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Manual de Prcticas de Bioqumica

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MANUAL DE PRCTICAS DE
BIOQUMICA

ABRIL 2011

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NDICE

Pg
ndice
Presentacin
Prctica 1
Prctica 2
Prctica 3
Prctica 4
Prctica 5
Prctica 6
Prctica 7
Prctica 8
Prctica 9
Prctica 10
Prctica 11
Bibliografa
Anexo.- Preparacin de Reactivos

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PRACTICA No. 1

IDENTIFICACIN DE MATERIALES DE USO COMN EN EL LABORATORIO DE


BIOQUMICA.
INTRODUCCIN
El uso del material para llevar a cabo una prueba, cualquiera que sea, es de suma
importancia para que se realice en forma adecuada. La eleccin de los materiales estar
de acuerdo con las caractersticas y funciones que ste tenga. En general, los materiales
de vidrio se pueden clasificar como material de medicin y de contencin.

OBJETIVOS
El discente conocer el material de laboratorio ms comnmente utilizado en el laboratorio de
Bioqumica.

MATERIAL

Pipetas (terminales, no terminales, volumtricas)


Matraces volumtricos
Bureta
Probeta
Matraces erlenmeyer
Vaso de precipitado
Tubos de ensaye

MTODO

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Los alumnos llevarn a cabo la medicin de agua utilizando los diferentes materiales de laboratorio
as como una discusin dirigida en el laboratorio.

CUESTIONARIO
1. Cmo se clasifica el material empleado en las prcticas de laboratorio?
2. Cules son los cuidados que se deben tener en cuanto a bioseguridad?
3. Qu precauciones debes tener en el laboratorio?

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PRACTICA No. 2

IDENTIFICACIN Y MANEJO DE EQUIPOS DE USO COMN EN EL LABORATORIO


DE BIOQUMICA.
INTRODUCCIN
El uso del equipo para llevar a cabo una prueba, cualquiera que sea, es de suma
importancia para que se realice en forma adecuada. La eleccin del equipo estar de
acuerdo con las caractersticas y funciones que ste tenga y nos sea til para una prctica
determinada que queramos realizar.

OBJETIVOS
El discente identificar y manejar el equipo comnmente utilizado en el laboratorio de
Bioqumica.

EQUIPOS

Balanza analtica
Balanza granatara
Espectrofotmetro
Potencimetro
Centrfuga
Bao mara
Estufa de laboratorio

Microscopio ptico
MTODO
Se llevar a cabo una demostracin prctica de cada uno de los equipos y una discusin dirigida
en el laboratorio.

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CUESTIONARIO
1. Que medidas de seguridad para el uso correcto del equipo crees que se deban llevar a
cabo?
2. Menciona y describe brevemente que otros equipos consideras que sean de importancia en
el laboratorio mdico.
3. Solamente en el laboratorio de medicina se pueden utilizar los equipos mencionados
anteriormente? Si escribes como respuesta si o no, menciona porque y en que otras
disciplinas se podran utilizar.
PRCTICA # 3.- PREPARACIN DE SOLUCIONES

INTRODUCCIN

Una solucin es una dispersin homognea (en forma inica o molecular) de un slido, lquido o
gas, en el seno de un lquido, y pueden ser Molares, Normales, Saturadas, Amortiguadoras o
Buffer, Porcentuales, Hipertnicas, Isotnicas, etc.

OBJETIVO:

El alumno llevar a cabo la preparacin de soluciones normales, molares y porcentuales.

MATERIAL:

Probeta graduada de 100 mL


frasco de 100 Ml con tapn de
rosca
vaso de precipitado de 250 mL
pipeta graduada de 10 mL
pipeta graduada de 1 mL

Balanza
matraz aforado de 100 mL

matraz aforado de 50 mL
esptula

REACTIVOS:

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HCl concentrado
NaOH granular

NaCl
Agua destilada

MTODO:
A: Preparacin de soluciones normales, molares, porcentuales

1. Preparar 100 mL de una solucin normal de HCl, guardar y etiquetar correctamente.


2. Preparar 100 mL de una solucin molar de NaOH, guardar y etiquetar
correctamente.
3. Preparar 100 mL de una solucin porcentual de NaCl, guardar y etiquetar
correctamente.
4. En el reporte a entregar describir cmo se elabor cada solucin
Anotar observaciones
CUESTIONARIO:

1. Escribir las definiciones de solucin normal y molar.


2. Qu significa y cmo se preparar las soluciones porcentuales v/v, v/p y p/v?
3. Describa y exprese la diferencia entre unidades fsicas y unidades qumicas en las
soluciones.
4. Cmo se elabora una solucin amortiguadora?
PRCTICA # 4.- TITULACIN DE SOLUCIONES

INTRODUCCIN

La titulacin es el proceso en el cual un reactivo de la solucin (el titulante) se aade


cuidadosamente a la solucin de otro reactivo y se determina el volumen del titulante necesario
para que la reaccin se complete.

OBJETIVO

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El discente realizar reacciones para demostrar las propiedades fsicas y qumicas de los
carbohidratos.

MATERIAL

Pipeta volumtrica de 10 ml
Pipetas volumtrica de 5 ml
Vaso de precipitado de 100 ml
Agitador
Bureta de 25 ml
Pinzas de 3 dedos

soporte universal
Embudo
Matraces erlenmeyer de 50 ml

REACTIVOS

Fenolftalena
NaOH1 N
HCl 1 N

MTODO

1. Utilizando una pipeta volumtrica, medir 10 ml de la solucin a titular en un matraz


erlenmeyer de 50 ml.
2. Adicionar 2 gotas de fenolftalena y agitar.
3. Agregar gota a gota la solucin con la que se titula hasta neutralizar la solucin.
4. Realizar los clculos de acuerdo con la frmula y determinar la concentracin de la solucin
titulada:
N1V1 = N2V2

CUESTIONARIO

1. Qu es un indicador?

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2. Menciona al menos 3 indicadores con el rango de pH en el que se utilizan.

PRCTICA NO. 5

MEDICIN DEL pH EN DIFERENTES LQUIDOS

INTRODUCCIN

Los lmites de la escala de pH habituales se han colocado en 0 y 14, que corresponden


aproximadamente a la realidad de las posibilidades prcticas de tener soluciones con sta
concentracin de pH [H+]. Aunque tericamente sera posible tener pH menores de 0 o mayores de
14, en la prctica las soluciones muy concentradas o lcalis fuertes tienden a disociarse
relativamente menos que las diludas, y es difcil tener en una solucin ms de 1 g (1 equivalente)
de [H+] libre por litro, o ms de 17 g (1 equivalente) de [OH-] por litro.

OBJETIVO
El discente comprobar por diferentes mtodos el pH (papel pH, potencimetro) y determinar el
pH de algunas sustancias y lquidos corporales.

MATERIAL

vasos de precipitado de 50 mL
pipetas graduadas de 5 mL
Potencimetro
Gasas
Tiras reactivas para pH
Papel secante

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REACTIVOS

Agua destilada
Muestras de diferentes lquidos

MTODO

1. Determinar el pH de las diferentes muestras utilizando tiras reactivas.


2. Colocar los lquidos en un vaso de precipitado, y medir el pH con el potencimetro
previamente calibrado.

CUESTIONARIO

1. Defina pH
2. Qu significa solucin cida, bsica y neutra?
3. Cul es el pH que presentan la mayora de los lquidos corporales?

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PRCTICA # 6.- EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE CLORURO DE SODIO SOBRE LAS


CLULAS SANGUNEAS

INTRODUCCIN

En general, las membranas celulares son permeables al agua y a algunos solutos e impermeables
a otros, pero las concentraciones molares en equilibrio y por lo tanto las presiones osmticas, de
un lado a otro de la membrana, son iguales. Una situacin fisiolgica dada se define en relacin a
la concentracin de las soluciones en ambos lados de una membrana, las soluciones son
isoosmticas o isotnicas, cuando una solucin tiene concentracin mayor que la del otro lado es
hipertnica y, en cambio, la solucin con menor concentracin, es hipotnica.

OBJETIVO

El discente describir los efectos de la concentracin de cloruro de sodio en una solucin sobre los
eritrocitos.

MATERIAL

tubos de ensayo de 10X100 mm


gradilla
Pipeta pasteur
Bulbo de plstico
Microscopio ptico
portaobjetos
cubreobjetos

REACTIVOS

Sangre completa con anticoagulante (EDTA)

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Soluciones de cloruro de sodio: hipotnica, isotnica e hipertnica

MTODO

1. Rotular cada uno de los tubos con el nombre de la solucin que contendr y
colocarlos en la gradilla.
2. Adicionar 1 ml de la solucin correspondiente en cada tubo.
3. Aadir utilizando la pipeta pasteur 4 gotas de sangre completa a cada tubo, agitar y
dejar en reposo.
4. Colocar 1 gota de la solucin en un portaobjetos, cubrir con un cubreobjetos y
observar bajo el microscopio con el objetivo seco dbil y seco fuerte.
5. Repetir el procedimiento anterior para cada solucin.
6. Dibujar y anotar los resultados de las observaciones.

Sol. Isotnica

Sol. Hipotnica

Sol. Hipertnica

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CUESTIONARIO

3. Defina el concepto de solucin


4. Describir brevemente que le sucede a los glbulos rojos al contacto con la solucin de
cloruro de sodio.
5. Defina el concepto de hemlisis
6. Defina qu es la presin osmtica y la difusin.

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PRCTICA # 7.- REACCIONES DE IDENTIFICACIN DE LOS CARBOHIDRATOS

INTRODUCCIN
Los carbohidratos son compuestos polihidroxilados aldehdicos o cetnicos y de acuerdo a su
cadena pueden ser monosacridos, disacridos, oligosacridos y polisacridos. Los azcares son
compuestos caracterizados por desviar la luz polarizada, por lo que aquellos compuestos que
desvan la luz a la derecha son considerados como dextrorrotatorios o que su rotacin es positiva y
las sustancias que desvan la luz polarizada a la izquierda son levorrotatorios o bien su rotacin es
negativa. Esto es posible determinarlo con un polarmetro.
Los carbohidratos representan el mayor suministro en la alimentacin y la principal fuente de
energa para la poblacin mundial. A pesar de su mayor utilizacin como fuente energtica, slo
una pequea cantidad se almacena en el cuerpo. Cuando la ingestin calrica sobrepasa el
consumo diario, los carbohidratos en exceso se convierten fcilmente en grasas las cuales se
almacenan en el tejido adiposo.
Desde el punto de vista clnico y nutricional es importante identificar y cuantificar algunos
carbohidratos importantes, tanto en raciones alimenticias como en productos elaborados y
materiales biolgicos.

OBJETIVO
El discente realizar reacciones para demostrar las propiedades fsicas y qumicas de los
carbohidratos.

MATERIAL

gradilla
pipetas graduadas de 5 ml
tubos de ensaye de 13X100 mm
mechero bunsen
soporte universal
tripi

tela de alambre
bao mara a 20C
bao mara a ebullicin
bao mara de hielo
pinza para tubo de ensaye
bureta de 100 ml

Solucin coloidal de almidn

REACTIVOS

Reactivo de Mollish
Reactivo de Benedict

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Lugol
cido sulfrico concentrado
Acetona
Hidrxido de sodio 0.1 N
Agua destilada
Solucin de diferentes azcares

MTODO

REACCIN CON EL REACTIVO DE BENEDICT

El in Cu+2 se estabiliza en medio alcalino para formar un quelato con el citrato de sodio
dando un precipitado rojo-naranja en presencia de azcares reductores.

1.
2.
3.
4.
5.
6.

Colocar 1 ml de cada solucin de azcares en diferentes tubos de ensaye.


Aadir a cada tubo 1 ml de NaOH 0.1 N
Verter 1 ml de reactivo de Benedict.
Mezclar los tubos al mismo tiempo.
Calentar todos los tubos a bao en ebullicin por 1 min.
Sacar del bao y dejar enfriar en bao de hielo, observar y anotar el resultado.

REACCIN DE YODO

sta prueba se utiliza para caracterizar a los almidones segn sea el tipo (amilosa o
amilopectina) dando una coloracin caracterstica para cada uno.

1. Colocar en diferentes tubos de ensaye 1 ml de las diferentes soluciones de azcares y


llevar a ebullicin por dos minutos, dejar enfriar 1 minuto.
2. Agregar a cada tubo 1 gota de lugol.
3. Mezclar y anotar el color que se observa.
Una reaccin positiva dar una coloracin azul intensa.

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REACCIN CON EL REACTIVO DE MOLLISH

Los glcidos se deshidratan con cido sulfrico concentrado dando origen a furfurales.
stos se condensan con componentes fenlicos como el -naftol, para dar sustancias qumicas
coloreadas.

1. Colocar en diferentes tubos 1 ml de cada una de las soluciones de carbohidratos.


2. Aadir a cada tubos 2 gotas de reactivo de Mollish, 1 ml de acetona y 1 ml de agua
destilada.
3. Mezclar los 10 tubos al mismo tiempo.
4. Agregar lentamente 0.5 ml de cido sulfrico concentrado a cada tubo de ensaye.
5. Anotar lo observado
CUESTIONARIO

7. Mencionar las funciones de los carbohidratos.


8. Defina la palabra disacrido.
9. Explique las propiedades fsicas y qumicas de los carbohidratos.
10. Explique que diferencia hay entre los almidones y el glucgeno.
11. Cul es el carbohidrato ms abundante en el reino vegetal?

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PRCTICA NO. 8.- REACCIONES DE IDENTIFICACIN DE LPIDOS: PROPIEDADES


GENERALES.

INTRODUCCIN:

stas biomolculas se encuentran en todos los tejidos de los animales, vegetales y en la flora y
fauna microscpicas. Todos los lpidos contienen carbono, hidrgeno y oxgeno, y algunos
nitrgeno, fsforo y azufre. El metabolismo intermedio de los lpidos en animales superiores est
ntimamente relacionado con el de los glcidos y con algunas degradaciones de las protenas,
pues sus vas metablicas tienen diversos puntos en comn; forman la parte principal de los
combustibles productores de energa del cuerpo.
Lpido
a.- Sustancias insolubles en agua pero solubles en los disolventes (de las grasas) como ter,
cloroformo, ter de petrleo, etc.
b.- Son steres reales o potenciales de los cidpos grasos

OBJETIVO:

El discente observar y realizar diferentes purebas para la identificacin de los lpidos.

MATERIAL:

tubos de ensaye de 13X100 mm


Gradilla
gotero
perilla
tela de alambre

mechero Fisher
pipetas gradadas de 5 ml
pinzas portatubos
tripi

Sales biliares
Aceite de cocina
ter

REACTIVOS:

NaOH en solucin
Al(OH)2 en solucin
NaCl

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Aceite oliva
Agua destilada
Manteca de cerdo

Cloroformo
Alcohol

EMULSIFICACIN:
Cuando un aceite es agitado vigoroamente con el agua, el primero se separa en porciones ms
pequeas dando como resultado la formacin de una emulsin. Por lo tanto podramos decir que
una emulsin es una dispersin de un lquido en otro, en el que no es miscible. sta emulsin no
es estable, ya que despus de transcurrido poco tiempo, los 2 lquidos se separan nuevamente. Si
al agua se le agregan sales biliares, se estabiliza por ms tiempo.

MTODO

1. En un tubo de ensaye agregar 5 ml de agua y 10 gotas de aceite vegetal.


2. Agitar fuertemente y observar cuanto tiempo dura la emulsin.
3. En otro tubo de ensaye, depositar 5 ml de agua destilada, 2 gotas de sales biliares y 10
gotas de aceite vegetal, mezclar y observar cuanto tiempo dura la emulsin.
SAPONIFICACIN:
Hidrlisis de una grasa por medio de un lcali. Los productos resultantes de ella son el glicerol y
las sales alcalinas de los cidos grasos, que reciben el nombre de jabones (son agentes limpiados
debido a su accin emulsificante)

MTODO
1.
2.
3.
4.

Colocar 3 ml de NaOH en un tubo de ensaye y 3 ml de Al(OH)2 en otro.


Agregar 10 gotas de aceite de oliva a cada tubo y mezclar bien
Hervir a fuego directo 4 veces cada uno de los tubos, por dos minutos
Vaciar en tros tubos el contenido de NaOH y Al(OH)2 por separado, dejando en ellos el
precipitado formado.

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5. Agregar a cada uno de los tubos con el precipitado 3 ml de agua destilada. Agitar y
observar.
6. Agregar a cada uno de los tubos NaCl a saturacin
7. Observar la formacin de precipitado que se aglomera en la parte inferior del tubo (despus
de un breve reposo).
8. Decantar el lquidon y observar el precipitado en el mismo tubo
9. Agregar 3 ml de agua destilada, agitar y observar si se disuelve y forma espuma jabonosa.
INDICE DE YODO:
Mide el nmero de gramos de yodo fijados en cada 100 g de grasa.

MTODO
1. Tomar 3 tubos de ensaye y colocar a cada uno de ellos 2 ml de alcohol en cada uno y 1 g
de una muestra de lpido diferente en cada tubo (manteca, aceite de cocina y aceite de
oliva).
2. Colocar en bao Mara a ebullicin por un minuto cada tubo y dejar enfriar.
3. Agregar 10 gotas de lugol a cada tubo y mezclar.
4. Agitar perfectamente y observar el resultado anotando cuales son los cambios para cada
una de las muestras.
SOLUBILIDAD:
Todas las grasas son insolubles en agua pero solubles en solventes orgnicos

MTODO
1. Tomar 4 tubos de ensaye y colocar a cada uno de ellos 2 ml de los diferentes solventes
(ter, cloroformo, alcohol y agua).
2. Agregar 10 gotas de aceite vegetal a cada uno, repetir la prueba para el aceite de cocina.
3. Agitar perfectamente y observar el resultado anotando cuales son los mejores solventes,
para cada una de las muestras.
CUESTIONARIO:
1.
2.
3.
4.
5.

Mencione cual de los solventes es el mejor disolvente de lpidos.


Explique por qu la emulsin con sales biliares es ms estable que sin ellas.
Cul es la funcin de los lpidos en el organismo?
Describa la clasificacin de los lpidos.
Cules son las principales zonas de reserva de lpidos en el organismo?

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PRCTICA NO. 9.- DEMOSTRACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA CATALASA

INTRODUCCIN
La catalasa pertenece junto con las peroxidasas al grupo de las hidroperoxidasas. El papel
fisiolgico de la catalasa consiste en la destruccin del perxido de hidrgeno funcionando como
resguardo fisiolgico para impedir su acumulacin, localizndose en la mayor parte de los tejidos
animales. sta enzima aumenta bruscamente en los enfermos con anemia perniciosa y su
disminucin se observa en adolescentes enfermos con hepatitis viral o con neoplasias malignas.

OBJETIVO
El discente observar el ndice de la actividad de la catalasa en el desprendimiento de oxgeno
molecular que se forma con la descomposicin del perxido de hidrgeno.

MATERIAL Y REACTIVOS

Gradilla
Pipetas graduadas
Bao mara
Perilla de plstico
Mechero
Tubos de ensaye
Sangre nitratada
Perxido de hidrgeno
Agua destilada

MTODO

1. Enumerar los tubos de ensaye


2. Agregar a los tubos 2 ml de agua destilada
3. Introducir uno de los tubos en bao en ebullicin (tubo 2)

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4. Aadir a los tubos 2 gotas de sangre (tubos 2, 3, 4 y 5)


5. Introducir los tubos 2 y 3 al bao mara a 37C, el 4 en ebullicin, y el 1 y 5 en ninguno
6. Agregar a todos los tubos 0.5 ml de perxido de hidrgeno
CUESTIONARIO

1. En qu casos se puede encontrar alguna alteracin de la enzima ctalasa?


2. Sirve la determinacin de la catalasa del plasma para apoyar el diagnstico en procesos
inflamatorios severos?
3. En qu casos aumenta la fosfatasa alcaina?
4. Qu rganos estn relacionados con las enzimas ALT y AST?
PRCTICA # 10.- DETERMINACIN DE PROTENAS EN LECHE

INTRODUCCIN

Las protenas de la leche estn constituidas por las casenas y por las protenas del suero o
protenas solubles. La proporcin vara de una raza lechera a otra pero es el componente ms
constante dentro de un mismo hato lechero. Los valores normales se sitan entre 28 y 35 g/L.

OBJETIVO

El discente realizar la determinacin del contenido proteico en diversas muestras de leche.

MATERIAL

Pipetas volumtricas de 10 y 5 ml
Vasos de precipitado de 250 ml

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Agitador

REACTIVOS

Oxalato de potasio
Sulfato de cobalto
Fenolftalena
Solucin de NaOH
Formaldehdo
Leche

MTODO

7. Con pipeta volumtrica medir 25 ml de muestra y vertir en dos vasos de precipitado


(problema y testigo).
8. Adicionar 1 ml de oxalato de potasio a cada vaso.
9. Agregar al testigo 0.5 ml de sulfato de cobalto.
10. Agregar a la muestra problema 4 gotas de fenolftalena y titular con la solucin de NaOH
hasta obtener una coloracin igual al testigo.
11. Adicionar a la muestra problema 6 ml de formaldehido, agitar y titular nuevamente con
NaOH.
12. Realizar los clculos correspondientes

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PRCTICA # 11.- MEDICIN DE LA CONCENTRACIN DE GLUCOSA, UREA Y CREATININA


EN SANGRE

INTRODUCCIN

La determinacin de metabolitos en sangre es un indicador del estado metablico del organismo.


Dentro de las pruebas de laboratorio ms sencillas dentro de sta rea se encuentran la
determinacin de glucosa, urea y creatinina por mtodos espectrofotomtricos.

OBJETIVO

El discente realizar la determinacin de la concentracin de glucosa, urea y creatinina en suero

MATERIAL

Micropipetas
Tubos de ensaye
Kits comerciales de diagnstico
Espectrofotmetro
Bao mara

REACTIVOS

Los indicados en los insertos para cada uno de los metabolitos.

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MTODO

Se seguirn las indicaciones de los insertos para cada uno de los metabolitos, tanto
para la realizacin de las determinaciones como para los clculos de las
concentraciones.

CUESTIONARIO:

1.

Qu indica un nivel alto de glucosa en sangre?

2. Cmo se relacionan los resultados de urea y creatinina con las rutas metablcas?

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BIBLIOGRAFA

Daz Zagoya JC; Leons Oropeza MA. Bioqumica: un enfoque bsico aplicado a las ciencias de la
vida. Mc Graw-Hill. Mxico. 2007.
Hicks, J.J. Bioqumica. Mc Graw-Hill. 2 edicin. Mxico. 2007.
Mathews, D.K; Van Holde, KE; Ahern KG. Bioqumica. Pearson Prentice Hall. 4 edicin. Espaa.m
2002.
McKee, T y McKee JR. Bioqumica. Mc Graw-Hill. 3 edicin. Mxico. 2009.
Murray RK, Bender DA,Bothanik M, Kennely, PJ. Bioqumica Ilustrada de Harper. Mc Graw-Hill
Lenga. Mxico. 2010.

ACTUALIZACIN
Manual de Prcticas de Fisiologa. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad
Autnoma del Estado de Mxico. Toluca, Mxico; 4 de junio de 2013.

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

Director:
Dr. en C. Mauro Victoria Mora
Elabor:

Dra. Mara Uxa Alonso Fresn


IA Mara Lourdes Garca Bello
M. en C. Susana Goi Cedeo
QFB Hctor Roberto Daz Guadarrama
Revis:

Dra. Mara Uxa Alonso Fresn


IA Mara Lourdes Garca Bello
M. en C. Susana Goi Cedeo
QFB Hctor Roberto Daz Guadarrama

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