlisis y

manipulacin de cidos nucleicos.

2.

Purificacin y anlisis de cidos nucleicos in vitro. Purificacin de ADN y ARN.

Separacin y anlisis de cidos nucleicos mediante electroforesis en geles.

3.

Manipulacin enzimtica de cidos nucleicos in vitro. Corte y ligamiento del ADN.

Modificacin in vitro. Sntesis y degradacin.

4.

Amplificacin de cidos nucleicos in vitro. Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR):

Taq polimerasa, cebadores y amplificacin. PCR de ARN (RT-PCR). Aplicaciones de la PCR.

5.

Identificacin de secuencias especficas. Transferencia a soporte slido. Sondas.

Hibridacin. Deteccin.

6.

Secuenciacin. Secuenciacin de genomas completos.

7.

Diagnostico genetico y genetica forense. Diagnstico de enfermedades. Gentica

forense: evidencias biolgicas, pruebas de paternidad.

BLOQUE II: Manipulacin gentica en procariotas (E. coli)

8.

Introduccin a la clonacin. Qu es la clonacin. Por qu se hace. Anlisis bsico del

proceso de clonacin: inserto, vector, ADN recombinante, clula hospedadora, seleccin de
recombinantes. Introduccin de informacin gentica en bacterias.

9.

Vectores de clonacin en procariotas. Vectores de origen plasmdico. Vectores de origen

viral (derivados del fago lambda). Csmidos. Vectores monocatenarios.

10. Deteccin e identificacin de un clon: seleccin de recombinantes. Mtodos basados

en la secuencia de nucletidos. Mtodos basados en el producto de expresin del gen
clonado.
11. Estrategias de clonacin en E. coli. Genotecas. Clonacin de productos de PCR.
Genotecas genmicas, genotecas de ADNc y genotecas sustractivas.
12. Mutagnesis in vitro. Mutagnesis aleatoria y mutagnesis dirigida.
BLOQUE III: manipulacin gentica en eucariotas
13. Manipulacin gentica en levaduras. Vectores empleados. Transformacin. Seleccin de
recombinantes. Expresin. Aplicaciones. [este tema se elimina del temario]
14. Manipulacin gentica en animales I. Marcadores seleccionables. Vectores. Transfeccin
de clulas somaticas y clulas germinales. Seleccin de recombinantes. Inactivacin
funcional de genes.
15. Manipulacin gentica en animales II. Modificacin gentica de organismos completos.

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Algunas aplicaciones.
PRCTICAS
A) Prcticas de laboratorio
Las prcticas de laboratorio estarn divididas en tres semanas intensivas (sesiones de 2 horas
diarias), y en ellas se llevarn a cabo algunas de las tcnicas de manipulacin gentica tratadas
en teora.
-

PRCTICA 1. Aislamiento de ADN genmico de alto peso molecular. En ella se realizar la

extraccin de ADN, se medir su concentracin y su pureza, se digerir con endonucleasas
de restriccin, y se proceder a separar los fragmentos obtenidos en funcin de su peso
molecular mediante electroforesis en gel de agarosa. Finalmente, se llevar a cabo la
extraccin de ADN a partir de geles de agarosa.

PRCTICA 2. Southern-blot. Para la realizacin de esta prctica ser necesario marcar y

cuantificar una sonda, digerir el ADN y realizar una electroforesis de la digestin en un gel de
agarosa. Tras la transferencia a una membrana de nylon, se realizar la hibridacin con la
sonda marcada y el revelado inmunolgico.

PRCTICA 3. Clonacin en E. coli. Esta prctica incluye: corte y ligamiento de fragmentos

especficos, obtencin de bacterias competentes, transformacin de stas ADN
recombinante (las construcciones previamente preparadas), seleccin de bacterias
recombinantes, extraccin de ADN plasmdico, digestin y electroforesis del mismo y
comprobacin de la presencia del inserto.

B) Problemas y actividades
Existe una relacin de problemas para que el alumno trabaje algunos de los puntos explicados
en clase. Las dudas que hayan podido surgir en la resolucin de estos problemas se resolvern
en clases destinadas a tal fin, en fechas que sern acordadas a lo largo del curso.

Actividades en que se organiza

CLASES DE TEORA
CLASES DE PRCTICAS
A) Prcticas de laboratorio
B) Problemas

Sistema y criterios de evaluacin

Se evaluar tanto la adquisicin de los conocimientos (teora y prcticas), como la capacidad
de aplicacin de stos a situaciones concretas. En las pruebas escritas se valorarn
negativamente las faltas gramaticales y de ortografa. El criterio general empleado en la
evaluacin del examen y las actividades propuestas ser: 80% por conocimientos adquiridos y
capacidad de aplicacin de los mismos y 20% por claridad en la expresin, donde se tendrn en
cuenta los errores gramaticales y las faltas de ortografa
Se realizar un nico examen final de la asignatura donde se evaluarn teora, prcticas y
problemas. La puntuacin obtenida ser sobre 10 puntos y no se aprobar el examen con una

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nota inferior a 5. Tampoco se aprobar el examen si las palabras DELECIN, COHESIVO,
HEBRA y ABSORBANCIA no aparecen bien escritas.
Los exmenes consistirn fundamentalmente en la resolucin de problemas o de supuestos
prcticos en los que debern aplicarse los conocimientos adquiridos en la asignatura. La nota
mxima de cada pregunta se indicar en el examen.

BIBLIOGRAFA
Bibliografa bsica
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Hacer lo mismo sobre Acceso al catlogo de la biblioteca para entrar en la web de B-UJA.
INGENIERIA GENETICA. Volumen I. Preparacion, analisis, manipulacion y clonaje de DNA.
Autor(es):
Edicin:
ISBN:
Observaciones:
Nivel de relevancia:
Recomendado por:

J. Perera, A. Tormo y J.L. Garcia

Ed. Sntesis (2002)
ISBN: 84-7738-964-0

Acceso al catlogo de la biblioteca

INGENIERIA GENETICA. Volumen II. Expresion de DNA en sistemas heterlogos.
Autor(es):
Edicin:
ISBN:
Observaciones:
Nivel de relevancia:
Recomendado por:

J. Perera, A. Tormo y J.L. Garcia

Ed. Sntesis (2002)
ISBN: 84-7738-965-9

Acceso al catlogo de la biblioteca

GENE CLONING AND DNA ANALYSIS, AN INTRODUCTION.
Autor(es):
Edicin:
ISBN:
Observaciones:
Nivel de relevancia:
Recomendado por:

T.A Brown
5 Ed. Blackwell Science (2006)
ISBN: 978-1-4051-1121-8

Acceso al catlogo de la biblioteca

PRINCIPLES OF GENE MANIPULATION AND GENOMICS.
Autor(es):
Edicin:
ISBN:
Observaciones:
Nivel de relevancia:
Recomendado por:

S.B. Primrose and R.M. Twyman

7 Ed. Blackwell Science (2006)
ISBN: 1-4051-3544-1
http://www.blackwell-science.com/primrose

Acceso al catlogo de la biblioteca

RECOMBINANT DNA: GENES AND GENOMES A SHORT COURSE.
Autor(es):
Edicin:
ISBN:
Observaciones:
Nivel de relevancia:
Recomendado por:

J.D. Watson, A.A. Caudy, R.M. Myers, J.A. Witkowski

3 Ed. Cold Spring Harbour Press and Freeman (2006)
ISBN: 0-7167-2866-4

Acceso al catlogo de la biblioteca

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ANALYSIS OF GENES AND GENOMES.
Autor(es):
Edicin:
ISBN:
Observaciones:
Nivel de relevancia:
Recomendado por:

Richard J Reece
Wiley (2004)
ISBN: 0-470-84380-2

Acceso al catlogo de la biblioteca

UNDERSTANDING DNA AND GENE CLONING. A GUIDE FOR THE CURIOUS.
Autor(es):
Edicin:
ISBN:
Observaciones:
Nivel de relevancia:
Recomendado por:

Karl Drlica
Wiley (2004)
ISBN: 0471-43416-7

Acceso al catlogo de la biblioteca

FROM GENES TO GENOMES. CONCEPTS AND APPLICATIONS OF DNA TECHNOLOGY.
Autor(es):
Edicin:
ISBN:
Observaciones:
Nivel de relevancia:
Recomendado por:

J.W. Dale y M. von Schantz

2 Ed. Wiley (2007)
ISBN: 978-0-470-01733-3

Acceso al catlogo de la biblioteca

GENETICS: FROM GENES TO GENOMES.
Autor(es):
Edicin:
ISBN:
Observaciones:
Nivel de relevancia:
Recomendado por:

L. Hartwell, L. Hood, M. L. Goldberg, A. E. Reynolds, L. M. Silver, R. Veres

2 Ed. McGraw-Hill (2008)
ISBN: 0072919302

Acceso al catlogo de la biblioteca

UNA TUMBA PARA LOS ROMANOV Y OTRAS HISTORIAS CON ADN.
Autor(es):
Edicin:
ISBN:
Observaciones:
Nivel de relevancia:
Recomendado por:

R.A. ALZOGARAY
Buenos Aires, Siglo Veintiuno Editores Argentina (2004)
ISBN: 978-987-1105-68-7

Acceso al catlogo de la biblioteca

Bibliografa complementaria
-

The Cloning Sourcebook. Ed. A.J. Klotzko. Oxford University Press (2003). ISBN: 0-19512883-4

Molecular Biotechnology: principles and applications of recombinant DNA. B.R. Glick y J.J.
Pasternak. 3 Edicin. ASM Press (2003).

Cloning, Gene Expression and Protein Purification Experimental Procedures and Process
Rationale. C. Hardin, J. Pinczes, A. Riell, D. Presutti, W. Miller y D. Robertson. Oxford
University Press (2001). ISBN: 0-19-513294-7

Ingeniera Gentica y transferencia gentica. Marta Izquierdo Rojo. Pirmide (2001).

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-

EL ADN y la indentificacin en la investigacin criminal y en la paternidad biolgica. Jose

Antonio Lorente y Miguel Lorente. Comares, Granada (1995)

Molecular analysis and genome discovery. Eds R. Rapley and S. Harbron. Wiley (2004).
ISBN: 0-471-49919-6

Un detective llamado ADN: tras las huellas de criminales, desaparecidos y personajes

histricos. JA Lorente. Ed Temas de hoy. ISBN: 84-8460-386-5.

Genes, girls and Gamov. After the double helix. J. Watson. Vintage, 2003. ISBN:
0375727159.

DNA. The secret of life. J. Watson and A. Berry. Knopf (2003). ISBN: 0375415467.

Lateral DNA transfer: mechanisms and consequences. Frederic Bushman. Cold Spring
Harbor Laboratory Press, New York (2002). ISBN 0-87969-621-4.

Algunos artculos de inters

Adems de los artculos en pdf que se incluyen en la carpeta de lecturas adicionales de cada
tema (plataforma Ilias), a continuacin se incluyen otros artculos que pueden ser de inters por
su relacin con el temario de la asignatura.
IC: Investigacin y Ciencia; MD: Mundo Cientfico
Relacionados con la PCR:

Tcnicas nucleotdicas: nuevas alternativas a la PCR. IC 1992 p36.

Nucleic Acid Sequence-based Amplification. J. Compton. Nature, vol 350, 7 Marzo 1991. Pg:
91-92.
Relacionados con la modificacin gentica y la clonacin de individuos:
-

Sustitucin dirigida de genes. M Capecchi. IC mayo 1994 p22.

Ratones "knockout" estn de moda? F Rosier. MC 1996 p740.
Ratones casi a medida. A Miller. MC octubre 1998 p36.
Ratones expertos. JZ Tsier. IC junio 2000 p44.
Qu tal Dolly? Dosier sobre clonacin. MC junio 1996 p534.
Clonacin con fines mdicos. I Wilmut. IC febrero 1999 p24.
Organismos transgnicos. Dosier. MC marzo 2000. p22
Informe sobre organismos transgnicos. IC junio 2001.

Relacionadas con aplicaciones en medicina:

La clonacin de seres humanos a debate. I Bravo MC abril 1998 p35.
Hay que tener miedo a la ingeniera gentica? F Beton y JJ Perrier. MC 1995 p13.
Produccin de frmacos a travs de animales transgnicos. WH Velander et al. IC marzo 1997 p46.
Las nuevas medicinas genticas. JS Cohen y ME Hogan. IC febrero 1995 p38.
Terapia gnica. IM Verma. IC enero 1991 p24.
Terapia gnica. W French Anderson. IC noviembre 1995 p60.
Avances en terapia gnica. Informe especial. Varios autores. IC agosto 1997 p43.
Dossier Terapia Gnica. MC febrero 1999 p38.
La terapia gnica contra el infarto. S Arditi MC junio 1995 p578
Es posible eliminar la Corea de Huntington? G Lucotte y J-C Turpin. MC 1997 p31.
Bsqueda de genes para el diseo de nuevas medicinas. WA Heseltine. IC mayo 1997 p16.
Biotecnologa de frmacos. G Stiegler et al. IC noviembre 1997 p52.

La huida de los genes. TR Mikkelsen et al. MC abril 1997 p323.

Una revolucin? Las vacunas por DNA. J Maurice. MC julio 1995 p674.
Vectores vricos antitumorales. IC enero 2004 n328.
El negocio actual del genoma humano. IC septiembre n288.
Vacunas genticas. DB Weiner y RC Kennedy. IC septiembre 1999 p14.

Relacionados con aplicaciones en agricultura y ganadera:

Biodegradacin e ingeniera gentica. JL Ramos y F Rojo. IC mayo 1990 p72.
Cultivos transgnicos. CS Grasser y RT Fraley. IC agosto 1992 p64.
Plantas transgnicas. Nieto-Jacobo et al. IC enero 1999 p70.
Creacin de un arroz resistente a enfermedades. PC Ronald. IC enero 1998 p68.
Plantas resistentes a insectos. JJ Estruch. IC febrero 1998 p46.
Ingeniera gentica contra las plagas de insectos. O'Brochta y PW Atkinson. IC febrero 1999 p64.
Plantas transgnicas y antibiticas. P Courvalin. MC julio 1998 p20.
Cepas mejoradas de Rhizobium. E Martnez Romero et al. IC octubre 1998 p14.
Otros:

Del mapa gentico a la secuenciacin. J Weissenbach. MC 1998 p83.

Ms all del genoma humano. IC septiembre n288.
La resistencia contra los antibiticos. SB Levy. IC mayo 1998 p14.
Antibiticos. La resistencia de las bacterias. Dosier. MC enero 1999.
Los biochips a la conquista del mercado. M Gozlan. MC junio 1999 p74.
Interferencia de ARN. IC octubre 2003 n325.