Universidad de

Guanajuato
Divisin de Ciencias Naturales y Exactas
Laboratorio de Fisicoqumica en Biologa y
Farmacia.

PRACTICA 9:

ACTIVIDAD ENZIMATICA
Mara Dolores Herrera
Equipo 3:
Mata Ledesma Mara Fernanda
Villanueva Sols Luis Enrique
Fecha de trmino:
20/04/2016
Fecha de entrega:
27/04/2016

PRACTICA 9:
ACTIVIDAD ENZIMATICA

OBJETIVOS:
Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de:
1. Observar la actividad de la enzima catalasa.
2. Comparar la actividad de la catalasa de tejidos de organismos vivos, con un
catalizador no proteico.
3. Examinar los factores que afectan la actividad enzimtica.
INTRODUCCION:
Se define la unidad de actividad enzimtica (U) como la cantidad de enzima que cataliza la
conversin de 1 mol de sustrato en un minuto. La actividad especfica es el nmero de unidades
de enzima por miligramo de protena (U/mg prot) o por mililitro de disolucin (U/ml).
Debido a que las enzimas son catalizadores, se debe de tener en cuenta que un catalizador es una
sustancia que disminuye la energa de activacin de una reaccin qumica, incrementando as, la
velocidad de la reaccin.
La mayora de las reacciones de los sistemas vivos son reversibles, es decir, que en ellas se
establece el equilibrio qumico. Por lo tanto, las enzimas aceleran la formacin de equilibrio
qumico, pero no afectan las concentraciones finales del equilibrio.
Las enzimas se pueden clasificar de la siguiente manera:

En las protenas conjugadas podemos distinguir dos partes:

Apoenzima: Es la parte polipeptdica de la enzima.

Cofactor: Es la parte no proteica de la enzima, y pueden ser :

a) Iones metlicos: Favorecen la actividad cataltica general de la enzima, si no estn

presentes, la enzima no acta. Estos iones metlicos se denominan activadores. Ejemplos:
Fe2+, Mg2+, Cu2+, K+, Na+ y Zn2+.
b) Coenzimas: la mayora de los cofactores son de esta naturaleza. stas son generalmente
son compuestos orgnicos de bajo peso molecular, por ejemplo, las vitaminas del
complejo B son coenzimas que se requieren para una respiracin celular adecuada.

Cuando etas dos partes se encuentran unidas se les conoce como holoenzima.
La sustancia sobre la cual acta una enzima se llama sustrato, y estos a su vez son especficos
para
cada
enzima,
as
entonces:
-La sacarosa es el sustrato de la sacarasa que acta rompindola en sus componentes.
Se dice que existe una actividad enzimtica cuando la enzima (E) y el sustrato
(S) se combinan para formar un complejo intermedio enzima sustrato (E-S), el cual se
descompone formando un producto y regenerando la enzima.

El grado de especificidad de las enzimas es muy alto, pueden distinguir incluso entre diferentes
tipos de ismeros. Se cree que la especificidad de la enzima es debido a la forma particular de
una pequea parte conocida como sitio activo, la cual se fija a la contraparte complementaria en
el sustrato.
Unidad de actividad enzimtica:
Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de actividad
enzimtica como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo. Esta
unidad se llama katal (kat). Como 1 mol son 106 moles y 1 minuto son 60 segundos, resulta que
1 katal equivale a 60 x 106 U. Esta unidad es muy grande, de forma que se utilizan
frecuentemente los submltiplos como el microkatal (kat, 10-6 kat) o el nanokatal (nkat, 10-9
kat).
Cuando se conoce el peso molecular del enzima puro y el nmero de centros activos por
molcula de enzima, las medidas de actividad enzimtica permiten calcular el nmero de
recambio del enzima, o sea, el nmero de reacciones elementales que realiza el enzima por cada
centro activo y por unidad de tiempo.Las enzimas son protenas que catalizan todas las reacciones
bioqumicas. Adems de su importancia como catalizadores biolgicos, tienen muchos usos
mdicos y comerciales.

Factores que afectan la actividad enzimtica.Existen diversos factores que pueden afectar la actividad enzimtica, favoreciendo as la
velocidad de reaccin o retrasndola, estos factores se mencionan a continuacin:
Concentracin del sustrato
A mayor concentracin del sustrato, a una concentracin fija de la enzima se obtiene la velocidad
mxima. Despus de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentracin del sustrato
no tiene efecto en la velocidad de la reaccin.
Concentracin de la enzima.
Siempre y cuando haya sustrato disponible, un aumento en la concentracin de la enzima
aumenta la velocidad enzimtica hacia cierto lmite.
Temperatura.
Un incremento de 10C duplica la velocidad de reaccin, hasta ciertos lmites. El calor es un
factor que desnaturaliza las protenas por lo tanto si la temperatura se eleva demasiada, la enzima
pierde su actividad.
pH.
El pH ptimo de la actividad enzimtica es 7, excepto las enzimas del estmago cuyo pH ptimo
es cido.
Presencia de cofactores.
Muchas enzimas dependen de los cofactores, sean activadores o coenzimas para funcionar
adecuadamente. Para las enzimas que tienen cofactores, la concentracin del cofactor debe ser
igual o mayor que la concentracin de la enzima para obtener una actividad cataltica mxima.
MATERIAL REQUERIDO
8 tubos de ensaye de 13 x 100 mm
1 agitador de vidrio
2 pipetas graduadas de 5 mL
1 vaso de precipitados de 150 mL
1 gradilla metlica
1 parrilla de calentamiento con agitacin

REACTIVOS
Perxido de hidrgeno al 3 %
Acido clorhdrico 0.1 M
Hidrxido de sodio 0.1 M
Cianuro de potasio 0.1 M
DESARROLLO EXPERIMENTAL
En los siguientes experimentos mide la velocidad de reaccin de acuerdo a la siguiente
escala: 0 = no hay reaccin; 1 = lenta; 2 = moderada; 3 = rpida; 4 = muy rpida.
PARTE A. Comparacin de la actividad de la catalasa y el dixido de manganeso
1. Coloca en 4 tubos de ensaye 1 mL de perxido de hidrgeno al 3 %.
2. Agrega a cada tubo las siguientes sustancias:
Tubo
1
2
3
4

Agregar
Un poco de arena fina
Un poco de MnO2
Una porcin de papa cruda
Una porcin de hgado

3. Registra la velocidad de reaccin en cada tubo y compara los resultados obtenidos.

PARTE B. Efecto del pH sobre la actividad enzimtica
1. Coloca una pequea cantidad de papa fresca en 3 tubos de ensaye. Usa el agitador
y un poco de arena fina para triturar la papa.
2. Agrega 1 mL de agua destilada al primer tubo, 1 mL de HCl 0.1 M al segundo y 1 mL
de NaOH 0.1 M al tercer tubo. Registra el pH de cada tubo.
3. Adiciona a cada tubo 1 mL de perxido de hidrgeno al 3 % y registra los resultados
al cabo de 5 minutos.
PARTE C. Efecto de la temperatura
1. Coloca una pequea cantidad de papa en un tubo de ensaye y tritura con arena, Pon
el tubo en un bao de agua hirviendo durante 5 minutos.
2. Aade 1 mL de perxido de hidrgeno al 3 %. Observa y registra los resultados.
3. Repite lo anterior pero a temperatura ambiente.
4. Coloca en dos tubos de ensaye 1 mL de perxido de hidrgeno al 3 %. Coloca uno de
los tubos en un bao de agua a 37C y el otro tubo en un bao de agua helada,
durante 5 minutos. Agregar una pequea cantidad de papa triturada a cada tubo.
Compara las velocidades de reaccin.
PARTE D. Efecto de un inhibidor
1. Coloca una pequea cantidad de papa en un tubo de ensaye y tritura con arena,
agrega 3 gotas de KCN 0.1 M. Mezcla bien el contenido del tubo.
2. Aade 1 mL de perxido de hidrgeno al 3 % al tubo y registra los resultados.

Anotacin de las observaciones y resultados del experimento y su discusin

1. Elabora una tabla con los resultados obtenidos.
Observaciones y resultados de Parte A: comparacin de la actividad de la catalasa
y el dixido de magnaneso.
Tubo
Observacin
Velocidad
1
Apareci un leve burbujeo
1
Arana fina
en la superficie del tubo
2
Hubo efervecencia de color
3
Oxido de manganeso
negro
3
Presencia de efervecencia
2
Papa cruda
blanca
4
De inmediato comenz la
4
Hgado
formacin de espuma
blanca
Observaciones y resultados de Parte B: efecto del pH sobre la enzima.
Tubo
pH
Observacin
Velocidad
Observacin
Velocidad
antes de agregar al agregar
despus de
despus de 5
H2O2
H2O2
5min de
min de
agregar H2O2
agregar
H2O2
1
6
Presencia de
2
Se observ an
3
Papa + arena
efervescencia
ms
+ 1mL de
blanca (reaccin
efervescencia
agua
muy lenta)
destilada
2
0
No se observaron
0
Se observ muy
1
Papa + arena
cambios
poca
+ 1mL de HCl
efervescencia
0.1M al 3%
blanca
3
Papa + arena
+ 1mL de
NaOH 0.1M al
3%

14

No se observaron
cambios

E observo algo
de efervecencia
balnaca

Observaciones y resultados de Parte C: efecto de la temperatura

Tubo
Observacin
Velocidad
1
No hubo cambio alguno
0
Papa + arena + H2O2
(caliente)
2
Se percibi la formacin de
4
Papa + arena + H2O2 (a
efervescencia blanca casi
temperatura ambiente)
al instante.
3
La reaccin fue casi al
3
H2O2 (caliente) + papa
instante muy rpidamente
se comenz a formar la
efervescencia.
4
La reaccin fue ms lenta
2
H2O2 (helado) + papa
que en caliente.
Observaciones y resultados de Parte D: efecto del inhibidor.
Tubo
Observacin
Velocidad
1
La actividad de enzima se
0
Papa + arena + 3gotas
inhibi por completo por lo
KCN 0.1M + 1mL de H2O2 tanto no hubo presencia de
efervescencia.
2. Basado en tus anotaciones sobre la velocidad de las reacciones de los
experimentos anteriores, elabora un grfico de barras.

Como se puede persivir en la grafica, el higado fue el que presento una mayor velocidad de
reaccion, mostrando mas produccion de burbujeo, mientras que la arena fina fue la que casi no
tenia reaccion con el peroxido.asi entonces se puede decir que el higado es que contenia mas
enzima, por tanto hubo mas actividad enzimatica.

Como se puede observar al momento de agregar el perxido, solo hubo reaccin

apreciable en el tubo que contena papa+arena+1ml de agua destilada, el cual tena
un pH de 6. Sin embargo en los otros dos tubos, que contenan acido he hidrxido no
se percibi actividad enzimtica, esto se debe a que el pH ptimo de la actividad del
perxido es de 6.

Como se observa en esta grafica, despues de dejar pasar 5minutos de agregar el peroxido a los
tubos, se comenzo a ver la presencia de actividad en el tubo que contenia acido he hidroxido, sin
embrago la actividad del tubo que contenia agua destilada (pH=6) segua teniendo la velocidad
mayor de reaccin, por lo tanto se puede decir que la enzima si tiene su actividad mxima a un
pH casi neutro.

Como se puede obsrvar en esta grafica, la actividad enzimatica si se ve afectada por la

temperatura, y en este caso se logra ver que a temperaturas ,muy altas no hay actividad, sin
embargo la temperatura ambiente es la optima para la actividad del la enzima.
Eston se debe a que a altas temperaturas la enzima puede descomponerse ya que se logran romper
algunos de los emlaces peptdicos de la protena, haciendo que se desnaturalice y por tanto ya no
tenga actividad enzimatica.

En este caso observamos que el KCN efectivamente si sirve como un inhibidor de la actividad
enzimatica de nuestra encima, ya que no hubo presencia de reaccion alguna. Esto lo logramos
verificar al momento de no observar cambio alguno en la reaccin.

3. Puede el perxido de hidrgeno ser descompuesto por otros catalizadores

diferentes de los que se encuentran en los tejidos vivos? Explica.
A pesar de que el perxido de hidrgeno es relativamente estable a temperatura
ambiente, numerosas sustancias actan como catalizadores de su descomposicin,
entre otras: metales de transicin, lcalis, y xidos metlicos. La luz del da tambin
favorece la descomposicin del perxido de hidrgeno, por lo que debe conservarse en
envases opacos.
4. Describe el efecto del tamao de partcula, de la temperatura, el pH y del
inhibidor sobre la velocidad de reaccin de la enzima.
Efecto del pH sobre la actividad enzimtica
Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol
-SH; imidazol, etc.) en las cadenas laterales de sus aminocidos. Segn el pH del
medio, estos grupos pueden tener carga elctrica positiva, negativa o neutra.
Como la conformacin de las protenas depende, en parte, de sus cargas elctricas,
habr un pH en el cual la conformacin ser la ms adecuada para la actividad
cataltica. Este es el llamado pH ptimo.
La mayora de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de
pocas dcimas por encima o por debajo del pH ptimo pueden afectar drsticamente
su actividad.
As, la pepsina gstrica tiene un pH ptimo de 2, la ureasa lo tiene a pH 7 y la arginasa
lo tiene a pH 10. Como ligeros cambios del pH pueden provocar la desnaturalizacin
de la protena, los seres vivos han desarrollado sistemas ms o menos complejos para
mantener estable el pH intracelular: Los amortiguadores fisiolgicos.
Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica
En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones qumicas: por cada
10C de incremento, la velocidad de reaccin se duplica. Las reacciones catalizadas
por enzimas siguen esta ley general. Sin embargo, al ser protenas, a partir de cierta
temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor. La temperatura a la cual la
actividad cataltica es mxima se llama temperatura ptima.
Por encima de esta temperatura, el aumento de velocidad de la reaccin debido a la
temperatura es contrarrestado por la prdida de actividad cataltica debida a la
desnaturalizacin trmica, y la actividad enzimtica decrece rpidamente hasta
anularse.
A mayor temperatura, mayor velocidad de reaccin. La temperatura representa uno
de los tipos de energa presente en la reaccin. El sentido del flujo de energa entre
los miembros de la reaccin, determina si esta es exotrmica o endotrmica.
Efecto de los inhibidores sobre la actividad enzimtica
Ciertas molculas pueden inhibir la accin cataltica de un enzima: son los inhibidores.
Estos inhibidores bien pueden ocupar temporalmente el centro activo por semejanza
estructural con el sustrato original (inhibidor competitivo) o bien alteran la

conformacin espacial del enzima, impidiendo su unin al sustrato (inhibidor no

competitivo).
Efecto del tamao de partcula: Superficie de contacto:
A mayor superficie de contacto, mayor velocidad de reaccin. La superficie de
contacto determina el nmero de tomos y molculas disponibles para la reaccin. A
mayor tamao de partcula, menor superficie de contacto para la misma cantidad de
materia.
Conclusiones
Se cumpli el objetivo de la prctica al comparar la actividad de la enzima catalasa en
diferentes muestras observando su velocidad de reaccin, donde logramos ver que en
un tejido vivo la actividad enzimtica de la catalasa es muy rpida; Se demostr que
el pH influye en la actividad enzimtica de las protenas as mismo se comprob que
el factor temperatura es de gran influencia en la actividad enzimtica ya que se
observ mayor velocidad de actividad a temperaturas altas que en temperatura
ambiente o bajas. En la prueba del efecto de inhibidor se corrobor que al adicionar
una especie qumica con esta funcin si se evita que la enzima tenga actividad pues
despus de agregar el inhibidor y realizar la prueba ya no se observ reaccin como en
los casos que no tenan inhibidor.
REFERENCIAS
Survey of Chemistry, Laboratory Experiments, 7th Edition, A Manual for
Chemistry 104, 5, 6. Department of chemistry, Soyuthern Oregon University,
Ashland, Oregon, USA, 1998, pgs. 69-72.
CIENCIAS BIOLOGICAS de las molculas al hombre, Adaptacin de la versin azul
del BIOLOGICAL SCIENCES CURRICULUM STUDY, Educational Programs
Improvement Corporation, Venezuela. Mxico, 1972, pgs. 201 204.
Enzimas, recuperado de:
http://genesis.uag.mx/edmedia/material/quimicaII/enzimas.cfm#enzimatica,
fecha de consulta: 22/04/2016.
Actividad enzimtica, recuperado de:
http://recursostic.educacion.es/ciencias/biosfera/web/profesor/practicas/Ac
tividad_enzimatica.pdf, fecha de consulta: 22/04/2016.
Enzimas, recuperado de:
http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz22.htm#ph, fecha de
consulta: 22/04/2016.