1) Fundamento e importancia de la coloracin de Gram de orina sin centrifugar

La coloracin de Gram de orina sin centrifugar es un mtodo rpido y econmico

que orienta la seleccin del tratamiento antibitico emprico, se ha empleado como
prueba de tamizacin en el diagnstico de la infeccin del tracto urinario (ITU). La
tcnica utilizada en la mayora de los laboratorios y estudios es la de la orina total
sin centrifugar, en la cual se considera como criterio de positividad el hallazgo de
una o ms bacterias por campo de inmersin, lo cual se ha correlacionado con
urocultivos con ms de 10^5 UFC/mL. La sensibilidad y especificidad de esta
prueba varan del 65% al 94%, y del 75% al 98%, respectivamente. La coloracin de
Gram es de gran importancia en Microbiologa porque permite diferenciar dos
grandes grupos de bacterias (Gram positivas y Gram negativas), segn se
comporten ante esta tincin. El fundamento de la coloracin de Gram de orina sin
centrifugar radica en la diferente estructura de la pared celular de ambos grupos:
las bacterias Gram positivas tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared,
mientras que las bacterias Gram negativas tienen una capa de peptidoglicano ms
fina y una capa lipopolisacardica externa, por este motivo a las bacterias Gram
positivas se les fija el primer colorante usado en la mezcla (cristal violeta), mientras
que las Gram negativas despus del lavado se desprende el colorante y se fija el
colorante de contraste de la tincin (safranina) para que puedan observarse. Hoy en
da la coloracin de Gram es una de los pilares del diagnstico temprano de las
infecciones bacterianas. Posteriormente, el conocimiento de las estructuras de las
membranas bacterianas, en cuanto al aspecto fsico y su composicin molecular
demostraron que la coloracin de Gram distingue dos grupos de bacterias muy
diferentes. Las bacterias Grampositivas que presentan una gruesa capa de
peptidoglicano, y las Gram negativas con una delgada capa de peptidoglicano, a la
que se le superpone una capa de lipopolisacrido-lipoprotena, denominada
membrana externa. La presencia de esta membrana, marca la diferencia entre las
bacterias Gram negativas y las Grampositivas carentes de dicha estructura. Las
Grampositivas debido a sus paredes gruesas de peptidoglicano y la poca cantidad
de lpidos no son permeables al alcohol acetona (decolorante) puesto que este
deshidrata la pared celular y cierra los poros, alterando y afectando el pequeo
espacio entre las molculas. El complejo cristal violeta-yodo queda atrapado dentro
de la pared celular tiendo a las bacterias Grampositivas de color azul. Las
bacterias Gramnegativas tienen espacios en la estructura de su pared celular y el
alcohol acetona es un solvente de lpidos que acta sobre la membrana exterior de
la pared celular afectando la membrana citoplasmtica donde se unen las
molculas que componen el peptidoglicano. De igual manera, la delgada capa de
peptidoglicano no es capaz de retener el complejo cristal violeta-yodo lo cual obliga
a las clulas Gram negativas a decolorarse, necesitando entonces la adicin de la
safranina o la fuscina como colorante de contraste para colorearse de rosado.
El examen directo o mediante tincin de Gram de una muestra de orina sin
centrifugar permite conocer si el paciente tiene bacteriuria significativa y si el
germen es gramnegativo o positivo. En una infeccin urinaria es de gran
importancia identificar el agente etiolgico lo ms pronto posible, para entablar un
tratamiento oportuno, prevenir reincidencias y cronicidad, evitando el dao renal

que puede ser fatal para el paciente. Es por eso que La principal ventaja de realizar
el Gram de orina no centrifugada como parte de la rutina bacteriolgica de cultivos
de orina, es el diagnstico presuntivo rpido de infeccin urinaria y como gua para
el tratamiento inicial basado en la forma y propiedades de la tincin del probable
agente etiolgico. En resumen, la gran rapidez y simplicidad de la coloracin de
Gram de orina no centrifugada permiten detectar con alto rango de sensibilidad y
especificidad la presencia de bacteriuria significativa compatible con infeccin del
tracto urinario; adems, es un mtodo rpido, econmico, sensible y especfico para
detectar bacteriuria. Se recomienda realizarlo como respaldo frente a discordancias
o hallazgos especiales ms que como screening. Debe aplicarse a la muestra recin
agitada sin centrifugar. La presencia de una bacteria/campo de inmersin tiene
buena correlacin con un recuento mayor de 100.000 ufc/ml en aproximadamente
85% 95% de los casos. Sin embargo, la tincin de Gram de una muestra de orina
no se utiliza en la mayora de los laboratorios clnicos como prueba de cribado
porque la revisin metdica de los frotis es demasiado arduo. El Gram tambin
puede ser de gran utilidad para la documentacin rpida de BS, con la consiguiente
orientacin adicional sobre el tipo de microorganismo involucrado en algunos casos
particulares de pacientes sintomticos o de alto riesgo, en los que el mdico quiera
adoptar una teraputica antimicrobiana precoz. Finalmente, se recomienda la
realizacin de una coloracin de Gram de la orina en pacientes que estn recibiendo
antibiticos y pacientes que presentan sedimento patolgico con cultivos negativos,
para verificar la presencia de microorganismos exigentes. Dado que la coloracin de
Gram es uno de los procedimientos ms sencillos y de mayor utilidad empleados en
la microbiologa diagnostica, siempre ser necesario correlacionar los hallazgos
encontrados en el frotis coloreado con los aislamientos bacterianos realizados de los
cultivos, de otro modo se podra caer en contaminaciones y grandes errores que no
se ajustan a la realidad del paciente.
2) Importancia diagnostica de urocultivo
Las infecciones del tracto urinario (ITU) se hallan entre las enfermedades
infecciosas ms frecuentes. Denotan una amplia variedad de entidades patolgicas,
en las cuales el comn denominador es la presencia de un nmero
significativamente grande de microorganismos en cualquier porcin del aparato
urinario. Se han diseado numerosos mtodos para determinar bacteriuria
significativa adems del urocultivo: microscpicos, qumicos, bioqumicos,
enzimticos, etc., pero un nmero mnimo logra ofrecer un costo adecuado y
sencillez en la realizacin del anlisis. El urocultivo es el cultivo de orina para
diagnosticar infeccin sintomtica del tracto urinario o infeccin asintomtica
(bacteriuria asintomtica) en pacientes con riesgo de infeccin. Est basada en la
presencia de un nmero significativo de bacterias (generalmente >100.000
bacterias/ml.) La piuria, junto con la bacteriuria, es un dato muy importante para el
diagnstico de infeccin del tracto urinario, ya que prcticamente est presente en
todas las infecciones urinarias. Una excepcin es la bacteriuria asintomtica en la
que la piuria est ausente. La importancia de practicar el urocultivo radica en que
permite indicar un tratamiento especfico con lo cual se podr tener la certeza de
que se erradicara la infeccin, los tratamientos indicados de forma emprica pueden

llevar a la eleccin de un antibitico errneo bien sea porque el agente causal no es

una Escherichia coli, que es la causa ms frecuentes de estas infecciones, o porque
exista resistencia bacteriana hacia el antibitico indicado lo cual llevara a que no
desaparezca la infeccin. Una vez que se ha determinado que un cultivo es
significativo, el microbilogo debe realizar el antibiograma.
UTILIDAD CLINICA:
1. Cuando los sntomas indican una posible infeccin urinaria como: dolor y
sensacin decalor al orinar, as como urgencia frecuente de orinar.
2. Cuando un paciente esta canalizado por largo tiempo, aunque no muestre
sntomas deinfeccin.
3. En mujeres embarazadas para monitorear cualquier bacteria en la orina que
pueda causar algn problema al beb.
Se realiza cuando hay sospecha de una infeccin urinaria, tanto baja como ocurre
en el caso de las uretritis y cistitis, como alta ante la sospecha de una pielonefritis.
Tambin debe solicitarse ante de practicar un estudio o ciruga urolgica, durante el
embarazo, en personas que presenten dolor lumbar acompaado por fiebre de
varios das de duracin o en los hombres con sntomas de aumento del tamao de
la prstata que tengan adems dolor.

http://www.definicionabc.com/salud/urocultivo.php
http://www.revista-portalesmedicos.com/revista-medica/coloracion-gramdiagnostico-microbiologico/