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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD

Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA


Programa: _ing_Agroforestal
PREINFORME: Laboratorio Bioqumica Metablica-BM
Nombre y Apellidos: Ruben Gonzalez Padilla Cdigo 72278775
Email: rdgonzalezp@unadvirtual.edu.co Fecha: 13/octubre/2012
TTULO DE LA PRCTICA:

1. MATERIALES Y MTODOS

ACTIVIDAD URESICA EN MUESTRAS DE ORIGEN


BIOLGICO

1.1Materiales y Equipos requeridos


Materiales

Equipos

INTRODUCCIN
La ureasa es una enzima amidohidrolosa de peso
molecular: 480.kD, punto isoelctrico: 5.0 y pH ptimo entre
6 y 7, cataliza la hidrlisis de la urea produciendo gas
carbnico, hidrxido de amonio, segn la reaccin, La
ureasa, se encuentra en varios tejidos vegetales como en el
haba de soya, lo cual implica que pueda ser usada en
anlisis de alimentos para determinar urea, ya sea por el
mtodo de Kendal o por titulacin del amonio liberado,
cataliza la hidrolisis de la urea a dixido de carbono y
amoniaco.
Mentefacto conceptual

Pipeta graduada 5 y 10 ml

Balanza analtica

Soporte universal

Agitadores magnticos

Mantraz aforado 100ml

Pinzas para bureta


Beaker de 400 ml
Bano termostatado
Tubo de ensayo
Gradilla
Bureta de 25 ml
Erlenmeyer de 125

1.2 Reactivos a utilizar


Reactivo

Frmula

Hidrxido de sodio

Concentracin
0,1 N

NaOH

Cloruro de
mercurio

HgCl2 1

0,1 N

Fenolftalena Rojo
demetilo

Agua estilada
Solucin buffer
fosfato

1.3 Procedimiento:

(Elaborarlo en este espacio)

EXTRACCIN Y SOLUBILIZACIN DE UREASA EN


HARINAS, SUELOS FORRAJE (MTODO SALTING
OUT)

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1
2
3
4

concentrado
suelo
forraje
suelo

2,4
3,2
2
2,4

3. RESULTADOS ESPERADOS
Cuantificar la capacidad amortiguadora de
muestras biolgicas mediante tcnicas
potenciometricas y de titulacion volumtrica, en
presencia de los indicadores adecuados.
Realizar un analisis comparativo del potencial
bufferante de muestras de origen biologico ,como:
leche, sangre, orina , concentrado y forrajes
4. GLOSARIO
Biocatalizador: referente a un enzima natural.
Permanganometrico: mtodo de cuantificacin
reactiva.
Estroma: armazn de un tejido que sirve para
retener entre sus mallas elementos celulares.
Desaminacion: degradacin de una aminocido.

BIBLIOGRAFA
1.3.1 Toma de muestra (cuando se requiere)
Alistar el montaje de titulacin: lavar, purgar
,cargar y enrasar la bureta con HCl 0,1N
Colocar el Erlenmeyer que contiene la solucin
blanco, debajo la bureta y adicionar lentamente el
HCl, hasta que aparezca y permanezaca un color
rosado-violceo.
Esto indica que los equivalentes-gramo del
hidrxido de amonio fueron neutralizados por los
equivalentes-gramo del cido clorhdrico.
Registrar en su tabla de datos, los mL de HCl
gastados en la titulacin del blanco.
Repetir el procedimiento anterior, con el tubo St y
anotar los mL empleados de HCl
Continuar el proceso con los tubos 1, 2, 3 y 4 ;
registrar los mL gastados de HCl en la tabla de
datos.
1.3.2 EN LABORATORIO
Tomar 3 Erlenmeyer pequeos rotulados 1, 2,3 adicionar: 1
20 ml agua destilada, 2 20 ml solucin buffer, 3 20 ml leche
dos gotas fenolftalena, agitar 10 segundos titular 1,2,3 hasta
color rosa permanente, registrar NaOH gastado montaje de
titulacin con NaOH 0,1N
2. TABLA DE DATOS
Tabla 1.Volmenes de HCl 0,1N, empleados en la
titulacin del NH4OH

Tubos
B
St

Tipo de Muestra

mL gastados de
HCl 0,1N
1
2.1

http://es.wikipedia.org/wiki/Desaminaci%C3%
http://buscon.rae.es/draeI/SrvltConsulta
http://bvs.sld.cu/revistas/ibi/vol15_2_96/ibi01296.htm
II. CAPACIDAD AMORTIGUADORA () Y POTENCIAL
AMORTIGUADOR (p ( ) DE MUESTRAS BIOLGICAS
INTRODUCCIN
Solucin amortiguadora es aquella que se opone los
cambios de pH cuando se agrega cido o lcali. Tales
soluciones se utilizan en muchos experimentos bioqumicos
en los cuales se necesita controlar exactamente el pH. De la
ecuacin de Henderson-Hasselbalch, se puede deducir que
el pH de una solucin amortiguadora depende de dos
factores uno es el de pKa y el otro es la proporcin de sal a
cido. Esta proporcin se considera igual a las cantidades
de sal y cido mezcladas en el intervalo de pH entre 4 y 10,
donde la concentracin de hidrogeniones e hidroxilos del
medio acuoso son muy baja y se puede ignorar.
PH = pKa + log 10 [sal] / [cido]
Mentefacto conceptual

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muestras biolgicas
(concentrado ,orina , sangre
y forraje )

1.2 Reactivos a utilizar


Reactivo

Frmula

Hidrxido de sodio

Concentracin
0,1 N

NaOH

Fenolftalena
rojo de metilo

Agua estilada
Solucin buffer
fosfato

Erlenmeyer de 125mL

Potencimetro

pipetas graduadas de 10mL

equipo de titulacin

Mtodo de titulacin volumtrica


Alistar 3 beaker erlenmeyer pequeos y rotular
as: 1, 2, 3.
Adicionar al erlenmeyer uno , 20mL de agua
destilada , al dos , 20mL de solucin buffer y al
tercero, 20 mL de leche.
Colocar en cada frasco 2 gotas de fenolftalena y
agitar por 10 segundos
Alistar el montaje de titulacin y cargar la bureta
con solucin de NaOH 0,1N
Colocar el primer frasco bajo la bureta y titular la
solucin acuosa, adicionando el NaOH hasta que
aparezca y permanezca un color rosado plido,
registrar el volumen gastado en su tabla de datos.
Repetir la titulacin anterior con las dems
soluciones, buffer y leche. Registrar volmenes en
tabla de datos.

esptula metlica

balanza digital

1.3 Procedimiento

1. MATERIALES Y MTODOS
1.1Materiales y Equipos requeridos
Materiales

agitador de vidrio,
probeta graduada de 100mL
bureta de 25mL
soporte universal
beaker de 250mL

Equipos

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2. TABLA DE DATOS
Tabla 1.Volmenes de HCl 0,1N, empleados en la
titulacin del NH4OH

Muestras
Agua
destilada
Buffer fosfato
Leche

Vm (mL)

V NaOH 0,1N (mL)

20

3. RESULTADOS ESPERADOS
Que al Cuantificar la capacidad amortiguadora de muestras
biolgicas mediante tcnicas
Potenciomtricos y de titulacin volumtrica, en presencia de
los indicadores adecuados.

1.3.1 Toma de muestra (cuando se requiere)


Tcnica Potenciomtricos
Alistar 5 Beaker Erlenmeyer y rotularlos del 1 al 5
Al primer frasco , adicionar +/-5 gramos (Wm ) de
concentrado pulverizado y 100 mL de agua
destilada , agitar con varillad de vidrio en
agitador magntico por 5min ,filtrar y medir el pH
de este filtrado ,registrar como pH1 .
Posteriormente , agregar 5 mL de HCl 0,1N ,
agitar de nuevo por un minuto y volver a medir el
pH2
En el segundo y tercer beakers , repetir el
procedimiento con las muestras de
Harina y forraje picado, respectivamente.
En el cuarto vaso, Agregar 1mL de sangre y 19
mL de agua destilada , agitar por 30 segundos y
medir pH1 , luego, adicionar 5mL de NaOH 0,1N ,
agitar por un minuto y volver a observar el pH
final (pH2)
En el quinto frasco, colocar 20mL de orina junto
con 20mL de agua destilada,
agitar por 30 segundos y registrar el pH1 , luego ,
adicionar 5mL de NaOH 0,1N , agitar nuevamente
por 1min y evaluar el pH final (pH2)

1.3.2 EN LABORATORIO
Tomar 3 Erlenmeyer pequeos rotulados 1, 2,3 adicionar: 1
20 ml agua destilada, 2 20 ml solucin buffer, 3 20 ml leche
dos gotas fenolftalena, agitar 10 segundos titular 1,2,3 hasta
color rosa permanente, registrar NaOH gastado montaje de
titulacin con NaOH 0,1N

Que al Realizar un anlisis comparativo del potencial buffer


ante de muestras de origen
Biolgico, como: leche, sangre, orina , concentrado y
forrajes de los resultados esperado y que comparados con la
que se ha hecho en otros experimentos halla un error
mnimo de resultado.
4. GLOSARIO
cido dbil,
base dbil,
electrolitos ,
disociacin electroltica

BIBLIOGRAFA
http://recursosbiblioteca.utp.edu.co/tesisdigitales/texto/62816
2G216.pdf

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III. DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS NO
ESTRUCTURALES (CNE), POR EL MTODO DE FENOLCIDO SULFRICO.
INTRODUCCIN
Los carbohidratos que no forman parte de la pared celular se
denominan carbohidratos no estructurales (CNE). Son
compuestos activos en el metabolismo de las plantas, se
almacenan en rganos de reserva y estn constituidos por
azcares libres (glucosa, fructosa, sacarosa y, en menor
medida, maltosa, melobiosa, rafinosa y estaquiosa), almidn
y fructosanos. Este grupo de carbohidratos posee un
potencial de fermentacin rpido y total en el rumen, al igual
que en el proceso de fermentacin de los ensilajes. Los
CNE se pueden determinar con una metodologa analtica
sencilla: se gelatiniza el almidn de la muestra en agua, se
incuba con takadiastasa y se realiza una hidrlisis cida para
liberar azcares reductores, los que se cuantifican por el
mtodo Shaeffer-Somogyi.
Mentefacto conceptual

Llevar el Beaker con la solucin al bao


termostatado y calentar a 90C,durante 20 min
Dejar enfriar por 5 min y filtrar sobre papel filtro.
Medir el volumen del filtrado(Vf) y pasar 5mL a un
tubo de ensayo, adicionar a ste 5mL de NaOH
0,6N, agitar por 15 segundos, tapar y rotular as:
FCNE:
Filtrado
para
carbohidratos
no
estructurales.

1.3.2 EN LABORATORIO
Tomar 3 Erlenmeyer pequeos rotulados 1, 2,3 adicionar: 1
20 ml agua destilada, 2 20 ml solucin buffer, 3 20 ml leche
dos gotas fenolftalena, agitar 10 segundos titular 1,2,3 hasta
color rosa permanente, registrar NaOH gastado montaje de
titulacin con NaOH 0,1N
2. TABLA DE DATOS
Tabla 1.Datos para la cuantificacin de CNE
Indicadores
Descripcin
Wm
Peso de la muestra
Vf
Volumen del filtrado
Ast
Absorbancia del estndar
Am
Absorbancia del tubo que
contena el FCNE

Valor

3. RESULTADOS ESPERADOS
Protena bruta (PB)
Se obtiene a partir del contenido de nitrgeno total de un
alimento, determinado por el mtodo Kjeldahl, multiplicado
por el factor 6,25 (debido a que las protenas contienen un
16% de N en promedio). El valor de PB incluye a la protena
verdadera y a otros compuestos nitrogenados no proteicos.
Lignina detergente cido (LDA)
Su extraccin se realiza a partir del residuo de forraje
insoluble en detergente cido con cido sulfrico al 72%. La
lignina es un compuesto no glcido de la pared celular que
dificulta la accesibilidad de los microrganismos del rumen a
la celulosa y la hemicelulosa, limitando la digestibilidad de
esos componentes.
4. GLOSARIO

1.3 Procedimiento
Extraccin:
Pesar +/- 1.0g de muestra en balanza analtica y
registrar como: (Wm) ,depositarla luego en un
vaso de precipitado y agregar 50 mL de solucin
de HCl 0,6N. Agitar constantemente con la varilla
de vidrio durante 3 minutos.

Las Pentosas Xilosa Se encuentra como componente en la


madera, Ribosa Es un constituyente de los cidos nucleicos
Arabinosa Forma parte de las gomas, mucilagos y pectinas
(de este grupo, estas son la snicas que normalmente
ingerimos dentro de mermeladas y dulces)
Las Hexosas: (son 24 pero, solamente 4 tienen importancia
biolgica)D-glucosa aparece en los frutos maduros, sangre y
tejidos animales. Esta constituye el azcar del organismo, es
muy soluble en agua, yes el carbohidrato que transporta la
sangre y el que principalmente utilizan los tejidos .D-manosa
Siempre aparece combinado en la naturaleza.
BIBLIOGRAFA
http://recursosbiblioteca.utp.edu.co/tesisdigitales/texto/62816
2G216.pdf
http://es.scribd.com/doc/98992356/OVA-Carbohidratos

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IV. ACTIVIDAD CATALTICA DE LA CATALASA (ACAT)
INTRODUCCIN
La catalasa como biocatalizador de origen proteico, es una
enzima xido-reductasa que participa en la degradacin del
perxido de hidrgeno (H2O2), hasta Oxgeno molecular
(O2) y agua (H2O). La reaccin bioqumica enzimtica
(RBE) que cataliza es la siguiente:

1. MATERIALES Y MTODOS
1.1Materiales y Equipos requeridos
Materiales

Equipos

Montaje de titulacin (soporte


universal, bureta ,pinzas ,
erlenmeyer )Montaje de titulacin
(soporte universal, bureta ,pinzas
, erlenmeyer )
pipeta graduada

Mentefacto conceptual

Beaker de 400Ml
tubos de ensayo con gradilla

1.2 Reactivos a utilizar


Reactivo

Frmula

Concentracin

H2O2

0,05M

H2SO4

2N

KMnO4

0,01M

Extractos de
catalasa (ECAT)

1.3 Procedimiento
Extraccin
Frutas, verduras concentrados
Pesar 2g de muestra picada pulverizada y
colocarla en un tubo de centrifuga ,luego adicionar
10mL de solucin fra de buffer fosfato 0,05M,
pH=6,8-7,0, agitar, con agitador de vidrio (3min) y
centrifugar a 2500rpm ,durante 5min
Sacar el sobrenadante, pasarlo a una probeta,
medir su volumen, registrarlo como: Vs y tomar 5
mL de ste para depositarlo en un tubo de ensayo,
taparlo, rotularlo como: EVCAT (extracto de
verdura para catalasa) EFCAT (extracto de fruta
para catalasa), ECCAT (extracto de concentrado
para catalasa), colocarlos inmediatamente en
bao de hielo.
Sangre y orina
En un tubo de ensayo, colocar 0,2 mL de sangre y
10 mL de buffer fosfato fro, agitar vigorosamente
hasta obtener mezcla completa, tapar, rotular:
SSCAT (Solucin sangunea para catalasa) y
guardar en refrigeracin bao de hielo. En el
caso de la orina, mezclar 4 mL de muestra con 6
mL de buffer fro, agitar, tapar, rotular: SOCAT

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(solucin de orina para catalasa), colocar en bao
de hielo.
1.3.1 Toma de muestra (cuando se requiere)
Cuantificacin
Agronmica
2.1 Mezcla Reactiva
Alistar 7 tubos de ensayo y rotularlos as: B, 1, 2,3 ,4,5
,6,colocarlos en bao de hielo y adicionar los siguientes
reactivos en el orden dado:

3. RESULTADOS ESPERADOS
La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas
de los tejidos animales y vegetales
El cambio de pH si afecta la actividad
Enzimtica por que cuando se le agrego el hcl disminuyeron
las reacciones con las muestras, por lo consiguiente, con el
perxido de hidrogeno ya que el hcl desnaturalizo a la
catalasa que esta es una protena.
4. GLOSARIO
APARIENCIA La Catalasa es un lquido, que concentrado
tiene un color caf claro, derivado del Aspergillus Nger.
PROPIEDADES
La Catalasa a base Aspergillus Nger es efectiva bajo un
adecuado rango de temperatura y de pH, y en ms altas
concentraciones de perxido de hidrgeno, que la Catalasa
derivada de fuente animal.

BIBLIOGRAFA
http://bioquimica.obolog.com/determinacion-actividad-catalasafrente-diferentes-factores-1287945
http://es.wikipedia.org/wiki/Catalasa

Titulacin permanganomtrica
Alistar el montaje de titulacin, colocar el Erlenmeyer debajo
de la bureta y titular adicionando lentamente el KMnO4,
agitando, hasta que aparezca y permanezca un color
Rosado violeta plido, por 30 segundos, en la solucin
reactiva, registrar los mL de
Permanganatos gastados en este proceso.
2. TABLA DE DATOS
Tabla 1.Datos para actividad cataltica de catalasa (ACAT)
Tubos
mL de KMnO4 0,01N
Vs (mL)
B
1
2
3
4
5
6

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V. CUANTIFICACIN DE NITRGENO NO PROTEICO
(NNP) (Fraccin A de Van
Soest)
INTRODUCCIN
El NNP en los alimentos en general, esta constituido por
compuestos nitrogenados de bajo peso molecular, tales
como pptidos, aminocidos libres, cidos nucleicos,
aminas, amidas y amonio (NRC 2001) y puede representar
entre el 90 y el 100% de la fraccin soluble (Carulla 1999).
Van Soest (1994), indica que en pastos frescos est fraccin
esta fundamentalmente constituida por pptidos, nitratos y
aminocidos no esenciales, entre los que se destacan
glutamina, asparagina y el cido aminobutrico. Rodrguez
(1999) encontr que el NNP en praderas de kikuyo y
ryegrass (Lolium perenne L) comprenda entre el 82 y el
100% de la fraccin soluble y que esta, a su vez,
corresponda a cerca del 40% del N de la planta (ver tabla
4). Otros autores, por el contrario, han reportado valores
ms bajos. As, Messman et al (1992) encontraron que el
NNP represent el 8.1 y el 12.2% de la PC en muestras
de Festuca
arundinacea Schreb
y Lolium
perenne L,
respectivamente.

Frmula

Concentracin

Acido Tricloroactico
(ATA)

( Cl3-C-COOH
)

al 10%

1.3 Procedimiento
Extraccin con cido Tricloroactico (ATA)
Pesar +/- 1,0 g de muestra (picada pulverizada) ,
en balanza analtica y registrar como ( y colocar en
vaso de precipitado
Adicionar 30 mL de agua destilada fra, agitar por
Adicionar 20 mL de solucin de ATA, agitar por
1min
Reposar a Tambiente por 15 min
Filtrar con papel filtro sobre probeta
Medir el volumen del filtrado(Vf)
Recolectar 5 mL del filtrado, colocarlos en un tubo
de ensayo y rotularlo: FNNP: filtrado para
nitrgeno no proteco
Colocar el papel filtro con el residuo, en una
cpsula de porcelana y secar en el horno por
30min a 105C.
Cuantificacin
Cuantificar el Nitrgeno en el filtrado, por mtodo
espectrofotomtrico de Biuret-Lowry
a) Mezcla de reactivos
Alistar 3 tubos de ensayo, rotularlos as: B:blanco ; st
:estndar ; m: muestra
Adicionar los siguientes reactivos en el orden dado, segn el
cuadro:

Mentefacto conceptual

Nitrgeno no
proteico

los compuestos
de nitrgeno que
pueden ser
convertidos en
protenas

Reactivo

por algunos
organismos
vivos.

3. RESULTADOS ESPERADOS
Reconocer la porcin de nitrgeno de origen proteico y no
proteico de los materiales analizados.

1. MATERIALES Y MTODOS

BIBLIOGRAFA

1.1Materiales y Equipos requeridos

http://www.lrrd.org/lrrd20/4/corra20059.htm

Materiales

Biolgico, como: leche, sangre, orina , concentrado y


forrajes de los resultados esperado y que comparados con la
que se ha hecho en otros experimentos halla un error
mnimo de resultado.

1.2 Reactivos a utilizar

Equipos

BIBLIOGRAFA
http://recursosbiblioteca.utp.edu.co/tesisdigitales/texto/62816
2G216.pdf