Universidad De San Carlos De Guatemala

Facultad De Agronoma
Laboratorio De Bioqumica
Jornada: Matutina 11:00-1:00
Auxiliar De Laboratorio: Gladys Arvalo
Grupo: # 2
INFORME

DE PROTENAS

INTRODUCCIN
Empezaremos por tener en claro que la bioqumica es la qumica de la clula viva.
Se estar estudiando en clase y laboratorio a las biomolculas; que son
compuestos parte de la clula y son componentes estructurales de las sustancias
disueltas en el citoplasma. Ahora nos centraremos en una de las biomolculas
ms importantes en los organismos: Las protenas.
El termino protena proviene del vocablo griego proteicos, que significa primero o
de nivel primario. Las protenas son un grupo de biopolmeros construidos de
aminocidos; estos aminocidos son la unidad monmera de las protenas y estn
unidos por enlaces amido.
Primeramente, los aminocidos son molculas orgnicas que poseen por lo
menos un grupo carboxilo y un grupo amino, en clase se tomaran un grupo selecto
de los aminocidos:20 molculas diferentes, cada una con una estructura qumica
distinta. La combinacin de aminocidos tan diversos en las protenas da lugar a
un nivel de dificultad molecular y de diversidad estructural. La composicin y
secuencia de aminocidos caractersticos de cada protena es lo que le permite
plegarse en un arreglo tridimensional preciso para que lleve a cabo la funcin
bioqumica para la cual fue diseada. Las protenas, como un grupo de
biomolculas, desempean una gran variedad de funciones como: soporte
mecnico a las clulas y a los organismos, y esto lo pueden llevar a cabo por la
enorme posibilidad de combinaciones en la composicin y secuencia de
aminocidos.
En el laboratorio de bioqumica, se estudiaron a las protenas en relacin a lo
agronmico, realizando diferentes pruebas cuantitativas y cualitativas de esta
biomolcula a un rgano vegetal asignado donde para estas pruebas se
seleccion a la (Semilla).

La semilla de garbanzo, fue nuestra herramienta de trabajo en todas las prcticas

realizadas, esta fue previamente preparada, secndola, molindola y tamizndola
antes de realizarle los anlisis qumicos.
En el siguiente informe se describir y explicara las pruebas analticas realizadas a
la muestra de garbanzo, como: las extracciones salinas y acuosas efectuadas
para las pruebas de presencia de protenas con la tcnica de precipitacin de
protenas y biuret, seguidamente se realizaron en las hidrolisis (alcalina y acuosa)
mediante la utilizacin de varios reactivos la identificacin de los diferentes
aminocidos: aromticos, fenlicos, thioaminoacidos y el grupo mirasol,
finalizando con la realizacin de las pruebas de caracterizacin de aminocidos
con reactivos, cromatografa en capa fina donde como adsorbente se utiliz
silicagel y la espectrofotometra donde medimos la tramitansia y calculamos la
absorbancia.

OBJETIVOS
Objetivo General

Obtencin de la capacidad para la aplicacin de pruebas cualitativas y

cuantitativas realizadas en el laboratorio, identificando
protenas y
aminocidos a una muestra vegetal (semilla de garbanzo).

REDACTAR NUEVAMENTE OBJETIVOS Y UTILIZAR VERBOS EN LA

REDACCIN
Objetivos Especficos

Realizacin de extracciones de protenas; salina y acuosa a la muestra

vegetal, aplicando las pruebas de deteccin de protenas, como:
precipitacin proteica y Biuret.

Elaboracin de la hidrolisis acida y alcalina de protenas a la muestra

vegetal, determinando mediante pruebas de reactivos la presencia o
ausencia de diferentes aminocidos como: aromticos, fenlicos,
thioaminoacidos y presencia de histidina (grupo mirasol).

Empleo de tcnicas como cromatografa en capa fina y espectrofotometra

para realizar los anlisis cualitativos y cuantitativos de aminocidos en la
muestra vegetal.

RESULTADOS
1. Seleccin del material vegetal a trabajar en el
laboratorio

1. Se pesaron 456.1 gramos de semilla de Garbanzo

2. Despus de pesar la semilla, esta fue dividida en 2 sobres, pesando 212.67

gramos el sobre 1 y el sobre dos pesando 238.44 gramos.

3. Seguidamente el instructor de laboratorio, ingreso al horno los sobres con

las semillas.

NO INCLUIR METODOLOGA
2. Preparacin de muestras vegetales para anlisis qumico secado, molido y
tamizado de muestras vegetales:
Cuadro No.1
Semilla Garbanzo
Resultados
Cantidad de semilla utilizada para la
456.1 gramos
obtencin de harina
Peso semilla hmeda
456.1 gramos
Sobre 1
212.67 gramos
Sobre 2
238.44 gramos
Peso semilla seca
451.119
Porcentaje de humedad
1.09%
Molienda
445.25 gramos
% perdida en molienda
1.29%
Tamizado
133.40
% perdida en tamizado
70.04%
Fuente:Pruebas realizadas por el grupo en la practica 5 de laboratorio de
bioqumica

Porcentaje de humedad (semilla)

= 1.09% en semilla seca.

= 1.29%

= 70.04%

Total de harina obtenida: 133.40 gramos.

3. Extraccin y estudio cualitativo de protenas en muestras vegetales

Resultados de la Prueba de Precipitacin proteica
Cuadro No. 2

Muestra analizada
Metal utilizado
Dictamen
Extracto acuoso
Nitrato de mercurio
positivo
Extracto salino
Nitrato de mercurio
Positivo
Peptona
Nitrato de mercurio
Positivo
Albumina
Nitrato de mercurio
positivo
Casena
Nitrato de mercurio
Positivo
Gelatina
Nitrato de mercurio
positivo
Fuente:Pruebas realizadas por el grupo en la practica 5 de laboratorio de
bioqumica
Resultados de la Prueba de Biuret
Cuadro No. 3

Muestra analizada
Coloracin obtenida
Dictamen
Extracto acuoso
Violeta claro
positivo
Extracto salino
Violeta fuerte
positivo
Peptona
Violeta fuerte
positivo
Albumina
Violeta claro
positivo
Casena
Azul
positivo
gelatina
Violeta claro
positivo
Fuente:Pruebas realizadas por el grupo en la practica 5 de laboratorio de
bioqumica

4. Estudio de aminocidos de muestras vegetales

Cuadro No.4
Muestras a

Pruebas

analizar
Hidrolizado
acuoso bsico
Hidrolizado
acuoso cido

Ninhidrina Xantoproteica Million

Positivo

Positivo

Sulfuro

Bromo

Positivo

Negativa Negativa

Negativa

Positivo

Negativa Positivo

Negativa

Hidrolizado
salino bsico

Positivo

Positivo

Negativa Negativa

Negativa

Hidrolizado
salino acido

Positiva

Positiva

Negativa Positivo

Negativa

Fuente:Pruebas realizadas por el grupo en la practica 5 de laboratorio de

bioqumica

Cuadro No.5
Pruebas cualitativas de aminocidos aplicadas a soluciones patrones.
Solucin
Patrn
Ninhidrina
Lisina
Positiva
Triptfano
Positiva
Tirosina
Positiva
Leucina
Positiva
Histidina
Positiva
Cistena
Positiva
Fenilalanina
Positiva

Xantoproteica
-Positiva
Positiva
---Positiva

Pruebas
Million
Sulfuro
----Positiva
------Positiva
---

Bromo
----Positiva
---

Fuente:Pruebas realizadas por el grupo en la practica 5 de laboratorio de

bioqumica

5. Estudio de aminocidos,
espectrofotometra.

Espectrofotometra de Protenas.

cromatografa

de

aminocidos

Cuadro No.8

No
Tubo
Muestra
. Primario Primaria
1

Tubo
Concentraci
Muestra
ml
Secundari
Tramitancia Absorbancia n de Protena
Secundaria Muestra
o
(mg/ml)

9. 5 ml
NaSO4+
F
Albumina
4 ml
99
0.00436480
0.5
albumina.
9. 5 ml
NaSO4+
G
X
4 ml
97
0.01322826
0.5 Sol X.
9. 5 ml
NaSO4+
H
S. Salina
4 ml
94
0.02687214
0.5 S.
Salina
9. 5 ml
NaSO4+
I
S. Acuosa
4 ml
97.5
0.01099538
0.5 S.
Acuosa.
Fuente:Pruebas realizadas por el grupo en la practica 5 de laboratorio de
bioqumica

1.00

3.03

6.16

2.52

DISCUSIN DE RESULTADOS
1. Seleccin del material vegetal a trabajar en el laboratorio

Las semillas tienen cierto contenido de humedad, por lo cual al pesarlas cuando
no se le ha realizado ningn secado, en comparacin con las que ya se les ha
realizado el secado pesan menos ya que se ha suprimido la cantidad de humedad
que estas tenan.
Para esta tcnica del secado se utiliz el mtodo de secado al horno, que es una
tcnica de secado artificial, esta es mucho ms rpida, que una tcnica de secado
natural ya que no hay descomposicin de constituyentes por lo cual es una tcnica
muy recomendable pero mucho ms tardada para la eliminacin total del agua.

2. Preparacin de muestras vegetales para anlisis qumico secado, molido y

tamizado de muestras vegetales
Durante el proceso de molienda es de suma importancia contar con el proceso de
secado, puesto lo que se pretende con dicha tcnica es la obtencin de pequeas
fracciones del rgano ya homogenizado para la posterior evaluacin de los
compuestos qumicos con los que el rgano de la planta cuente. Es as como se
logr obtener 133.40 gramos de harina tras el proceso de molienda y tamizado,
como tambin un porcentaje de humedad del 1.09% en semilla seca el cual fue
eliminado mediante secado artificial, en donde dicho porcentaje fue la diferencia
de peso de la semilla sin haber sido sometida al proceso de secado, menos el
peso de la semilla seca, con el resultado siendo dividido nuevamente por el peso
de semilla seca.
Durante el secado artificial no se debe de exceder una temperatura mayor a los
60C (8) puesto de no ser as las biomolculas se desnaturalizan,
descomponindose de esta manera importantes compuestos de objeto de
evaluacin, para las consiguientes prcticas de protenas y aminocidos.

3. Extraccin y estudio cualitativo de protenas en muestras vegetales

Los metales pesados tienen el efecto de precipitar protenas de sus soluciones
creando enlaces cross-linking entre los grupos amino libre y los grupos carboxilo

libre. Los iones ms comunes utilizados para detectar la presencia de protenas.

Incluyen:

Reaccin del precipitado con,

(9)

(10)

Debido a su carcter anftero, las protenas reaccionan con los cidos y con las
bases. Los cidos proteicos y lcali proteicos son insolubles en agua y en solucin
de sales neutras y se disocian en los cidos y en las bases diluidas, pero
precipitan en medio neutro. Las protenas recuperadas resultan desnaturalizadas
por la accin de metales pesados.
El mtodo de precipitacin proteica por medio de metales pesados se basa en
que las sales de que poseen los metales pesado precipitan las protenas porque el
ion del metal pesado muy probablemente se combina con la forma aninica de la
protena, ya que la protena en el lado alcalino de su punto isoelctrico existe
como ion negativo y eso al combinarse con el ion del metal formara proteinatos, lo
cual se pudo observar en este experimento ya que todas las muestras analizadas
presentaron un precipitado de color Blanco unos con ms intensidad que otros
pero esto debido a la concentracin de protenas que vara de una sustancia a
otra.
DONDE ESTAN SUS DISCUSIONES PORQUE ESTO ES COPIAR Y PEGAR. SI
COLOCAN INFORMACIN COLOCAR FUENTE
REACCION DE BIURET (REACCION DE FEHLING) Es la formacin de
compuestos coloreados de violeta de las protenas en medio fuerte alcalino de las
sales de Cu la reaccin empleada mediante ROONH2 , R CS NH2 (9)

Ejemplo de reactivo biuret en albumina (10)

En esta reaccin de destruyen los enlaces amidos liberando aminocidos, cuando
este enlace de una protena o pptido entra en contacto con este reactivo forma
una coloracin violeta o azul lo cual nos hace saber que la prueba es positiva.
Como se pudo observar en todas las muestras analizadas dieron positivas ya que
todas presentaban una concentracin de protenas en su interior, la intensidad del
color puede variar debido a la concentracin de protenas en la sustancia
analizada pero la ms leve variacin de color indica la presencia de protenas.

4. Estudio de aminocidos de muestras vegetales

Durante las pruebas que se realizaron para identificar aminocidos se realizaron
hidrolizados de los extractos de garbanzo, la hidrlisis es una reaccin qumica
entre agua y otra sustancia, como sales, produciendo un desplazamiento del
equilibrio de disociacin del agua y como consecuencia se modifica el valor del pH
(11) , esta es la ruptura de enlaces peptidico, para producir aminocidos libres. En
el laboratorio se realizaron hidrlisis acida utilizando HCl e hidrlisis bsica
utilizando NaOH; para que se puedan obtener aminocidos libres y as poder
aplicarles a cada hidrolizado las pruebas para la determinacin de aminocidos.
Con los resultados obtenidos de los hidrolizados que se muestran en el cuadro
(hidrolizado acuoso acido, hidrolizado acuoso bsico, hidrolizado salino acido e
hidrolizado salino bsico) se observan resultados positivos de acuerdo con las
pruebas individuales que se le han aplicado a cada uno, solo con la excepcin de
la prueba de bromo, esta resulto negativa asimilando que no contiene histidina en
su estructura. Podemos definir que los hidrolizados contienen aminocidos en su
estructura segn el dictamen positivo; se encuentran alfa-aminocidos,
aminocidos aromticos y cistena. La prueba de milln segn lo investigado de

los aminocidos del garbanzo, contiene de 100 gr de garbanzo tiene 710 mg de

tirosina; con lo anterior podramos decir entonces que la prueba de milln sera
positiva para los hidrolizados, pero en las pruebas realizadas el resultado obtenido
fue negativo tanto para los hidrolizados cidos como para los hidrolizados bsicos.
para las pruebas realizadas con las soluciones patrn que se tena en el
laboratorio servan como un modelo a seguir para comprobar la presencia de los
aminocidos que contenan, para la Lisina; solo se le aplico la prueba de
Ninhidrina resultando un color violeta siendo as positiva ya que la prueba de
ninhidrina es positiva para todos los aminocidos. Al Triptofano, se le realizaron las
pruebas de ninhidrina y xantoproteica obteniendo una coloracin violeta y
anaranjada, en ambas siendo as positivas las dos pruebas, como es un
aminocido y el triptfano posee un ncleo aromtico da positiva denotando la
presencia de aminocidos aromticos. POSITIVOS PARA QUEN???
A la tirosina se le aplicaron la prueba de ninhidrina y xantoproteica siendo positivas
en ambas pruebas ya que presenta un anillo aromtico en el, tambin debi haber
resultado positivo con la prueba de milln ya que esta es especfica para la tirosina
denotando un color rojo.
La leucina se le aplico nicamente la prueba de ninhidrina denotando una
coloracin violeta siendo positiva la prueba ya que es un aminocido, a la Histidina
se le aplicaron la prueba de ninhidrina siendo positiva por ser aminocido y la
prueba de bromo; con esta se obtuvo positiva denotando una coloracin azul
oscuro y el grupo imidazol en su estructura.
La Cisteina se le aplico la prueba de ninhidrina y sulfuro siendo positivas ambas
pruebas, demostrando que la cistena es un thiaminoacido. Por ltimo, a la
Fenilalamina se le aplicaron las pruebas de ninhidrina y xantoproteica siendo
ambas positivas, demostrado ser un aminocido y que tiene un ncleo aromtico
en su estructura
PARA QUIENES FUERON POSITIVAS LAS PRUEBAS??? Discutir sus
resultados falta mucha discusin acerca de los procesos de hidrlisis alcalina
yacida, porque detectan algunos aminocidos en los hidrolizados cidos y en los
alcalinos no. Que aminocidos se ven afectados con la hidrolisis cida? Cules
con la hidrolisis alcalina? Etc

Espectrofotometra.
Las leyes de la absorcin de energa radiante hacen referencia a las relaciones
existentes entre la magnitud de la absorcin de energa radiante y la cantidad de
la sustancia absorbente. (13).
En base al fundamento anterior se dice que por medio de la espectrofotometra se
puede determinar la concentracin de protenas debido a la absorbancia y
transmitancia que estas tienen de la energa radiante incidente sobre ellas.
Obteniendo la transmitancia de cada sustancia se pudo calcular la absorbancia, y
as poder conocer la concentracin de protenas contenidas en ellas. Las
concentraciones obtenidas fueron 3.56 mg/ml en el extracto acuoso y 4.62 mg/ml
en el extracto salino, por lo tanto, si hay presencia de protenas en los extractos de
la muestra vegetal, se afirma el resultado obtenido en las pruebas de metales
pesados y en el resultado obtenido en la prueba de Biuret por segunda vez. Se
puede decir que las protenas se diluyen ms en el extracto acuoso que en el
extracto salino, ya que las altas concentraciones de sales contenidas en la
solucin tienden a precipitar a las protenas, tal fenmeno se conoce como
salting-out y por esto se observa una menor concentracin en el extracto
acuoso que en el extracto salino.

CONCLUSIONES

Los dos tipos de extraccin acuosa y salina en la muestra vegetal de

garbanzo, se realizaron para garantizar el mximo porcentaje de protenas
solubilizadas, esto quiere decir, las protenas que no se extraen con el
medio acuoso son extradas con el medio salino y viceversa. Del tipo de
extraccin en esta muestra en definitiva se espera que las protenas sean
globulares pues a diferencia de las fibrosas stas solubilizan en soluciones
acuosas y salina. Antes de continuar con las siguientes pruebas, debemos
identificar la presencia de proteinas; la prueba realizada a nuestra muestra
mostro positivo indicandonos la presencia de esta biomolecula.
Con los aminocidos libres obtenidos por los hidrolizados de proteinas,
aplicamoslas pruebas de caracterizacin cualitativa de aminocidos, Al
saber primeramente que tenemos proteinas con las pruebas de
precipitacion proteica o biuret, se realizara la prueba de aminoacidos,
sabiendo que hay aminoacidos aromaticos, fenolicos, thioaminoacidos, el
grupo amidazol, entre otros. Las pruebas positivas a nuestra muestra
fueron las de: Xantoproteica (aromaticos), Sulfuro (thioaminoacidos) y
Bromo
(Histidina).

Las dos tcnicas utilizadas en el laboratorio (cromatografa y

espectrofotometra) fueron muy tiles en la identificacin de las clases de
aminocidos. La parte de la cromatografa es un anlisis cualitativo, para
esta tecnica fue utilizada la cromatrografia en capa fina, usando como
adsorbente el silicagel, luego se calcularon las rf. la espectrofotometra es
un anlisis cuantitativo de los aminocidos aplicada a la muestra vegetal
designada. En el espectrofotometro se midieron las tramitancias y luego se
calcularon con despejes las absorbacias de las muestras.

BIBLIOGRAFIA
1. S.a. s.f. (en linea)http://www.aula21.net/nutricion/proteinas.htm . Consultado
el 13/12/2015
2. s.a.
s.f.
(en
linea)
http://www.dmedicina.com/vidasana/alimentacion/diccionario-de-alimentacion/proteinas.html . Consultado el
13/12/2015.
3. Arturo cuadrado. S.f. universidad nacional de colombia. Bogota D.C.colombia
(en
linea)http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000024/lecciones/cap0
1/01_01_12.htm. Consultado el 13/12/2015.
4. S.a.
s.f.pruebas
cuantitativas
y
cualitativas.http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201103/201103/leccin_5
_pruebas_cualitativas__y_cuantitativas_para_determinar__aminocidos___y
_protenas_en_laboratorio.html. Consultado el 13/12/2015
5. Guillermo
mendez.
S.f.
(
en
linea)
http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manuales
%20PDF/EXPERIMENTO%202%20IDENT%20AA%2006-04.pdf.
Consultado el 13/12/2015
6. Alices villa nueva, H.P (2009) protenas y aminocidos, recinto de
aguanadilla: universidad interamericana de puerto rico.
7. Murray, R,K Bender, D,A Bothan K,M Kennelly, P,J Rodwell, (2000) VW
HARPER BIOQUIMICA ILUSTRADA Mc Graw Hill Lange
8. Pruebas cualitativas para aminocidos. Aula virtual. Consultada el 12 de
diciembre
de
2015.
Disponible
en:
http://angelabioqumica.blogspot.com/2011/09/objetivos-1.html
9. Universidad nacional de Qilmes. Extraccin y cuantificacin de protenas,
introduccin a la teora celular y molecular. Consultado el 12 de diciembre
de
2015.
Disponible
en:
https://ibcmunq.files.wordpress.com/2010/03/tp2.pdf
10. Anderson SC (1995): Metabolismo de aminocidos y afecciones
relacionadas. En Anderson SC, Cockayne (Iniciales nombre?) (eds):
Qumica Clnica, 1 Ed. Editorial Interamericana McGraw-Hill (Mxico D.F.,
Mxico), pp. 213 221. (en lnea) consultado 13 de diciembre de 2015.
Disponible
en:
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biolmol/pdfs/26aminoacidos.pdf
11. Snchez A (1998): Alteraciones de la digestin de protenas y de la
absorcin y metabolismo de los aminocidos. En Gonzlez de Buitrago JM,
Arilla E, Rodrguez-Segade M, Snchez A (eds): Bioqumica Clnica, 1 Ed.
Editorial McGraw-Hill Interamericana (Madrid, Espaa), pp. 181190. (en
lnea) consultado 13 de diciembre de 2015. Disponible en:

http://iesptolosa.net/ies/dptos/dpto_biologia_geologia/bto_1/practica_de__pr
oteinas.pdf
12. Skoog, D. A.; Holler, F. J. & Nieman, T. A. Principios de Anlisis Instrumenta
l. 5ta EdicinMcGrawHill/Interamericana de Espaa, S. A. Espaa, 2001, x
xv + 1028
13. Facultad de Agronoma, Laboratorio de bioqumica; PRCTICA No. 5
ESTUDIO DE AMINOCIDOS, CROMATOGRAFA DE AMINOCIDOS Y
ESPECTROFOTOMETRA; Guatemala, Guatemala; USAC, Facultad de
Agronoma; fecha desconocida; 19p.