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A N A L I T I C O S
M E T O D O S
E N
O F I C I A L E S
A L I M E N T A R I A
D E
A N A L I S I S
Aceites
y grasas
Panreac Aceites
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A N A L I T I C O S
E N
A L I M E N T A R I A
Durante todo este tiempo se han producido modificaciones tanto en los mtodos propuestos en la
legislacin, como en la oferta de nuevos productos
fabricados y distribuidos por Panreac. Las nuevas
ediciones de los Mtodos Analticos en Alimentaria
irn recogiendo todas estas modificaciones y se irn
actualizando de manera acorde.
La incorporacin de Espaa en la Unin Europea y
la transposicin de las Directivas Comunitarias en la
Legislacin Espaola hace que, cada vez ms, se utilicen los mtodos de las Normativas Comunitarias
en el trabajo habitual. Por tanto, las nuevas ediciones se realizarn con los mtodos establecidos en las
Directivas. Este principio se ha introducido en la
nueva edicin del folleto Aceites y Grasas y se ir
implementando en las nuevas ediciones actualizadas
de los distintos mtodos.
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Aceites y grasas
Aguas potables
de consumo pblico
y aguas de bebida envasadas
Carne y productos crnicos
Cereales, derivados de cereales
y cerveza
Leche y productos lcteos
Productos derivados de la uva,
aguardientes y sidras
Obviamente esta edicin ha sido actualizada con las
disposiciones publicadas hasta el momento, que
establecen nuevos procedimientos o que modifican
notablemente caractersticas anteriormente establecidas.
Por ltimo, comentarles que estn a su disposicin
adems de esta coleccin, nuestros:
Catlogo General de Reactivos PANREAC
Catlogo ADITIO de Aditivos Alimentarios
Manual Bsico de Microbiologa CULTIMED.
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Aceites y grasas
C O N T E N I D O
Recoge una transcripcin ntegra de los mtodos oficiales de anlisis publicados en el Diario Oficial de las Comunidades Europeas:
NL248/1 de 5.9.91 Reglamento (CEE)
N2568/91 de la Comisin de 11 de julio de 1991
actualizados con las siguientes modificaciones
hasta la fecha: (Mayo 1999).
NL150/17 de 2.6.92 Reglamento (CEE)
N1429/92 de la Comisin de 26 de mayo de 1992
NL258/49 de 28.10.95 Reglamento (CE)
N2527/95 de la Comisin de 27 de octubre de
1995
L341/25 de 12.12.97 Reglamento (CE)
N2472/97 de la Comisin de 11 de diciembre de
1997
L28/5 de 4.2.98 Reglamento (CE) N282/98 de
la Comisin de 3 de febrero de 1998
L85/3 de 20.3.98 Reglamento (CE) N623/98
de la Comisin de 19 de marzo de 1998
A continuacin de los mtodos de anlisis se
indican los reactivos Panreac recomendados.
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Aceites
Objeto .......................................................
Principio.....................................................
Reactivos...................................................
Material......................................................
Procedimiento............................................
Expresin...................................................
14
14
14
15
15
15
Objeto .......................................................
Ambito de aplicacin ................................
Definicin ..................................................
Principio ....................................................
Aparatos ....................................................
Reactivos ..................................................
Muestra .....................................................
Procedimiento............................................
Expresin de los resultados ......................
15
15
15
15
15
16
16
16
16
17
17
17
17
18
19
19
Objeto........................................................
Campo de aplicacin .................................
Principio.....................................................
Equipo .......................................................
Reactivos...................................................
Preparacin de la muestra .........................
Preparacin de las placas
cromatogrficas .........................................
8. Procedimiento............................................
9. Expresin de los resultados .......................
10. Notas.........................................................
28
28
28
28
29
30
30
30
31
31
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Objeto........................................................
Campo de aplicacin .................................
Principio.....................................................
Aparatos ....................................................
Reactivos...................................................
Preparacin de las muestras......................
Procedimiento............................................
Clculo y expresin de los resultados ........
31
31
32
32
32
32
32
32
Anexo V: Determinacin de la
composicin y del contenido
de esteroles mediante
cromatografa de gases
con columna capilar
1. Objeto .......................................................
2. Principio ....................................................
3. Material .....................................................
4. Reactivos ..................................................
5. Procedimiento ...........................................
6. Expresin de los resultados ......................
Apndice ..........................................................
27
27
27
27
27
27
28
Introduccin . ....................................................
1. Objeto .......................................................
2. Principio ....................................................
3. Material y aparatos ....................................
4. Reactivos ..................................................
5. Procedimiento ...........................................
6. Expresin de los resultados .......................
20
20
20
20
21
24
24
Introduccin ......................................................
1. Objeto........................................................
2. Principio.....................................................
3. Material y aparatos.....................................
4. Reactivos...................................................
5. Procedimiento............................................
6. Expresin de los resultados .......................
Apndice I: Preparacin de la almina
y control de su actividad ............................
Apndice II: Ajuste del espectrofotmetro..........
35
35
35
35
35
35
36
36
36
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8.
Objeto........................................................
Reactivos...................................................
Aparatos ....................................................
Procedimiento............................................
Expresin de los resultados .......................
Caso especial de determinacin de los
ismeros trans ...........................................
Caso especial de utilizacin de un
catarmetro (funcionamiento basado en
el principio de los cambios de
conductividad trmica)...............................
Informe del anlisis.....................................
2.
3.
4.
37
37
37
38
41
42
44
44
44
45
45
45
45
45
46
46
46
46
46
46
46
47
47
47
47
47
48
48
48
48
6
Anexo XI: Determinacin del contenido en
solventes halogenados voltiles
en el aceite de oliva
1.
Equipo ....................................................... 48
Reactivos................................................... 49
Procedimiento de anlisis........................... 49
Anexo XIII:
1.
49
49
49
49
50
50
50
50
2.
3.
Nota 2A .....................................................
Nota 2B .....................................................
Nota 2C .....................................................
Nota 2D .....................................................
Nota 2E .....................................................
Nota 3 .......................................................
Nota 4 .......................................................
50
51
52
52
52
52
52
Anexo XV:
1.
2.
3.
Objeto........................................................
Definicin ...................................................
Principio.....................................................
Reactivos...................................................
Material......................................................
Preparacin de la muestra .........................
Procedimiento............................................
Expresin de los resultados .......................
54
54
54
54
55
55
55
55
Objetivos.................................................... 56
Aplicacin .................................................. 56
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M
3.
4.
5.
6.
Fundamento ..............................................
Instrumental ...............................................
Reactivos...................................................
Metodologa...............................................
56
56
56
57
Objeto........................................................
Campo de aplicacin .................................
Principio.....................................................
Mtodo ......................................................
Evaluacin de los resultados ......................
Ejemplo......................................................
60
60
60
60
65
66
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M
REGLAMENTO (CEE) N 2568/91 DE LA
COMISIN de 11 de julio de 1991 relativo
a las caractersticas de los aceites de
oliva y de los aceites de orujo de oliva y
sobre sus mtodos de anlisis
HA ADOPTADO EL PRESENTE
REGLAMENTO:
Artculo 1
1. Se considerarn aceites de oliva vrgenes, a
que se refieren las letras a), b), y c) del punto 1 del
Anexo del Reglamento n 136/66/CEE, los aceites
cuyas caractersticas se ajusten a las indicadas,
respectivamente, en los puntos 1, 2 y 3 del Anexo I
del presente Reglamento.
2. Se considerar aceite de oliva virgen lampante, a que se refiere la letra d) del punto 1 del Anexo
del Reglamento n 136/66/CEE, el aceite cuyas
caractersticas se ajusten a las indicadas en el punto 4 del Anexo I del presente Reglamento.
3. Se considerar aceite de oliva refinado, a que
se refiere el punto 2 del Anexo del Reglamento n
136/66/CEE, el aceite cuyas caractersticas se ajusten a las indicadas en el punto 5 del Anexo I del presente Reglamento.
4. Se considerar aceite de oliva, a que se refiere el punto 3 del Anexo del Reglamento n
136/66/CEE, el aceite cuyas caractersticas se ajusten a las indicadas en el punto 6 del Anexo I del presente Reglamento.
5. Se considerar aceite de orujo de oliva crudo,
a que se refiere el punto 4 del Anexo del Reglamento n 136/66/CEE, el aceite cuyas caractersticas se
ajusten a las indicadas en el punto 7 del Anexo I del
presente Reglamento.
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6. Se considerar aceite de orujo de oliva refinado, a que se refiere el punto 5 del Anexo del Reglamento n 136/66/CEE, el aceite cuyas caractersticas se ajusten a las indicadas en el punto 8 del
Anexo I del presente Reglamento.
7. Se considerar aceite de orujo de oliva, a que
se refiere el punto 6 del Anexo del Reglamento n
136/66/CEE, el aceite cuyas caractersticas se ajusten a las indicadas en el punto 9 del Anexo I del presente Reglamento.
Artculo 2
Artculo 3
10
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M
2. El contenido de aceite mencionado en el
apartado 1 se expresar como porcentaje del
extracto seco en peso.
Artculo 7
Sern aplicables las disposiciones comunitarias
sobre la presencia de sustancias extraas distintas
de las mencionadas en el Anexo XI.
Artculo 8
1. Cada Estado miembro comunicar a la Comisin las medidas adoptadas en aplicacin del presente Reglamento.
2. Cada Estado miembro comunicar a la Comisin, al inicio de cada semestre una recapitulacin
de los datos analticos de las determinaciones efectuadas durante el semestre precedente.
Estos resultados sern examinados por el Comit de gestin de las materias grasas con arreglo al
procedimiento previsto en el artculo 39 del Reglamento n 136/66/CEE.
Artculo 9
Queda derogado el Reglamento (CEE) n
1058/77.
Artculo 10
1. El presente Reglamento entrar en vigor el
tercer da siguiente al de su publicacin en el Diario
Oficial de las Comunidades Europeas.
No obstante, el mtodo que figura en el Anexo
XII se aplicar a partir del 1 de enero de 1992,
excepto en lo que se refiere a las operaciones relacionadas con la intervencin.
El presente Reglamento no se aplicar a los
aceites de oliva y de orujo de oliva envasados antes
de la fecha de entrada en vigor del presente Reglamento y comercializados hasta el 31 de octubre de
1992.
El presente Reglamento ser obligatorio en
todos sus elementos y directamente aplicable en
cada Estado miembro.
Hecho en Bruselas, el 11 de julio de 1991.
Por la Comisin
RAY MAC SHARRY
Miembro de la Comisin
ANEXOS
Indice
Anexo I: Caractersticas de los aceites de oliva
Anexo II: Determinacin del grado de acidez
Anexo III: Determinacin del ndice de perxidos
Anexo IV: Determinacin del contenido de ceras
mediante cromatografa de gases con columna
capilar (Modificado por el Reglamento 183/93)
Anexo V: Determinacin de la composicin y del
contenido de esteroles mediante cromatografa de
gases en columna capilar
Anexo VI: Determinacin del eritrodiol y uvaol
Anexo VII: Determinacin de los cidos grasos
saturados en la posicin 2 de los triglicridos de
aceites y grasas
Anexo VIII: Determinacin del porcentaje de trinolena
Anexo IX: Prueba espectrofotomtrica en el
ultravioleta
Anexo X "A": Anlisis de los steres metlicos de
los cidos grasos mediante cromatografa de gases
Anexo X "B": Preparacin de los steres metlicos de los cidos grasos
Anexo XI: Determinacin del contenido en solventes halogenados voltiles en el aceite de oliva
Anexo XII: Valoracin organolptica del aceite de
oliva virgen
Anexo XIII: Neutralizacin y decoloracin del
aceite de oliva en laboratorio (Modificado por el
Reglamento 183/93)
Anexo XIV: Notas complementarias 2, 3 y 4 del
captulo 15 de la nomenclatura combinada
Anexo XV: Contenido de aceite de los orujos de
aceituna
Anexo XVI: Determinacin del ndice de yodo
Anexo XVII: Mtodo para la determinacin de
estigmastadienos en los aceites vegetales (Modificado por el Reglamento 656/95)
Anexo XVIII: Mtodo para la determinacin de la
composicin de los triglicridos de ECN42 (Modificado por el Reglamento 2472/97)
11
20
20
> 20
5
15
5
15
2,0
3,3
> 3,3
0,5
1,5
> 0,5
0,5
1,5
6. Aceite de oliva
0,20
0,20
0,20
0,20
> 0,20
0,20
0,20
0,20
> 350
350
2,0
-
1,8
2,0
0,50
0,15
0,15
0,15
Estigmastadienos (2)
mg/kg
1,5
1,5
1,3
350
350
1,3
1,3
1,3
cidos grasos
saturados en
posicin 2
de los
triglicridos
(%)
250
250
250
Ceras
mg/kg
0,5
0,5
0,6
0,3
0,3
0,3
0,2
0,2
0,2
Diferencia
entre ECN42
y HPLC
y ECN42
clculo
terico
5,30
5,50
3,30
3,40
3,70
2,60
2,60
2,50
K232 (*)
2,00
2,50
1,00
1,20
> 0,25
0,25
0,25
0,20
K270 (*)
0,11
0,10
0,10
0,10
K270
despus de
pasar por
almina
(3)
0,20
0,25
0,13
0,16
0,01
0,01
0,01
D-K
(*)
< 3,5
3,5
5,5
6,5
Panel test
(*)
(1) Lmite mximo total de compuestos halogenados detectados mediante captura de electrones.
Para cada uno de los componentes el lmite mximo es de 0,10 mg/kg.
(2) Suma de ismeros que podran (o no podran) separarse mediante una columna capilar.
(3) Para la verificacin de aceite refinado, cuando el K270 sobrepase el lmite de la categora correspondiente, deber procederse a la determinacin del K270 despus de ser tratado con
almina.
Notas:
Los resultados de los anlisis debern expresarse con el mismo nmero de decimales que los previstos para cada caracterstica.
La ltima cifra deber aumentarse en una unidad si la cifra siguiente es superior a 4.
Para cambiar de categora a un aceite o declararlo no conforme a su pureza bastar con que una sola de las caractersticas no se ajuste a los lmites fijados.
Las caractersticas indicadas con asterisco (*), relativas a la calidad del aceite, implican lo siguiente:
en el caso del aceite de oliva virgen lampante, los lmites (excepto el de K232) no debern respetarse simultneamente;
en el caso de los dems aceites de oliva vrgenes, el incumplimiento de uno de los lmites supondr un cambio de categora, aunque seguirn clasificados dentro de una de las categoras de los aceites de oliva vrgenes.
20
1,0
ndice de
Disolventes
perxidos halogenados
mg/kg
meq O2/kg
(*)
(*) (1)
Acidez (%)
(*)
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Categora
12
(modificado por el Reglamento (CE) N 2472/97)
ANEXO I
Panreac Aceites
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0,6
0,6
0,6
0,6
0,6
0,6
0,6
0,6
0,6
0,4
0,4
0,4
0,4
0,4
0,4
0,4
0,4
0,4
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,3
0,3
0,3
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,05
0,05
0,05
0,10
0,20
0,20
0,20
0,40
0,40
0,05
0,05
0,05
0,10
0,30
0,30
0,10
0,35
0,35
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,9
0,9
0,9
0,9
0,9
0,9
0,9
0,9
0,9
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,2
0,2
0,2
Brasicasterol
(%)
4,0
4,0
4,0
4,0
4,0
4,0
4,0
4,0
4,0
Campesterol
(%)
< Camp.
< Camp.
< Camp.
< Camp.
< Camp.
< Camp.
< Camp.
Estigmasterol
(%)
93,0
93,0
93,0
93,0
93,0
93,0
93,0
93,0
93,0
Betasitosterol
(1)
(%)
Nota:
Los resultados de los anlisis debern expresarse con el mismo nmero de decimales que los previstos para cada caracterstica.
La ltima cifra deber aumentarse en una unidad si la cifra siguiente es superior a 4.
Para cambiar de categora a un aceite o declararlo no conforme a su pureza bastar con que una sola de las caractersticas no se ajuste a los lmites fijados.
(1) Suma de: Delta-5,23-Estigmastadienol + Clerosterol + Sitosterol + Sitostanol + Delta-5-Avenasterol + Delta-5-Avenasterol + Delta-5,24-Estigmastadienol.
Mirstico
(%)
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
1000
1000
1000
1000
1000
1000
2500
1800
1600
Delta-7- Esteroles
Estigmas- totales
tenol
(mg/kg)
(%)
4,5
4,5
4,5
4,5
4,5
4,5
12
12
> 4,5
Eritrodiol
y uvaol
(%)
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Categora
Sumas
Sumas de
de los
los ismeros
ismeros translinoleicos y Colesterol
Lino- Araqu- Eicose- Beh- Lignotransoleicos translinolnicos
(%)
lnico lnico noico nico crico
(%)
(%)
(%)
(%)
(%)
(%)
(%)
Contenido de cidos
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13
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ANEXO II
DETERMINACIN DEL GRADO DE ACIDEZ
1. OBJETO
Determinar los cidos libres en los aceites de oliva. El contenido en cidos grasos libres se expresa
mediante la acidez calculada segn el mtodo convencional.
1.1. Principio
Disolucin de la muestra en una mezcla de
disolventes y valoracin de los cidos grasos libres
mediante una solucin etanlica de hidrxido potsico.
1.2. Reactivos
Todos los reactivos deben ser de calidad analtica reconocida y el agua utilizada debe ser agua
destilada o de una pureza equivalente.
1.2.1. Mezcla de ter dietlico y etanol de
95% (V/V), en proporcin de volumen 1:1.
Nota: El ter dietlico es muy inflamable y puede
formar perxidos explosivos. Debe utilizarse tomando especiales precauciones.
Debe neutralizarse exactamente en el momento
de su utilizacin con la solucin de hidrxido potsico (1.2.2) en presencia de 0,3 ml de la solucin de
fenolftalena (1.2.3) por cada 100 ml de mezcla.
Nota: Si no es posible utilizar ter dietlico, puede sustituirse por una mezcla de disolventes formada por etanol y tolueno. Si fuera necesario, el etanol podra sustituirse, a su vez, por 2-propanol.
REACTIVO
Etanol de 95 % (V/V)
Etanol
Etanol de 95-96% (V/V)
ter dietlico
14
Hidrxido potsico
2-Propanol
Solucin de 10 g/l de fenolftalena
en etanol de 95-96% (V/V)
Solucin etanlica valorada de
hidrxido potsico, = 0,1 M
Solucin etanlica valorada de
hidrxido potsico, = 0,5 M
Tolueno
Virutas de aluminio
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo
Denominacin
121085
Etanol 96% v/v PA
132770
121515
131090
281327
182146
181519
131745
A13805
Tolueno PA-ACS-ISO
Aluminio, virutas, 99+%
Panreac Aceites
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M
1.3. Material
Material habitual de laboratorio, y en particular:
1.3.1. Balanza analtica
1.3.2. Matraz erlenmeyer de 250 ml de capacidad
1.3.3. Bureta de 10 ml de capacidad, con graduacin de 0,05 ml
1.4. Procedimiento
1.4.1. Preparacin de la muestra para la prueba
La determinacin se efectuar en una muestra
filtrada. Si el contenido global de humedad e impurezas es inferior al 1%, se utilizar la muestra tal
cual.
1.4.2. Muestra para la prueba
Tomar la muestra, segn el grado de acidez previsto, de acuerdo con el cuadro siguiente:
Grado de
acidez previsto
Peso de la
muestra (en g)
Precisin de la
pesada de la
muestra (en g)
<1
1a4
4 a 15
15 a 75
> 75
20
10
2,5
0,5
0,1
0,05
0,02
0,01
0,001
0,0002
siendo:
V : volumen en ml de la solucin valorada de
hidrxido potsico utilizada.
c : concentracin exacta, en moles por litro, de
la solucin de hidrxido potsico utilizada.
M: peso molecular del cido en que se expresa
el resultado (cido oleico = 282).
P: peso en gramos de la muestra utilizada.
Se tomar como resultado la media aritmtica
de dos determinaciones.
ANEXO III
DETERMINACIN DEL NDICE DE
PERXIDOS
1. OBJETO
La presente norma describe un mtodo para la
determinacin del ndice de perxidos de los aceites y grasas.
2. MBITO DE APLICACIN
La presente norma es aplicable a los aceites y
grasas animales y vegetales.
3. DEFINICIN
El ndice de perxidos es la cantidad (expresada
en miliequivalentes de oxgeno activo por kg de grasa) de perxidos en la muestra que ocasionan la
oxidacin del yoduro potsico en las condiciones
de trabajo descritas.
4. PRINCIPIO
La muestra problema, disuelta en cido actico
y cloroformo, se trata con solucin de yoduro potsico. El yodo liberado se valora con solucin valorada de tiosulfato sdico.
5. APARATOS
Todo el material utilizado estar exento de sustancias reductoras u oxidantes.
Nota: No engrasar las superficies esmeriladas.
5.1. Navecilla de vidrio de 3 ml
5.2. Matraces con cuello y tapn esmerilados,
de 250 ml de capacidad aproximadamente, previamente secados y llenos de gas inerte puro y seco
(nitrgeno o, preferiblemente, dixido de carbono).
5.3. Bureta de 25 o 50 ml, graduada en 0,1 ml.
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6. REACTIVOS
6.1. Cloroformo para anlisis, exento de oxgeno por borboteo de una corriente de gas inerte
puro y seco.
6.2. cido actico glacial para anlisis, exento de oxgeno por borboteo de una corriente de gas
inerte puro y seco.
6.3. Solucin acuosa saturada de yoduro
potsico, recin preparada, exenta de yodo y
yodatos.
REACTIVO
cido actico glacial para anlisis
Almidn soluble
Cloroformo para anlisis
Solucin acuosa de tiosulfato sdico
0,01 N
Solucin acuosa de tiosulfato sdico
0,002 N
Solucin de almidn, en solucin
acuosa de 10 g/l
Yoduro potsico
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo
Denominacin
131008
Acido Actico glacial PA-ACS-ISO
121096
Almidn de Patata soluble PA
131252
Triclorometano estabilizado con etanol PA-ACS-ISO
181723
Prepararlo a partir de Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l
(0,1N) SV diluido convenientemente con agua
181723
Prepararlo a partir de Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l
(0,1N) SV diluido convenientemente con agua
283146
Almidn solucin 1% RV
131542
7. MUESTRA
La muestra se tomar y almacenar al abrigo de
la luz, y se mantendr refrigerada dentro de envases de vidrio totalmente llenos y hermticamente
cerrados con tapones de vidrio esmerilado o de
corcho.
8. PROCEDIMIENTO
El ensayo se realizar con luz natural difusa o
con luz artificial. Pesar con precisin de 0,001 g en
una navecilla de vidrio (5.1) o, en su defecto, en un
matraz (5.2) una cantidad de muestra en funcin del
ndice de perxidos que se presuponga, con arreglo
al cuadro siguiente:
16
ndice de perxidos
que se supone
(meq de O2/kg)
Peso de la muestra
problema (en g)
de 0 a 12
de 12 a 20
de 20 a 30
de 30 a 50
de 50 a 90
de 5,0 a 2,0
de 2,0 a 1,2
de 1,2 a 0,8
de 0,8 a 0,5
de 0,5 a 0,3
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M
siendo:
V: ml de solucin valorada de tiosulfato sdico
(6.4) empleados en el ensayo, convenientemente corregidos para tener en cuenta el
ensayo en blanco.
N: normalidad exacta de la solucin de tiosulfato
sdico (6.4) empleada.
P: peso, en gramos de la muestra problema.
El resultado ser la media aritmtica de las dos
determinaciones efectuadas.
ANEXO IV
(Modificado por los Reglamentos (CEE)
N 183/93 y 177/94)
DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE
CERAS MEDIANTE CROMATOGRAFA DE
GASES CON COLUMNA CAPILAR
1. OBJETO
El presente mtodo describe un procedimiento
para la determinacin del contenido de ceras en
determinados aceites y grasas en las condiciones
de ensayo.
Puede utilizarse, en particular, para distinguir el
aceite de oliva obtenido mediante extraccin (aceite
de orujo de oliva).
2. PRINCIPIO
Fraccionamiento de la grasa o aceite, a los que
se habr aadido un patrn interno adecuado,
mediante cromatografa en columna de gel de slice
hidratado. Recuperacin de la fraccin eluida en las
condiciones de ensayo (cuya polaridad es inferior a
la de los triglicridos) y, a continuacin, anlisis
directo mediante cromatografa de gases columna
capilar.
3. APARATOS
3.1. Matraz Erlenmeyer de 25 ml.
3.2. Columna de vidrio para cromatografa de
15 mm de dimetro interior y 30-40 cm de longitud.
Recomendacin Panreac: 727401 Columna
para cromatografa "flash" con adaptador y vlvula
de tefln. 20 mm ID x 400 mm longitud.
3.3. Cromatgrafo de gases adecuado con
columna capilar, dotado de un sistema de introduccin directa en la columna, que incluya los siguientes elementos:
3.3.1. Horno termosttico para las columnas,
que pueda mantener la temperatura deseada con
una oscilacin mxima de 1C.
3.3.2. Inyector en fro para introduccin directa
en la columna.
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REACTIVO
ter etlico para cromatografa
n-Heptano, de calidad para
cromatografa
n-Hexano, de calidad para
cromatografa
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RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo
Denominacin
362551
Eter Dietlico estabilizado con etanol
(UV-IR-HPLC) PAI
362062
n-Heptano (UV-IR-HPLC-HPLC preparativa) PAI
362063
5. PROCEDIMIENTO
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5.2.3.1.Tomar 1 l de solucin con la microjeringa de 10 l; sacar el mbolo hasta que la aguja est
vaca. Introducir la aguja en el sistema de inyeccin
e inyectar rpidamente despus de 1 o 2 segundos.
Despus de 5 segundos aproximadamente, extraer
lentamente la aguja.
5.2.3.2. Llevar a cabo el registro hasta que las
ceras se hayan eluido completamente.
La lnea de base debe satisfacer siempre las
condiciones exigidas (5.2.1.2).
5.2.4. Identificacin de los picos
Identificar los picos sobre la base de los tiempos
de retencin, comparndolos con mezclas de ceras
analizadas en las mismas condiciones y cuyos tiempos de retencin sean conocidos.
La figura 1 presenta un cromatograma de las
ceras de un aceite de oliva virgen.
5.2.5. Anlisis cuantitativo
5.2.5.1.Determinar con ayuda del integrador las
reas de los picos correspondientes al patrn interno y a los steres alifticos de C40 a C46.
5.2.5.2. Determinar el contenido de cada uno de
los steres en mg/kg de materia grasa, aplicando la
siguiente frmula:
Ax ms 1000
ster (mg/kg) =
As m
siendo:
Ax : rea del pico de cada uno de los steres;
As : rea del pico del laurilaraquidato;
ms: peso, en miligramos, del laurilaraquidato
aadido;
m: peso, en gramos, de la muestra tomada para
la determinacin.
APNDICE
Determinacin de la velocidad lineal del gas
Inyectar de 1 a 3 l de metano (propano) en el
cromatgrafo de gases, despus de haberlo ajustado a las condiciones de ensayo normales. Medir el
tiempo que tarda el gas en recorrer la columna,
desde el momento de su inyeccin hasta la aparicin del pico (tM).
La velocidad lineal en cm/segundo viene dada
por la frmula L/tM, siendo L la longitud de la columna expresada en cm y t M el tiempo medido en
segundos.
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FIGURA 1: Cromatograma de las ceras de un aceite de oliva virgen
I.S. = Patrn interno del ster C32
1 = steres C36
2 = steres C38
4 = steres C42
5 = steres C44
3 = steres C40
6 = steres C46
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ANEXO V
DETERMINACIN DE LA COMPOSICIN Y
DEL CONTENIDO DE ESTEROLES
MEDIANTE CROMATOGRAFA DE GASES
CON COLUMNA CAPILAR
1. OBJETO
El presente mtodo describe un procedimiento
para la determinacin del contenido de esteroles en
las materias grasas, expresado como contenido de
cada uno de los esteroles analizados y como contenido total de esteroles.
2. PRINCIPIO
Saponificacin de la materia grasa, a la que se
habr aadido a-colestanol como patrn interno, con
una solucin etanlica de hidrxido potsico; a continuacin, extraccin del insaponificable con ter etlico.
Separacin de la fraccin de esteroles del insaponificable extrado mediante cromatografa en placa de gel de slice bsica; los esteroles recuperados
del gel de slice se transforman en trimetilsililteres y
se analizan mediante cromatografa de gases con
columna capilar.
3. MATERIAL
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4.12. Solucin de 2,7-diclorofluorescena al
0,2% en etanol. Para hacerla ligeramente bsica se
aaden algunas gotas de solucin alcohlica 2N de
hidrxido potsico.
4.13. Piridina anhidra para cromatografa.
4.14. Hexametildisilazano.
4.15. Trimetilclorosilano.
4.16. Solucin problema de trimetilsililteres de
los esteroles: preparar en el momento del uso a
partir de esteroles puros o de mezclas de esteroles
REACTIVO
Acetona para cromatografa
Benceno para cromatografa
Cloroformo de calidad para anlisis
Colesterol
2,7-diclorofluorescena
Etanol
ter etlico de calidad para anlisis
ter etlico para cromatografa
Hexametildisilazano
Hexano para cromatografa
Hidrxido potsico
Piridina anhidra para cromatografa
Sulfato sdico anhidro de calidad
para anlisis
Trimetilclorosilano
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo
Denominacin
361007
Acetona (UV-IR-HPLC) PAI
361192
Benceno (UV-IR-HPLC) PAI
131252
Triclorometano estabilizado con etanol
PA-ACS-ISO
A11470
Colesterol, 99+%
133606
2',7'-Diclorofluorescena PA-ACS
121085
Etanol 96% v/v PA
132770
Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT
PA-ACS-ISO
362551
Eter Dietlico estabilizado con etanol
(UV-IR-HPLC) PAI
A15139
1,1,1,3,3,3-Hexametildisilazano, 98+%
362063
n-Hexano (UV-IR-HPLC) PAI
121515
Potasio Hidrxido 85% lentejas PA
481457
Piridina seca (mx. 0,01% de agua) DS-ACS
131716
Sodio Sulfato anhidro PA-ACS-ISO
A13651
5. PROCEDIMIENTO
5.1. Preparacin del insaponificable.
5.1.1. Con la microjeringa de 500 l introducir
en el matraz de 250 ml un volumen de disolucin de
a-colestanol al 0,2% en cloroformo (4.17) que contenga una cantidad de a-colestanol correspondiente al 10% aproximadamente del contenido de esteroles en la alcuota de la muestra para la
determinacin. Por ejemplo, para 5 g de muestra
aadir 500 l de la solucin de a-colestanol al
0,2%, si se trata de aceite de oliva, y 1500 l, si se
trata de aceite de orujo de oliva. (Modificado por el
Reglamento (CE) 183/93)
Evaporar en corriente de nitrgeno hasta sequedad y, a continuacin, pesar con precisin, en el
mismo matraz, 5 g de muestra seca y filtrada.
En el caso de aceites con un alto contenido de
colesterol puede producirse un pico cuyo tiempo de
retencin sea idntico al del colestanol. En tal caso
el anlisis de la fraccin de esteroles debe realizarse
Trimetilclorosilano, 98+%
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5.3.2. Tapar el tubo y agitar cuidadosamente (sin
invertir) hasta la completa disolucin de los esteroles. Dejar reposar un cuarto de hora, como mnimo,
a temperatura ambiente y centrifugar durante algunos minutos; la solucin lmpida queda lista para el
anlisis mediante cromatografa de gases.
Nota 5: La formacin de una ligera opalescencia
es normal y no ocasiona ninguna interferencia. La
formacin de una floculacin blanca o la aparicin
de una coloracin rosa son indicios de presencia de
humedad o de deterioro del reactivo. En este caso
deber repetirse la prueba.
5.4. Cromatografa de gases.
5.4.1. Operaciones preliminares: acondicionamiento de la columna.
5.4.1.1. Colocar la columna en el cromatgrafo
uniendo uno de los extremos de la columna al
inyector y el otro al detector.
Efectuar los controles generales del equipo para
cromatografa de gases (estanqueidad de los circuitos de gases, eficacia del detector, eficacia del sistema de divisin de flujo y del sistema de registro, etc.).
5.4.1.2. Si la columna se utiliza por vez primera,
es conveniente acondicionarla previamente. Hacer
pasar un ligero flujo de gas a travs de la columna,
encender el equipo de cromatografa de gases e iniciar un calentamiento gradual hasta alcanzar una
temperatura al menos 20C superior a la temperatura de trabajo (nota 6). Mantener dicha temperatura durante 2 horas como mnimo; a continuacin,
poner el equipo completo en condiciones de funcionamiento (regulacin del flujo de gases y de la relacin de split, ignicin de la llama, conexin con el
registrador electrnico, regulacin de la temperatura del horno del detector y del inyector, etc.) y registrar la seal con una sensibilidad al menos dos
veces superior a la prevista para el anlisis. El trazado de la lnea de base debe ser lineal, exento de
picos de cualquier tipo y no debe presentar deriva.
Una deriva rectilnea negativa indica que las
conexiones de la columna no son totalmente estancas; una deriva positiva indica que el acondicionamiento de la columna es insuficiente.
Nota 6: La temperatura de acondicionamiento
deber ser siempre, como mnimo 20C inferior a la
temperatura mxima prevista para la fase estacionaria utilizada.
5.4.2. Eleccin de las condiciones de trabajo.
5.4.2.1. Las condiciones de trabajo exigidas son
las siguientes:
temperatura de la columna: 260C 5C,
temperatura del evaporador: 280C,
temperatura del detector: 290C,
velocidad lineal del gas portador: helio 20 a 35
cm/s, hidrgeno 30 a 50 cm/s,
relacin de split de 1/50 a 1/100,
sensibilidad del instrumento: de 4 a 16 veces
la atenuacin mnima,
sensibilidad de registro: 1 a 2 mV f.e.
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Ax
% del esterol X = x 100
A
Ax ms 100
esterol x =
As m
siendo:
Ax : rea del pico del esterol x,
As : rea del pico del a-colestanol,
ms : peso de a-colestanol aadido, en miligramos,
m : peso de la muestra tomado para la determinacin, en gramos.
(Modificado por el Reglamento (CE) 183/93)
siendo:
Ax : rea del pico de x,
A: suma de las reas de todos los picos.
APNDICE
Determinacin de la velocidad lineal del gas
Inyectar en el cromatgrafo, preparado para trabajar en condiciones normales, de 1 a 3 l de metano (o propano) y medir el tiempo que tarda el gas en
recorrer la columna, desde el momento de la inyeccin hasta el momento en que aparece el pico (tM).
La velocidad lineal en cm/s viene dada por L/tM,
siendo L la longitud de la columna en cm y tM el
tiempo, expresado en segundos.
Cuadro I
Tiempos de retencin relativos de los esteroles
Pico
Identificacin
Tiempo de retencin
Columna
SE 54
24
Columna
SE52
Colesterol
D-5-colesten-3-b-ol
0,67
0,63
Colestanol
5-a-colestan-3-b-ol
0,68
0,64
Brasicasterol
[24S]-24-metil-D-5,22-colestadien-3-b-ol
0,73
0,71
24-metilencolesterol
24-metilen-D-5,24-colestadien-3-b-ol
0,82
0,80
Campesterol
[24R]-24-metil-D-5-colesten-3-b-ol
0,83
0,81
Campestanol
[24R]-24-metil-colestan-3-b-ol
0,85
0,82
Estigmasterol
[24S]-24-etil-D-5,22-colestadien-3-b-ol
0,88
0,87
D-7-campesterol
[24R]-24-metil-D-7-colesten-3-b-ol
0,93
0,92
D-5,23-estigmastadienol
[24R,S]-24-etil-D-5,23-colestadien-3-b-ol
0,95
0,95
10
Clerosterol
[24S]-24-etil-D-5,25-colestadien-3-b-ol
0,96
0,96
11
b-sitosterol
[24R]-24-etil-D-5-colesten-3-b-ol
12
Sitostanol
24-etil-colestan-3-b-ol
13
D-5-avenasterol
[24Z]-24-etiliden-D-5-colesten-3-b-ol
1,03
1,03
14
D-5,24-estigmastadienol
[24R,S]-24-etil-D-5,24-colestadien-3-b-ol
1,08
1,08
1,02
1,02
15
D-7-estigmastenol
[24R,S]-24-etil-D-7,24-colesten-3-b-ol
1,12
1,12
16
D-7-avenasterol
[24Z]-24-etiliden-D-7-3-b-ol
1,16
1,16
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Figura 1
Cromatograma de la fraccin de esteroles de un aceite de oliva bruto
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Figura 2
Cromatograma de la fraccin de esteroles de un aceite de oliva refinado
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M
ANEXO VI
DETERMINACIN DEL CONTENIDO EN
ERITRODIOL Y UVAOL
INTRODUCCIN
El eritrodiol, entendido corrientemente como
conjunto de los dioles eritrodiol y uvaol, es un componente del insaponificable, caracterstico de algunos tipos de materias grasas. Su concentracin es
mucho ms elevada en los aceites de oliva obtenidos mediante extraccin que en los obtenidos
mediante presin o en el aceite de pepita de uva y,
por lo tanto, su determinacin puede servir para
comprobar la existencia de aceite de oliva obtenido
mediante extraccin.
1. OBJETO
El presente mtodo describe un procedimiento
para determinar el eritrodiol en las materias grasas.
2. PRINCIPIO
La materia grasa se saponifica con una solucin
etanlica de hidrxido potsico; a continuacin se
extrae el insaponificable con ter etlico y se purifica
pasndolo por una columna de almina.
El fraccionamiento del insaponificable se realiza
mediante cromatografa en capa fina en placa de
gel de slice y se aslan la banda de la fraccin esterlica y la del eritrodiol.
Los esteroles y el eritrodiol recuperados de la
placa se transforman en trimetilsililteres y seguidamente se analiza la mezcla mediante cromatografa
de gases.
El resultado se expresa en porcentaje de eritrodiol respecto del conjunto de eritrodiol + esteroles.
3. MATERIAL Y APARATOS
3.1. El mismo material que el indicado para el
mtodo del Anexo V (Determinacin del contenido
de esteroles).
4. REACTIVOS
4.1. Los mismos reactivos que los indicados
para el mtodo del Anexo V (Determinacin del
contenido de esteroles).
4.2. Solucin patrn de eritrodiol al 0,5% en
cloroformo.
5. PROCEDIMIENTO
5.1. Preparacin del insaponificable
Se realiza tal como se indica en el apartado
5.1.2 del mtodo del Anexo V
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ANEXO VII
DETERMINACIN DE LOS CIDOS
GRASOS SITUADOS EN LA POSICIN 2
DE LOS TRIGLICRIDOS DE ACEITES
Y GRASAS
1. OBJETO
La presente norma describe un mtodo para la
determinacin de la composicin porcentual de cidos grasos que se encuentran esterificados en la
posicin 2 (oposicin interna) de los triglicridos.
2. CAMPO DE APLICACIN
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M
Para el control de la actividad lipsica:
4.21. pH-metro.
Recomendacin Panreac: 923 501 pHmetro
digital pH 300.
4.22. Agitador espiral.
4.23. Bureta de 5 ml.
4.24. Cronmetro.
Para la eventual preparacin de la lipasa:
4.25. Agitador de laboratorio, adecuado para
dispersar y mezclar materiales heterogneos.
5. REACTIVOS
5.1. n-Hexano o, en su defecto, ter de petrleo (punto de ebullicin 30-50C), de calidad
para cromatografa.
5.2. 2-Propanol, o etanol, 95% (v/v) de calidad para anlisis.
5.3. 2-Propanol, o etanol, solucin acuosa 1/1.
5.4. ter dietlico, exento de perxidos.
5.5. Acetona.
5.6. cido frmico, al menos de 98% (p/p).
5.7. Solvente de desarrollo: una mezcla de
n-hexano (5.1), ter dietlico (5.4) y cido frmico
(5.6) en las proporciones 70/30/1 (v/v/v).
5.8. Almina activada para cromatografa, neutra, actividad l segn Brockmann.
REACTIVO
Acetona
cido clorhdrico
cido frmico, al menos de 98% (p/p)
Cloruro de calcio
Colato sdico
2,7-diclorofluorescena
Etanol, 95% (v/v) de calidad para anlisis
Etanol al 95% (v/v)
ter de petrleo (punto de ebullicin
30-50C), de calidad para cromatografa
ter dietlico, exento de perxidos
Goma arbiga
Hidrxido sdico
Hidrxido sdico 1N
n-Hexano de calidad para
cromatografa
2-Propanol de calidad para anlisis
Solucin acuosa de hidrxido sdico 0,1N
Solucin de 10 g/l de fenolftalena en
etanol al 95% (v/v)
Tris-hidroximetil-aminometano
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo Denominacin
131007 Acetona PA-ACS-ISO
131019 Acido Clorhdrico 35% PA-ISO
131030 cido Frmico 98% PA-ACS
121221 Calcio Cloruro anhidro, polvo PA
121215 Calcio Cloruro 2-hidrato escoriforme PA
A17074 cido clico, sal sdica, 99%
133606 2',7'-Diclorofluorescena PA-ACS
121085 Etanol 96% v/v PA
361315
132770
142061
131687
182415
362063
131090
181694
281327
2-Propanol PA-ACS-ISO
Sodio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) SV
Fenolftalena solucin 1% RV
131940
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6. PREPARACIN DE LA MUESTRA
Si la acidez de la muestra, determinada con
arreglo al mtodo del Anexo II es inferior al 3%, se
efectuar directamente la purificacin en columna
de almina como se describe en el punto 6.2.
Si la acidez de la muestra, determinada con
arreglo al mtodo del Anexo II, es superior al 3%, se
efectuar una neutralizacin alcalina en presencia
de un solvente, como se describe en el punto 6.1, y
a continuacin se realizar la purificacin en columna de almina descrita en el punto 6.2.
6.1. Neutralizacin alcalina en presencia de un
solvente.
Introducir en el embudo de separacin (4.6)
aproximadamente 10 g de aceite crudo y aadir
100 ml de hexano (5.1), 50 ml de 2-propanol (5.2),
algunas gotas de solucin de fenolftalena (5.16) y el
volumen de solucin de hidrxido sdico (5.11)
correspondiente a la acidez libre del aceite ms un
0,3 % de exceso. Agitar enrgicamente durante 1
minuto, aadir 50 ml de agua destilada, agitar de
nuevo y dejar reposar.
Una vez que se haya producido la separacin,
separar la capa inferior que contiene los jabones.
Separar, asimismo, todas las capas intermedias
(muclago, materias insolubles). Lavar la solucin de
hexano del aceite neutralizado con porciones sucesivas de 25-30 ml de la solucin de 2-propanol
(5.3), hasta que desaparezca el color rosa de la
fenolftalena.
Eliminar la mayor parte del hexano mediante
destilacin en vaco en el evaporador rotatorio
(4.18); desecar el aceite en vaco a 30-40C
mediante una corriente de nitrgeno puro hasta la
completa eliminacin del hexano.
6.2. Purificacin con almina.
Preparar una suspensin de 15 g de almina
activada (5.8) en 50 ml de hexano (5.1) y verterla en
la columna cromatogrfica (4.7), removiendo al mismo tiempo. Dejar que la almina se asiente uniformemente y esperar a que el nivel del solvente descienda a 1-2 mm por encima del absorbente. Verter
cuidadosamente en la columna 5 g de aceite disueltos en 25 ml de hexano (5.1); recoger todo el eluyente de la columna en un matraz de fondo redondo (4.1).
7. PREPARACIN DE LAS PLACAS
CROMATOGRFICAS
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matraz de metilacin (4.2). Tratar directamente la
slice recogida como se indica en el Anexo X-B, de
modo que los monoglicridos se transformen en
steres metlicos, y, a continuacin, examinar los
steres mediante cromatografa en fase gaseosa,
como se describe en el Anexo X-A.
9. EXPRESIN DE LOS RESULTADOS
Calcular la composicin de los cidos grasos
situados en la posicin y expresar el resultado con
una cifra decimal (nota 3).
10. NOTAS
Nota 1: Control de la actividad lipsica
Preparar una emulsin oleosa como sigue: agitar en un mezclador adecuado una mezcla constituida por 165 ml de solucin de goma arbiga
(5.21), 15 g de hielo picado y 20 ml de aceite neutralizado (5.18).
En un vaso de precipitados (4.5) introducir 10 ml
de esta emulsin, 0,3 ml de solucin de colato sdico (5.20) y 20 ml de agua destilada.
Colocar el vaso en un termostato a 37C 0,5C
(nota 4) e introducir los electrodos del pH-metro
(4.21) y un agitador espiral (4.22); despus, aadir
gota a gota con una bureta (4.23) solucin de hidrxido sdico (5.19) hasta obtener un pH de 8,5.
Aadir una suspensin acuosa de la lipasa (vase a continuacin) en cantidad suficiente. Se mide
el pH y, tan pronto como alcance el valor de 8,3, se
pone en marcha un cronmetro y se va aadiendo
la disolucin de hidrxido sdico (5.19) gota a gota,
con la velocidad necesaria para mantener constante el pH de 8,3; anotar cada minuto el volumen de
solucin alcalina consumido.
Llevar los datos obtenidos a un sistema de ejes
de coordenadas, indicando en abscisas los tiempos
y en ordenadas los mililitros de solucin alcalina
necesarios para mantener constante el pH. Deber
obtenerse una grfica lineal.
La suspensin de lipasa mencionada es una
suspensin en agua al 1/1000 (p/p). Deber emplearse en cada ensayo una cantidad suficiente de
esta suspensin, de modo que en 4 o 5 minutos se
consuma 1 ml de solucin alcalina aproximadamente. Normalmente se necesitan de 1 a 5 mg de polvo.
La unidad lipsica se define como la cantidad de
enzima que libera 10 meq de cido por minuto. La
actividad A del polvo utilizado, medida en unidades
lipsicas por mg, se calcula mediante esta frmula:
siendo:
V : volumen de solucin de hidrxido sdico
(5.19) consumido por minuto
(calculado a partir de la grfica),
P : peso, en mg, de la muestra problema de polvo.
Nota 2: Preparacin de la lipasa
En el comercio pueden encontrarse lipasas de
actividad lipsica satisfactoria. Tambin es posible
prepararlas en laboratorio de la manera siguiente:
tomar 5 kg de pncreas fresco de cerdo, refrigerado a 0C; eliminar la grasa slida y el tejido conjuntivo que lo rodean, y triturar en un molino de cuchillas
hasta obtener una pasta fluida. Con un agitador
(4.25) agitar la pasta junto con 2,5 l de acetona
anhidra, durante 4-6 horas y despus centrifugar.
Efectuar tres extracciones ms del residuo con el
mismo volumen de acetona anhidra, dos extracciones con una mezcla de acetona y ter etlico 1:1
(V/V), y dos extracciones con ter etlico, en este
orden.
Desecar el residuo al vaco durante 48 horas
para obtener un polvo estable, que debe almacenarse en un refrigerador.
Nota 3: Es aconsejable en todos los casos
determinar la composicin de los cidos grasos
totales de la misma muestra, ya que la comparacin
con la de los cidos situados en la posicin 2 facilitar la interpretacin de las cifras obtenidas.
Nota 4: Por tratarse de un aceite lquido, la
hidrlisis se efecta a 37C. No obstante, en el caso
de la muestra problema se efectuar a 40C a fin de
que puedan examinarse las grasas con puntos de
fusin de hasta 45C.
ANEXO VIII
DETERMINACIN DEL PORCENTAJE DE
TRILINOLENA
1. OBJETO
Determinacin de la composicin de los triglicridos de los aceites lquidos vegetales expresada en
su nmero equivalente de carbonos mediante cromatografa de lquidos de alto rendimiento.
La presente norma describe un mtodo para
efectuar la separacin y determinacin de la composicin de los triglicridos de los aceites vegetales
segn su peso molecular y grado de insaturacin
en funcin de su nmero equivalente de carbonos
(vase la nota 1).
2. CAMPO DE APLICACIN
V x 10
A =
P
La presente norma es aplicable a todos los aceites vegetales que contengan triglicridos de cidos
grasos de cadena larga. Este mtodo es especial-
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REACTIVO
Acetona
Cloroformo
Acetonitrilo
Tripalmitina
5. REACTIVOS
Los reactivos debern ser de calidad para anlisis. Los disolventes de elucin debern desgasificarse y podrn reciclarse varias veces sin que ello
afecte a las separaciones.
5.1. Cloroformo.
5.2. Acetona.
5.3. Acetonitrilo.
5.4. Fase mvil: acetonitrilo + acetona (las proporciones se ajustarn para obtener la separacin
deseada; comenzar con una mezcla 50:50).
5.5. Disolvente de solubilizacin: acetona o
mezcla de acetona-cloroformo 1:1.
5.6. Triglicridos de referencia: pueden utilizarse bien
triglicridos comerciales (tripalmitina, triolena, etc.), en
cuyo caso se reflejarn en un grfico los tiempos de
retencin frente al nmero equivalente de carbonos,
alternativamente un cromatograma de referencia del
aceite de soja (vanse las notas 3 y 4 y las figuras 1 y 2).
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo Denominacin
131007 Acetona PA-ACS-ISO
131252 Triclorometano estabilizado con etanol
PA-ACS-ISO
131881 Acetonitrilo PA-ACS
A10922 Glicerol tripalmitato, 98%
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NEC = NC do no dl nl dln nln
Los coeficientes do, dl y dln pueden calcularse
mediante los triglicridos de referencia.
En las condiciones que se especifican en el presente mtodo, la relacin que se obtenga ser similar a la siguiente:
NEC = NC [2,60 no] [2,35 nl] [2,17 nln]
Nota 2: Ejemplos: Lichrosorb (Merck) RP 18 Art
50333;
Lichrosphere (Merck) 100 CH 18 Art 50377 o
similares.
Recomendacin Panreac: 728032.46 Columna
para HPLC, cartucho ChromCart , CC250/4.6
Lichrospher 100 RP18,5 mm.
Nota 3: Algunos triglicridos de referencia tambin
permiten calcular la resolucin respecto a la triolena:
a= TR' /TR'olena
utilizando el tiempo de retencin corregido
TR' = TR TR disolvente.
La representacin grfica del log a frente a f
(nmero de enlaces dobles) permite determinar los
valores de retencin de todos los triglicridos de los
cidos grasos contenidos en los triglicridos de
referencia (vase la figura 2).
Figura 1
Cromatograma de una muestra de aceite de soja
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Nota: P: cido palmtico;
St: cido esterico;
O: cido oleico;
L: cido linoleico;
Ln: cido linolnico.
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Figura 2
Representacin grfica del log alfa frente a f (nmero de enlaces dobles)
Nota: La: cido lurico; My: cido mirstico; P: cido palmtico; St: cido esterico;
O: cido oleico; L: cido linoleico; Ln: cido linolnico.
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ANEXO IX
3. MATERIAL Y APARATOS
PRUEBA ESPECTROFOTOMTRICA EN EL
ULTRAVIOLETA
INTRODUCCIN
La prueba espectrofotomtrica en el ultravioleta
puede proporcionar indicaciones sobre la calidad
de una materia grasa, su estado de conservacin y
las modificaciones inducidas por los procesos tecnolgicos.
Las absorciones en las longitudes de onda indicadas en el mtodo se deben a la presencia de sistemas dinicos y trinicos conjugados. Los valores
de estas absorciones se expresan en extincin
especfica E1%,1cm (extincin de una solucin de
la materia grasa al 1% en el disolvente determinado,
en un espesor de 1 cm) que se expresar convencionalmente como K, tambin denominado coeficiente de extincin.
1. OBJETO
El mtodo describe el procedimiento de ejecucin de la prueba espectrofotomtrica en el ultravioleta de las materias grasas.
2. PRINCIPIO
La materia grasa se disuelve en el disolvente
requerido y se determina la extincin de la solucin
a las longitudes de onda prescritas, respecto al
disolvente puro. A partir de los valores espectrofotomtricos se calculan las extinciones especficas.
REACTIVO
Almina bsica para
cromatografa en columna
Ciclohexano de calidad para
espectrofotometra
Isooctano de calidad para
espectrofotometra
n-Hexano para cromatografa
3.1. Espectrofotmetro para medidas de extincin en el ultravioleta entre 220 y 360 nm, con posibilidad de lectura para cada unidad nanomtrica.
3.2. Cubetas de cuarzo, con tapadera, con
paso ptico de 1 cm. Las cubetas, llenas de agua o
de otro disolvente adecuado, no deben presentar
entre ellas diferencias superiores a 0,01 unidades
de extincin.
3.3. Matraces aforados de 25 ml.
3.4. Columna de cromatografa, de 270 mm de
longitud y 35 mm de dimetro en la parte superior:
de 270 mm de longitud y 10 mm de dimetro en la
parte inferior.
(Modificado por el Reglamento (CE) 183/93)
4. REACTIVOS
4.1. Isooctano (2,2,4-trimetilpentano) de calidad para espectrofotometra: debe tener, respecto al agua destilada, una transmitancia del 60%
como mnimo a 220 nm y del 95% como mnimo a
250 nm; o
ciclohexano de calidad para espectrofotometra: debe tener, respecto al agua destilada, una
transmitancia del 40% como mnimo a 220 nm y del
95% como mnimo a 250 nm. (Modificado por el
Reglamento (CE) 183/93)
4.2. Almina bsica para cromatografa en
columna, preparada y controlada como se describe en el apndice I.
4.3. n-Hexano para cromatografa.
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo Denominacin
121100 Aluminio xido Bsico PA
361250
362064
362063
5. PROCEDIMIENTO
5.1. La muestra debe ser perfectamente homognea y estar exenta de impurezas en suspensin.
Los aceites lquidos a temperatura ambiente se filtran con papel de filtro a una temperatura aproximada de 30C, las grasas slidas se homogeneizan y
se filtran a una temperatura superior en 10C como
mximo a su temperatura de fusin.
5.2. Se pesan con precisin 0,25 g aproximadamente de la muestra preparada y se colocan en
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APNDICE I
Preparacin de la almina y control de
su actividad
A.1.1. Preparacin de la almina
En un recipiente que pueda cerrarse hermticamente se echa la almina previamente desecada en
horno a 380-400C durante tres horas, se aade
agua destilada en una proporcin de 5 ml por 100 g
de almina, se cierra rpidamente el recipiente, se
agita repetidas veces y se deja reposar durante 12
horas como mnimo antes del uso.
A.1.2. Control de la actividad de la almina
Se prepara una columna para cromatografa con
30 g de almina. Se opera tal como se describe en
el apartado 5.4. Se hace pasar a travs de la
columna una mezcla formada por:
95% de aceite de oliva virgen, con extincin
especfica a 268 nm menor que 0,18,
5% de aceite de cacahuete tratado con tierras
decolorantes en el proceso de refinado, con una
extincin especfica a 268 nm mayor o igual que 4.
Si, despus del paso por la columna, la mezcla
presenta una extincin especfica a 268 nm mayor
que 0,11, la almina es aceptable; en otro caso se
debe aumentar el porcentaje de hidratacin.
APNDICE II
Ajuste del espectrofotmetro
A.2. El aparato debe revisarse peridicamente
(por lo menos cada seis meses) tanto en lo que se
refiere a la conformidad de la longitud de onda
como a la exactitud de la respuesta.
A.2.1. El control de la respuesta de la longitud
de onda puede hacerse mediante una lmpara de
vapor de mercurio o mediante filtros adecuados.
A.2.2. Para controlar la clula fotoelctrica y el
fotomultiplicador se procede como sigue: se pesan
0,2 g de cromato potsico de calidad para espectrofotometra, se disuelven, en un matraz aforado
de 1000 ml, en una solucin de hidrxido potsico 0,05N y se completa hasta el enrase. De la solucin obtenida se toman exactamente 25 ml, se
transvasan a un matraz aforado de 500 ml y se
completa hasta el enrase con la misma solucin de
hidrxido potsico.
Se mide la extincin a 275 nm de la solucin as
obtenida, utilizando la solucin de hidrxido potsico como referencia. La extincin medida en cubeta
de 1 cm deber ser de 0,200 0,005.
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REACTIVO
Cromato potsico
Hidrxido potsico 0,05N
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo Denominacin
121497 Potasio Cromato PA
181517 Prepararlo a partir de Potasio Hidrxido
1 mol/l (1N) SV diluido convenientemente
con agua
ANEXO X A
ANLISIS DE LOS STERES METLICOS
DE LOS CIDOS GRASOS MEDIANTE
CROMATOGRAFA DE GASES
1. OBJETO
El presente mtodo internacional proporciona
orientaciones generales para determinar, mediante
cromatografa de gases con columna de relleno o
capilar, la composicin cualitativa y cuantitativa de
una mezcla de steres metlicos de cidos grasos
obtenidos con arreglo al Anexo X B.
El mtodo no es aplicable a los cidos grasos
polimerizados.
2. REACTIVOS
2.1. Gas portador
Gas inerte (nitrgeno, helio, argn, hidrgeno,
etc.), perfectamente desecado y que contenga
menos de 10 mg/kg de oxgeno.
Nota 1: El hidrgeno, que slo se emplea como
gas portador en las columnas capilares, puede
duplicar la velocidad del anlisis, pero es peligroso.
Existen dispositivos de seguridad.
2.2. Gases auxiliares
2.2.1. Hidrgeno (pureza 99,9%) exento de
impurezas orgnicas.
2.2.2. Aire u oxgeno, exento de impurezas
orgnicas.
2.3. Patrn de referencia
Una mezcla de steres metlicos de cidos grasos puros, o los steres metlicos de una grasa de
composicin conocida y, preferentemente, similar a
la de la materia grasa objeto de anlisis.
Deber evitarse la oxidacin de los cidos grasos poliinsaturados.
3. APARATOS
Las normas que figuran a continuacin se refieren al equipo ordinario para cromatografa de
gases, utilizando columnas de relleno y/o capilares
y un detector de ionizacin de llama. Podr utilizarse cualquier aparato cuya eficacia y resolucin se
ajusten a lo dispuesto en el punto 4.1.2.
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a) longitud y dimetro de la columna;
b) composicin y cantidad de la fase estacionaria;
c) temperatura de la columna;
d) flujo del gas portador;
e) resolucin exigida;
f) tamao de la muestra problema, determinado
de modo que el conjunto del detector y el electrmetro d una respuesta lineal;
g) duracin del anlisis.
Como norma general, las cifras de las tablas 1 y 2
permitirn obtener los resultados deseados, es decir,
al menos 2000 platos tericos por metro de longitud
de columna en el caso del estearato de metilo, y su
elucin en 15 minutos aproximadamente.
Cuando el aparato lo permita, la temperatura del
inyector deber ser de 200C aproximadamente y la
del detector deber ser igual o superior a la de la
columna.
Por lo general, la razn entre la velocidad de flujo del hidrgeno suministrado al detector de ionizacin de llama y la del gas portador oscila entre 1:2 y
1:1, en funcin del dimetro de la columna. El flujo
del oxgeno es de 5 a 10 veces superior al del hidrgeno.
Tabla 1
Dimetro interior
de la columna
mm
2
3
4
15 a 25
20 a 40
40 a 60
dr1
n = 16
a1
:
Tabla 2
Concentracin
de la fase fija
% (m/m)
Temperatura
de la columna
C
5
10
15
20
175
180
185
185
4.1.1.2.Columna capilar
Las propiedades de eficacia y permeabilidad de
las columnas capilares implican que la separacin
de los constituyentes y la duracin del anlisis
dependen considerablemente del flujo del gas portador en la columna. Por lo tanto, para optimizar las
condiciones operativas ser necesario manipular
este parmetro (o, lo que es ms sencillo, la presin
en cabeza de columna) segn se desee mejorar las
separaciones o efectuar un anlisis rpido.
4.1.2. Determinacin del nmero de platos tericos (eficacia) y de la resolucin (figura 1)
Efectuar el anlisis de una mezcla de estearato
de metilo y de oleato de metilo (por ejemplo, steres
b
siendo:
a : altura del pico ms pequeo, medida a partir
de la lnea de base;
b : altura del punto ms bajo del valle comprendido entre los dos picos adyacentes, medida
a partir de la lnea de base.
(Modificado por el Reglamento (CEE)
N 1429/92)
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Figura 1
Cromatograma para determinar el nmero de platos tericos (eficacia) y la resolucin
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4.4. Preparacin del cromatograma y las grficas de referencia
Analizar la mezcla patrn de referencia (2.3) aplicando las mismas condiciones de ensayo que a la
muestra y medir los tiempos o las distancias de
retencin de los cidos grasos que la componen.
Representar grficamente en papel semilogartmico, para cualquier grado de insaturacin, el logaritmo del tiempo o de la distancia de retencin en funcin del nmero de tomos de carbono. En
condiciones isotrmicas, las grficas de los steres
de cadena lineal con el mismo grado de insaturacin deben formar lneas rectas. Dichas lneas rectas deben ser aproximadamente paralelas.
Deben evitarse las condiciones que propicien la
existencia de picos ocultos, es decir, una resolucin insuficiente para separar dos componentes.
5. EXPRESIN DE LOS RESULTADOS
5.1. Anlisis cualitativo
Identificar los picos del estearato de metilo de la
muestra a partir de los grficos citados en el punto
4.4, si es necesario por interpolacin.
5.2. Anlisis cuantitativo
5.2.1. Determinacin de la composicin
Salvo en casos excepcionales, utilizar el mtodo
de normalizacin interna, es decir, partir del principio de que todos los componentes de la muestra
estn representados en el cromatograma, de
manera que el total de las reas situadas debajo de
cada pico representa el 100% de los constituyentes
(elucin total).
Si el equipo incluye un integrador, utilizar las
cifras que ste proporcione. En caso contrario,
determinar el rea situada debajo de cada pico multiplicando la altura del pico por el ancho a la mitad
de la altura y, cuando sea necesario, tomar en consideracin las atenuaciones utilizadas durante el
registro.
5.2.2. Mtodo de clculo
5.2.2.1.Caso general
Calcular el contenido de un componente dado (i)
(expresado como porcentaje en masa de steres
metlicos), mediante la determinacin del porcentaje
que representa el rea de su pico en relacin con la
suma de las reas de todos los picos, aplicando la
frmula siguiente:
Ai
x 100
A
siendo:
Ai : rea del pico correspondiente al componente i.
A : suma de las reas de todos los picos.
Expresar el resultado con una cifra decimal.
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Figura 2
Cromatograma de gases tipo relativo a la determinacin de los ismeros trans
de los cidos grasos con columna capilar
Cromatograma de gases tipo relativo a la determinacin de los ismeros trans de los cidos
grasos con la columna capilar 726089.60 (recomendacin Panreac)
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Para la determinacin de la composicin cualitativa y cuantitativa de una mezcla de steres metlicos de cidos grasos tambin podr utilizarse un
cromatgrafo de gases provisto de un detector
cuyo funcionamiento se base en el principio de los
cambios de conductividad trmica (catarmetro).
En ese caso, las condiciones establecidas en los
puntos 3 y 4 debern modificarse como se indica
en la tabla 3.
Para el anlisis cuantitativo, utilizar los factores
de correccin definidos en el punto 5.2.2.2.
Tabla 3
Variable
Longitud: 2 a 4 m
Dimetro interior: 4 mm
Soporte
Gas portador
Gases auxiliares
Ninguno
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Valor / condicin
Columna
ANEXO X "B"
En el informe del anlisis se expondrn los mtodos utilizados para la preparacin de los steres
metlicos y para la realizacin del anlisis mediante
cromatografa de gases, as como los resultados
obtenidos. Se mencionarn, asimismo, cualesquiera procedimientos de trabajo que no se especifiquen en la presente norma internacional o que se
consideren facultativos, as como toda circunstancia que pueda haber influido en los resultados.
INTRODUCCIN
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En particular:
cuando se trate de materias grasas que contengan cidos grasos inferior a C12, slo podrn utilizarse los procedimientos en tubo cerrado o con
dimetlico,
cuando se trate de materias grasas con una
acidez superior al 3%, slo podrn utilizarse los
procedimientos con mezcla de metanol y cido
clorhdrico o con sulfato dimetlico,
en la determinacin mediante cromatografa
de gases de los ismeros trans, slo podrn utilizarse los procedimientos con metilato sdico o con
sulfato dimetlico,
el procedimiento con mezcla de metanol,
hexano y cido sulfrico deber utilizarse en la preparacin de los steres metlicos de pequeas cantidades de materias grasas por separacin mediante cromatografa en capa fina.
No se tendr en cuenta el insaponificable cuando no supere el 3%; en caso contrario, los steres
metlicos debern prepararse a partir de los cidos
grasos.
Procedimiento A
2. PRINCIPIO DEL MTODO
La materia grasa objeto de anlisis se calienta a
reflujo con alcohol metlico y metilato sdico. Los
steres metlicos que se obtengan se extraen con
ter etlico.
3. MATERIAL Y APARATOS
3.1. Matraz redondo de 100 ml con refrigerante
de reflujo, provisto en su extremidad superior de un
tubo para cal sdica, con junta esmerilada.
3.2. Probetas de 50 ml.
3.3. Pipeta de 5 ml graduada en divisiones de
0,1 ml.
3.4. Embudos de separacin de 250 ml.
3.5. Matraz redondo de 200 ml.
1. OBJETO
4. REACTIVOS
A continuacin se describen cinco procedimientos para la preparacin de los steres metlicos de
las materias grasas:
a) con metilato sdico;
b) con metilato sdico en tubo cerrado;
c) con mezcla de metanol y cido clorhdrico en
tubo cerrado;
d) con sulfato dimetlico;
REACTIVO
Cloruro sdico
ter de petrleo 40-60C
ter etlico
Metanol anhidro
Sodio metal
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo Denominacin
131659 Sodio Cloruro PA-ACS-ISO
131315 Eter de Petrleo 40-60C PA-ISO
132770 Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT
PA-ACS-ISO
481091 Metanol seco (mx. 0,01% de agua)
DS-ACS-ISO
131699 Sodio metal, barras PA-ACS
5. PROCEDIMIENTO
5.1. Introducir en el matraz de 100 ml 2 g de
grasa previamente deshidratada en sulfato sdico y
filtrada. Aadir 35 ml de metanol, acoplar el refrigerante y llevar a ebullicin mantenindola a reflujo
durante algunos minutos.
5.2. Interrumpir el calentamiento, separar el
refrigerante y aadir rpidamente 3,5 ml de la solucin de metilato sdico; acoplar nuevamente el
refrigerante y hervir a reflujo durante 3 horas como
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Procedimiento B
3. MATERIAL Y APARATOS
3.1. Tubo de vidrio de paredes gruesas, de
unos 5 ml (altura: 40-45 mm, dimetro: 14-16 mm).
3.2. Pipeta de 1 ml graduada en divisiones de
0,1 ml.
4. REACTIVOS
4.1. Solucin de metilato sdico en metanol al
1,5% aproximadamente. Se prepara disolviendo
0,50 g de sodio metal en 100 ml de metanol anhidro.
REACTIVO
Metanol anhidro
Sodio metal
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo Denominacin
481091 Metanol seco (mx. 0,01% de agua)
DS-ACS-ISO
131699 Sodio metal, barras PA-ACS
5. PROCEDIMIENTO
Procedimiento C
5.1. Introducir en el tubo de vidrio 2 g de materia grasa previamente deshidratada en sulfato sdico y filtrada. Aadir 0,3 g (unos 0,4 ml) de la solucin de metilato sdico y cerrar el tubo a la llama.
5.2. Mantener el tubo durante dos horas al
bao Mara a una temperatura entre 85 y 90C agitndolo de vez en cuando. La esterificacin se
habr conseguido cuando se vuelva transparente el
contenido del frasco tras la sedimentacin de la glicerina y de los residuos de los reactivos.
5.3. Enfriar a temperatura ambiente. Abrir el
tubo cuando se vayan a utilizar los steres metlicos. stos no necesitan de ninguna otra manipulacin antes de ser analizados.
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REACTIVO
Hexano de calidad adecuada
para cromatografa
Metanol anhidro
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo Denominacin
362063 n-Hexano (UV-IR-HPLC) PAI
481091
Panreac Aceites
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M
5. PROCEDIMIENTO
3. MATERIAL Y APARATOS
Procedimiento D
2. PRINCIPIO DEL MTODO
La materia grasa objeto de anlisis se saponifica
con una solucin en alcohol metlico de hidrxido
potsico, y despus se trata con sulfato dimetlico.
Tras aadir cido clorhdrico, los steres metlicos
formados se separan espontneamente. Mediante
el tratamiento posterior con almina, se obtienen
steres metlicos de elevada pureza.
REACTIVO
cido clorhdrico concentrado (d = 1,19)
Alcohol metlico de calidad
adecuada para cromatografa
Hidrxido potsico
xido de aluminio
Solucin al 0,05% del indicador verde
de bromocresol en alcohol metlico
Sulfato dimetlico (d = 1,335 a 15C)
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo Denominacin
131020 cido Clorhdrico 37% PA-ACS-ISO
361091 Metanol (UV-IR-HPLC-HPLC preparativa) PAI
121515
121100
281760
162714
Dimetilo Sulfato PS
5. PROCEDIMIENTO
5.1. Introducir en el tubo de ensayo de 20 ml
unos 2,2 ml de materia grasa previamente deshidratada en sulfato sdico y filtrada; aadir 5 ml de la
solucin de hidrxido potsico y algunos granos de
piedra pmez para regular la ebullicin. Acoplar el
refrigerante de reflujo y calentar agitando sobre llama pequea durante 5 minutos. Para que la saponificacin sea completa, la solucin deber volverse
transparente. Por ltimo, enfriar en agua corriente y
separar el refrigerante.
5.2. Aadir dos gotas del indicador y, lentamente, con la ayuda de una jeringa, 1 ml de sulfato
dimetlico. Cerrar hermticamente el tubo de ensayo y agitar durante dos o tres minutos, introduciendo con frecuencia el fondo del tubo en agua hirvien-
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Procedimiento E
3.2.
3.3.
3.4.
3.5.
REACTIVO
cido sulfrico concentrado
ter de petrleo 40-60C
Hexano
Metanol anhidro
Sulfato sdico anhidro
4. REACTIVOS
4.1. Reactivo de metilacin: metanol anhidro,
hexano y cido sulfrico concentrado (d = 1,84)
en la siguiente proporcin: 75:25:1 (V/V/V).
4.2. ter de petrleo 40-60C.
4.3. Sulfato sdico anhidro.
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo Denominacin
131058 Acido Sulfrico 96% PA-ISO
131315 Eter de Petrleo 40-60C PA-ISO
132063 n-Hexano PA-ACS
481091 Metanol seco (mx. 0,01% de agua)
DS-ACS-ISO
131716 Sodio Sulfato anhidro PA-ACS-ISO
5. PROCEDIMIENTO
48
rarse con antelacin cantidades grandes de solucin metanlica de cido clorhdrico, ya que se conserva en perfectas condiciones en la oscuridad
dentro de botellas con tapones de vidrio.
Nota 2: Para controlar la ebullicin, introducir
una varita de vidrio en el tubo y limitar la temperatura del bao Mara a 90C.
ANEXO XI
DETERMINACIN DEL CONTENIDO EN
SOLVENTES HALOGENADOS VOLTILES
EN EL ACEITE DE OLIVA
1. PRINCIPIO DEL MTODO
Anlisis por cromatografa en fase gaseosa segn
la tcnica del espacio de cabeza (head space).
2. EQUIPO
2.1. Cromatografa de gases con detector de
captura de electrones (ECD).
2.2. Equipo para espacio de cabeza (head space).
2.3. Columna de cromatografa en fase gaseosa de vidrio de 2 metros de largo y 2 mm de dimetro, fase estacionaria.
OV 101 al 10% impregnado en cromosorb WAW-DMCS (tierra de diatomeas calcinada lavada
con cido y silanizado (80-100 Mesh).
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M
Recomendacin Panreac: 726785.50 Columna
capilar OPTIMA 624, 50 m long., 0,25 mm ID,
1,40 m espesor.
2.4. Gas portador y gas auxiliar: nitrgeno para
cromatografa de gases de pureza adecuada para
la deteccin por captura de electrones.
2.5. Frascos de cristal de 10 a 15 ml provistos
de septum de tefln y con una cpsula de aluminio
con un orificio para toma de muestras con jeringa.
Recomendacin Panreac: 70205.36 Vial encapsulable N 20-10 DIN, incoloro.
70234 Cpsula de aluminio con disco N 20
TB/oA color aluminio.
2.6. Pinzas capsuladoras para cerrar hermticamente.
Recomendacin Panreac: 735120 Encapsuladora manual, N 20 para tapones encapsulables de
20 mm ID.
2.7. Jeringa para gases de 0,5 y 2 ml.
3. REACTIVOS
Solventes halogenados con una pureza apropiada para su uso en cromatografa en la fase gaseosa.
4. PROCEDIMIENTO DE ANLISIS
4.1. Pesar con exactitud unos 3 g de aceite en
un frasco de cristal (no reutilizable), tapar el frasco
de manera que quede cerrado hermticamente.
Introducir el frasco en un bao con termostato a
70C durante 1 hora. Extraer con precisin, por
medio de una jeringa, un volumen de 0,2 a 0,5 ml
del espacio de cabeza. Inyectarlo en la columna del
cromatgrafo de gases con las siguientes condiciones:
temperatura inyector: 150C
temperatura columna: 70-80C
temperatura detector: 200-250C
Podrn utilizarse otras temperaturas siempre
que los resultados sean equivalentes.
La inyeccin se puede realizar con el equipo
para espacio de cabeza.
4.2. Soluciones de referencia. Preparar solucio-
REACTIVO
Alcohol isoproplico puro para anlisis
Hexano para anlisis
Hidrxido de sodio
Solucin etanlica al 1 % de fenolftalena
nes patrn utilizando aceite de oliva refinado sin trazas de solventes con concentraciones en hidrocarburos halogenados de 0,05 a 1 ppm (mg/kg) segn
el contenido supuesto de la muestra. Para preparar
la solucin de referencia, si es necesario diluir previamente el hidrocarburo halogenado patrn, puede
utilizarse pentano.
Recomendacin Panreac: 362006 n-Pentano
(UV-IR-HPLC) PAI
4.3. Cuantificacin. Se efecta por clculo
mediante la relacin de reas o alturas del pico de
la muestra y de la solucin patrn cuya concentracin sea la ms prxima a la de la muestra. Si la
desviacin es superior al 10%, ser necesario volver
a hacer el anlisis, comparndolo con una nueva
solucin patrn de concentracin tal que se ajuste
a la desviacin relativa antes mencionada. El contenido se establecer efectuando la media de varias
inyecciones.
4.4. Expresin de los resultados. Los resultados
se expresarn en ppm (mg/kg). El lmite de deteccin del mtodo es de 0,01 mg/kg.
ANEXO XIII
1. NEUTRALIZACIN Y
DECOLORACIN DEL ACEITE DE
OLIVA EN LABORATORIO.
(Modificado por el Reglamento
(CE) 183/93)
1.1. Neutralizacin del aceite
1.1.1. Equipo
vaso de 300 ml de forma alta,
centrfuga con tubos de 100 ml,
vaso de 250 ml,
matraces de 100 ml,
ampolla de decantacin de 1 litro.
1.1.2. Reactivos
solucin acuosa de hidrxido de sodio al
12 %,
solucin etanlica al 1 % de fenolftalena,
hexano para anlisis,
alcohol isoproplico puro para anlisis.
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo Denominacin
131090 2-Propanol PA-ACS-ISO
132063 n-Hexano PA-ACS
131687 Sodio Hidrxido lentejas PA-ACS-ISO
281327 Fenolftalena solucin 1% RV
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ANEXO XIV
NOTAS COMPLEMENTARIAS 2, 3 Y 4 DEL
CAPTULO 15 DE LA NOMENCLATURA
COMBINADA
(Modificado por los Reglamentos (CE)
N 183/93, (CE) N 174/94, (CE) 656/95, (CE)
N 2472/97 y (CE) N 2248/98)
1. Nota 2A: Slo pertenecern a las partidas
nos 1509 y 1510 aceites que procedern exclusivamente del tratamiento de las aceitunas y cuyas
caractersticas analticas relativas al contenido de
cidos grasos y esteroles, establecidas mediante
los mtodos que figuran en los anexos V, X A y X B
del Reglamento (CEE) n 2568/91, sean las siguientes:
Cuadro I
Contenido de cidos grasos en porcentaje
de los cidos grasos totales
cidos grasos
cido mirstico
cido linolnico (1)
cido araqudico
cido eicosenoico
cido behnico (2)
cido lignocrico
Porcentajes
0,05
0,9
0,6
0,4
0,3
0,2
(1) 1,0 para los aceites de oliva virgen de las subpartidas 1509 10 10 y 1509 10 90 originarios de
Marruecos hasta el 31 de octubre de 2001.
(2) 0,2 para los aceites del n 1509
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Cuadro II
Contenido de esteroles en porcentaje
del total de esteroles
Esteroles
Colesterol
Brasicasterol (1)
Campesterol
Estigmasterol (2)
Beta-sitosterol (3)
Delta-7-estigmasterol
Porcentajes
0,5
0,1
4,0
< Campesterol
93,0
0,5
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sensorial igual o superior a 3,5, con arreglo a lo dispuesto en el anexo XII del Reglamento (CEE) n
2568/91;
h) un contenido de eritrodiol + uvaol no superior
a 4,5%;
ij) un contenido de cidos grasos saturados en
la posicin 2 de los triglicridos no superior a un
1,3%;
k) la suma de ismeros transoleicos no superior
a un 0,05% y la suma de ismeros translinoleicos +
translinolnicos no superior a un 0,05%;
l) un contenido de estigmastadienos no superior
a 0,15 mg/kg;
m) una diferencia entre la composicin segn la
HPLC y la composicin terica de los triglicridos
de ECN42 no superior a 0,2.
Nota 2C: Pertenecer a la subpartida 1509 90
el aceite de oliva obtenido por tratamiento de los
aceites de las subpartidas 1509 10 10 y/o 1509 10
90, incluso con adicin de aceite de oliva virgen,
que presente las caractersticas siguientes:
a) una acidez, expresada en cido oleico, no
superior a 1,5 g/100 g;
b) un contenido de ceras no superior a
350 mg/kg;
c) un coeficiente de extincin K270 no superior a
1,0;
d) una variacin del coeficiente de extincin (K)
en la zona de 270 nm no superior a 0,13;
e) un contenido de eritrodiol + uvaol no superior
a 4,5%;
f) un contenido de cidos grasos saturados en la
posicin 2 de los triglicridos no superior a un
1,5%;
g) la suma de los ismeros transoleicos no superior a un 0,20% y la suma de ismeros translinoleicos + translinolnicos no superior a un 0,30%;
h) una diferencia entre la composicin segn la
HPLC y la composicin terica de los triglicridos
de ECN42 no superior a 0,3.
52
ANEXO XV
1. CONTENIDO EN ACEITE DE LOS
ORUJOS DE ACEITUNA
1.1. Material
aparato de extraccin apropiado tipo soxhlet,
provisto de un matraz de 200 a 250 ml,
bao por calefaccin elctrica (bao de arena,
bao de agua, etc.) o placa calefactora,
balanza analtica,
estufa regulada a 80C como mximo,
estufa de calefaccin elctrica provista de un
dispositivo de termorregulacin regulada a 103C
2C y que permita realizar una insuflacin de aire o
una presin reducida,
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triturador mecnico fcil de limpiar y que permita el triturado del orujo sin calentamiento y sin
disminucin sensible de su contenido en agua y en
aceite,
cartucho de extraccin y algodn hidrfilo o
papel filtro, exentos de productos extrables por el
hexano,
(Consultar Tarifa Panreac. Filtracin-Cartuchos
de extraccin)
desecador,
REACTIVO
n-hexano tcnico
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo Denominacin
132063 n-Hexano PA-ACS
2. MODO DE OPERAR
2.1. Preparacin de la muestra para ensayo
Triturar la muestra para laboratorio, si fuera
necesario, en el triturador mecnico, previamente
bien limpio, para reducirla a partculas que puedan
atravesar completamente la criba.
Utilizar aproximadamente una vigsima parte de
la muestra para completar la limpieza del triturador,
tirar dicha mezcla, triturar el resto, recogerlo, mezclarlo con cuidado y analizarlo sin demora.
2.2. Toma de muestra
Pesar inmediatamente despus del triturado,
alrededor de 10 g de la muestra para ensayo con
una aproximacin de 0,01 g.
2.3. Preparacin del cartucho de extraccin
Colocar la toma de muestra en el cartucho y taparlo
con el tampn de algodn hidrfilo. En caso de
haber utilizado papel de filtro, envolver la muestra
molida en dicho papel.
2.4. Presecado
Cuando el orujo est muy hmedo (contenido en
agua y en materias voltiles superior al 10%), efectuar un presecado colocando durante un tiempo
conveniente el cartucho lleno (o el papel de filtro) en
la estufa calentada a 80C como mximo, para llevar el contenido en agua y en materias voltiles por
debajo del 10%.
2.5. Preparacin del matraz
Pesar con aproximacin de 1 g el matraz que
contenga 1 a 2 granos de piedra pmez, previamente secado en la estufa a 103C 2C y despus
enfriado durante al menos una hora en el desecador.
2.6. Primera extraccin
Colocar en el aparato de extraccin el cartucho
(o el papel de filtro) que contenga la muestra. Verter
en el matraz la cantidad necesaria de hexano.
Adaptar el matraz al aparato de extraccin y colocarlo todo sobre la placa calefactora. Llevar la calefaccin a tal estado que el caudal de reflujo sea al
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3.2. Repetitividad
La diferencia entre los resultados de las dos
determinaciones, efectuadas simultneamente o
rpidamente la una a continuacin de la otra mediante el mismo anlisis, no deber ser superior a 0,2 g
de extracto de hexano por cada 100 g de muestra.
En caso contrario, repetir sobre otras dos tomas
de muestra. Si esta vez la diferencia es de nuevo
superior a 0,2 g tomar como resultado la media aritmtica de las cuatro determinaciones efectuadas.
ANEXO XVI
DETERMINACIN DEL NDICE DE YODO
54
1. OBJETO
La presente norma internacional especifica un
mtodo para la determinacin del ndice de yodo de
las grasas y aceites animales y vegetales, en lo
sucesivo denominados grasas.
2. DEFINICIN
A los fines de la presente norma internacional,
se aplicar la definicin siguiente:
2.1 ndice de yodo: el peso de yodo absorbido
por la muestra en las condiciones de trabajo que se
especifican en la presente norma internacional.
El ndice de yodo se expresa en gramos de yodo
por 100 g de muestra.
3. PRINCIPIO
Disolucin de la muestra problema y adicin de
reactivo de Wijs. Una vez transcurrido el tiempo que
se especifica, adicin de solucin acuosa de yoduro
potsico y valoracin del yodo liberado con solucin de tiosulfato sdico.
4. REACTIVOS
Todos los reactivos sern de calidad analtica
reconocida.
4.1. Yoduro potsico, solucin de 100 g/l,
exento de yodatos o de yodo libre.
4.2. Engrudo de almidn.
Mezclar 5 g de almidn soluble con 30 ml de
agua, aadir esta mezcla a 1 000 ml de agua en
ebullicin, hervir durante 3 minutos y dejar enfriar.
4.3. Solucin volumtrica patrn de tiosulfato sdico.
c (Na2S2O3. 5H2O) = 0,1 mol/l, valorada como
mximo 7 das antes de su uso.
4.4
Disolvente, preparado mezclando volmenes iguales de ciclohexano y cido actico.
4.5. Reactivo de Wijs, que contenga monocloruro de yodo en cido actico. Se utilizar reactivo
de Wijs comercializado.
Nota: El reactivo contiene 9 g de ICl3 + 9 g de I
en cido actico.
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M
REACTIVO
cido actico
Almidn soluble
Ciclohexano
Engrudo de almidn
Solucin volumtrica patrn de tiosulfato sdico
Yoduro potsico, solucin de 100 g/l
Reactivo de Wijs
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo Denominacin
131008 cido Actico glacial PA-ACS-ISO
121096 Almidn de Patata soluble PA
131250 Ciclohexano PA-ACS-ISO
283146 Almidn solucin 1% RV
181723 Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV
171543 Potasio Yoduro solucin 10% p/v RE
281590 Reactivo de Wijs 0,1 mol/l (0,2N) RV
5. MATERIAL
Material ordinario de laboratorio y, en particular,
lo siguiente:
5.1. Navecillas de vidrio, apropiadas para la
muestra problema y que puedan introducirse en los
matraces (5.2).
5.2. Matraces erlenmeyer de 500 ml de capacidad con boca esmerilada, provistos de sus correspondientes tapones de vidrio y perfectamente
secos.
6. PREPARACIN DE LA MUESTRA
QUE DEBER ANALIZARSE.
Secar la muestra homogeneizada con sulfato
sdico y filtrarla.
7. PROCEDIMIENTO
7.1. Tamao de la muestra
El peso de la muestra vara en funcin del ndice
de yodo previsto, como se indica en el cuadro 1.
Cuadro 1
ndice de yodo
previsto
Peso de la muestra
problema
menos de 5
5 - 20
21 - 50
51 - 100
101 - 150
151 - 200
3,00 g
1,00 g
0,40 g
0,20 g
0,13 g
0,10 g
p
siendo:
c : valor numrico de la concentracin exacta,
expresada en moles por litro, de la solucin
volumtrica patrn de tiosulfato sdico (4.3)
utilizada;
V1: valor numrico del volumen, expresado en
mililitros, de la solucin de tiosulfato sdico
(4.3) utilizada para el ensayo en blanco;
V2: valor numrico del volumen, expresado en
mililitros, de la solucin de tiosulfato sdico
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ANEXO XVII
MTODO PARA LA DETERMINACIN DE
ESTIGMASTADIENOS EN LOS ACEITES
VEGETALES
1. OBJETIVOS
Determinacin de estigmastadienos en los aceites vegetales que presentan bajas concentraciones
de dichos hidrocarburos, particularmente en el aceite de oliva virgen y en el aceite de orujo de oliva sin
refinar.
2. APLICACIN
Se trata de una norma aplicable a cualquier
aceite de origen vegetal, teniendo en cuenta que
nicamente se obtendrn medidas fiables cuando
el contenido de estos hidrocarburos se halle incluido en un margen de 0,01 a 4,0 mg/kg. El mtodo
resulta especialmente adecuado para detectar la
presencia de aceites vegetales refinados (aceites de
oliva, orujo de oliva, girasol, palma, etc.) en el aceite
de oliva virgen, dado que los aceites refinados contienen estigmastadienos y los aceites vrgenes no.
3. FUNDAMENTO
Aislamiento de la materia insaponificable. Separacin de la fraccin de hidrocarburos esteroideos
mediante cromatografa en columna de gel de slice
y anlisis mediante cromatografa de gases en
columna capilar.
4. INSTRUMENTAL
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M
Recomendacin Panreac: 815330 Adsorbente
de slica 60, 0,063-0,2 mm.
Nota 4.
Por lo general, el gel de slice puede utilizarse
directamente a partir del envase sin necesidad de
tratamiento. Sin embargo, algunos lotes de slice
pueden presentar baja actividad produciendo separaciones cromatogrficas inadecuadas. Cuando ello
ocurra debe tratarse el gel de slice de la siguiente
manera: activar el gel calentndolo a 550C durante
un mnimo de cuatro horas. Tras el calentamiento
poner el gel de slice a enfriar en un desecador y
trasvasarlo a continuacin a un matraz con cierre
hermtico. Se aade seguidamente un 2% de agua
agitando hasta que dejen de verse grumos y el polvo fluya libremente.
Si algn lote de gel de slice origina cromatogramas con picos que interfieran, dicho gel ser sometido al tratamiento anteriormente mencionado. Puede considerarse como alternativa la utilizacin de gel
de slice 60 extrapuro (referencia 7754 de Merck).
REACTIVO
Etanol de 96 v/v
Etanol
Hexano
Hidrxido potsico
Sulfato sdico anhidro
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo Denominacin
121085 Etanol 96% v/v PA
132063
121515
131716
6. METODOLOGA
6.1. Preparacin de la materia insaponificable:
6.1.1. Pesar 20 0,1 g de aceite en un matraz
de 250 ml (4.1), aadir 1 ml de solucin patrn de
colesta-3,5-dieno (20 g) y 75 ml de potasa alcohlica al 10%, colocar un refrigerante de reflujo y
calentar a ebullicin suave durante 30 minutos.
Retirar de la fuente de calor el matraz con la muestra y dejar enfriar ligeramente la solucin (el enfriamiento no debe ser total para evitar la decantacin
de la muestra). Aadir 100 ml de agua y pasar la
solucin a un embudo de decantacin (4.2) con
ayuda de 100 ml de hexano. Agitar enrgicamente
durante 30 segundos y dejar decantar.
Nota 6.
Si se produce emulsin, que no desaparece
rpidamente, aadir pequeas cantidades de etanol.
6.1.2. Pasar la fase acuosa inferior a un segundo
embudo de decantacin y someterla nuevamente a
extraccin con 100 ml de hexano. Separar nuevamente la fase inferior y lavar los extractos de hexano
(mezclndolos en otro embudo de decantacin)
con tres porciones de 100 ml cada una de una
n-Hexano PA-ACS
Potasio Hidrxido 85% lentejas PA
Sodio Sulfato anhidro PA-ACS-ISO
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deteccin:
aproximadamente
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Figura 1
Cromatogramas procedentes del
anlisis de muestras de aceite de oliva
en columna capilar de slice fundida
(0,25 mm de dimetro interno x 25 m)
recubierta con una pelcula de 0,25 mm
de grosor de 5%-fenilmetilsilicona.
a) Primera fraccin (30 ml) de un
aceite virgen marcado con el patrn.
b) Segunda fraccin (40 ml) de un
aceite de oliva que contiene 0,10 mg/kg
de estigmastadienos.
c) Segunda fraccin (40 ml) que
incluye una pequea proporcin de la
primera.
Figura 2
Cromatograma procedente del anlisis de una muestra de aceite de oliva
refinado en una columna DB-5, en el
que se aprecia el ismero del estigmasta-3,5-dieno.
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ANEXO XVIII
(Reglamento (CE) N 2472/97, modificado por
Reglamento (CE) N 282/98)
DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE
TRIGLICRIDOS CON ECN42 (DIFERENCIA
ENTRE EL CONTENIDO TERICO Y LOS
DATOS OBTENIDOS POR HPLC)
1. OBJETO
Determinacin de la composicin de triglicridos
(TG) de los aceites de oliva, expresados en su nmero equivalente de carbonos (ECN) en funcin de las
diferencias existentes entre el contenido terico, calculado a partir de la composicin de cidos grasos,
y los resultados analticos obtenidos mediante cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC).
2. CAMPO DE APLICACIN
La presente norma es aplicable a los aceites de
oliva. El mtodo puede utilizarse para detectar la presencia de pequeas cantidades de aceites de semillas (ricos en cido linoleico) en todos los tipos de
aceites de oliva.
3. PRINCIPIO
El contenido terico de triglicridos con ECN42
(calculado sobre la base de la determinacin de la
composicin de cidos grasos mediante GLC) y el
contenido de triglicridos con ECN42 determinado
mediante HPLC se corresponden dentro de unos
lmites en el caso de los aceites puros. Las diferencias superiores a los valores establecidos en el
Reglamento respecto a cada tipo de aceite indican
que el aceite contiene aceites de semillas.
4. MTODO
El mtodo para calcular el contenido terico de
triglicridos con ECN42 y su diferencia respecto a
los datos obtenidos mediante HPLC consiste esencialmente en coordinar los datos analticos obtenidos
por otros mtodos. Pueden distinguirse tres fases:
determinacin de la composicin de cidos grasos
mediante cromatografa de gases en columna capilar, clculo de la composicin terica de triglicridos
con ECN42, y determinacin de los triglicridos con
ECN42 mediante HPLC.
60
4.1. Aparatos
4.1.1. Matraces redondos de 250 y 500 ml.
4.1.2. Vasos de precipitados de 100 ml.
4.1.3. Columna de cromatografa de vidrio, de
21 mm de dimetro interior y 450 mm de longitud,
con grifo y cono (hembra) normalizado en el extremo
superior.
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M
REACTIVO
Acetona
Acetonitrilo
ter de petrleo, 40-60C,
grado cromatogrfico
ter etlico
Gel de slice, 70-230 mallas
Lana de vidrio
Tripalmitina
RECOMENDACIN PANREAC
Cdigo Denominacin
361007 Acetona (UV-IR-HPLC) PAI
261881 Acetonitrilo (HPLC-isocrtico-preparativa)
PAI
361315 ter de Petrleo 40-60C (UV) PAI
362551
815330
211376
A10922
61
Panreac Aceites
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Abreviatura
Peso molecular
(PM)
ECN
cido palmtico
cido palmitoleico
cido esterico
cido oleico
cido linoleico
cido linolnico
P
Po
S
O
L
Ln
256,4
254,4
284,5
282,5
280,4
278,4
16
14
18
16
14
12
4.5.3. Transformacin del % superficie en moles para todos los cidos grasos
% sup. P
moles P =
PM P
% sup. S
moles S =
PM S
% sup. Po
moles Po =
PM Po
62
(1)
% sup. O
moles O =
PM O
% sup. L
moles L =
PM L
% sup. Ln
moles Ln =
PM Ln
Panreac Aceites
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M
4.5.4. Normalizacin al 100% de los cidos grasos
moles P * 100
% moles P (1,2,3) =
moles (P + S + Po + O + L + Ln)
moles S * 100
% moles S (1,2,3) =
moles (P + S + Po + O + L + Ln)
moles Po * 100
% moles Po (1,2,3) =
moles (P + S + Po + O + L + Ln)
moles O * 100
% moles O (1,2,3) =
moles (P + S + Po + O + L + Ln)
(2)
moles L * 100
% moles L (1,2,3) =
moles (P + S + Po + O + L + Ln)
moles Ln * 100
% moles Ln (1,2,3) =
moles (P + S + Po + O + L + Ln)
(3)
63
(4)
Panreac Aceites
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% moles O(1,2,3)
% moles O(2) = * [100 % moles P(2) % moles S(2)]
% moles AGI
(5)
% moles L(1,2,3)
% moles L(2) = * [100 % moles P(2) % moles S(2)]
% moles AGI
% moles Ln(1,2,3)
% moles Ln(2) = * [100 % moles P(2) % moles S(2)]
% moles AGI
64
Panreac Aceites
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Pgina 65
M
4.5.6. Clculo de los triglicridos
4.5.6.1. TG con un cido graso (AAA; en este
caso, LLL, PoPoPo)
% moles A(1,3) * % moles A(2) * % moles A(1,3)
% moles AAA =
10 000
(7)
4.5.6.2.
TG con dos cidos grasos (AAB; en este caso,
PoPoL, PoLL)
% moles A(1,3) * % moles A(2) * % moles B(1,3) * 2
% moles AAB =
10 000
(8)
% moles A(1,3) * % moles B(2) * % moles A(1,3)
% moles ABA =
10 000
(9)
65
Panreac Aceites
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S
284,5
3,0
Po
O
L
Ln
254,4 282,5 280,4 278,4
1,0
75,0 10,0 1,0
66
Panreac Aceites
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M
(4.5.5.2.) cidos grasos insaturados en la posiciones 1 y 3 [Po(1,3), O(1,3), L(1,3) y Ln(1,3)]
1,097%
% moles Po(2) = * (100 0,659 0,177) = 1,263 % moles
Vase frmula (5)
86,169%
74,113%
% moles O(2) = * (100 0,659 0,177) = 85,295 % moles
86,169%
9,956%
% moles L(2) = * (100 0,659 0,177) = 11,458% moles
86,169%
1,003%
% moles Ln(2) = * (100 0,659 0,177) = 1,154% moles
86,169%
2,944 0,177
% moles S(1,3) = + 2,944 = 4,327% moles
2
1,097 1,263
% moles Po(1,3) = + 1,097 = 1,015% moles
2
74,113 85,295
% moles O(1,3) = + 74,113 = 68,522% moles
2
9,956 11,458
% moles L(1,3) = + 9,956 = 9,205% moles
2
1,003 1,154
% moles Ln(1,3) = + 1,003 = 0,927% moles
2
Posicin 1 y 3
16,005%
4,327%
1,015%
68,522%
9,205%
0,927%
100,0%
Posicin 2
0,653%
0,177%
1,263%
85,295%
11,458%
1,154%
100,0%
67
Panreac Aceites
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(4.5.6.3.) TG con tres cidos grasos diferentes (PoPLn, OLLn, PLLn, PoOLn)
68
Panreac Aceites
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Pgina 69
M
1,015% * 1,154% * 16,005% * 2
% moles PoLnP = = 0,00375
10 000
0,00762 mol PPoLn
68,522% * 11,458% * 0,927% * 2
% moles OLLn = = 0,14577
10 000
0,927% * 85,295% * 9,205% * 2
% moles LnOL = = 0,14577
10 000
9,205% * 1,154% * 68,522% * 2
% moles LLnO = = 0,14577
10 000
0,43671 mol OLLn
16,005% * 11,458% * 0,927% * 2
% moles PLLn = = 0,03400
10 000
0,927% * 0,653% * 9,205% * 2
% moles LnPL = = 0,00111
10 000
9,205% * 1,154% * 16,005% * 2
% moles LLnP = = 0,03400
10 000
0,06911 mol PLLn
1,015% * 85,295% * 0,927% * 2
% moles PoOLn = = 0,01605
10 000
0,927% * 1,263% * 68,522% * 2
% moles LnPoO = = 0,01605
10 000
68,522% * 1,154% * 1,015% * 2
% moles OLnPo = = 0,01605
10 000
0,04815 mol PoOLn
ECN42 = 0,69540 mol TG
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Figura 1: Representacin grfica del log alfa frente a f (nmero de enlaces dobles)
Nota: La:cido lurico; My: cido mirstico; P: cio palmtico; St: cido esterico; O: cido oleico L: cido linoleico;
Ln: cido linolnico.
70
Panreac Aceites
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Pgina 71
M
Figura 2: aceite de soja
71
Panreac Aceites
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Pgina 72
Relacin de reactivos
y productos auxiliares
Panreac que se utilizan
en los mtodos de
Anlisis de Aceites y
Grasas
72
Panreac Aceites
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Pgina 73
M
361007
131007
261881
131881
131008
131019
131020
A17074
131030
131058
121096
283146
121100
A13805
361192
121221
121215
361250
131250
A11470
133606
162714
121085
361315
131315
132770
362551
281327
A10922
142061
A15139
362062
362063
132063
211376
361091
481091
362064
362006
211835
481457
121497
182146
181519
181517
121515
131542
171543
131090
281590
131659
181694
182415
131687
131699
131716
181723
131745
131252
A13651
131940
281760
815330.1
73
Panreac Aceites
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Pgina 74
Relacin de aditivos y
coadyuvantes
tecnolgicos para
uso alimentario
industrial
PANREAC QUIMICA, S.A., fabrica adems de
los reactivos para anlisis PANREAC, una lnea de
aditivos y coadyuvantes tecnolgicos para uso alimentario industrial, que cumplen las especificaciones de pureza prescritas por The Food Chemicals
Codex IV ed., complementadas con las exigencias
especficas prefijadas por la legislacin espaola y
comunitaria de la CEE.
En la relacin que sigue se indica denominacin
del producto, frmula y nmero de identificacin.
Para mayor informacin, solicite nuestro catlogo
ADITIO 2000.
74
Panreac Aceites
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Pgina 75
M
Cdigo
Producto
201003
204333
201007
201008
202342
201013
202034
202422
201014
201808
201018
201020
201019
202785
202512
Aceite de Vaselina
Acetofenona
Acetona
Acido Actico glacial
Acido Adpico
Acido L(+)-Ascrbico
Acido L-Asprtico
Acido DL-Asprtico
Acido Benzoico
Acido Ctrico anhidro
Acido Ctrico 1-hidrato
Acido Clorhdrico 37%
Acido Clorhdrico 35%
Acido Decanoico
Acido Esterico (mezcla de cidos
grasos)
Acido Etilendiaminotetraactico
Sal Disdica 2-hidrato
Acido Frmico 98%
Acido Frmico 85%
Acido orto-Fosfrico 85%
Acido Fumrico
Acido L-Glutmico
Acido L(+)-Lctico
Acido Lurico
Acido DL-Mlico
Acido Mirstico
Acido Nicotnico
Acido Octanoico
Acido Palmtico
Acido Propinico
Acido Srbico
Acido Succnico
Acido Sulfrico 95-98%
Acido Tnico
Acido L(+)-Tartrico
Agar
L-Alanina
DL-Alanina
Alcohol Benclico
Aluminio Amonio Sulfato
12-hidrato
Aluminio Potasio Sulfato
12-hidrato
Amonaco 30% (en NH3)
Amonaco 25% (en NH3)
Amonio Carbonato
Amonio Cloruro
Amonio Hidrgeno Carbonato
di-Amonio Hidrgeno Fosfato
Amonio di-Hidrgeno Fosfato
Amonio Hierro(III) Citrato pardo
Amonio Hierro(III) Citrato verde
Amonio Sulfato
L-Arginina
L-Arginina mono-Clorhidrato
201669
201030
201029
201032
202344
202042
201034
202368
202051
202591
203389
202786
202345
201810
201055
201883
201058
201065
201066
201792
202043
202035
201081
201102
201103
201130
201129
201119
201121
201116
201127
201126
202912
202028
201140
203464
204653
Sinnimos
Frmula
C8H8O
CH3COCH3
CH3COOH
(CH2CH2COOH)2
C6H8O6
C4H7NO4
C4H7NO4
C6H5COOH
C6H8O7
C6H8O7.H2O
HCl
HCl
C10H20O2
N de
identificacin
E-260
E-355
E-300
E-210
E-330
E-330
E-507
E-507
C18H36O2
Na2H2C10H12N2O8.2H2O
HCOOH
HCOOH
H3PO4
HOOCCHCHCOOH
C5H9NO4
CH3CHOHCOOH
C12H24 O2
C4H6O5
CH3(CH2)12COOH
C6H5NO2
C8H16O2
C16H32O2
CH3CH2COOH
C6H8O2
HOOCCH2CH2COOH
H2SO4
(CHOH)2(COOH)2
E-236
E-236
E-338
E-297
E-620
E-270
E-296
E-375
E-280
E-200
E-363
E-513
E-334
E-406
C3H7NO2
C3H7NO2
C6H5CH2OH
NH4Al(SO4)2.12H2O
AlK(SO4)2.12H2O
NH4OH
NH4OH
~(NH4)3(CO3)2H+NH2COONH4
NH4Cl
(Amonio Bicarbonato) NH4HCO3
(NH4)2HPO4
NH4H2PO4
(NH4)2SO4
C6H14N4O2
C6H15ClN4O2
E-523
E-522
E-527
E-527
E-503i
E-510
E-503ii
E-542ii
E-342i
E-381
E-381
E-517
75
Panreac Aceites
Cdigo
76
21/10/99 09:24
Pgina 76
Producto
Sinnimos
Frmula
N de
identificacin
C4H8N2O3
C14H10O4
C10H16N2O3S
C4H10O
C4H10O
(Metiletilcetona)
C4H8O
(BHA, Butilhidroxianisol) C11H16O2
C6H12O2
Ca(CH3COO)2.xH2O
CaCO3
Ca3(C6H5O7)2.4H2O
CaCl2.2H2O
CaCl2.6H2O
(Calcio Difosfato)
E-320
E-263
E-170i
E-333iii
E-509
E-509
~Ca(C18H35O2)2
C2H2CaO
~Ca3(PO4)2
C12H22CaO14.H2O
E-509
E-470a
E-238
E-341iii
E-578
CaH4(PO4)2.H2O
CaHPO4
E341i
E-341ii
CaHPO4.2H2O
Ca(OH)2
Ca(CH3CHOHCOO)2.5H2O
C6H10CaO4
CaSO4.2H2O
E-341ii
E-526
E-327
E-282
E-516
E-466
E-466
(BHT, Butilhidroxitoluol)
C6H12N2O4S2
C15H24O
ClCH2ClCH2
Cl2CH2
C12H26O
SnCl2.2H2O
CH3CH2OH
CH3CH2OH
CH3CH2OH
CH3COOC2H5
C5H10O3
C9H11NO2
C6H12O6
(Glicerol)
(Glicerol)
C3H8O3
C3H8O3
C9H14O6
H2NCH2COOH
E-466
E-921
E-321
E-512
E-422
E-422
E-1518
E-640
Panreac Aceites
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Pgina 77
M
Cdigo
Producto
201341
203140
202061
201076
201509
D(+)-Glucosa
D(+)-Glucosa 1-hidrato
Goma Arbiga polvo
Hidrgeno Perxido 30% p/v
(100 vol.) estabilizado
Hierro(III) Fosfato x-hidrato
Hierro(II) Sulfato 7-hidrato
L-Histidina
L-Histidina mono-Clorhidrato
1-hidrato
Lactosa 1-hidrato
L-Leucina
D(+)-Limoneno
Magnesio Cloruro 6-hidrato
Magnesio Estearato
tri-Magnesio di-Fosfato
5-hidrato
Magnesio Hidrgeno Fosfato
3-hidrato
Magnesio Hidroxicarbonato
5-hidrato
Magnesio Oxido
Magnesio Sulfato 7-hidrato
Manganeso(II) Cloruro
4-hidrato
Manganeso(II) Sulfato 1-hidrato
D(-)-Manita
Metanol
Metilo Benzoato
Metilo-4-Hidroxibenzoato
4-Metil-2-Pentanona
Parafina P.F. 51-53C
en lentejas
Parafina P.F. 60-65C
Potasio Acetato
Potasio Bromato
Potasio Carbonato
tri-Potasio Citrato 1-hidrato
Potasio Cloruro
Potasio Disulfito
tri-Potasio Fosfato 1,5-hidrato
Potasio Hexacianoferrato(II)
3-hidrato
Potasio Hidrgeno Carbonato
di-Potasio Hidrgeno Fosfato
anhidro
di-Potasio Hidrgeno Fosfato
3-hidrato
Potasio di-Hidrgeno Fosfato
201486
201515
201524
201855
204321
202515
201362
202045
202198
201375
202046
203385
201396
202029
201399
201927
201395
201276
201404
201410
201413
202067
201091
201949
203332
201430
203209
204621
201479
201487
201490
201492
201494
201522
201513
201505
201480
201512
202333
Sinnimos
Frmula
N de
identificacin
C6H12O6
C6H12O6.H2O
E-414
H2O2
FePO4.xH2O
FeSO4.7H2O
C6H9N3O2
C6H10ClN3O2.H2O
C12H22O11.H2O
C6H13NO2
C10H16
MgCl2.6H2O
~Mg(C18H35O2)2
(Magnesio
orto-Fosfato)
Mg3(PO4)2.5H2O
MgHPO4.3H2O
CH3COOK
KBrO3
K2CO3
K3C6H5O7.H2O
KCl
K2S2O5
K3PO4.1 1/2 H2O
(Potasio Ferrocianuro) K4Fe(CN)6.3H2O
(Potasio Bicarbonato) KHCO3
(di-Potasio
orto-Fosfato)
K2HPO4
(mono-Potasio
orto-Fosfato)
E-511
E-470b
E-343ii
E-504ii
E-530
E-518
E-421
E-218
E-261
E-924
E-501i
E-332ii
E-508
E-224
E-340iii
E-536
E-501ii
E-340ii
K2HPO4.3H2O
E-340ii
KH2PO4
(COO)2KH(CHOH)2
KOH
KNO3
KNO2
K4O7P2
E-340i
E-336i
E-525
E-252
E-249
E-450v
77
Panreac Aceites
Cdigo
21/10/99 09:24
Pgina 78
Producto
78
Sinnimos
(Lauril Sulfato
Sdico)
(Sodio Diacetato)
(Sodio Bicarbonato)
(di-Sodio
orto-Fosfato)
(mono-Sodio
orto-Fosfato)
(tetra-Sodio
Difosfato)
(tetra-Sodio
Difosfato)
Frmula
NaK(COO)2(CHOH)2.4H2O
CH3(CHCH)2COOK
K2SO4
K2SO3
K2(COO)2(CHOH)2.1/2H2O
KIO3
KI
C5H9NO2
CH2OHCHOHCH3
CH3CH2CH2OH
C10H12O5
CH3COONa
CH3COONa.3H2O
C6H7NaO6
C6H5COONa
Na2CO3
Na2CO3.H2O
Na2CO3.10H2O
Na3C6H5O7.2H2O
Na3C6H5O7.5 1/2 H2O
NaCl
Na2S2O5
C12H25NaSO4
Na3PO4.H2O
Na3PO4.12H2O
NaH2PO2.H2O
C5H8NNaO4.H2O
CH3COONaCH3COOH
NaHCO3
N de
identificacin
E-337
E-202
E-515i
E-336ii
E-310
E-262i
E-262i
E-301
E-211
E-500i
E-500i
E-500i
E-331iii
E-331iii
E-223
E-339iii
E-339iii
E-621
E-262ii
E-500ii
E-331ii
Na2HPO4
E-339ii
Na2HPO4.12H2O
E-339ii
NaH2PO4.H2O
E-339i
NaH2PO4.2H2O
H2Na2O7P2
NaOH
NaOH
C3H5NaO3
NaNO3
NaNO2
E-339i
E-450i
E-524
E-524
E-325
E-251
E-250
Na4P2O7
E-450iii
Na4P2O7.10H2O
(NaPO3)6
Na2SO4
Na2SO4.10H2O
Na2SO3
Na2(COO)2(CHOH)2
Na2(COO)2(CHOH)2.2H2O
E-450iii
E-452i
E-514i
E-514i
E-221
E-335ii
E-335ii
Panreac Aceites
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M
201721 Sodio Tiosulfato 5-hidrato
Na2S2O3.5H2O
N de
identificacin
Cdigo
Producto
Sinnimos
Frmula
203064
201733
202475
202101
204644
202049
202048
201786
201788
201787
D(-)-Sorbita
Talco lavado
Tierra Silcea purificada y calcinada
Titanio(IV) Oxido
DL-a-Tocoferol
L-Triptfano
Vainillina
Zinc Oxido
Zinc Sulfato 1-hidrato
Zinc Sulfato 7-hidrato
(Sorbitol)
C6H14O6
E-420i
E-553b
TiO2
C29H50O2
C11H12N2O2
C8H8O3
ZnO
ZnSO4.H2O
ZnSO4.7H2O
E171
E-307
79
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NOTAS
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M
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040 -15 - 1000 - 11/99.
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