Revista Colombiana de Medicina Legal y Ciencias Forenses / Volumen 3 / Nmero 1/

julio-diciembre 2015

Identificacin simultnea y determinacin cualitativa de cido cianhdrico y fosfina por

cromatografa de gases con detector de nitrgeno fsforo y automuestreador headspace
(hs-gc-npd) en fluidos biolgicos
Luz Adriana Monsalve-Salamanca*1, Mara Martha Ortiz-Rangel1 y Alexis Mateus-Fontecha1
1 Instituto

Nacional de Medicina Legal y Ciencias Forenses, Regional Nororiente. Bucaramanga,

Colombia

Recibido: 08 de agosto del 2015

Aprobado: 09 de octubre del 2015
*Autor de correspondencia: Luz Adriana Monsalve-Salamanca. Instituto Nacional de Medicina
Legal y Ciencias Forenses, Bucaramanga, Santander, Colombia. Calle 45 No. 1-51, Barrio
Campohermoso.

Telfono:

(57)

6978503,

(ext.

2735-2779)

Correo

electrnico:

lamonsalve@medicinalegal.gov.co
Cmo citar este artculo: Monsalve-Salamanca LA, Ortiz-Rangel MM, Mateus-Fontecha A.
Identificacin simultnea y determinacin cualitativa de cido cianhdrico y fosfina por
cromatografa de gases con detector de nitrgeno fsforo y automuestreador headspace (hsgc-npd) en fluidos biolgicos. 2015; 3 (1): xx-xx. doi:

Resumen
Introduccin: resaltamos el valor terminolgico de la armonizacin conceptual del mbito
mdico-legal, cuyo enfoque se aplic en el rea de Clnica Forense, a partir de los resultados
de la investigacin. Objetivo: Determinar un sistema conceptual integral de trminos tcnicocientficos en contextos especficos del campo Forense. Materiales y mtodos: Aplicacin
cualitativa en contexto de la TGT y la modelacin terminolgica, que permiti el rastre de
documentacin del INMLCF, sede Medelln, con Cratilo. Resultados: A partir de la delimitacin y
el anlisis para la precisin conceptual se obtuvieron un total de 136 conceptos bsicos, que
constituyen este sistema conceptual.

Conclusin: El lenguaje en todas las reas del

conocimiento es transversal y la precisin depende siempre de su contexto, lo cual facilita la

comunicacin, de manera fluida y fiable, entre las diferentes disciplinas existentes. Al evitar
opacidades en el lenguaje tcnico-cientfico de uso cotidiano para los que intervienen en el
sistema judicial, se optimiza la comunicacin entre expertos y de stos con los legos y con
profesionales de otras ramas del conocimiento.
Palabras clave: cianuro, cromatografa de gases fosfina, fluidos biolgicos.

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Los fosfuros de metales como el de aluminio (Al), zinc (Zn) o magnesio (Mg), son muy
utilizados para combatir plagas en los silos para el almacenamiento de granos. Se
presentan en forma de tabletas, envasadas en tubos metlicos. Estos productos se
comercializan bajo los siguientes nombres: Phostoxin, Gastoxin y Celphos. Se
caracterizan por presentar un color grisceo y olor caracterstico a ajo. Al contacto con
la humedad, generan un gas altamente txico conocido como fosfina. Se requiere entre
24 a 48 horas para que el fosfuro se descomponga y libere la mayor parte de fosfina;
este tiempo depende del metal as como tambin de la temperatura y de la humedad
relativa [1, 2].
La rapidez con la que aparecen los efectos txicos de la fosfina dependen de la va de
exposicin, siendo ms rpida la va inhalatoria. Por va oral, la dosis letal oscila entre
4.95 y 6.95 mg/kg, por va drmica la dosis vara entre 900 y 1520 mg/kg, dependiendo
del tiempo de exposicin (24 horas a 14 das); por va inhalatoria a concentraciones
mayores de 0.01 mg/m3 hay riesgo de intoxicacin, a 10 mg/m 3 puede causar la muerte
en 6 horas y a 300 mg/m3 en 1 hora [3,4].
La fosfina acta inhibiendo la accin de la citocromo C oxidasa mediante la generacin
de especies reactivas de oxgeno. Los rganos diana son: pulmn, corazn, cerebro,
tracto gastrointestinal, rin e hgado. Tras su ingesta, la fosfina es rpidamente
absorbida en el tracto gastrointestinal y una parte es transportada haca el hgado a
travs de la vena porta produciendo dao heptico [4-6].
Dentro de los sntomas caractersticos cuando se inhalan bajas concentraciones de
fosfina se encuentran dolor de cabeza, mareos, temblores, malestar gastrointestinal y
fatiga. Por otro lado, cuando se inhalan concentraciones cercanas a la dosis letal, se
presentan sntomas tales como nuseas, vmito, diarrea, sed, sensacin de presin en
el pecho, dolor de espalda, disnea, escalofros, estupor, desmayo y marcado edema
pulmonar [4, 7].
La fosfina se absorbe por va inhalatoria, oral y a travs de las mucosas. Cuando se
administra fosfuro de aluminio por va oral, al entrar en contacto con el agua y el cido
del estmago, se libera fosfina. Se distribuye ampliamente en el hgado, rin, corazn

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y cerebro. Se metaboliza en el hgado y se excreta mediante heces, va inhalatoria, y en

orina como fosfitos y fosfatos [8, 9].
Por otra parte, el cido cianhdrico es un lquido muy voltil (temperatura de ebullicin
26C), presenta una densidad reducida, posee una elevada tensin de vapor, es muy
soluble en agua y alcohol y se caracteriza por presentar un fuerte olor a almendras
amargas [10].
Los cianuros de mayor importancia toxicolgica son potsico y sdico, sales de color
blanco, solubles en agua, las reaccionan fcilmente con los cidos liberando cido
cianhdrico [10, 11].
Las principales vas de absorcin son: oral, inhalatoria y a travs de mucosas. Luego de
la absorcin por cualquiera de las vas anteriormente mencionadas, los signos y
sntomas de intoxicacin se manifiestan a los pocos minutos.
El cianuro acta formando complejos estables con iones metlicos, tiene gran afinidad
por los iones de hierro (Fe+3). A nivel celular, inactiva metalo-enzimas, siendo la ms
importante la citocromo oxidasa mitocondrial. La inhibicin de esta enzima produce
anoxia citotxica y paso de la glucolisis aerobia a anaerobia. El cianuro tambin inhibe
la transformacin del piruvato en el ciclo de Krebs, resultando en hiperproduccin de
lactato y acidosis metablica severa [12, 13]. Por otros mecanismos de accin, libera
aminas bigenas que contribuyen con falla cardaca, vasoconstriccin arteriolar o
coronaria que genera fallo de bomba [14].
Dada la alta toxicidad y nocividad de estas sustancias, son aprovechadas para ser
empleadas con fines suicidas u homicidas. De los casos recibidos en el Laboratorio de
Toxicologa Forense, de la Direccin Regional Nororiente del Instituto Nacional de
Medicina Legal y Ciencias Forenses, relacionados con posibles intoxicaciones por
agentes qumicos, siempre se incluye el anlisis de cianuros. Adicionalmente, de los
casos provenientes de la ciudad de Ocaa, en un alto porcentaje se sospecha la
posible intoxicacin por fosfina, por lo tanto, tambin esta sustancia es incluida dentro
de la solicitud de anlisis.

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Dado el inters forense de estas sustancias qumicas, se hizo necesario implementar y

validar un mtodo que permitiera su identificacin en muestras biolgicas y no
biolgicas, garantizando que ste tenga las caractersticas analticas adecuadas para
su aplicacin en casos forenses.
Materiales y mtodos
Se implement y valid un mtodo cromatogrfico que permiti la identificacin y
determinacin cualitativa de cido cianhdrico y fosfina, en muestras biolgicas (i.e.,
sangre y contenido gstrico) y no biolgicas (e.g., tabletas), en casos relacionados con
intoxicaciones por agentes qumicos. Para esto, se evaluaron los siguientes parmetros:
selectividad, especificidad, lmites de deteccin y cuantificacin y linealidad.

Los reactivos empleados fueron cido sulfrico, acetonitrilo, cianuro de sodio, nitrato de
plata, tabletas FOSCAM (equivalentes a 56,7% de fosfuro de alumnio).
Para la preparacin de la muestra, se emplearon viales de 10 mL de capacidad y se
tom 1 mL de muestra, a la cual se le adicionaron 200 L de acetonitrilo (empleado
como estndar interno) de concentracin 500 mg/L, y 200 L de cido sulfrico
concentrado.
Para el anlisis cromatogrfico, se emple un cromatgrafo marca Agilent Technologies
6890 con detector de nitrgenofsforo (NPD) y una columna capilar HP Blood Alcohol
Analysis de 7 m x 0.32 mm D.I. Se modific el mtodo cromatogrfico reportado por
Musshoff [2], con el objetivo de lograr la identificacin simultnea de fosfina y cianuro.
La configuracin del horno fue la siguiente: se inici en 70 C por 0.5 min, luego, se
increment a razn de 35 C/min hasta 150 C, donde se mantuvo por 4 min. El tiempo
total del anlisis fue de 6.79 minutos. La temperatura del inyector y detector se mantuvo
en 250 C. Se emple helio como gas de arrastre, y el modo de inyeccin empleado fue
split en una relacin 20:1.
Las condiciones del automuestreador de voltiles, Thermo Triplus, fueron las
siguientes: temperatura de incubacin de 70 C por 5 minutos, volumen de inyeccin 1

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mL.
Adicionalmente, se realiz una comparacin entre el mtodo cromatogrfico y la prueba
de coloracin a la gota, utilizada en el laboratorio para la identificacin preliminar de
fosfina. Esta prueba consiste en exponer una tira de papel filtro humedecida con nitrato
de plata (3%) a 1 mL de muestra en un vial de 10 mL tapado hermticamente. En
presencia de fosfina se observa sobre el papel filtro una coloracin gris oscuro que
persiste en el tiempo por formacin de fosfuro de plata.

Resultados y discusin
A continuacin se presentan los resultados obtenidos para las figuras de mrito
evaluadas.
Selectividad y especificidad: Se analizaron diez muestras de contenido gstrico y
sangre de occisos, cuyo deceso se produjo por causa diferente a intoxicacin por
fosfina o cido cianhdrico. No se observaron seales cromatogrficas en los
tiempos de retencin de la fosfina (1.78 min), cido cianhdrico (2.73 min) y
acetonitrilo (4.20 min).
Linealidad: Mediante curvas de calibracin con soluciones de fosfina y cido
cianhdrico en sistema y soluciones de cido cianhdrico en mtodo (sangre) de
concentraciones: 0.13; 0.20; 0.40; 0.80; 1.59; 2.39 y 2.66 mg/L para fosfina y
0.16; 0.24; 0.49; 0.98; 1.95; 2.93 y 3.26 mg/L para cido cianhdrico, se observ
respuesta lineal entre el rea relativa y la concentracin.
Con base en los resultados obtenidos, se observ que para el cido cianhdrico
el mtodo es lineal y demostr repetibilidad en las concentraciones de trabajo
empleadas, en los dos casos, sistema y mtodo, los coeficientes de correlacin
fueron mayores de 0.99.
Para el caso de la fosfina, no se observ repetibilidad en el anlisis cuantitativo
con las concentraciones de trabajo empleadas. Esto se puede explicar dada la
alta volatilidad y baja solubilidad en agua de la fosfina y porque se utiliz como
estndar un producto comercial que rpidamente libera la fosfina y produce

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variaciones durante el pesaje del producto para la preparacin de la solucin

estndar.
Lmites de deteccin y cuantificacin: El lmite de deteccin se calcul para cada
una de las sustancias estudiadas por diluciones sucesivas, partiendo del nivel
ms bajo de la curva de calibracin. Se determin como aquel en el que se
detectaron reas mayores que el ruido, siendo positiva cuando la seal super la
relacin seal/ruido (S/N) en un factor de 3.3 al aplicar la frmula S/N = 3.3/m,
en donde es la desviacin estndar residual resultante del anlisis de varianza
de la curva, m la pendiente de la curva y 3.3 el factor seal/ruido.
As mismo, el lmite de cuantificacin se determin como aquel en el que se
detectaron reas con precisin y exactitud que superaron la relacin S/N en un
factor de 10, al aplicar la frmula S/N = 10/m, en donde es la desviacin
estndar residual resultante del anlisis de varianza de la curva, m la pendiente
de la curva y 10 el factor seal/ruido.
El lmite de deteccin y cuantificacin encontrados para el cido cianhdrico y la
fosfina fueron 0.04 mg/L y 0.2 mg/L respectivamente. Sin embargo, para la
fosfina el coeficiente de variacin fue superior al 15% debido a su volatilidad (~
20%), probablemente se requiera un ambiente ms controlado para la
preparacin de las soluciones de trabajo y las muestras.
Finalmente, con relacin a la comparacin realizada entre la prueba preliminar para la
identificacin de fosfina con el mtodo cromatogrfico, se encontr correspondencia
entre los dos mtodos.
Discusin y conclusiones
Se implement y valid un mtodo cromatogrfico que permite la identificacin
simultnea y determinacin cualitativa de cido cianhdrico y fosfina, en muestras
biolgicas tales como sangre y contenido gstrico, sin embargo el mtodo puede ser
aplicado a otras muestras biolgicas de matriz diferente y a muestras de origen no
biolgico. Este mtodo present lmites de deteccin y cuantificacin, de 0.04 mg/L y
0.2 mg/L tanto para el cido cianhdrico como para la fosfina, respectivamente.
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Para el cido cianhdrico, el mtodo demostr repetibilidad y linealidad en el rango de

concentraciones empleadas (0.16 3.26 mg/L). Para la identificacin de fosfina, se
recomienda realizar un tamizaje aplicando la prueba colorimtrica con formacin de
fosfuro de plata y posteriormente, emplear el mtodo cromatogrfico.
Con anterioridad a la implementacin de este mtodo, los casos de intoxicacin por
fosfina, deban concluir sus necropsias con los hallazgos macroscpicos e
histopatolgicos, debido a que los laboratorios del INML y CF no disponan de mtodo
para anlisis de fosfina. Este mtodo es sencillo, rpido y, permite confirmar la
presencia de cianuro y fosfina en las muestras biolgicas. La fase estacionaria de la
columna desarrollada para anlisis de alcoholes en sangre (HP blood alcohol analysis)
ha demostrado que tambin es adecuada para la separacin cromatogrfica de fosfina
y cianuro.
El laboratorio ha aplicado este mtodo durante tres aos en la determinacin cualitativa
de cianuro o fosfina en muestras de contenido gstrico. Los resultados han demostrado
las bondades del mtodo tanto para cido cianhdrico como para fosfina. Tambin, se
han analizado muestras de rin e hgado con resultados negativos para fosfina y
cianuro; por el contrario, en muestras de sangre se han detectado casos positivos para
cido cianhdrico.

A continuacin, se presentan tres casos forenses que han sido analizados empleando
el mtodo desarrollado.
CASO 1. Caso recibido en el Laboratorio el 23 de febrero de 2011. Segn entrevista
aportada por la madre del occiso: El da 4 de febrero a las 14:00 horas el padre del
menor de forma intencional da a tomar al nio un veneno de nombre fosfamina, fue
llevado a un hospital del municipio, luego a una clnica de la capital del departamento,
donde ingresa con agitacin motora, dificultad moderada para respirar, pupilas
hiporeactivas, leve midriasis, pulmones con hipoventilacin, neurolgico irritable, palidez
mucocutnea moderada y con leve cianosis distal, posteriormente presenta paro
cardiorespiratorio, que no responde a maniobras de reanimacin y fallece a las 19:10

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horas.
Las muestras remitidas por el mdico fueron: un frasco plstico con aproximadamente
25 mL de lavado vesical, un tubo tapa roja con aproximadamente 4 mL de bilis; y un
tubo tapa gris de 4 mL con aproximadamente 4,5 mL de sangre.
Se analizaron las muestras de sangre y bilis con resultado: NO DETECTADO para
fosfina.
CASO 2. Corresponde al padre del infante del caso 1. Se recibi en el laboratorio el
15 de marzo de 2011. Segn la informacin: El 4 de febrero de 2011 a las 21:30 horas
fueron informados de la llegada de un occiso que haba muerto de manera inmediata.
Las muestras remitidas por el mdico fueron un frasco plstico con 20 mL de contenido
gstrico aproximadamente.
Se analiz la muestra de contenido gstrico con resultados positivos para fosfina.
CASO 3. Caso recibido en el Laboratorio el 30 de enero de 2009. Segn informacin
tomada del acta de inspeccin del cadver, se trataba de un comerciante en unin libre.
Segn los familiares ingiri las pastillas para conservar el frjol debido a problemas
econmicos. Edad del occiso: 40 aos
Las muestras remitidas por el mdico fueron un tubo tapa gris con aproximadamente 3
mL de sangre, un frasco de vidrio color mbar con aproximadamente 50 mL de
contenido gstrico.
Se analiz la muestra de contenido gstrico con resultado positivo fosfina.
Se analiz la muestra de sangre y se detect etanol en una concentracin de 176
mg/100mL de sangre total.
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