FACULTAD/ESCUELA DE CIENCIAS

EXPERIMENTALES
Departamento de Biologa Experimental
Licenciado en Biologa (plan 1993, adaptado en 2000)

PROGRAMA DE LA ASIGNATURA:
CARCTER :

TRONCAL

CURSO ACADMICO:

CRDITOS TERICOS:

2010/11

REA DE CONOCIMIENTO:

GENTICA APLICADA

CICLO:

CURSO:

CRDITOS PRCTICOS:

CUATRIMESTRE:

GENTICA
DESCRIPTORES SEGN B.O.E.

Aplicaciones de la Gentica: Ingeniera Gentica. Metodologa del ADN recombinante.

Manipulacin gentica de microorganismos. Manipulacin gentica de clulas animales y
vegetales. Tcnicas moleculares de mejora gentica.
OBJETIVOS DE LA ASIGNATURA

Al final del curso el alumno debe de ser capaz de resolver problemas relacionados con el
contenido material del mismo utilizando los conocimientos adquiridos. Para ello deber:
-

Conocer las principales tcnicas de manipulacin de cidos nucleicos, de manera que

sea capaz de aplicarlos a la manipulacin gentica de procariotas y eucariotas.

Obtener una perspectiva global de las aplicaciones que las tcnicas de manipulacin de
cidos nucleicos tienen hoy da.

Saber utilizar el mtodo cientfico, aprendiendo a sugerir hiptesis y explicaciones a

hechos observados, as como a evaluar, rechazar o aceptar hiptesis de forma objetiva
basndose en evidencias experimentales.

Utilizar correctamente el vocabulario propio de la asignatura.

CONTENIDOS

TEORA
PARTE I: Introduccin a la ingeniera gentica. Tcnicas bsicas.
1.

Introduccin a la Ingeniera gentica. Perspectiva histrica de las tecnologas de anlisis

y manipulacin de cidos nucleicos.

2.

Purificacin y anlisis de cidos nucleicos in vitro. Purificacin de ADN y ARN.

Separacin y anlisis de cidos nucleicos mediante electroforesis en geles.
1

PARTE II: Manipulacin de cidos nucleicos in vitro

3.

Manipulacin enzimtica de cidos nucleicos in vitro. Sistemas de modificacin

restriccin del ADN. Enzimas de modificacin/restriccin: Tipo I, II y III. Isoesquizmeros.
Enzimas modificadoras. Extremos romos, cohesivos y compatibles. Ligasas. Enzimas
modificadoras Degradacin y sntesis de cidos nucleicos in vitro.

4.

Amplificacin de cidos nucleicos in vitro. Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR):

Taq polimerasa, cebado y amplificacin. PCR de ARN (RT-PCR). Algunas aplicaciones de la
PCR.

5.

Secuenciacin. Mtodos de secuenciacin. Proyectos genoma.

6.

Identificacin de secuencias especficas. Transferencia de cidos nucleicos a un soporte

slido. Sondas. Hibridacin. Deteccin.

7.

Diagnstico gentico y gentica forense. Diagnstico de enfermedades. Identificacin de

individuos. Gentica forense: evidencias biolgicas y pruebas de paternidad.

8.

Introduccin a la clonacin. Qu es la clonacin. Por qu se hace. Anlisis bsico del

proceso de clonacin: inserto, vector, ADN recombinante, clula hospedadora, seleccin de
recombinantes.

PARTE III: Manipulacin gentica en procariotas (E. coli)

9.

Vectores de clonacin en procariotas. Vectores de origen plasmdico. Vectores de origen

viral (derivados del fago lambda). Csmidos. Vectores derivados de fagos monocatenarios.

10. Deteccin e identificacin de un clon: seleccin de recombinantes. Mtodos basados

en la secuencia de nucletidos. Mtodos basados en el producto de expresin del gen
clonado.
11. Estrategias de clonacin en E. coli. Genotecas. Esquema bsico de clonacin en E. coli.
Genotecas genmicas, genotecas de ADNc y genotecas sustractivas.
12. Mutagnesis in vitro. Mutagnesis aleatoria: por insercin, delecin y sustitucin.
Mutagnesis dirigida.
PARTE IV: manipulacin gentica en eucariotas
13. Manipulacin gentica en levaduras. Vectores empleados. Transformacin. Seleccin de
recombinantes. Expresin. Aplicaciones.
14. Manipulacin gentica en animales I. Marcadores seleccionables. Vectores. Transfeccin
de clulas somaticas y clulas germinales. Seleccin de recombinantes. Inactivacin
funcional de genes.
15. Manipulacin gentica en animales II. Modificacin gentica de organismos completos.
Algunas aplicaciones.
PRCTICAS
A) Prcticas de laboratorio
Las prcticas de laboratorio estarn divididas en tres semanas intensivas (sesiones de 2 horas
diarias), y en ellas se llevarn a cabo algunas de las tcnicas de manipulacin gentica tratadas
en teora.
2

PRCTICA 1. Aislamiento de ADN genmico de alto peso molecular. En ella se realizar la

extraccin del mismo, se medir su concentracin y su pureza, se digerir con
endonucleasas de restriccin, y se proceder a separar los fragmentos obtenidos en funcin
de su peso molecular mediante electroforesis en gel de agarosa. Finalmente, se llevar a
cabo la extraccin de ADN a partir de geles de agarosa.

PRCTICA 2. Southern-blot. Para ello ser necesario marcar y cuantificar la sonda, digerir
el ADN que ser empleado y realizar una electroforesis de la digestin en un gel de agarosa.
Tras la transferencia a una membrana de nylon, se realizar la hibridacin con la sonda y el
revelado inmunolgico.

PRCTICA 3. Clonacin de un fragmento de ADN en E. coli. Esta prctica incluye: corte y

ligamiento de fragmentos especficos, obtencin de bacterias competentes, transformacin
de stas con las construcciones previamente preparadas, seleccin de bacterias
recombinantes, extraccin de ADN plasmdico, digestin y electroforesis del mismo y
comprobacin de la presencia de un inserto.

B) Problemas
A lo largo del curso se propondrn problemas y cuestiones diversas que se irn resolviendo a
medida que se vayan dando los conceptos tericos correspondientes. Adems, existe una
relacin de problemas para que el alumno trabaje algunos de los puntos explicados en clase.
Las dudas que hayan podido surgir en la resolucin de estos problemas se resolvern en clases
destinadas a tal fin, en fechas que sern acordadas a lo largo del curso.
ACTIVIDADES EN QUE SE ORGANIZA

CLASES DE TEORA
CLASES DE PRCTICAS
A) Prcticas de laboratorio
B) Problemas
TUTORAS
BIBLIOGRAFA BSICA

Ingenieria genetica. J. Perera, A. Tormo Garrido y J.L. Garcia. Ed. Sntesis (2002).
Vol.I. preparacion, analisis, manipulacion y clonaje de DNA.
Vol.II. Expresion de DNA en sistemas heterlogos.

Gene cloning and DNA analysis, an introduction. T.A Brown. 5 Ed. Blackwell Science (2006).
ISBN: 978-1-4051-1121-8.

Principles of gene manipulation and genomics. S.B. Primrose y R.M. Twyman. 7 Ed.
Blackwell Science (2006). ISBN 1405135441 http://www.blackwell-science.com/primrose

Recombinant DNA: genes and genomes A short course. J.D. Watson, A.A. Caudy, R.M.
Myers, J.A. Witkowski. 3 Ed. Cold Spring Harbour Press and Freeman (2006). ISBN: 07167-2866-4.

Analysis of genes and genomes. Richard J Reece. Wiley (2004). ISBN: 0-470-84380-2.

Understanding DNA and gene cloning. A guide for the curious. Karl Drlica. Wiley (2004).
ISBN: 0471-43416-7.

From genes to genomes. Concepts and applications of DNA technology. J.W. Dale y M. von
Schantz. Wiley (2002). ISBN: 978-0-470-01733-3.

Genetics: from genes to genomes. L. Hartwell, L. Hood, M. L. Goldberg, A. E. Reynolds, L.

M. Silver, R. Veres. 2 Ed. McGraw-Hill (2008). ISBN: 0072919302.

Una tumba para los Romanov y otras historias con ADN. R.A. Alzogaray. Buenos Aires, Siglo
Veintiuno Editores Argentina (2004). ISBN: 978-987-1105-68-7.

BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA

The Cloning Sourcebook. Ed. A.J. Klotzko. Oxford University Press (2003). ISBN: 0-19512883-4

Molecular Biotechnology: principles and applications of recombinant DNA. B.R. Glick y J.J.
Pasternak. 3 Edicin. ASM Press (2003).

Cloning, Gene Expression and Protein Purification Experimental Procedures and Process
Rationale. C. Hardin, J. Pinczes, A. Riell, D. Presutti, W. Miller y D. Robertson. Oxford
University Press (2001). ISBN: 0-19-513294-7

Ingeniera Gentica y transferencia gentica. Marta Izquierdo Rojo. Pirmide (2001).

EL ADN y la indentificacin en la investigacin criminal y en la paternidad biolgica. Jose

Antonio Lorente y Miguel Lorente. Comares, Granada (1995).

Molecular analysis and genome discovery. Eds R. Rapley and S. Harbron. Wiley (2004).
ISBN: 0-471-49919-6

Un detective llamado ADN: tras las huellas de criminales, desaparecidos y personajes

histricos. JA Lorente. Ed Temas de hoy. ISBN: 8484603865.

Genes, girls and Gamov. After the double helix. J. Watson. Vintage, 2003. ISBN:
0375727159.

DNA. The secret of life. J. Watson and A. Berry. Knopf (2003). ISBN: 0375415467.

Lateral DNA transfer: mechanisms and consequences. Frederic Bushman. Cold Spring
Harbor Laboratory Press, New York (2002). ISBN 0-87969-621-4.

PROCEDIMIENTO DE EVALUACIN

Se realizar un nico examen final de la asignatura donde se evaluarn teora, prcticas y

problemas. La puntuacin mxima obtenida ser 10 y no se aprobar la asignatura con una nota
inferior a 5.

La evaluacin final de la asignatura se har teniendo en cuenta la evaluacin obtenida en las

actividades realizadas y la nota del examen final.
CRITERIOS DE EVALUACIN

Todas las actividades propuestas a lo largo del curso sern evaluadas. En la evaluacin se
tendrn en cuenta:
-

La adquisicin de los conocimientos proporcionados por las distintas actividades realizadas

a lo largo del curso (teora, prcticas y problemas)

La capacidad de aplicarlos a situaciones concretas

La correcta utilizacin de la terminologa y el vocabulario propio de la asignatura

La expresin escrita y la ortografa