Momordica charantia extracto de hoja suprime la

progresin del cncer de prstata de rata en estudios

in vivo
Metstasis del cncer es una causa importante de muerte en
pacientes con cncer, con la invasin como un primer paso
que contribuye en gran medida al fracaso de los tratamientos
clnicos. Cualquier compuesto con una influencia inhibidora
sobre este proceso, son de gran inters primordial. Momordica
charantia (meln amargo) se consume ampliamente como un
vegetal y especialmente como una medicina popular en Asia.
Se han investigado los efectos anti-invasivos de extracto de
hoja de meln amargo (BMLE) en una lnea celular de cncer
de prstata de rata (PLS10) in vivo como tambin podra ser
en in vitro. Los resultados indicaron que las concentraciones
no txicas de BMLE inhibieron significativamente la migracin
y la invasin de las clulas in vitro. Los resultados de
zimografa mostraron que BMLE inhibe la secrecin de MMP-2,
MMP-9 y activador del plasmingeno uroquinasa (uPA) de
PLS10. Un ensayo de gelatinasa / colagenasa EnzChek mostr
que la actividad de colagenasa tipo IV se inhibi parcialmente
por BMLE. En el estudio in vivo, la inoculacin intravenosa de
PLS10 a ratones desnudos result en una tasa de
supervivencia del 100% en los ratones que recibieron un
BMLE-dieta en comparacin con 80% en los controles. La
incidencia de metstasis de pulmn no mostr ninguna
diferencia, pero el rea pulmonar porcentaje ocupado por
lesiones metastsicas se disminuy ligeramente en el grupo
de tratamiento BMLE 0,1% y disminuy significativamente con
el tratamiento BMLE 1% en comparacin con el control. Por lo
tanto, los resultados indican por primera vez un efecto antimetasttica de BMLE en los estudios In vivo.
El cncer de prstata es el tumor maligno masculino ms
comn en los pases occidentales. La terapia con andrgenos
ablacin es ampliamente utilizada para la etapa inicial de la

enfermedad y puede producir resultados favorables, pero la

mayora de los pacientes finalmente desarrollan cnceres de
prstata resistente a la ablacin con focos metastticos.
Actualmente, no existe un tratamiento que sea capaz de curar
el cncer de prstata metastsicas refractario a hormonas
progresiva.
Momordica charantia, (meln amargo), ha sido utilizado con
frecuencia en diversos sistemas de medicina tradicional
asitica y comnmente se consume como un vegetal. Los
extractos
se
ha
informado
que
poseen
actividad
anticancergena
contra
linfoide
leucemia,
linfoma,
coriocarcinoma, melanoma, cncer de mama, tumor de piel,
cncer de prstata, carcinoma epidermoide de lengua y de la
laringe, carcinomas de vejiga humanos y la enfermedad de
Hodgkin. Adems, antioxidante, antiviral (virus de la
inmunodeficiencia humana [VIH] inhibidor) antidiabtico y las
propiedades inmunomoduladoras se han descrito. Un estudio
previo demostr que la tailandesa Momordica charantia
induce enzimas de fase II y monooxigenasa reprimido,
mientras que una variedad china slo monooxigenasa
afectados.) Un estudio anterior mostr que el extracto de hoja
de meln amargo (BMLE) en Tailandia revoc la resistente a
mltiples frmacos (MDR) fenotipo en carcinoma cervical,
clulas KB-V1 y aumentaron su sensibilidad a un agente
quimioteraputico, vinblastina. Sin embargo, evidencia de que
BMLE tiene efectos sobre la invasin de clulas de cncer de
prstata hasta ahora se ha faltan. En este estudio, por tanto,
examinamos los efectos inhibidores de BMLE contra la
progresin de una lnea celular de cncer de prstata, tanto in
vitro e in vivo. La lnea andrgeno-independiente de
andrgeno receptor negativo de prstata de rata de clulas
cancerosas (PLS10), que se estableci en nuestro laboratorio
a partir de un 3,2 'dimetil-4-amino-bifenilo ms testosterona
inducida por carcinoma en la prstata dorso lateral de una
rata F344 macho, se utiliz en este estudio.

Materiales y mtodos
El material vegetal y la extraccin Hojas de meln
amargo se recogieron de la plantacin de la Asamblea
Conservacin de la hierba Lampang en Lampang, Tailandia y
el nmero del ttulo de la muestra fue certificado por el
herbario de la Flora de Tailandia Facultad de Farmacia,
Universidad de Chiang Mai.

Cultivo de clulas. La lnea celular PLS10 se cultiv en

Roswell Park Memorial Institute-1640 (RPMI 1640, Gibco,
Carlsbad, CA, EE.UU.) con suero bovino fetal al 10% (FBS, Life
Technologies Japan Ltd., Japn), 50 U / ml la penicilina y 50 mg
/ ml de estreptomicina, en un incubador humidificado con una
atmsfera que comprende 95% de aire y 5% de CO 2 a 37 C.
Cuando las clulas alcanzaron un 70-80% de confluencia, que
se recogieron y se sembraron o bien para el paso subsiguiente
o para el tratamiento.

Los animales El experimento con animales se llevaron a

cabo bajo los protocolos aprobados por el Cuidado y Uso de
Animales institucional de la Ciudad de Nagoya University
Graduate School of Medical Sciences. Seis semanas de edad
ratones desnudos atmicos macho (KSN cepa) fueron

adquiridos de Nihon SLC (Hamamatsu, Japn) y alojados en

jaulas de plstico con un lecho de virutas de madera en una
habitacin con aire acondicionado a 23 2 C y 55 5% de
humedad con un ciclo de 12 h de luz / oscuridad. Dieta
oriental MF polvo (MF Oriental, Oriental Yeast Co., Tokio,
Japn) y agua destilada estaban disponibles ad libitum.

La citotoxicidad y ensayo de inhibicin de

crecimiento. PLS10 clulas se sembraron a 2,0 x 10 3
clulas por pocillo en placas de 96 pocillos. Veinticuatro horas
despus de la siembra, se aadieron diversas concentraciones
de BMLE. Las clulas se incubaron entonces durante 24 y 48 h
a 37 C, y el crecimiento celular se evalu mediante WST-1
ensayo
colorimtrico
(Roche
Diagnostics,
Mannheim,
Alemania). En cada experimento, las determinaciones se
realizaron por triplicado.

Ensayos de colagenasa IV. Un EnzChek gelatinasa /

colagenasa Assay Kit (Life Technologies Ltd Japn, Tokyo,
Japn) se utiliz para medir la actividad gelatinasa o
colagenasa. El sustrato, DQ gelatina fluorescena conjugado,
se incub con colagenasa tipo IV de Clostridium histolyticum
con BMLE (0, 25, 50 y 100 mg / ml) durante 1,5 h y la seal de
fluorescencia que representa actividad proteoltica se midi
usando un lector de microplacas de fluorescencia (480 / 530
nm).

Ensayos de metstasis en ratones desnudos. Despus

de 1 semana de aclimatacin, los ratones se dividieron en tres
grupos de 10 ratones cada uno y dado BMLE (0, 0,1 y 1% w /
w) durante 3 semanas y una dieta basal despus. Una semana
despus del inicio del tratamiento BMLE, las clulas PLS10 (1
10 6 fueron inyectados / animal) en la vena de la cola. Los
ratones se sacrificaron en la semana 4 experimental.

El anlisis estadstico. Todos in vitro experimentos se

realizaron al menos por triplicado para confirmar la
reproducibilidad. Los anlisis estadsticos se realizaron con la

media SD de valores utilizando un solo sentido anova , la

correccin de Bonferroni y de Student t -test. La significacin
estadstica se concluy con * P <0,05 o ** P <0,01.
Efectos de BMLE en metstasis de pulmn de clulas PLS10
en ratones desnudos Cuatro semanas despus del
tratamiento BMLE, el porcentaje de supervivencia de los
ratones desnudos en los grupos tratados con BMLE (100%) fue
mayor que en los controles (80%; Fig. 4A ). La administracin
de BMLE no caus la depresin en el peso corporal.
El rea metastsico tumor calculado en el pulmn se redujo
ligeramente en el grupo BMLE 0,1% y disminuy
significativamente en el grupo BMLE 1%, en 35% y 48% en
relacin con el grupo de control, respectivamente.

Resultados
Efectos de BMLE en la inhibicin de la citotoxicidad y
crecimiento de las clulas PLS10. Diferentes ensayos
mostraron que el tratamiento BMLE redujo el crecimiento
celular de las clulas PLS10 dependiente de la concentracin
de 24 y 48 h. A concentraciones superiores a 100 mg / ml, el
tratamiento BMLE inhibi significativamente el crecimiento, y
la concentracin inhibitoria (IC) 50 de BMLE estaba en el
intervalo de 150 a 200 mg / ml. El tratamiento con 75 mg / ml
BMLE durante 24 o 48 h no fue citotxica para las clulas
PLS10. Por lo tanto, un intervalo de concentraciones no

txicas (25 o 50 mg / ml) se aplic para todos los

experimentos posteriores.
El Bitter extrado de la hoja de la
Momordica (BMLE) hubo una supresin de
la metstasis pulmonar en un modelo de
tumor de prstata del ratn inoculado por
va intravenosa. Para el ensayo de
metstasis en ratones desnudos, los
animales se les dio BMLE (0, 0,1 y 1% w/w)
en su dieta durante el perodo experimental
1-3 semanas, 1 semana despus de PLS10
clulas (1 10 6 / animal) fueron
inyectados en la vena caudal. Los ratones
fueron asesinados en la semana 4.
Los presentes resultados proporcionan
pruebas claras de que un extracto de hojas
de meln amargo puede ejercer potencial
inhibidor contra propiedades metastsicas
de clulas PLS10 en tanto in vitro e in vivo en los
experimentos. Momordica charantia, meln amargo, se ha
demostrado que es segura y sin ningn signo de
nefrotoxicidad y hepatotoxicidad y de cualquier influencia
adversa sobre la ingesta de alimentos, peso de los rganos
crecimiento y parmetros hematolgicos en animales
experimentales cuando se ingiere en dosis bajas para un
mximo de 2 meses. Aunque los estudios en animales
mostraron toxicidad de meln amargo cuando se inyectaron
extractos va intravenosa o intraperitoneal, con extractos de
frutas y semillas que tienen una toxicidad relativamente ms
alta que la hoja o las partes areas de la planta,( 14,19,27 )
nuestros resultados apuntan a los efectos beneficiosos en los
niveles no txicos. El BMLE lo tanto, podra permitirse un

agente anticancergeno progresin ventajosa especialmente

para la terapia de la metstasis tumoral.
In vivo el estudio mostr adems que el tratamiento diettico
BMLE tendi a reducir el peso de los pulmones y el nmero de
los tumores metastsicos de pulmn. El tratamiento de BMLE
reduce significativamente el porcentaje de rea del tumor en
los pulmones de una manera dosis-respuesta, al menos en
trminos del tamao de la lesin. En la histopatologa, un
nmero excesivo de tumores metastsicos desarrollados y
formndose en los pulmones; Por lo tanto, un efecto
significativo no fue evidente en la incidencia o multiplicidad.
Adems, no hay diferencia en la proliferacin celular fue
evidente entre los grupos. Podran ser necesarios ms
estudios para caracterizar los componentes activos de BMLE y
confirmar los efectos BMLE sobre la metstasis in vivo .

Efectos de BMLE en la inhibicin de la citotoxicidad y

crecimiento de las clulas PLS10. Mostraron que el
tratamiento BMLE redujo el crecimiento celular de las clulas
PLS10 dependiente de la concentracin de 24 y 48 h. A
concentraciones superiores a 100 mg / ml, el tratamiento
BMLE inhibi significativamente el crecimiento, y la
concentracin inhibitoria (IC) 50 de BMLE estaba en el
intervalo de 150 a 200 mg / ml. El tratamiento con 75 mg / ml
BMLE durante 24 o 48 h no fue citotxica para las clulas
PLS10. Por lo tanto, un intervalo de concentraciones no
txicas (25 o 50 mg / ml) se aplic para todos los
experimentos posteriores.

Estudios Ex vivo
Estudios de tabletas gliclazida mucoadhesivos
por el uso de polmeros naturales y
semisintticas
El objetivo principal de que usa la tableta oral mucoadhesivos
es para lograr prolongar la estancia de drogas en el TGI.
Existen problemas de estabilidad en los fluidos intestinales
que puede ser superada a travs de esta entrega del
medicamento. Las diferentes composiciones de Gliclazide que
son comprimidos mucoadhesivos los cuales se prepararon
(S1-S4, D1-D4) por el mtodo de granulacin hmeda
utilizando polmero natural como Momordica charantia en
polvo, del extracto de fruta y el polmero semisintticas como
el
sodio
de
carboximetilcelulosa
como
agentes
mucoadhesivos. Los estudios de DSC y FTIR revelaron que no
hay interaccin entre el frmaco y los excipientes utilizados.
Entre las formulaciones 8, D3 ha considerado como la mejor
formulacin para la liberacin ptima en 12 horas y tambin
tena un buen ndice de hinchamiento, el tiempo de residencia
ptimo y permeacin ex vivo a travs de la mucosa del
estmago de ovejas. Desde el perfil de disolucin obtenido in
vitro, los datos de liberacin de frmaco se instalaran en
varios modelos cinticos, que se sugirieron que todas las
formulaciones
siguientes
liberacin de primer orden
con una cintica de Higuchi,
excepto S1 y S4 muestra la
liberacin de orden cero con
una cintica de Higuchi.

MATERIAL Y MTODOS
Gliclazida se adquiri de Drogas India, el sodio carboxi metil
celulosa, celulosa microcristalina, estearato de magnesio, y
talco se utilizaron en el estudio de un grado analtico. El fruto
de la Momordica charantia se identific como una planta que
tiene propiedades mucoadhesivas. Extractos del polvo de la
fruta de la Momordica charantia se prepararon en el
laboratorio mediante el mtodo de extracto acuoso.

Preparacin de extracto acuso de la Momordica

Charantia
Los frutos frescos de Momordica charantia se aclararon a
fondo con agua. A continuacin, se cortaron las piezas y se
secaron bajo la luz solar. Los frutos secos se pulverizan en la
licuadora y se sumergen en agua durante 1 hora. A
continuacin, la mezcla se filtr y el filtrado se almacen para
el estudio.

Formulacin de tabletas gliclazida mucoadhesivo

Las tabletas de gliclazida se prepararon por el mtodo de
granulacin hmeda convencional usando el polvo del
extracto del fruto de la Momordica charantia y sodio,
utilizando el carboxi metil celulosa como agente adhesivo, la
celulosa microcristalina como desintegrante y de relleno, el
talco y estearato de magnesio como agente de deslizamiento,
lubricante y agua como fluido de granulacin.

Estudios de permeabilidad en ex vivo es esencial para

investigar la penetracin de la molcula de frmaco a travs
de la mucosa del estmago apropiada para predecir la
disponibilidad sistmica de la molcula de frmaco desde el
sistema mucoadhesivos desarrollado]. Este estudio se llev a
cabo mediante el uso de la versin modificada de una celda
de difusin. Consiste en un tubo de vidrio abierto en ambos
extremos. La mucosa del estmago de una oveja fue escogida
como el modelo de membrana, pegado con el lado de la
mucosa hacia arriba en un extremo de la celda de difusin. El
extremo que contiene la membrana de la mucosa se sumergi
cuidadosamente en un vaso de precipitados que contiene 100
ml de tampn de fosfato de pH 6,8. Este vaso de precipitados
se coloc en un agitador magntico con placa de
calentamiento. El contenido vaso de precipitados se mantuvo
a 37 0,5 C y se agit con una perla magntica. La tableta
se meti en la membrana ovejas estmago que previamente
fue humedecido con 2 ml de tampn del fosfato 6,8 pH. Las
muestras de 5 ml se retiraron del vaso de precipitados a un
intervalo de tiempo predeterminado, se filtraron y luego
analizar la gliclazida a 226 nm con la dilucin y los resultados
adecuados se muestra en la figura de abajo.

De los estudios anteriormente realizados, se puede concluir

que los comprimidos mucoadhesivos de gliclazida preparados
por el mtodo de granulacin en hmedo tenan buena
propiedad de flujo, as como una buena resistencia mecnica.
Entre todas las formulaciones, la formulacin D3 muestra la
tasa de liberacin del frmaco ptimo y se considera que es
mejor formulacin para el comprimido mucoadhesivo ya que
se retiene en el estmago durante un periodo de tiempo
prolongado y aumenta la biodisponibilidad. La naturaleza y el
tiempo de residencia de hinchamiento dependen de la
concentracin del polmero. La disolucin in vitro y
permeacin ex vivo estos estudios muestran la liberacin del
frmaco ptimo y la permeabilidad para la formulacin D3. La
formulacin de liberacin optimizada es decir, D3 muestra la
liberacin de primer orden y sigue el modelo de cintica de
liberacin de Higuchi.