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Artigo Original
DESENVOL
VIMENTO
ESENVOLVIMENTO
PR-EMBRIONRIO EM RA
RATTAS TRA
TRATTADAS COM
OXCARBAZEPINA NOS QUA
TRO PRIMEIROS DIAS APS A INSEMINAO
QUATRO
*M. DE O. GUERRA, L. E. G. DE OLIVEIRA ,V. M. PETERS
Centro de Biologia da Reproduo - Universidade Federal de Juiz de Fora-MG
INTRODUO
Cerca de 0,5% de mulheres gestantes
so epilpticas e precisam usar anticonvulsivantes continuamente j que com a
interrupo do tratamento podem surgir
crises convulsivas e conseqente risco
fetal por hipxia intra-uterina1,2. Entretanto, drogas antiepilpticas eficientes como
o cido valprico e a carbamazepina tm
apresentado efeito teratognico em humanos 3,4. Embora o efeito teratognico
tambm possa ser atribudo a fatores genticos, associados com a prpria enfermidade5, o fato que fetos de mes epilpticas esto sujeitos a um risco duplo a
*Correspondncia:
R. So Matheus, 711 - apto 103-C - Cep: 36026-001
Juiz de Fora/MG - Tel.: (32) 229-3253
E-mail: moguerra@cbr.ufif.br
346
Grupos
Incio do tratamento
MATERIAL E MTODOS
Animaisdeexperimentao
Foram usadas ratas, originalmente Wistar, com trs meses de idade, da colnia do
Biotrio do Centro de Biologia da Reproduo Universidade Federal de Juiz de Fora,
pesando em mdia 180 a 200g .
ProcedimentoExperimental
Os animais foram acasalados com machos de fertilidade previamente comprovada e a presena de espermatozide no
esfregao vaginal foi considerada indicativa
de inseminao, sendo este dia designado o
primeiro ps-fertilizao15,16.
As ratas inseminadas foram distribudas
aleatoriamente em trs grupos: controle,
tratado-20 (T-20) e tratado-200 (T-200).
O grupo controle recebeu 0,5ml de gua
destilada, o grupo T-20, 20mg de oxcarbazepina diluda em 0,5 ml de gua destilada
/Kg de peso corporal e o grupo T-200,
200mg de oxcarbazepina /Kg de peso corporal. gua e oxcarbazepina foram administradas por sonda gstrica s 9h e s 12h.
As doses escolhidas foram baseadas na
dose teraputica preconizada para o ser
humano (1200 mg/dia), e nas doses usadas
para o estudo do efeito anticonvulsivante
em ratos: 5, 10, 30, 60mg17 e 40 ou 80 mg
OXC/ Kg de peso corporal de rato18.
Avaliaododesenvolvimentopr-embrionrio
Para a avaliao do pr-embrio, durante o seu trajeto pelo oviduto at a chegada
ao tero, foram realizados os seguintes experimentos (cada experimento compreendeu um lote de 15 animais):
Rev Ass Med Brasil 2000; 46(4): 346-53
Controle
Tratado 20
Tratado 200
173,4 10,2
177,3 15,1
175,9 13,8
(15)
(15)
(16)
180,3 12,2
185,9 15,7
181,1 15,6
(15)
(15)
(16)
II
Controle
Tratado 20
Tratado 200
171,6 14,5
181,7 15,7
178,7 11,3
(15)
(15)
(17)
175,7 14,9
186,9 16,5
183,3 11,3
(15)
(15)
(17)
III
Controle
Tratado 20
Tratado 200
172,7 14,3
180,1 15,9
184,5 13,6
(15)
(15)
(15)
176,9 13,7
181,9 16,7
186,3 13,2
(15)
(15)
(15)
IV
Controle
Tratado 20
Tratado 200
168,4 15,8
180,5 14,9
182,7 13,8
(17)
(15)
(15)
166,9 15,7
180,2 12,8
181,5 13,3
(17)
(15)
(15)
Fim do
Tratamento
Sacrifcio
Controle
165,4 10,4
(15)
169,1 12,4
(15)
Tratado - 20
172,1 10,9
(15)
176,9 12,2
(15)
Tratado -2 00
176,6 6,4
(14)
176,5 5,8
(14)
178,4 6,8
(14)
347
GUERRA MO ET AL.
ExperimentoI:Tratamentodasratasno1dia
ps-inseminao.
Experimento II : Tratamento das ratas no 2
diaps-inseminao
Experimento III: Tratamento das ratas no 3
diaps-inseminao
Experimento IV: Tratamento das ratas no 4
diaps-inseminao.
ExperimentoV:Tratamentodasratasnosdias
1, 2, 3 e 4 ps - inseminao.
As ratas foram pesadas no dia do tratamento e no dia do sacrifcio (5 dia de
gestao) que foi feito por excesso de inalao de ter. O grupo tratado desde o primeiro at o quarto dia foi pesado no incio
do tratamento, no trmino e no dia do
sacrifcio.
Durante todo o experimento os animais
foram examinados para avaliar sinais clnicos
de toxicidade materna (mortes, piloereo
e alterao na locomoo)19.
Para a coleta de pr-embries, foram
usadas as tcnicas de coleta e exame de
estruturas embrionrias conforme descrito por Forcelledo, Vera, Croxatto20 e
Ortiz, Llados, Croxato21. Atravs dessa
tcnica os ovidutos e cornos uterinos,
expostos por laparotomia, so removidos
para uma placa de Petri, contendo soro
fisiolgico. Os ovidutos so separados da
extremidade tubria do corno uterino e
ambos so canulados com sonda apropriada por onde se perfunde soluo salina.
Os lavados tubrios e uterinos so recolhidos em cpsulas embrionrias, para posterior exame dos pr-embries.
Cada cpsula embrionria foi examinada
para contagem do nmero de pr-embries e para avaliao do seu desenvolvimento at a fase de blastocisto expandido.
Os ovrios so examinados sob lupa
para contagem dos corpos lteos, estabelecendo-se a relao entre corpos
lteos e pr-embries para a determinao do ndice de perdas embrionrias
(IPE = 1 pr-embries/corpos lteos X 100).
348
Tabela 3 - Nmero de corpos lteos nos ovrios de ratas Wistar tratadas com 20 mg ou
200 mg de oxcarbazepina / Kg de peso corporal, via gstrica, nos dias 1,2,3 ou 4 psinseminao, e do 1 ao 4 dia ps-inseminao, e de controles tratadas com 0,5 ml de
gua destilada pela mesma via e mesmo dias de tratamento.
Experimentos
Grupos
Esquerdo
Total
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
5,1 1,4
5,3 1,8
4,9 1,7
(15)
(15)
(16)
11,4 1,1
12,2 1,8
12,1 1,9
(15)
(15)
(16)
II
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
5,8 1,8
5,8 1,8
5,2 1,9
(15)
(15)
(17)
11,7 1,4
12,3 1,7
11,2 1,3
(15)
(15)
(17)
III
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
5,1 1,3
6,3 1,9
5,2 1,9
(15)
(15)
(15)
12,2 1,8
12,4 1,4
13,5 2,0
(15)
(15)
(15)
IV
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
4,9 2,0
5,4 1,3
5,5 1,5
(17)
(15)
(15)
11,0 1,8
11,9 1,2
12,1 1,5
(17)
(15)
(15)
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
5,4 2,2
5,7 1,7
5,2 1,5
(15)
(15)
(14)
11,6 1,5
12,1 1,5
11,6 1,1
(15)
(15)
(14)
Processamentoestatstico
Pesos maternos antes e depois do tratamento so comparados pelo teste tde
Student pareado; o nmero de pr-embries coletados foi comparado por
Anova, seguida de teste de Dunnet (a
=0,05). A proporo de blastocistos expandidos em relao ao total de pr-embries coletados e o ndice de perdas de
pr-embries foram comparados pelo
teste do Qui quadrado (a =0,05).
RESULTADOS
O tratamento das ratas com oxcarba-
Grupos
Peso de Ovrios*
Direito
Esquerdo
Controle
173,4 10,2
(15)
180,3 12,2
(15)
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
0,022 0,004
0,025 0,003
0,027 0,004
(15)
(15)
(16) **
0,019 0,003
0,021 0,003
0,022 0,003
(15)
(15)
(16)
II
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
0,023 0,004
0,026 0,004
0,023 0,005
(15)
(15)
(17)
0,023 0,003
0,025 0,004
0,020 0,003
(15)
(15)
(17) **
III
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
0,024 0,004
0,022 0,003
0,028 0,004
(15)
(15)
(15) ***
0,020 0,002
0,021 0,004
0,023 0,005
(15)
(15)
(15)
IV
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
0,025 0,004
0,026 0,005
0,025 0,005
(17)
(15)
(15)
0,022 0,006
0,023 0,003
0,021 0,003
(17)
(15)
(15)
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
0,022 0,003
0,024 0,004
0,021 0,003
(15)
(15)
(14)
0,021 0,004
0,021 0,004
0,019 0,002
(15)
(15)
(14)
CONCLUSES
GUERRA MO ET AL.
to de secreo de progesterona e 20hidroxi-progesterona22, hormnios que
mantm a gestao da rata. Alm disso, os
pesos de ovrios so muito dependentes do
nmero e do volume dos corpos lteos,
que aumentam ao longo da gestao23.
Por fim, Inman& Markivee24 j demonstraram que o nmero de corpos lteos
uma boa evidncia do nmero de ovulaes. Como pode ser verificado na tabela 4,
o peso dos ovrios, na sua maioria, foi
semelhante quando comparados nos trs
grupos experimentais. A diferena estatstica encontrada no tem significado biolgico
e deve ser atribuda ao fato de haver maior
nmero de corpos lteos em um dos ovrios. Porm, quando se considera o total de
corpos lteos nos dois ovrios (tabela 3),
nota-se que o seu nmero mdio no
variou entre os grupos experimentais. Consequentemente, os mecanismos neuroendcrinos responsveis pela ovulao esto
funcionando de maneira uniforme em ratas
de todos os grupos experimentais e quaisquer alteraes observadas aps o tratamento podem ser imputadas a alteraes
provocadas pelo agente examinado.
Dado que existe uma correlao entre
o nmero de corpos lteos e o nmero de
ovulaes, habitual que o primeiro tambm seja correlacionado com o nmero de
pr-embries25, pois pressupem-se que
cada ovulao libera um ovcito que pode
ser fecundado e viabilizar-se em um prembrio. O ndice de perdas pr-embrionrias estabelece a relao entre as duas
variveis e, como se depreende dos dados
exibidos na tabela 5, a administrao de
oxcarbazepina no modificou o ndice de
perdas pr-embrionrias.
As alteraes no desenvolvimento do
pr-embrio podem ser devidas a leso
direta ou indireta do agente txico. No
primeiro caso, a leso diretamente sobre
o concepto e na segunda, pode decorrer de
alteraes da secreo tubrias ou de mo350
Tabela 5 - Nmero de pr-embries nos cornos uterinos de ratas Wistar tratadas com
20 mg ou 200 mg de oxcarbazepina / Kg de peso corporal, via gstrica, nos dias 1, 2, 3 ou
4 ps- inseminao, e do 1 ao 4 dia ps- inseminao, e de controles que receberam
0,5 ml de gua destilada pela mesma via e mesmos dias de tratamento.
Experimentos
Grupos
Esquerdo
Total
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
4,71,9
(15)*
6,1 1,6 (15)
6,2 1,7 (16)
5,1 1,4
5,3 1,8
4,9 1,7
(15)
(15)
(16)
11,4 1,1
12,2 1,8
12,1 1,9
(15)*
(15)
(16)
II
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
5,8 1,8
5,8 1,8
5,2 1,9
(15)
(15)
(17)
11,7 1,4
12,3 1,7
11,2 1,3
(15)**
(15)
(17)
III
Controle
Tratado - 20
5,1 1,3
6,3 1,9
(15)
(15)
12,2 1,8
12,4 1,4
(15)
(15)
Tratado - 200
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
6,5
5,2
5,8
5,3
13,5 2,0
11,0 1,8
11,9 1,2
12,1 1,5
(15)
(17)
(15)
(15)
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
5,4 2,2
5,7 1,7
5,2 1,5
11,6 1,5
12,1 1,5
11,6 1,1
(15)
(15)
(14)
IV
1,8
1,6
1,2
2,3
(15)
(17)
(15)
(15)
(15)
(15)
(14)
Grupos
Controle
Tratado-20
Tratado-200
Controle
Tratado-20
Tratado-200
Controle
Tratado-20
Tratado-200
25,3
12,5
12,3
16,8
8,2
12,9
12,4
13,2
15,5
14,5
15,2
12,6
13,8
11,5
11,1
14,8
12,6
12,5
20,5
13,7
12,4
15,3
9,7
17,8
14,2
12,9
14,3
IV
Controle
Tratado-20
Tratado-200
15,4
11,2
19,2
9,5
19,7
16,9
12,8
15,1
18,7
Controle
Tratado-20
Tratado-200
12,9
16,5
13,3
18,5
15,3
12,3
15,5
15,9
12,9
II
III
TUE
Total
GUERRA MO ET AL.
6.
7.
8.
Experimentos
I
Grupos
Percentual de Blastocistos
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
91,4
90,5
89,9
(139/152)
(143/158)
(152/169)
II
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
88,6
97,0
92,8
(132/149)
(162/167)
(155/167)
III
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
94,3
91,3
95,4
(148/157)
(148/162)
(166/174)
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
97,6
93,4
96,6
(161/165)
(142/152)
(144/149)
IV
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
Controle
Tratado - 20
Tratado - 200
93,2
97,4
92,2
(137/147)
(149/153)
(131/142)
16.
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