I.

CBI 111

Biologa Celular
Instituto de Ciencias Naturales

Gua de Laboratorio N 01 / Microscopa ptica y Biologa Celular

Mdulo I

2013

MICROSCOPIA OPTICA

Temario
Microscopa ptica

Objetivos
Objetivos
1. Conocer el microscopio ptico y la funcin de los elementos que lo componen.
2. Aprender el manejo y uso del microscopio.
3. Realizar diferentes mediciones.
4. Observar clulas al miscroscopio

Instrucciones
La gua de laboratorio consta las siguientes partes:
Primero una introduccin al tema con conceptos claves para el alumno
Segundo aparece una actividad preliminar y el desarrollo del
experimental
Tercero un espacio para los apuntes del laboratorio
Cuarto un test de conocimiento

diseo

Recomendaciones generales para el alumno

Para que las clases de laboratorio se desarrollen con total normalidad, se
recomienda a los alumnos que la semana anterior a la prctica de laboratorio,
lean y asimilen los textos de cada gua, con el fin de hacer las consultas
pertinentes del tema con la literatura recomendada, as el alumno podr llegar
al laboratorio con ideas cimentadas para hacer un buen y efectivo trabajo.
Para las prcticas se requiere el uso obligado de delantal, con el fin de evitar las
lesiones fsicas o dao de la ropa, en el caso de estar utilizando reactivos.
Adems el alumno debe ceirse a las normas de seguridad entregadas por el
profesor a cargo y ante cualquier duda o peligro, el estudiante debe consultar
con el profesor a cargo.

MICROSCOPIA OPTICA

INTRODUCCION
El progreso de la ciencia depende de la formulacin de ideas y del desarrollo de las
herramientas de trabajo. Las clulas son entidades pequeas y muy difciles de
observar a simple vista. El ojo humano slo puede observar estructuras de ms o
menos 0,1mm y la mayora de las clulas son muchsimo ms pequeas (entre 1 y
100m). Por esta razn, el estudio de las clulas ha dependido primordialmente del
uso del microscopio. Robert Hooke fue el primero que acuo el trmino de clula
siguiendo sus observaciones de una pieza de corcho con un simple microscopio ptico
en 1665. Utilizando un microscopio que ampliaba los objetos hasta 300 veces su
tamao real, Anthony van Leeuwenhoek, en 1670 y aos posteriores, fue capaz de
observar diferentes tipos de clulas, incluyendo esperma, glbulos rojos, y bacterias.
La propuesta de la teora celular planteada por Matthias Schleiden y Theodor Schawnn
en 1838 debe tomarse como nacimiento de la biologa celular contempornea. Los
estudios microscpicos de tejido vegetal por Schleiden y los de tejido animal por
Schawnn condujeron a la misma conclusin: todos los organismos estn compuestos
por clulas. Ms tarde, se reconoci que las clulas no se forman de novo sino que
emergen nicamente por la divisin de las clulas preexistentes. Por lo tanto, la clula
consigui su actual reconocimiento como la unidad fundamental de todos los
organismos vivos debido a las observaciones realizadas con el microscopio ptico.
El microscopio ptico corresponde a un sistema de lentes que permite obtener una
imagen aumentada de un objeto no visible al ojo desnudo. Para poder observar estas
estructuras se requiere de todo el poder resolutivo (PR) de este microscopio. El
trmino poder de resolucin expresa la capacidad de un sistema ptico de
discriminar detalles muy finos o distinguir puntos muy cercanos entre s. Lmite de
resolucin es la menor distancia que debe existir entre dos puntos para que puedan
ser individualizados como unidades separadas.
El microscopio ptico consta de tres componentes (ver Fig. 1):
Sistema
ptico

Sistema mecnico
Tornillos de
micromtrico

enfoque:

Tornillos del carro

Revlver
Platina con pinzas
Base o pi
Columna o brazo
Tubo

macromtrico

Sistema de
iluminacin

Lentes oculares

Fuente de luz

Lentes
objetivos

Condensador
Diafragma

Manejo del microscopio

A continuacin, se presenta la metdica que debe seguir para su uso. Es fundamental
que en la manipulacin de este delicado instrumento se proceda con el mximo
cuidado. Por consiguiente, se recomienda a los alumnos que se ajusten estrictamente
a las siguientes indicaciones:

MICROSCOPIA OPTICA
Acomodo en posicin correcta:

El tubo ptico dirjalo hacia usted;

El revlver se mueve siempre en sentido contrario a los punteros del reloj;
El condensador, colquelo en su posicin ms baja, a fondo en el soporte;
El diafragma, djelo completamente abierto;
La platina ubquela horizontalmente cuando se van a observar preparaciones en
fresco. Sin embargo, con preparaciones fijadas puede inclinarse el tubo (es
vlido para los microscopios con columna articulada al pie; en los otros no es
necesario).

Fig. 1. Fotografa de microscopio ptico con detalle de sus partes.

Video: Partes del Microscopio
Ubicacin del observador:
El observador debe sentarse cmodamente frente al microscopio, el cuerpo erguido y
la cabeza inclinada sobre el ocular. Mientras observe, una mano maneja el tornillo
micromtrico y la otra los tornillos del carro. Debe observarse en lo posible con ambos
ojos abiertos. El microscopio jams debe estar colocado en posicin oblicua sobre el
mesn.
Iluminacin del campo del microscopio:

MICROSCOPIA OPTICA
Se enciende la lmpara. Se gira el tornillo macromtrico hasta que la lente frontal del
objetivo quede a uno o dos centmetros del plano de la platina. Se observa el ocular y
ver que la intensidad del campo es uniforme.
Enfoque de la preparacin:
Se coloca el portaobjeto con la preparacin centrada y se fija con las pinzas en la
platina. Observando por el ocular, se sube la platina lentamente con el tornillo
macromtrico hasta que aparezca la imagen del objeto a observar. Se afina el enfoque
con el tornillo micromtrico.
Para aquellas preparaciones de poco contraste es conveniente cerrar el diafragma y
subir el condensador. Cuando la preparacin a examinar queda en el centro del campo
visual, se gira el revlver para pasar al objetivo de mayor aumento y con la ayuda del
tornillo micromtrico o de precisin obtendr una imagen ms ntida y con mayor
riqueza en detalles.
Video: Cmo utilizar el microscopio
Examen de la preparacin:
Para el examen topogrfico que da una visin en conjunto del objeto a observar, utilice
aumento menor y recorra la preparacin movindola con la mano o por medio de los
tornillos del carro. Para un examen citolgico o de detalles, utilice aumento mayor y
los movimientos del portaobjeto que ejecute deben ser muy suaves. Toda observacin
debe comenzar con aumento menor.
Defectos frecuentes en el manejo
En

la iluminacin:
Condensador bajo o encendido en la montura
Diafragma muy cerrado o lateralizado
Filtros inconvenientes o en exceso.

Por imgenes extraas:

Corpsculo de polvo u otros elementos extraos:
En el ocular: se reconocer al hacer girar el ocular.
En el objetivo: se reconocen porque persisten en el campo aunque se observe
sin la preparacin.
En el cubreobjeto: se reconocen porque se desplazan al mover la preparacin
y estn en un plano focal diferente al objeto.

Burbujas de aire: se reconocen porque tienen forma de crculo con bordes

negros y cambian de aspecto segn el foco.

Gotas de grasas: se reconocen porque son muy refringentes, centro brillante y

contornos oscuros.
Condensador y diafragma:
Durante la regulacin de un condensador, suelen cometerse bastantes errores. El
condensador puede considerarse como debidamente regulado cuando se encuentra en
la posicin ms alta o un poco por debajo de la misma y su diafragma se cierra lo
estrictamente necesario para producir el contraste justo.
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MICROSCOPIA OPTICA
La profundidad ntidamente reproducida en la preparacin para determinar graduacin
del mecanismo de enfoque fino es, en parte, extraordinariamente reducida (con los
objetivos potentes, menor que con los dbiles). Por esta razn en los trabajos de
microscopa hay que mover el condensador bastante hacia arriba y hacia abajo para
observar la profundidad de la preparacin.
Siempre que se utilicen instrumentos pticos (como es el caso del microscopio y del
anteojo) hay que mantener en cuenta dos cosas extraordinariamente importantes:
mirar por el ocular con la vista descansada, y que haya cierta distancia entre el ojo y el
ocular.
Conceptos Claves
Poder de resolucin: corresponde a la capacidad de un microscopio para discriminar
detalles muy finos o distinguir puntos muy cercanos entre s.
Lmite de resolucin: es la menor distancia que debe existir entre dos puntos para que
puedan ser individualizados como entidades separadas.
Microscopio ptico = 0.2m
Microscopio electrnico = 1-2nm
Portaobjeto: lmina rectangular de vidrio en que se colocan los objetos que se han de
examinar microscpicamente.
Cubreobjeto: lmina delgada de vidrio, con que se cubren las preparaciones
microscpicas para su proteccin y examen. Suelen ser cuadrados.
Actividad Preliminar
Indique el nombre y funcin de cada una de las piezas sealadas en este instrumento:

MICROSCOPIA OPTICA

Bibliografa:
Karp, G. Biologa Celular y Molecular. Editorial McGraw-Hill Interamericana.
Cooper, G. La Clula. Editorial Marbn.
Diseo Experimental y Actividades
En cada mesn se dispondr de una bandeja para cuatro alumnos con:
Material biolgico

Compuestos qumicos

Material de procesamiento
Papel milimetrado
Hojas de diario
Portaobjetos
Cubreobjetos
Gotarios
Piseta con agua destilada
Tijera
Bistur
Cultivo o Agua de charco

Objetivos
Conocer el microscopio ptico y la funcin de los elementos que lo componen.
Aprender el manejo y uso del microscopio.
Realizar diferentes mediciones.

MICROSCOPIA OPTICA
Procedimientos Generales y Anlisis de Muestras
I.

Enfoque de una preparacin

Procedimiento general para el montaje de muestras biolgicas hmedas y

enteras para microscopa.
1. Corte una letra o palabra de una hoja de diario y psela sobre un portaobjetos.
2. Agregue con ayuda de un gotario una gota de agua destilada y coloque sobre
ella el cubreobjetos.
3. Enfoque la muestra segn las indicaciones del profesor.
Segn lo observado responda:
1. La imagen que se observa es derecha o invertida?.
.

....................................................................

2. Mueva la preparacin de izquierda a derecha, hacia delante o hacia atrs, qu

observa en cada movimiento?.
.

II.

Clculo del aumento total del microscopio

Se obtiene a travs de una multiplicacin simple entre el aumento del lente objetivo y el
aumento del lente ocular que estamos empleando. Por ejemplo, la lupa aumenta el
tamao real del objeto en 3.5 veces y el ocular 10 veces: el aumento total ser de 35
veces. Calcule por similar procedimiento el aumento total que dan los otros objetivos.
Aumento total = Aumento lente objetivo Aumento lente ocular
III.

Clculo del dimetro del campo visual

MICROSCOPIA OPTICA
1. Corte un cuadrado de papel milimetrado y pselo sobre un portaobjetos.
2. Agregue con ayuda de un gotario una gota de agua destilada y coloque sobre
ella el cubreobjetos.
3. Enfoque la muestra con el objetivo 4X (lupa).
4. Cuente cuntos cuadros observa en el campo visual de la lupa.
5. Luego establezca cuntas veces cabe el aumento del objetivo que usted desea
investigar en el DCV de la lupa multiplicado por el aumento de la lupa, de
acuerdo a la siguiente frmula:

DCV Objetivo que deseo investigar =

DCV lupa gaumento lupa

Aumento objetivo que deseo investigar

De esta manera usted obtendr el DCV del lente utilizado en milmetros o micrones
dependiendo de la unidad de medicin empleada en el DCV de la lupa.

Objetivo

Aumento

Aumento
ocular

Aumento
total

DCV del objetivo en micrones

(m)

Lupa
Menor
Mayor
Inmersin

IV.

Observacin de clulas
1. Deposite una gota de cultivo o agua de charco en un portaobjeto
2. Agregue con ayuda de un gotario una gota de agua destilada y coloque sobre
ella el cubreobjetos.
3. Enfoque la muestra con el objetivo 4X (lupa). Observe.
4. Enfoque la muestra con el objetivo 10x. Observe.

Observaciones generales:
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MICROSCOPIA OPTICA
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TEST
1. Una de la(s) caracterstica(s) de la
imagen que se forma en el microscopio
ptico es ser:
a) Disminuida
b) Real
c) Invertida
d) Derecha
e) Ninguna de las anteriores
2. Corresponde(n) al sistema mecnico
del microscopio ptico:
I. Diafragma
II. Revlver
III. Tornillos de ajuste o enfoque
IV. Objetivos
a) I, II
b) II, III
c) I, IV
d) I, II, III
e) Todas
3. El lente objetivo de aumento menor
del microscopio ptico corresponde a:

a) 4X
b) 10X
c) 40X
d) 100X
e) 20X
4. Si observa una preparacin con el
objetivo mayor, el aumento total de lo
que est observando es:
a) 80X
b) 40X
c) 20X
d) 800X
e) 60X
5. Si el DCV de la lupa es de 5.000m y
esta observando una preparacin con el
objetivo menor. El DCV del objetivo
utilizado es:
a) 1.600m
b) 2.000mm
c) 2.000m
d) 125m
e) 125mm

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MICROSCOPIA OPTICA
6. Observa una preparacin de catfilo
de cebolla con objetivo de Inmersin,
cuya DCV es de 160 m. Usted cuenta
2 clulas, por lo tanto el tamao
aproximado de cada clulas sera:
a) 320m
b) 2m
c) 80m
d) 100m
e) Ninguna de las anteriores
7. ____ El ojo humano puede resolver
estructuras de 0.1 mm.
8. ____ El lmite de resolucin del
microscopio electrnico es de 0.2m.

9. ____ Los oculares son parte del

sistema ptico del microscopio.
10. ____ El tornillo macromtrico da un
enfoque aproximado de lo que se
observa.
11. ____ El aumento total de lo que se
observa se obtiene de la divisin del
aumento del lente
objetivo y del
aumento del lente ocular.
12. ____ El condensador concentra los
rayos luminosos que llegan a la
preparacin

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III.