CATALISIS ENZIMATICA

Las reacciones qumicas que ocurren en los sistemas vivientes son tan
variadas como complejas. Sin embargo, la naturaleza provee velocidades de
reaccin en condiciones por dems suaves, que haran avergonzar al mejor
qumico. La mayora de las reacciones que ocurren en los sistemas vivos son
catalizadas por protenas conocidas con el nombre de enzimas. Cientos de
enzimas han sido aisladas y probablemente existen cientos de miles en la
naturaleza. Su estructura es muy compleja, y puede ser representada como se
muestra en la figura 4.
Las enzimas reciben su nombre en funcin de su actividad especfica, as, por
ejemplo, la enzima "ureasa" cataliza con eficiencia la hidrlisis de la urea, las
proteasas actan sobre las protenas, las amidasas sobre las amidas, etc.
Todas las enzimas desde el punto de vista qumico son protenas, pero pueden
asociarse con substancias no protenicas, llamadas coenzimas o grupos
prostticos, que son esenciales para la accin de la enzima. A veces las
enzimas son inactivas catalticamente, si no se encuentran en presencia de
ciertos iones metlicos. A la luz de muchos estudios se ha logrado establecer
que no toda la molcula de protena presenta actividad cataltica, sino
nicamente una regin relativamente pequea, la cual se denomina centro
activo. Los mecanismos de reaccin de las enzimas son muy complejos,
implicando un nmero de etapas elementales cada una de las cuales puede
incluir interacciones complejas entre varios grupos de las molculas de la
enzima y el sustrato. En las reacciones catalizadas por enzimas las
velocidades de reaccin, as como los mecanismos se ven afectados por
cambios en la concentracin, el pH y la temperatura.

Figura 4. Estructura cristalina de la carboxipeptidasa A.

En la elucidacin de los mecanismos de reaccin de las enzimas, y
principalmente aquellas que involucran un ion-metlico o metaloenzimas, se
requiere conocer:

1) La afinidad de los reactantes, las coenzimas y los cofactores.

2) Las constantes de velocidad para cada paso.
3) Las relaciones geomtricas tridimensionales entre los reactantes, las
coenzimas en relacin a los sitios catalticamente importantes de la enzima.
4) el mecanismo de cada paso, es decir los arreglos atmicos y electrnicos. El
mecanismo qumico est determinado por el tipo de rompimiento y formacin
de enlaces que lleva a cabo la enzima.
Se ha propuesto que las enzimas contienen en sus "centros activos" cidos
(AH) o bases (B) de manera que se puede calcular su fuerza cida o bsica.
As la pepsina, enzima que cataliza la hidrlisis de ciertos enlaces ppticos en
el estmago, tiene un valor de fuerza cida (pK) de 2.2. El nico grupo orgnico
que puede dar este valor es el COOH-. Tambin hay enzimas con carcter
bsico como la quimotripsina y la colinesterosa con un pK=7.2.
El hecho de que puedan existir esos dos tipos de grupos cidos y bsicos al
mismo tiempo es posiblemente la explicacin qumica del efecto tan selectivo
observado en la catlisis por enzimas, ya que el ataque simultneo por las dos
especies cida y bsica debe traducirse en una mejora muy notable de la
velocidad y la selectividad, con un mecanismo que podra llamarse de "estira y
afloja". El equivalente en catlisis heterognea podra ser un mecanismo
bifuncional (que comprende dos funciones con dos tipos de sitios diferentes),
con la salvedad de que en la enzima los dos activos pueden actuar sobre la
misma molcula al mismo tiempo y en la heterognea esto no es posible.
La complejidad de la estructura de las enzimas se puede comprender al
observar la estructura bsica de la carboxipeptidosa A, que es una molcula
relativamente simple con un peso molecular de 36 400 (existen enzimas de
peso molecular de 600 000), su estructura obtenida por microscopa electrnica
se muestra en la figura 4.
La enzima es ligeramente elipsoidal de dimensiones 50 X 42 X 38 Angstroms.
En esta estructura se pueden ver un enlace azufre-azufre en el extremo
derecho, y un tomo de zinc (Zn 2+) en el centro, alrededor del cual se sita el
"sitio activo". El ion Zn2+es absolutamente esencial para la actividad enzimtica
de la carboxipeptidosa A. Sin embargo se puede cambiar ese ion por otros
iones metlicos como Mn2+, Fe2+, Co2+, Ni2+, etc., cambindose tanto la
actividad como la selectividad de la enzima.
Las velocidades de las reacciones catalizadas por enzimas son en general
proporcionales a la primera potencia de la concentracin de la enzima (son de
primer orden respecto a la enzima). Sin embargo, es frecuente encontrar una
dependencia de la concentracin del sustrato (sobre el que acta la enzima),
como se muestra en la figura 5. La velocidad vara linealmente con la
concentracin de sustrato a concentraciones bajas (primer orden respecto al
sustrato) y se hace independiente de la concentracin de ste (orden cero) a

concentraciones elevadas. Este tipo de comportamiento fue explicado por

Michaelis y Menten en funcin del mecanismo siguiente:
1. Interaccin de la enzima con el substrato (reactivo), para formar un
complejo intermediario.
11 k1
E1+1S1
1ES
xxxk-1
2. Descomposicin del complejo intermediario para dar los productos y
regenerar la enzima.
k2111
E1S
E+P
E es la enzima, S el sustrato, ES un complejo y P es el producto. Aplicando el
tratamiento cintico denominado del estado estacionario, en el que se asume
que la concentracin del complejo intermediario es constante obtenemos.
K 1 [ E ] SK 1 [ ES ] K 2 [ ES ] =0 I

Si la concentracin total de la enzima [E] o es igual a la suma de la

concentracin en enzima libre [E], ms la concentracin de enzima que forma
el complejo [ES]:

[ E ] 0=[ E ] + [ ES ] II
Introduciendo [E] de la ecuacin II en la ecuacin I, tenemos:
K 1 ( [ E ]0 [ ES ] ) [ S ]( K1+ K 2 ) [ ES ]=0
de donde podemos obtener la concentracin de enzima que est formando el
complejo

[ ES ] =

K 1 [ E0 ] [ S ]
K1+ K 2+ K 1 [ S ]

Se asume que la etapa determinante de la reaccin es la descomposicin del

complejo, entonces la velocidad de la reaccin es v=k 2[ES] en donde se
substituye [ES]
V=

K 2 K 1 [ E0 ] [ S ]
K1 + K 2+ K 1 [ S ]

que rearreglando nos da:

V=

K2 [ E0] [ S]
K m +[ S]

III

Donde:
km = se denomina constante de Michaelis.
De la ecuacin III se deduce que cuando [S] es suficientemente pequea,
V=

K2 [ E0] [ S]
K m +[ S ]

Lo que indica primer orden respecto a la concentracin de sustrato. Por el

contrario, cuando [S] es mucho mayor que Km
V =K 2 [ E0 ]

y la cintica es orden cero respecto al sustrato. En ambos casos el orden es

b>1 para la concentracin de enzima. La ecuacin III da cuenta entonces del
comportamiento observado en la figura 5.

Figura 5.
Dependencia tpica de la velocidad de una reaccin
enzimtica como funcin del sustrato S.
Muchas reacciones obedecen la ley de Michaelis (ecuacin III), sin embargo, el
mecanismo queda an en la duda ya que a travs de otro mecanismo complejo
es posible llegar a la misma ecuacin cintica.
El efecto del cambio de pH en las velocidades de las reacciones catalizadas
por enzimas se puede observar en la figura 6. Se tiene un mximo y la primera
explicacin de este hecho fue dada por Michaelis. La idea bsica es que el

centro activo de la enzima puede existir en tres estados de ionizacin

dependiendo de la fuerza cida,
zzzKb
EH2

ka

EH

Las constantes de disociacin se representan por kb y ka. Cada una de las tres
formas de la enzima puede interaccionar con el sustrato,
zzzKb
EH2

ka
EHS

ES

Si se postula que slo EHS puede dar productos, el esquema de reaccin

queda entonces
EH2

EH2S

EH

EH
S

ES
K2

EH

+P

As, en solucin cida, la enzima estar en la forma EH 2 y formar con el

reactivo el complejo EH2; este complejo se descompone para dar otro complejo
EHS, el cual a su vez se descompone para dar los productos y luego entonces
la velocidad ser pequea (lado izquierdo de la figura 6). Si la solucin es
bsica predominan las formas E y ES y la velocidad ser tambin pequea. A
cierto pH intermedio, llamado pH ptimo, se observar la concentracin
mxima de EHS y ser por lo tanto el mximo de la velocidad.
Los estudios sobre velocidades de reacciones catalizadas por enzimas a
diversos valores de concentraciones y pH han permitido obtener los valores de
las constantes de disociacin ka, kb, k'a y k'b. Las dos primeras corresponden
a informacin sobre la naturaleza del centro activo. Por ejemplo, la pepsina,
enzima que cataliza la hidrlisis de ciertos enlaces peptdicos en el estmago
tiene un pK = 2.2, siendo el nico grupo orgnico conocido que puede dar este
valor el grupo carboxilo (-COOH), concluyndose que esta enzima trabaja en
condiciones muy cidas equivalentes a las de un cido actico (principal
constituyente del vinagre).

Figura 6. Variacin
de la velocidad
en funcin del pH, para una reaccin enzimtica.
Los valores de k'a y k'b proporcionan informacin respecto de la forma en que
los grupos ionizantes del centro activo tienen interaccin con el sustrato.
La influencia de la temperatura en la velocidad ha suministrado informacin
valiosa acerca de los mecanismos enzimticos. Sin embargo, una complicacin
surge del hecho de que las enzimas por s mismas experimentan un proceso
de desactivacin que tiene una energa de desactivacin muy alta, por lo que a
35C o ms (dependiendo de la enzima) se puede observar una desactivacin
muy rpida. Por ello es frecuente encontrar que las velocidades catalizadas por
enzimas pasan por un mximo al ir subiendo la temperatura. A 60C por
ejemplo, muchas propiedades de la enzima se alteran, algunas de ellas
irreversiblemente. Estos cambios se conocen con el nombre de
desnaturalizacin y son los responsables del decrecimiento de la actividad de
la enzima.

TABLA 1. Efecto cataltico de algunas enzimas para diferentes reacciones.

Reaccin

Catalizador

Hidrlisis de la H3O+
urea
"
ureasa
Hidrlisis
de H3O+
trifosfato
de
adenosina
"
miosina

T C

k0

62.0

7.4X10-

1.8X1010

E
(Kcal/mol)
24.6

20.8
40.0

5.0x106
4.7x106

1.7x1013
2.4x109

06.8
21.2

25.0

8.2x106

1.6x1022

21.1

Descomposicin
del H2O2
"

Fe++

22.0

56

1.8x109

10.1

catalasa

22.0

3.5x107

6.4x108

01.7

En la tabla 1 se dan los valores de las constantes de velocidad, energas de

activacin y factores preexponenciales de tres reacciones catalizadas por
enzimas y se incluyen a ttulo de comparacin los valores de otros
catalizadores.

Catlisis enzimtica
Existen molculas biolgicas capaces de aumentar bastante la velocidad de reacciones
qumicas, i.e., son los llamados catalizadores. Estas molculas son genricamente
denominadas enzimas y son (en casi su totalidad) protenas. Las enzimas no proteicas
conocidas son constituidas por RNA. Las enzimas son altamente especficas: cada enzima
apenas reacciona con un conjunto muy restringido de molculas (sus sustratos). Las
enzimas no alteran el equilibrio qumico de las reacciones catalizadas, apenas disminuyen
su energa de activacin.

El mecanismo ms simple para explicar la accin enzimtica es el modelo de MichaelisMenten:

E +S <-> ES -> E + P
En este modelo la enzima (E) se liga al sustrato (S) para formar un complejo enzimasustrato (ES). Este puede separarse nuevamente en enzima y sustrato libre o transformar
el sustrato en producto (P). Como en cualquier reaccin elemental (i.e. una reaccin que
ocurre por simple colisin entre reactivos), la velocidad de cada paso ser proporcional a la
concentracin de los reactivos de ese paso. En cada caso, la constante de
proporcionalidad ser una funcin de la energa de activacin de ese paso.
En la mayor parte de las enzimas se verifica que el equilibrio E +S <-> ES se alcanza
muy rpidamente (en pocas decenas de milisegundos). Una vez alcanzado el equilibrio, la
concentracin de ES se mantiene constante, una vez que siempre que un complejo ES se
disocia en producto y enzima libre, esta se liga muy rpidamente a una nueva molcula de
sustrato regenerando el complejo ES. En estas condiciones es obvio que la velocidad de
degradacin ES es igual a la velocidad de su formacin o sea:

En principio, no nos es dado saber en cada momento cual ser la concentracin de enzima
que se encuentra libre o bajo la forma de complejo enzima sustrato. Sin embargo,
sabemos que la suma de las dos concentraciones debe igualar la concentracin de enzima
total (Et). Sustituyndola en (1)

Si el paso limitante de la reaccin fuese la transformacin del complejo ES en enzima libre

y producto, la velocidad de reaccin enzimtica ser:

La expresin puede ser simplificada si juntamos todas las constantes presentes e el

denominador en una nueva constante:

, que es conocida como constante de Michaelis.

Cuando

que es tambin la constante de

disociacin del complejo ES. Km es por tanto una medida de la estabilidad del complejo
enzima-sustrato. Substituyendo en la expresin (2), esta toma as la forma:

Cuando

, que es por tanto la velocidad mxima de reaccin enzimtica. Sustituyendo nuevamente

se obtiene la forma familiar de la ecuacin de Michaelis-Menten:

La representacin grfica de la velocidad de reaccin en funcin de la concentracin de

sustrato es por tanto una hiprbola, que se representa debajo. La asntota horizontal
corresponde a vmax. El valor de Km tambin puede ser obtenido a travs del grfico, una
vez que cuando la [S]=KM , la ecuacin de Michaelis-Menten prev que la velocidad sea

La constante de Michaelis Menten es por tanto la concentracin de sustrato para la cual la

velocidad de la reaccin es la mitad de la velocidad mxima.

El efecto de inhibidores competitivos en la actividad enzimtica

Un inhibidor competitivo de una enzima es una molcula capaz

de enlazarse a la enzima e impedir el enlace de la misma al sustrato
Para que esto suceda es necesario que el inhibidor se enlace al lugar de la enzima
normalmente ocupado por el sustrato (este lugar se denomina centro activo), lo que
obviamente solo es posible cuando el inhibidor tiene una estructura qumica bastante
semejante a la del sustrato.
Aplicando un tratamiento matemtico anlogo al utilizado anteriormente, se prueba que en
la presencia de un inhibidor competitivo, la velocidad de la reaccin enzimtica es dada
por:

La comparacin de esta ecuacin con la ecuacin de Michaelis-Menten muestra que: en la

presencia de un inhibidor competitivo, la velocidad de reaccin es inferior a la de la
reaccin no inhibida (de ah el nombre de inhibidor).
La concentracin de sustrato para la cual la velocidad es mitad de la velocidad mxima
Es:

Este valor (llammosle KM aparente) es siempre superior al valor de KM en la ausencia del

inhibidor.

Cuando
, la velocidad de reaccin se aproxima asintoticamente del
vmax, tal como en la reaccin no inhibida.
El efecto de inhibidores no competitivos en la actividad enzimtica
Un inhibidor no competitivo de una reaccin enzimtica a una sustancia que se enlaza a la
enzima en un lugar diferente del centro activo y que, mas all de que no impide el enlace
del sustrato al centro activo, impide su transformacin en producto: la reaccin solo puede
ocurrir luego que el sustrato se desenlace de la enzima.

Aplicando un tratamiento matemtico anlogo al utilizado

anteriormente, se prueba que en la presencia de un inhibidor no competitivo, la velocidad
de reaccin enzimtica esta dada por:

La comparacin de esta ecuacin con la ecuacin de Michaelis-Menten muestra que: en la

presencia de un inhibidor no competitivo, la velocidad de reaccin es inferior a la de la
reaccin no inhibida (de ah el nombre de inhibidor)
La concentracin de sustrato para la cual la velocidad es mitad de la velocidad mxima es
igual a la observada en ausencia de inhibidor.
Cuando

, la velocidad de la reaccin se aproxima asintticamente

de , que es siempre inferior al de la reaccin no inhibi