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Roteiro

Evoluo da Automao em Hematologia


Histrico
Prefeitura Municipal de Brusque

Tecnologia
Novas aplicaes

Novas aplicaes em Hematologia

Cenrios

Impacto da tecnologia na soluo de problemas


Validao da rotina

1 Simpsio Dr. Verner Willrich de


Medicina Laboratorial
Brusque, 23 de agosto de 2008

Principais causas de problemas nos resultados


automatizados
Otimizao de processos

Estudo de casos clnicos


Concluso

Histrico

Evoluo da Hematologia
Zacharias Jansen 1595
2 lentes num tubo
aumento 3 9 x

Antonie van Leeuwenhoek


(1632 -1723)
- lente feita mo, ajustvel
- aumento 70 - 266 x

Cmara de Burker

Histrico

Evoluo da Automao em Hematologia

Determinao precisa do dimetro do


eritrcito humano
Jurin - 1718

Pro
ced
i me
nto
sm
anu
ais

Diferenciao dos leuccitos


Paul Ehrlich
Caractersticas estruturais
Clulas granulares e agranulares

Caractersticas qumicas
Clulas granulares
Basoflicas
Acidoflicas
Neutroflicas

um ncleo
polimorfonuclear
Paul Ehrlich 1845-1915

At 1960

Linha do tempo

Valores calculados

at 1960
Procedimentos manuais
Contagem de leuccitos,
eritrcitos, dosagem de
hemoglobina e determinao
do hematcrito

Hgb x 3 = Hcto
RBC x 3 = Hgb
RBC x 9 = Hct

Clculo dos ndces


hematimtricos
Contagem diferencial de 100
clulas no microscpio
Contagem de Plaquetas pelo
mtodo de Fonio

Evoluo da Automao em Hematologia

Dcadas de 60 - 70
Incio da semi-automao da contagem de clulas
Princpio da Impedncia

2 parmetros em 10 minutos

At 1960

Determinao eltrica das


Con
aut tador
o m es s
ati
zad emi
os

Pro
ced
ime
nto
sm
anu
ais

eltrica

clulas sangneas
Aprimoramento dos

TOA CCCC-1001

equipamentos
Resultados mais rpidos,
Linha do tempo

Anos 70

menos trabalhosos, mais

CC-800

7 parmetros em
90 seg.

confiveis

Impedncia

Parmetros determinados por impedncia


Curva de distribui
distribuio das
hem
hemcias

Eritrcitos
Curva de distribui
distribuio das
plaquetas

Plaquetas

Lei de Ohm: V = R x I
Baseado na obstruo da passagem da corrente eltrica
O pulso gerado diretamente proporcional ao tamanho da
partcula

Curva de distribui
distribuio
leucocit
leucocitria

Leuccitos

Eritrcitos e Plaquetas

Eritrcitos e Plaquetas
Discriminadores flutuantes

Histograma de plaquetas
100%

20%

PL

PU

Histograma de eritrcitos
100%

RBC

PLT

20%

12-30 fl 25-75 fl

2-6 fl

Histograma de eritrcitos

Histograma de plaquetas

RU

RL

PL

PU

RBC

PLT
2-6 fl

200-250 fl

RU

RL

12-30 fl

Eritrcitos e Plaquetas

RBC

PLT
200-250 fl

25-75 fl

Eritrcitos e Plaquetas

Discriminadores flutuantes
Histograma de eritrcitos

Histograma de plaquetas
100%

20%

PL

PU

Histograma de plaquetas
100%

RBC

PLT
2-6 fl

RU

RL

12-30 fl

RBC

20%

PLT
25-75 fl

200-250 fl

Histograma de plaquetas e eritrcitos

Os histogramas propiciam
anlise visual das populaes
de clulas

PL

PU

PLT
2-6 fl

Histograma de eritrcitos

RU

RL

RBC

12-30 fl 25-75 fl

200-250 fl

Alteraes na distribuio

Dupla populao
eritrocitria

VCM: tamanho dos eritrcitos

Microcitose

Automao da contagem diferencial

Evoluo da Automao em Hematologia

Contagem diferencial de 3 partes

At 1960

Linfcitos

C on
ta g
em
de 3 difer
-pa enci
rtes al

Con
aut tador
o m es s
ati
zad emi
os

Pro
ced
ime
nto
sm
anu
ais

Impedncia

Anos 70

Neutrfilos
Mistas
Eosinfilos

Moncitos

Linha do tempo

Anos 80

Exemplos

Contagem diferencial de 3 partes


Princpio de Impedncia eltrica

Reativo lisante

Neutrofilia

Linfocitose

Histograma WBC

Histograma WBC

Resultados
WBC
LYM%
MXD%
NEUT%

Antes da reao: um nico leuccito e


trs eritrcitos

KX-21N

Basfilos

Depois da reao: o leuccito se


contrai e os trs eritrcitos so
completamente lisados

Diferencial
+ 23.8 x 109/L
8.1%
7.9%
84.0%

Diagnstico clnico: Neutrofilia

Resultados
8%
77 %
7%
7%
1%
0%

Band
Seg
Lymph
Mono
Eo
Baso

(x 400)

50

100

150

200

250

Diferencial
7.9 x 109/L
+ 64.7%
15.8%
19.5%

Band
Seg
Lymph
Mono
Eo
Baso
Aty-Lym

Diagnstico clnico: Linfocitose

Pico proeminente e distribuio mais larga (NEUT%)


na regio dos grandes leuccitos.
Nos casos de linfopenia, ocorrer uma curva similar
0

WBC
LYM%
MXD%
NEUT%

4
20
64
4
5
0
3

%
%
%
%
%
%
%

(x 1000)

Pico agudo na regio de linfcitos (LYM%).


Nos casos de neutropenia, ocorrer uma curva
similar

300

Exemplos
Monocitose

Avanando no processo de automao...

Eosinofilia

Histograma WBC

Histograma WBC

Hematcrito

WBC
LYM%
MXD%
NEUT%

Resultados

Diferencial

Resultados

F1 *
F2 *

7.7 x 109/L
13.2%
37.7%
49.1%

Stab
Seg
Lymph
Mono
Eo
Baso
Met
Aty-Lym

Diagnstico clnico: Monocitose

8%
37 %
17 %
35 %
1%
0%
1%
1%

(x 1000)

Moncitos, os maiores leuccitos do sangue normal, ficam


menores que os neutrfilos devido ao reativo lisante. No
histograma, eles se posicionam na regio das clulas de
tamanho mdio (MXD%).

WBC
LYM%
MXD%
NEUT%

Diferencial
4.3 x 109/L
18,3%

+ 62,2%
19.5%

Stab
Seg
Lymph
Mono
Eo
Baso
My
Met
Aty-Lym

Diagnstico clnico: Eosinofilia

1
19
20
9
47
1
1
1
1

%
%
%
%
%
%
%
%
%

(x 1000)

Deteco da altura de pulsos cumulativos


O hematcrito medido somando o volume de cada
clula que passa pela abertura
Volume constante
volume
constante

= Pulso gerado de eritr


eritrcitos

Eosinfilos e basfilos, so granulcitos como os neutrfilos, mas


ficam menores devido a sua contrao na presena do reativo lisante.
No histograma, eles se posicionam na regio das clulas de tamanho
mdio, junto com os moncitos.
Portanto, eosinofilia ou monocitose devem ser diferenciados
manualmente.

Avanando no processo de automao...

Avanando no processo de automao...

RDW
Curva de distribuio de eritrcitos

Dosagem de hemoglobina
Mtodo SLS-HGB
Reativo livre de cianeto
Atxico
Ecologicamente correto
Minimiza os interferentes

RDW-CV
Homem: 11,9 - 12,9%
Mulher: 11,6 - 14,7%

RDW-SD
Homem: 39,9 - 46,3 fL
Mulher: 36,9 - 50,2 fL

em amostras:
Com lipemia
Com leucocitose
Com protenas elevadas

Clculo dos ndices hematimtricos

Evoluo da Automao em Hematologia

Analisadores hematolgicos com


diferencial de 5-partes

At 1960

Anos 70

Anos 80

Con
ta g
em
d
de
5-p iferen
art
es cial

Co n
t ag
em
de 3 difer
-pa enci
rtes al

Concentrao de Hemoglobina Corpuscular Mdia


CHCM (g/dL) = HGB (g/dL)__
HCT (%)

Co n
au tador
tom es
ati sem
zad
i
os

Hemoglobina Corpuscular Mdia


HCM (pg) = HGB (g/dL)__
RBC (x 106/uL)

Pro
ced
i me
nto
sm
anu
ais

Volume Corpuscular Mdio


HCT (%)___
VCM (fL) =
RBC (x 106/uL)

Anos 90

Linha do tempo

Citometria de Fluxo Fluorescente


Sistema ptico de deteco

Diversas combinaes de tecnologias


Foto Multiplicador
(Fluorescncia)

Citometria de fluxo

Impedncia
Condutividade
Citoqumica
Laser

Espelho Dicr
Dicrico

Foto Multiplicador
(Luz desviada
lateralmente)

Laser Semicondutor
( = 633 nm)
nm)

Clula de Fluxo
Foto Diodo
(Luz desviada frontalmente)

Citometria de fluxo fluorescente

Citometria de Fluxo Fluorescente


Anlise celular

Eosinfilo

Neutrfilo

Eosinfilo

Basfilo

Basfilo

Moncito

Linfcito

Moncito

Linfcito

2 tomos de nitrognio endocclicos produzem sinais de luz "brilhantes"

Amplificao da fluorescncia da ligao com os cidos nuclicos

Excitao e emisso do comprimento do onda com o uso de laser semicondutor

Citometria de Fluxo Fluorescente

Fluorescncia: corante Polimetina


Sem corar

Neutrfilo

XE-2100 Plus/D e XT-1800/2000

Corante
fluorescente

Canal WBC/Baso
Luz dispersa
frontal
Volume celular

do de RNA/DNA)
(conte
Fluorescncia (conte

Canal DIFF

Luz dispersa lateral


Complexidade interna

Luz dispersa lateral (estrutura interna celular)

Canal WBC DIFF

Populaes anormais

XS-1000i
CBC + DIFF

Citometria de fluxo
fluorescente
Grfico de disperso do
Canal WBC DIFF
Posicionamento celular
para uma populao
normal

Moncitos

Linfcitos

Neutrfilos

Eosinfilos
Fantasmas
RBC
Basfilos

Limitaes da contagem diferencial manual

Reprodutibilidade das contagens


diferenciais

Quantas clulas
Estatstica
Com o que se est comparando
Como est o esfregao
Onde est se realizando a contagem
Qual o padro

Realidade

Esfregao sangneo

Neutrfilos
e Moncitos
Distribuio irregular das clulas
Qualidade da colorao

Limitaes da contagem manual

Rumke C.L. The statistical expected variability in differential


leucocyte counting en Kopke JA Differential Leucocyte Counting
CAP 1978
Bacus JW. The observer error in peripheral blood leucocyte
classification Am J Clin Path 1973, 59, 223-230
Talstad I, Problems in microscopic and automatic differentiation
of blood and cell suspensions Scand J Haematol, 1981, 26, 398406
Bentley S.A. Quality control and the differential leucocyte count.
Clin Lab Haemat, 1990, 12 Suppl 1, 101-109
Kopke JA, Dotson MA, Shifman MA, A critical evaluation of the
manual/visual differential leucocyte counting method Blood Cells,
1985, 11, 173- 186
Goossens W, Van Hove L, Verwilghen RL, Monocyte counting,
discrepancies in results obtained with differential automated
instruments , J Clin Pathol, 1991, 44, 224-227

Citometria de fluxo fluorescente


Canal RET

Canal RET
Reticulcitos

Plaquetas
pticas

Canal NRBC

Canal DIFF

Citometria de fluxo fluorescente

Contagem de Eritroblastos

Canal de contagem de eritroblastos

Corrige automaticamente as
contagens de leuccitos e
linfcitos
Estes parmetros ficam marcados
com smbolo &

Citometria de fluxo fluorescente

Contagem de Plaquetas pticas

Canal de Reticulcitos e Plaquetas pticas


Canal RET
Reticulcitos

Volume
celular

Luz dispersa
frontal

Fluorescncia - Contedo de DNA/ RNA

Canal RET

Plaquetas
pticas

Alm disso tudo... Canal IMI

Alm disso tudo... Canal IMI

Corrente Direta e Radiofrequncia

Corrente Direta e Radiofrequncia

Radio frecuencia

Fa
nt
as
m
as

Granulocitos inmaturos

Blastos
Corriente directa
celular

Volume

Densidade
celular

Radio
frecuencia

Bandas

Fa
nt
as
m
as

Densidade celular

Plaquetas agregadas

Plaquetas agregadas

Bandas
Granulocitos
inmaturos
Blastos
Corriente directa
Volume celular

Evoluo da Automao em Hematologia

O que so novos parmetros?


Parmetros adicionais ao Hemograma

At 1960

Anos 70

Anos 80

No
vo
Aut s par
m
om
a etro
o to s e
tal

Con
ta g
em
d
de
5-p iferen
art
c
es ial

Con
t ag
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de 3 difer
-pa enci
rtes al

Con
aut tador
o m es s
ati
zad emi
os

Pro
ce d
ime
nto
sm
anu
ais

Aprovados pelo FDA (Food and Drug Administration)

Anos 90

Anos 2000
at hoje

Realizados por um analisador hematolgico


Sem reagente adicional
Aplicao laboratorial ou clnica

Linha do
tempo

Expanso para novos parmetros


Contagem automatizada de granulcitos imaturos
IG % e #

Parmetros:
Contagem automatizada de Granulcitos Imaturos - IG
Contagem de Plaquetas Reticuladas IPF
Contedo de Hemoglobina dos Reticulcitos RET- He

Plataforma tecnolgica nica


Tecnologia de Citometria de Fluxo Fluorescente
Softwares especficos

Contagem automatizada de granulcitos imaturos

Contagem de granulcitos imaturos - IG

Software IG Master
Canal DIFF

Quantifica clulas imaturas da linhagem mielide


Mielcitos
Promielcitos

Fluorescncia
Conte
do de RNA/DNA
Conte

Metamielcitos

Luz dispersa lateral


Complexidade interna celular

Contagem diferencial de 6-partes

Contagem de granulcitos imaturos

4
6
1
2
3
5

Laboratorio clnico central do hospital da


Universidade de Kyoto

Aplicao laboratorial

Aplicao clnica

Impacto direto na rotina

A presena de granulcitos
imaturos no sangue um
indicador para o diagnstico
precoce de sepse

Diminuio de contagens manuais


Aumento da quantidade de amostras
liberadas automaticamente
Diminuio da digitao de resultados
Menor quantidade de erros

LABORATORY BOTTLENECK

Diminuio do tempo para liberao


de resultados

Immature Myeloid Cell Detection (IMI,


IG) as a Predictive Marker in Adult
Sepsis- Axel Nierhaus
Immature Granulocyte Measurement
Using the Sysmex XE-2100. Relationship
to Infection and Sepsis M. Ali AnsariLari, MD, PhD, thomas S. Kickler, MD,
and Michael J. Borowitz, MD, PhD

Referncias bibliogrficas

Evaluation of the diagnostic performance of the Sysmex XT-2000i


automated hematology analyser in the detection of immature
granulocytes - CENCI A M(Ospedale S. Agostino, Modena, Ita), MACONI

Contagem de plaquetas reticuladas


IPF % e #

M(Azienda Ospedaliera Arcispedale Santa Maria Nuova,Reggio Emilia, Ita),


CASOLARI B(Ospedale S. Agostino, Modena, Ita)

Inmature granulocytes, inmature myeloid cells and outcome in adult


severe sepsis and septic shock
Evaluation of the Automated Immature Granulocyte Count (IG) on
Sysmex XE-2100 Automated Haematology Analyser vs. Visual
Microscopy (NCCLS H20-A) - Th WEILAND, H.K., ALKMAN and H H EIHN
(Central Laboratory, Barmbek General Hospital, R-benkamp 148, D-22291,
Hamburg, Germany, Institute for Laboratory Medicine, Medical Microbiology and
Hospital Hygiene, LBK Hamburg, Stiegkamp 3, 22763 Hamburg, Germany and
Sysmex Europe GmbH, Norderstedt, Germany

Flow Cytometric Method for Enumeration and Classification of


Reactive Immature Granulocyte Populations - FUJIMOTO H(Sysmex Corp.,
Kobe, Jpn) SAKATA T(Sysmex Corp., Kobe, Jpn) HAMAGUCHI Y(Sysmex Corp., Kobe,
Jpn) SHIGA S(Kyoto Univ., Kyoto, Jpn) TOHYAMA K(Kyoto Univ., Kyoto, Jpn) ICHIYAMA
S(Kyoto Univ., Kyoto, Jpn) WANG F-S(Loma Linda Univ. School Of Medicine,
California) HOUWEN B(Loma Linda Univ. School Of Medicine, California)

10

Plaquetas reticuladas

Plaquetas Reticuladas
Medula ssea

Anlogas aos reticulcitos da srie eritroctica

Sangue
Perifrico

Ingraham e Coopersmith (1969): estudos em ces

Plaquetas jovens, recentemente liberadas


pela medula ssea, com contedo de RNA
citoplasmtico

RNA

Megacaricito

Imaturas

Maduras

New Methilene Blue + microscopia ptica

Determinao da Frao das Plaquetas


Imaturas - IPF

Plaquetas reticuladas
So mais densas e reativas que as plaquetas maduras *

Canal de reticulcitos

Contribuem na avaliao da supresso e consumo


plaquetrio **
O contedo de RNA nas plaquetas est correlacionado
com a atividade megacarioctica
Presentes em diferentes patologias

Volume celular

Refletem a velocidade de trombopoiese

IPF

* McCabe e col., 2004; Mohan e col., 2006


Fluorescncia

** Saxon e col., 1998

Exemplos de casos
Normal

Exemplos de casos

ITP/PREG
Prpura Trombocitopnica Idioptica
(PTI)

Platelet count

227 (x10 /L)

IPF 3.4%

Platelet count

IPF 53.8%

IPF

IPF
Platelets

Anemia Aplstica (AA)

74 (x10 /L)

Platelets

Abe e col., 2006

11

Contagem de plaquetas reticuladas


Aplica
Aplicao Cl
Clnica
Diferenciar as causas de trombocitopenia
Falha da medula ssea
Plaquetas reticuladas(%) baixas

Aumento da produo devido ao


consumo ou destruio
Plaquetas reticuladas(%) altas

Artigos sobre aplicaes das Plaquetas Reticuladas


Aumento de Plaquetas Reticuladas - PR(%) - em pacientes submetidos
dilise (Himmelfarb e col., 1997)
Aumento de Plaquetas Reticuladas - PR(%) - em pacientes com
Insuficincia Renal Crnica tratados com rHUEPO (Tssie e col., 1998)
Aumento de Plaquetas Reticuladas - PR(%) - nos acidentes vasculares
cardioemblicos (Nakamura e col., 2002)
Diminuio de Plaquetas Reticuladas - PR(%) - em pacientes com
LMA, AA e trombocitopenia induzida quimioterapia(Watanabe e col, 1997)
Aumento de Plaquetas Reticuladas - PR(%) - trombocitemia essencial
(Harrison e col., 1998)
Aumento de Plaquetas Reticuladas - PRs (%) - em pacientes com
hipertiroidismo (Stiegler e col., 1998)
Aumento significativo das Plaquetas Reticuladas - PR(#) - na crise
vaso oclusiva (CVO) nas Sndromes Falciformes (Noronha e col., 2007)

A Clinical Evaluation of High Fluorescent Platelet Fraction Percentage in Thrombocytopenia


Thomas S. Kickler, MD, Sinichiro Oguni, and Michael J. Borowitz, MD, PhD

Contedo de hemoglobina nos reticulcitos


RET-He

Contedo de Hemoglobina dos Reticulcitos


RET- He (pg)

Diagnstico da deficincia funcional de ferro


Estoques de ferro esto completos, mas o ferro no est
disponvel para ser usado na sntese de hemoglobina

Anemia de doena crnica

Reticulocyte hemoglobin equivalent (ret He) and assessment of iron-deficient states


C. Brugnara, B. Schiller, J. Moran

Reticulcitos no sangue perifrico

Contedo de Hemoglobina nos Reticulcitos


RET-He

Aplica
Aplicao Cl
Clnica
Estgio 1
(0,1%)

Estgio 2
(7%)

Estgio 3
(32%)

Estgio 4
(61%)

Reticulcitos so precursores dos eritrcitos

A presena de reticulcitos no sangue demonstra a


atividade eritropoitica da medula ssea

Reticulcitos com contedo de hemoglobina < 28 pg so


chamados de reticul
reticulcitos hipocrmicos
A presena de reticul
reticulcitos hipocrmicos no
sangue demonstra a deficincia na sntese de
hemoglobina na medula ssea
A diminuio do contedo de hemoglobina nos
reticulcitos est relacionada com a deficincia de
ferro
Boa correlao com a colorao de Azul da Prssia
da medula ssea

Quantidade real de ferro para a sntese de


hemoglobina na medula ssea
Deteco precoce do nvel da deficincia de ferro,
quando os marcadores bioqumicos podem sofrer
interferncia pelos quadros de infeco,
inflamao ou gravidez
Monitora a terapia com eritropoetina nos pacientes
com anemia crnica
Usado em testes anti-dopping nas olimpadas de Atenas

12

Referncias na literatura

Anlise automatizada da eritropoese

Thomas C, Thomas L: Biochemical markers and


hematologic indices in the diagnosis of funcional iron
deficiency - Clin. Chem. 2002,48:1066

Franck S, Linssen J, Messinger M, Thomas L:


Potential utility of RET-Y in the diagnosis of ironrestricted erythropoesis - Clin. Chem. 2004,50:1240

Primeira dimenso RBC maduros


RBC/ HCT/ VCM/ HCM/ CHCM

RBC3

Segunda dimenso Informa


Informao da
produ
produo de RBC
RET#
Frao imatura dos reticulcitos-IRF

Terceira dimenso Informa


Informao
funcional de RBC

Hinzmann R: Iron metabolism, iron deficiency and

RET-He

anaemia from diagnosis to treatment and


monitoring Sysmex Journ. Intern. 2003, 13:65

Contagem automatizada de leuccitos e


eritrcitos em lquidos corporais

E ainda tem mais...

Lquor - LCR
Fludos corporais
Peritonial
Pleural
Sinovial
pr-tratado con hialuronidase

Automao da preparao de lminas


SP-1000i

Temos que fazer contagem diferencial e


anlise morfolgica manual!!

Opes de identificao
Servio remoto

Micro amostras

SP-1000i
Fcil Operao
Confeco de lminas
otimizada
Pr-fix extra

13

Automao da confeco e colorao do


esfregao

Hematologia em
constante evoluo...

IM
LV
VO
N
SE
DE

TO
EN

L
O
CN
E
T

IC
G

e laboratrios
com grande volume

para laboratrios com


pequeno volume

Sistematizao: linhas de automao HST

Automao da microscopia
Morfologia Digital Automatizada

CellaVision

DM96/DM8

Evoluo da Automao:
alm da tecnologia, depende tambm de como
ela utilizada

Cenrios

14

Anos 80
Procedimentos
manuais ou semiautomatizados

Laboratrios convivendo

Pouca disponibilidade
de equipamentos

Predomnio de pacientes

Grande quantidade de
colaboradores

Pouca presso em custos

Bons tempos!!!

em relativa tranquilidade

particulares

Anos 90
Expanso da automao em
Hematologia
Cdigo de barras/
interfaciamento

Fomos luta!!!

Aumento da quantidade de
clientes assistidos por
planos de sade
Presso por diminuio de

Aprimoramento das
tecnologias

custos

Liberao automtica de
resultados
Aumento da produtividade

Aumento da
competitividade
Associao de laboratrios

Investimento em treinamento

Cenrio atual
Sistematizao
Portfolio abrangente
Novas tecnologias e
parmetros
Aumento da produtividade
Educao

Bons tempos!!! Que no voltam mais...

Necessidade de
diminuio de custos
Fuses e aquisies de
laboratrios
Disposio geogrfica
variada
Mercado dinmico e
altamente competitivo

15

Reviso dos paradigmas

Existem solues!!! melhores que essa...

Qualidade a qualquer custo

Qualidade a um custo adequado


Qualidade ao menor custo possvel

Empresas competentes

Inovar

Diminuir custos

Empresas
competentes

Laboratrios

Qualidade

Foco no cliente

Tecnologia

Conhecimento

Processos
otimizados

Validao da rotina

Impacto da utilizao da tecnologia


na soluo de problemas

Implementao adequada
Calibrado corretamente

Protocolo de testes
baseado em protocolos de orgos normatizadores
como o CLSI (Clinical and Laboratory Standards
Institute) - NCCLS (National Committee for Clinical
Laboratory Standards), CLIA (FDA), entre outros
www.nccls.org
www.clsi.org
www.fda.gov/cdrh/clia/

16

Validao da rotina

Controle de qualidade

Validao da rotina
Controle de qualidade

Monitorizao da rotina

Controle comercial: alto, baixo e normal

Colaboradores capacitados e treinados

Grficos Levey-Jennings

Avaliao dos resultados

Controle Comercial

Programa de controle de qualidade


Sysmex-Streck KX-21N
Programa inter-laboratorial para os controles
comerciais de referncia
Os laboratrios recebem relatrios mensais com
comparaes entre os resultados do laboratrio e um
grupo de usurios do mesmo tipo de equipamento e
do mesmo lote de controles
Relatrio de fcil interpretao
Dados estatsticos
Grficos de Levey-Jennings

Sysmex Insight

Validao da rotina

Insight
Programa interlaboratorial de
avaliao da qualidade(CQ)
em tempo real
disponvel 24 horas por dia

Relatrio mensal do
comportamento do analisador

Controle de qualidade
Monitorizao da rotina
Mdias dos normais: XM
Reprodutibilidade

Relatrios completos e fceis


de interpretar
Grficos
Reportes numricos

17

Reprodutibilidade

Validao da rotina

Controle de qualidade
Monitorizao da rotina
Colaboradores capacitados e treinados

Educao

Treinamento

Fornecimento de conhecimentos,
mtodos ou tcnicas com objetivos
isolados em busca de resultados breves

Lembrar que...
Um conhecimento dura por volta de 3 meses
Uma reciclagem vale 2 anos

Diferenciao
Educao

Pessoas

Visa o desenvolvimento, aperfeioamento


do homem para o seu crescimento, tanto
pessoal como profissional

EDUCAO

Validao da rotina

Avaliao dos resultados


Conhecimento do equipamento

Controle de qualidade

Anlise dos histogramas e dos

Monitorizao da rotina

grficos de populaes leucocitrias


Sensibilidade dos alarmes

Colaboradores capacitados e treinados


Avaliao dos resultados

Sensibilidade = Liberao automtica

18

Avaliao dos resultados

A tecnologia pode auxiliar na


soluo dos problemas?

Conhecimento do equipamento
Anlise dos histogramas e dos grficos de populaes
leucocitrias
Sensibilidade dos alarmes

Microscopia
Monitora a qualidade do resultado automatizado

Controle de Qualidade

Principais causas de problemas dos


resultados automatizados
Problemas de coleta e armazenamento

Principais causas de problemas dos


resultados automatizados

coagulao parcial

Problemas de coleta e armazenamento

amostra diluda (cateter)

Contagens de plaquetas

excesso de anticoagulante EDTA


hemlise acentuada

agregao plaquetria
induzida pelo EDTA

aquecimento ou congelamento da amostra


sangue coletado h mais de 48 horas ou em
condies inadequadas de armazenamento
transporte

Agregados plaquetrios

Principais causas de problemas dos


resultados automatizados
Problemas de coleta e armazenamento

Interferem na
contagem de
plaquetas
Vortex

Contagens de plaquetas
agregao plaquetria induzida pelo EDTA
satelitismo plaquetrio

Coletar a amostra
em anticoagulante
citrato
Aquecer a 37C

19

Satelitismo plaquetrio

Interfere na
contagem de
plaquetas
Vortex
Coletar a
amostra em
anticoagulante
citrato

Interferem na
contagem global de
leuccitos e de
plaquetas
Avaliar quantidade e
impacto no resultado

Interferncias na Contagem de Plaquetas


por Impedncia

Fragmentos de RBC

Micrcitos

Problemas de coleta e armazenamento


Contagens de plaquetas
agregao plaquetria induzida pelo EDTA
satelitismo plaquetrio
filamentos de fibrinas ou microcogulos

Aquecer a 37C

Filamentos de fibrina ou microcogulos

Falsamente aumentadas

Principais causas de problemas dos


resultados automatizados

Principais causas de problemas dos


resultados automatizados
Problemas de coleta e armazenamento
Contagens de plaquetas
agregao plaquetria induzida pelo EDTA
satelitismo plaquetrio
filamentos de fibrinas ou microcogulos
interferncia de micrcitos, esquizcitos,
plaquetas gigantes e grumos de plaquetas

Contagem de Plaquetas pticas

Falsamente diminudas

Plaquetas Gigantes

Agregados Plaquetrios

20

Contagem de Plaquetas por Impedncia x


Plaquetas pticas obtidas por Fluorescncia

Macrotrombcitos VPM = 15
PLT-I = 68

Manual = 130

PLT-O =135

Referncia

Optical fluorescent platelet counting has reduced


manual review rate of flagged impedance platelet
counts from 29 % to less than 8%
Johns Hopkins Hospital

Micrcitos VCM = 52
PLT-I = 166

Manual = 252

PLT-O = 267

Esquizcitos VCM 71
PLT-I = 146

Manual = 41

PLT-O = 31

Principais causas de problemas dos


resultados automatizados

Trombocitose acentuada
Pode ultrapassar a

Problemas de coleta e armazenamento


Contagens de plaquetas
Contagens muito elevadas de plaquetas e
leuccitos

linearidade da contagem de
plaquetas
Diluir a amostra com diluente
do equipamento, calculando
diluio para valor
intermedirio dentro da
linearidade do equipamento

Linearidade de plaquetas:
0 at 5.000.000/mm

Leucocitose acentuada
Pode ultrapassar a
linearidade da contagem
global de leuccitos
Interfere na dosagem de
hemoglobina, devido
turbidez do plasma

Linearidade de leuccitos:
de 0 at 440.000/mm

Diluir a amostra com


diluente do equipamento,
calculando diluio para
valor aproximado de
100.000 leuccitos (ex:
500.000: diluir 1:5)

Principais causas de problemas dos


resultados automatizados
Problemas de coleta e armazenamento
Contagens de plaquetas
Contagens muito elevadas de plaquetas e
leuccitos
Aglutinao de eritrcitos por crioaglutininas

21

Crioaglutininas

Interferem na contagem
global de eritrcitos e nos
ndices hematimtricos
Aquecer por 15min. a
37C

Principais causas de problemas dos


resultados automatizados
Problemas de coleta e armazenamento
Contagens de plaquetas
Contagens muito elevadas de plaquetas e
leuccitos
Aglutinao de eritrcitos por crioaglutininas
Lipemia

Repassar a amostra
aquecida no equipamento
Aps aquecimento

Lipemia
Interfere no resultado de
hemoglobina e nos
ndices
hematimtricos
Substituir o plasma
cuidadosamente pelo
diluente do equipamento
ou por soluo fisiolgica

Principais causas de problemas dos


resultados automatizados
Problemas de coleta e armazenamento
Contagens de plaquetas
Contagens muito elevadas de plaquetas e
leuccitos
Aglutinao de eritrcitos por crioaglutininas
Lipemia
Presena de eritroblastos circulantes

Eritroblastos - NRBC

Eritroblastos (NRBC)
Histograma WBC

Interfere na contagem
global de leuccitos e na
diferencial de linfcitos

Resultados
WBC
LYM%
MXD%
NEUT%

WL*
WL*
WL

56.1 x 109/L
42.7%
-.---.---

(x 1000)

Caso: Eritroblastos Ortocromticos


NRBC = 1352/100 WBC
Esta uma amostra com eritroblastose. O vale entre a regio dos clulas lisadas (eritrcitos)
e a dos leuccitos pequenos invadiram os limites, o que gerou o alarme WL. A maioria dos
NRBC so contadas como leuccitos. A contagem global de leuccitos deve ser corrigida:
Contagem de WBC corrigida =
contagem de WBC x 100
(100 + contagem de NRBC *)
* Contagem de NRBC: quantidade de NRBC em 100 leuccitos

22

Contagem de eritroblastos no XE-2100

Otimizao de processos
Canal NRBC

Correo da contagem de
leuccitos e linfcitos
Corrige automaticamente as
contagens de leuccitos e
linfcitos
Estes parmetros ficam
marcados com smbolo &

Drain

Processos

Passos
envolvidos

Waste
Barrel

Advia #1

Advia #2

Waste
Barrel

Advia
Parts &
Tools

Reviso de processo

QC & QW
Exceptions

STA
Reagents

Avaliar fluxo de trabalho

Advia #3

Waste
Barrel

Trash

Advia
Reagents

DI H20
Drain

Hematology

Processing
Special
Flow
Heme

Trash
Trash

Heme
Samples

Hct
Fuge

Diff
Ves-Matic
20
Setup
Manuals

UA
Cups

Cyto
Fuge

Supplies

Body Fluid
Prep
Daily
Purple
Tubes

Trash

Microscopy

Shred

Trash

Trash

Trash

Sakura

Atlas

Blood Trash
Gases

Drain

Drain

ID

ID

Avaliar fluxo de trabalho


Procurar alternativas

IPU

ID

Reviso de processo

Diagrama
Proposto

Cella
Vision

MOLIS
WAM

Ps-melhoria
IPU
XE-2100

IPU
XE-2100

DI H20

QC & QW
Exceptions

ID

Processos

XE-2100

SP-100

TS-1000

Sysmex HST-Expert Line

Sysmex
Reagents

Drain

Hematology
Processing
Special
Flow
Heme

Trash
Trash

Heme
Samples

Hct
Fuge

Diff
Ves-Matic
20
Setup
Manuals

UA
Cups

Cyto
Fuge

Supplies

Body Fluid
Prep

Trash

Microscopy

Shred

Trash
Trash

Trash

UF-100

Sakura

Blood Trash
Gases

23

Processos
Reviso de processo
Avaliar fluxo de trabalho
Procurar alternativas
Avaliar continuamente possibilidades de
melhoria

Processos

Processos
Reviso de processo

Avaliar fluxo de trabalho


Procurar alternativas
Avaliar continuamente possibilidades de
melhoria
Avaliar os passos de maior impacto
Retirar os passos desnecessrios

Casos clnicos

Reviso de processo
Avaliar fluxo de trabalho
Procurar alternativas
Avaliar continuamente possibilidades de
melhoria
Avaliar os passos de maior impacto
Retirar os passos desnecessrios
Viso global

Caso 1: Adulto, 61 anos, sexo masculino

Caso 1: Adulto, 61 anos, sexo masculino

Paciente com diagnstico de LMC Ph+


(Leucemia mielide crnica com cromossomo
Philadelphia positivo)

24

Microscopia

Durante o acompanhamento...

Presena de
escalonamento da
linhagem granuloctica

Aumento da contagem
de basfilos

Leucemia mielide aguda


LMA-M2

Microscopia
30% de blastos
Blastos grandes
Basofilia
citoplasmtica
Cromatina frouxa
Nuclolos
aparentes

Caso 2: Adulto, 32 anos, sexo masculino

Caso 2: Adulto, 32 anos, sexo masculino

Paciente com febre persistente, calafrios, dor


muscular, nusea e vmito
Ao exame clnico apresentava
hepatoesplenomegalia

25

Microscopia

Plasmodium falciparum

Eritrcitos intensamente
parasitados

Caso 3: Adolescente, 16 anos, sexo feminino

Caso 3: Adolescente, 16 anos, sexo feminino

Paciente com sintomas de febre baixa, fadiga,


dor de garganta, gnglios infartados

Microscopia

Mononucleose infecciosa

26

Canal DIFF
Parmetro de investigao - Other

Contagem diferencial de 7- partes

Alarme: linfcitos atpicos

Conte
do de RNA/DNA
Conte

Fluorescncia

Por que automatizar?

Concluso

Exame complexo

Hemograma
Grande quantidade de
parmetros
Informaes quantitativas e
qualitativas
Diferentes metodologias:
- Contagens globais, contagens diferencial e
absoluta de leuccitos, dosagem, medio de
volume do eritrcito, ndices e anlise ao
microscpio

Outros grandes motivos


Qualidade
Melhora a preciso e exatido
Aumenta confiabilidade dos
resultados
Reduz o erro humano
Melhora a documentao

Produtividade
Reduz o T.A.T.

27

Outros grandes motivos

Mensagem final

Eficincia
Reduz necessidade de recursos
Reduz repeties

Segurana
Reduz contato com material
biolgico
L.E.R.

Nunca ande pelo caminho traado, pois ele


conduz somente at onde os outros foram
Alexander Graham Bell

Aperfeioamento
Atualizao profissional

Muito Obrigada
consultoria@sysmex.com.br

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