UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO
INFORME DE LA PRCTICA N.- 5

TCNICAS HISTOLGICAS

DOCENTE: Lcdo. IVN PEAFIEL MNDEZ

TERCER SEMESTRE

ELABORADO POR: NELSON JAVIER CHAGNAMA

FECHA DE LA PRCTICA: 15 - 07 - 2016

FECHA DE ENTREGA: 03 - 08 - 2016
DURACIN DE LA PRCTICA: 3 HORAS: De 17:00 a 20:00

PERIODO ACADMICO: Abril 2016 - Agosto 2016

TTULO DE LA UNIDAD:
Unidad 3: TINCION Y MONTAJE.

TEMA DE LA PRCTICA:

TINCION HEMATOXILINA EOSINA Y MEDIO DE MONTAJE DE LOS

LAMINILLAS IMPREGNADAS CON TEJIDOS.

OBJETIVOS:

OBJETIVO GENERAL:

Realizar una correcta tincin y montaje de las laminillas que estn con un tejido
impregnado en ella.

OBJETIVOS ESPECFICOS:
Preparar la batera de tincin con los reactivos y sustancias necesarias en Eosina y
Hematoxilina.
Observar los diferentes procedimientos para una correcta tincin histoqumica.
Realizar el montaje de laminillas para la preservacin de un material histolgico.
Conocer las diferentes tcnicas de montaje
Reparar las laminillas rotas de un modo adecuado y especfico.

FUNDAMENTACIN TERICA O MARCO TERICO:

TINCIN HEMATOXILINA-EOSINA

La tincin hematoxilina-eosina corresponde a la mezcla de hematoxilina y eosina. La tincin

hematoxilina y eosina es el mtodo de tincin de rutina utilizado en histologa y medicina
diagnstica.
El mtodo supone la aplicacin de la tincin de hematoxilina, que por ser catinica o bsica,
tie estructuras cidas (basfilos) en tonos azul y prpura, como por ejemplo los ncleos
celulares; y el uso de eosina que tie componentes bsicos (acid filos) en tonos de color rosa,
gracias a su naturaleza aninica o cida, como el citoplasma.

HEMATOXILINA
Es un compuesto que se obtiene de la planta leguminosa Haematoxylum campechianum ,
conocida tambin con el nombre de palo de Campeche. Es un producto natural que al ser
oxidado constituye una substancia de color morado oscuro denominada hematenaDe carcter catinico o bsica, por lo que tie estructuras cidas (basfilos) en
tonos azul y prpura.
Se utiliza en histologa para teir los componentes aninicos (cidos) de los tejidos, a los que
da una coloracin violeta. Tie intensamente los ncleos de las clulas, dado que estos
contienen cidos nucleicos ricos en radicales cidos.
Tal como se obtiene de la planta e incluso luego de sufrir el proceso de oxidacin, su
capacidad de tincin es muy limitada. Por lo tanto, debe combinarse con iones metlicos,
especialmente las sales de hierro (III) o aluminio (II), que actan como mordientes.

Si bien la hematoxilina es una sal neutra, suele ser denominada como un colorante bsico, ya
que el componente cromgeno reside en el complejo catinico (bsico) de la misma.
Es de notar que la tincin histolgica por hematoxilina no indica tanto la constitucin qumica
de los componentes celulares, sino la densidad de cargas elctricas negativas de los mismos.
Acta como un colorante BSICO que se asocia y tie componentes CIDOS de la clula
como estructuras aninicas (que posean fosfatos, sulfatos y/o carboxilos ionizados):

Heterocromatina y nuclolos
ARN ribosomal
Matriz extracelular
Color: azul o violeta

EOSINA
Es un colorante basfilo (afinidad con lo bsico, porque es acida), en forma de polvo rojo
cristalino, de uso ampliamente extendido en el mbito industrial, desde la industria textil hasta
el estudio biolgico e histolgico. Como curiosidad, tambin se utiliza en la coloracin de la
gasolina.
La eosina es un compuesto cido cuya propiedad est basada en su polaridad negativa, lo que
le permite enlazarse con constituyentes celulares de carga positiva. Por ello colorea
componentes y orgnulos citoplasmticos, colgeno y obras musculares, pero no los ncleos
(que son bsicamente cidos nucleicos y estn cargados negativamente). Aquellos
componentes que se tien con eosina son conocidos como acidlos o eosinlos.
La coloracin resultante de la tincin con eosina es rosada-anaranjada para citoplasmas, y rojo
intenso en el caso de los eritrocitos. Es fuertemente uorescente, aunque esta caracterstica es
muy poco utilizada.
La eosina es un colorante muy usado en tinciones de vitalidad. Al ser un colorante aninico
(carga negativa) no penetra en el interior celular a no ser que la membrana sea permeable.
Esto solo sucede en clulas muertas. Por tanto, en una tincin con eosina encontraremos
clulas con el interior teido (muertas) y clulas solo teidas en su entorno (vivas).

Colorante CIDO (predomina densidad de carga negativa), que se asocia y colorea

estructuras catinicas (componentes BASICOS) del citoplasma y matriz extracelular
Filamentos citoplasmticos.
Componentes membranosos intracelulares.
Fibras extracelulares (por sus aminocidos bsicos ionizados).
Color: rosado
Actualmente existen dos compuestos conocidos como eosina y que estn ntimamente
relacionados:
Eosina Y (C20H8Br4O5, tetrabromouorescena, CI 45380, CI 45386), comnmente
conocida como eosina amarilla, y
Eosina B (C20H8Br2N2O9, dibromodinitrouorescena, CI 45400), tambin conocida
como eritrosina B azulada.
Ambas, en principio, son intercambiables, sin que sean notables las diferencias entre ellas en
el resultado de la tincin, por lo que la preferencia de una sobre otra suele seguir un criterio
subjetivo. A pesar de ello, la eosina Y es la ms utilizada en procedimientos rutinarios
histolgicos, como tincin de contraste en la tcnica de la Hematoxilina Eosina, y su
preparacin alcohlica es un paso obligado en la Tcnica de Papanicolaou.

Protocolo:
1) Previamente tendremos que elaborar un filtro para la hematoxilina.
2) Desparafinar las muestras.
Este paso se realiza en dos tandas: la primera en la estufa 60C durante 10 min y
posteriormente

lquido

intermedio,

Xilol,

tres

baos

de

10

min

cada

uno.

Asegurarse durante todo el proceso que los diferentes reactivos cubran por completo las
muestras de no ser as, agitar el cestillo con las muestras de forma vertical, de arriba a abajo.

Una vez finalizado este paso, no olvidar escurrir el cestillo en papel empapante con la
intencin de evitar contaminar los diferentes reactivos.

Estufa.

Muestras en la estiua a 60C

3) Hidratar con una batera de alcoholes a concentraciones decrecientes (de 100% al 50%) tres
minutos por cada copln de alcohol.
Ir observando la superficie del cristal.

Un par de coplins de alcoholes.

4) Agua, en nuestro caso la utilizamos del grifo ya que el agua de Valencia es rica en calcio.
En este paso es imprescindible prestar atencin a la superficie del cristal. Agitar
enrgicamente el cestillo hasta que en esta no se encuentre uniforme.
5) Hematoxilina, tiempo estimado de 3-5 min.

Unos segundos antes de que finalice el tiempo tendremos que transportar el coplin con la
hematoxilina y las muestras a la pila, donde pasaremos el cestillo a otro coplin y rellenaremos
este de agua del grifo a chorro constante hasta que el agua salga transparente.

Hematoxilina en la pila con el chorro de agua cayendo.

Tener la precaucin de evitar que el chorro de agua no incida directamente en las muestras, ya
que esto podra daar las muestras.

El chorro a un lado sin daar las muestras

Aadir agua hasta que salga transparente.

Una vez el agua del coplin se aprecie transparente se trasladar de nuevo a la mesa de tincin
para continuar con el protocolo.
6) Diferenciacin con cido clorhdrico.

En este caso, la estancia de las muestras en el reactivo ser muy rpida.

7) Neutralizacin con bicarbonato.
Debido a nuestra localizacin geogrfica, en nuestro laboratorio utilizamos agua del grifo.
8) Eosina, de 30 segundos a 3 min.
9) Lavar en agua corriente.
Este proceso tambin ser con la mayor rapidez posible, de lo contrario se podra perder el
color.
10) Deshidratacin a concentraciones crecientes de alcohol (del 50% al 100%).
Desde los 50-96% las muestras estarn en contacto con el lquido una vez durante 30
segundos, mientras que al 100% se dejarn reposar las muestras en tres coplins diferentes
durante 10 min cada uno.
11) Lquidos intermedios, Xilol.
Tres coplins diferentes y cinco min por coplin.
12) Para finalizar montaremos las muestras con lquido de montaje Eukitt.

Lquido de montaje.

Muestras recin montadas.

MONTAJE DE LAS LAMINILLAS

El paso final en la preparacin de una lmina portaobjetos es el de cubrir la porcin que
contiene el tejido con un cubreobjetos. Esto hace que la lmina sea permanente y permite el
examen microspico. Para pegar la laminilla hay tres medios de montaje que se pueden usar:
resanas naturales (blsamo de Canad), resinas sintticas (usadas en la actualidad) y medios
acuosos (estos ltimos se usan en estructuras alteradas por la deshidratacin o de medios
basados en xileno como tinciones para lpidos).
MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS:
MUESTRA:
Placas porta objetos
Placas cubreobjetos de 24x50 mm
Resina
Papel absorvente
Pipeta pasteur
MUESTRA:
Tejidos impregnados a la laminilla.

PROCEDIMIENTO:
Observar la laminilla y aplicar las tcnicas indicadas para cada procedimiento
TECNICA DE MONTAJE:
Colocar 3 gotas de entelan en la placa
Ubicar la palca con el cubreobjetos y colocar correctamente para evitar burbujas

TECNICA DE REPARACION DE LAMINILLAS

Recoger todos los pedazos de las laminillas
Todos los pedazos que estn implicadas a dicha laminillas
Colocar resina en un portaobjetos
Unir los pedazos en la placa con resina e ir pegando
Colocar ms resina y poner encima un cubreobjetos.
OBSERVACIONES:
La colocacin de la resina resulto un poco difcil
La reparacin de las laminillas fue muy complicada ya que los pedazos eran muy diminutos y
no haba como encajarlos.
CONCLUSIONES:

Las tcnicas de montaje y tincin son muy importantes para el procesamiento y

preservacin de tejidos.

Existen varias tcnicas

Para la realizacin de dichos procesos pero se le aplica lo indicado por el docente.

La reparacin de las laminillas es de vital importancia para la salud de un paciente ya

que si no se lo hace podra perjudicar la salud de un paciente por la medida del tejido
que pudo ser patolgico.

RECOMENDACIONES:
Utilizar todo el equipo de proteccin para evitar derrames de los reactivos o algn otro
accidente.
Realizar de una manera correcta los protocolos a seguir, para deben tener los
conocimientos necesarios y de den estar bien capacitados para realizar esos procesos.
SITIOS WEB:
https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_hematoxilina-eosina
http://procesamientohistologicoldl.blogspot.com/2015/05/protocolo-de-tinciones-ihematoxilina.html
http://es.slideshare.net/RosiVallejo/coloraciom-hematoxilina-eosina-y-medios-de-montaje
http://hematoxilina-eosina-uc.blogspot.com/