Galeria API 20E

(Sistemas de identificacin multipruebas)

La batera de pruebas API20E es un sistema de identificacin rpida para bacterias de la
familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram -. Bsicamente consta de 21 tests
bioqumicos estandarizados y miniaturizados, y una base de datos. Este sistema presenta las
ventajas de ser rpido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira
de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada
tubo es una prueba bioqumica distinta. La prueba nmero 21, la oxidasa, se hace de forma
independiente a la tira.
Las pruebas de que consta la galeria son las siguientes:
Prueba
ONPG
ADH
LDC
ODC
CIT
H2S
URE
TDA
IND
VP
GEL
GLU
MAN
INO
SOR
RHA
SAC
MEL
AMY
ARA
OX

Reaccin / Enzimas
Beta-galactosidasa
Arginina deshidrolasa
Lisina descarboxilasa
Ornitina descarboxilasa
Utilizacin del citrato
Produccin de H 2 S
Ureasa
Triptfano desaminasa
Produccin de indol
Produccin de acetona (Voges-Proskauer)
Gelatinasa
Fermentacin/oxidacin de glucosa
Fermentacin/oxidacin de manitol
Fermentacin/oxidacin de inositol
Fermentacin/oxidacin de sorbitol
Fermentacin/oxidacin de ramnosa
Fermentacin/oxidacin de sacarosa
Fermentacin/oxidacin de melobiosa
Fermentacin/oxidacin de amigdalina
Fermentacin/oxidacin de arabinosa
Citocromo oxidasa

A patir de una colonia bien aislada del microorganismo, hacer una suspensin en 5 mL de

solucin salina (1% de NaCl) o 5 mL de agua estril.

Llenar con la suspensin de bacterias los tubos, no la cpula (cada pocillo tiene un tubo y
una cpula, parte aerobia), de todos los pocillos.

Llenar la cpula de los pocillos CIT , VP, GEL con la suspensin de bacterias.

Cubrir con aceite mineral las cpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S para
obtener anaerobiosis.

Poner la tira en su propia cmara hmeda de incubacin. Previamente poner agua en los
alvolos de la cmara para proporcionar una atmsfera hmeda durante la incubacin.

Incubar a 37 C durante 18-24 h.

Tras la incubacin se anotan los resultados inmediatos, es decir, los que no requieren ser
revelados.
Determinadas pruebas requieren ser reveladas, para el revelado se tienen que
tener en cuenta dos criterios:

Si la glucosa da negativo y los tests positivos son dos o menos de dos, no hay que aadir
reactivos. Cuando sto ocurre se hacen otros tipos de API como el API 20NE, API OF, el
API M o el API 10S para ver determinados metabolismos especiales.

Si la glucosa es positiva y/o tres o ms tests son positivos se revelan los test que requieren

reactivos:
TDA
Aadir una gota de FeCl3 10 %.
VP
Aadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una gota del reactivo 2 (C2 H5 OH).
IND
Aadir una gota de reactivo de Kovacs o de Dimetilamino-cinamaldehido.
Oxidasa
Aadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recin preparado.
Interpretacin

La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparacin de los colores de cada pocillo
con los de las tablas de lectura, y anotando el resultado como positivo o negativo (ms
adelante se explicar con detalle).
Prueba

Reaccin / Enzimas

Negativo

Positivo

ONPG
ADH
LDC
ODC
CIT

Beta-galactosidasa
Arginina deshidrolasa
Lisina descarboxilasa
Ornitina descarboxilasa
Utilizacin del citrato

amarillo
rojo o naranja
rojo o naranja
rojo o naranja
azul oscuro o turquesa

H2S

Produccin de H 2 S

URE
TDA

Ureasa
Triptfano desaminasa

sin color
amarillo
amarillo
amarillo
verde
sin precipitado
negro
amarillo
amarillo

IND

Produccin de indol

amarillo

VP
GEL
GLU
MAN
INO
SOR

Produccin de acetona (VogesProskauer)

Gelatinasa
Fermentacin/oxidacin de glucosa
Fermentacin/oxidacin de manitol
Fermentacin/oxidacin de inositol
Fermentacin/oxidacin de sorbitol

precipitado negro
rojo o naranja
marrn-rojo
color rosa o anillo rosarojo

sin color

rosa-rojo

sin difusin
azul o verde
azul o verde
azul o verde
azul o verde

difusin de pigmento
amarillo
amarillo
amarillo
amarillo

RHA
SAC
MEL
AMY
ARA
OX

Fermentacin/oxidacin de ramnosa
Fermentacin/oxidacin de sacarosa
Fermentacin/oxidacin de melobiosa
Fermentacin/oxidacin de amigdalina
Fermentacin/oxidacin de arabinosa
Citocromo oxidasa

azul o verde
azul o verde
azul o verde
azul o verde
azul o verde

amarillo
amarillo
amarillo
amarillo
amarillo

Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil numrico de 7 cifras.

Los pocillos estn separados en grupos de tres: en total tenemos 7 grupos de tres
tubos o tripletes (el test nmero 21 corresponde al test de la oxidasa).
Para obtener el perfil nmerico de 7 cifras, a cada pocillo se le dar el valor 0, 1, 2
4, de acuerdo a los siguientes criterios:

Si la reaccin es negativa se pone 0.

Si la reaccin es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si es el segundo,

4 si es el tercero.

Se suman los valores de cada triplete, con las sumas de los siete tripletes se obtiene un
cdigo de 7 cifras.

Con este cdigo se busca en la tabla de identificacin la especie de que se trata,

para realizar esta operacin hay programas informticos.

Perfiles numricos.
0104140
0104452
0104504
0104521
0140004
0144042
0206042
0210004
0210004
0210004
0314000
0504512
0676001
0776000
1000004
1014743
1104112
1214012
1214773
2206004
2504752
3005573
3246527
4004550
4004550
4104100

Shigella flexneri
Salmonella paratyphi A
Pasteurella multocida
Yersinia enterocolitica
Pasteurella multocida
Shigella boydii
Acinetobacter calcoaceticus
Achromobacter sp.
Alcaligenes faecalis
Alcaligenes sp.
Proteus mirabilis
Salmonella paratyphi A
Proteus vulgaris
Proteus mirabilis
Pasteurella sp.
Klebsiella ozaenae
Shigella sonnei
Yersinia pseudotuberculosis
Klebsiella pneumoniae
Pseudomonas aeruginosa
Salmonella spp.
Enterobacter cloacae
Aeromonas hydrophilia
Salmonella cholerasuis
Salmonella typhi
Salmonella gallinarun

4357106
4404112
4404510
4404540
4504010
4604552
4704500
5004024
5044124
5046753
5100100
5104111
5104542
5144572
5207323
5255573
5346761
5314173
5317761
5704412
5704552
6004540
6144204
6404112
6504750
6604512
6704342
6704532
6704752
7244126
7305773
7704752
7704752

Vibrio parahemolyticus
Salmonella gallinarum
Salmonella cholerasuis
Salmonella tiphy
Salmonella pullorum
Salmonella spp.
Salmonella cholerasuis
Pseudomonas cepacea
Vibrio cholerae
Serratia odorifera
Yersinia ruckeri
Hafnia alvei
Salmonella arizonae
Escherichia coli
Serratia rubidae
Klebsiella oxytoca
Serratia marcescens
Enterobacter gergoviae
Serratia marcescens
Salmonella arizonae
Salmonella arizonae
Salmonella typhi
Plesiomonas shigelloides
Salmonella spp.
Salmonella spp.
Salmonella spp.
Salmonella spp.
Salmonella spp
Salmonella gallinarum
Aeromonas hydrophila
Enterobacter cloacae
Salmonella arizonae
Salmonella spp.

INICIO
Fuente:
http://perso.wanadoo.es/microdominguez/API.htm