DETERMINACIN DE LA PRESENCIA DE ENZIMAS HIDROLTICAS Y ENZIMAS OXIDATIVAS

EN LA HOJA DE ZABILA (Aloe Vera) Y EN RESTOS DE PAPAYA.

ELABORO: PROFA: ELIZABETH ALBITER ALBITER
PROFA: CLAUDIA PATRICIA RAMIREZ LOPEZ
CECyT No. 6 MIGUEL OTHON DE MENDIZABAL
INTRODUCCIN:
La Zbila o Aloe vera

como es conocida es una planta perenne

originaria de frica

naturalizada en nuestro pas en la cual existen ms de 250 de especies..(INEGI,1998)

La estructura de la hoja es un ncleo gelatinoso y transparente (pulpa) envuelto por una
fina capa lquida de color amarillo (Acbar) protegido todo ello por la fina pero resistente
corteza externa verde
CLASIFICACIN TAXONMICA(Rodrguez, C. A. 1992)
NOMBRE COMN

SBILA

Reino

Plantae

Divisin

Embriophyta-siphonogama- Magnoliophyta

Subdivisin

Angiospermae

Clase

Monocotiledoneae

Subclase

Liliopsida

Orden

Liliiflorae

Familia

Liliaceae Asphodelaceae

Nombre cientfico

Aloe vera o Aloe barbadensis

Descripcin de la planta
Tribu

Son plantas de hojas suculentas, enlongadas y

espinosas en el margen.
Aloinae

PAPAYA
Fruta americana (Carica papaya), originaria de climas clidos y templados. Se ha extendido
a muchos pases y latitudes y es uno de los alimentos bsicos de la Amrica tropical del sur
de Mxico hasta Costa Rica ; pero en la actualidad se cultiva con xito en diferentes
regiones tropicales.

Hay 71 especies distribuidas en cuatro gneros. La papaya posee un

tronco erecto, carnoso, grueso y flexible de color verdoso ; cubierto de hojas dentadas con

nervaduras estrechas dispuestas en grupos..El fruto tiene forma ovoide y cuando madura
es de color amarillo a naranja ; tanto la forma, el tamao, el color y sabor del fruto vara
considerablemente dependiendo de la variedad.
ENZIMAS
Las enzimas son protenas de origen natural que cataliza reacciones biolgicas con un alto
grado de especificidad .Debido a su naturaleza proteica, a las enzimas les afectan los
mismos factores que a la protenas: temperatura, disolventes, sales, pH, etc; que modifican
su estructura qumica con la consecuente prdida de su actividad cataltica.(Bohinski, R.B.
1991)
Las enzimas oxidativas entran dentro de la clasificacin de oxidoreductasas de las cuales se
manejarn glucosa oxidasa, polifenoloxidasa, catalasa, peroxidasa, lipoxidasa.(Badui D. S.)
Las enzimas oxidoreductasas catalizan la oxidacin o reduccin del substrato, el cual puede
ocurrir de diferentes formas.
GLUCOSA OXIDASA
B-D-glucosa oxidoreductasa; EC. 1.1.3.4 , se descubri en 1928 por Muller en Aspergillus
Nger y Penicillium glancum, cataliza la reaccin de oxidacin de D-glucosa a -Dglucolactona en presencia de oxgeno molecular.(Whitaker, J. R., 1994)
Glucosa + oxgeno ----------- cido glucnico + H2O2
Su mecanismo de accin en 1948 fue realizado con la oxidacin de la glucosa donde se
encontraron las siguientes observaciones:
1. La glucosa oxidasa

no es inhibida por HCN y CO, indicando con esto que no

contiene metales inicos. En general, las oxidasas contienen metales inicos hasta
cofactores esenciales.
2. La glucosa oxidasa , en la forma oxidada tiene una absorbancia mxima de 280 nm
tpico de protenas con una absorbancia mxima de 377 y 455 nm.
La glucosa oxidasa se ha utilizado para el anlisis cuantitativo de glucosa en diferentes
industrias como la alimentaria y farmacutica.( Whitaker, J. R., 1994)La glucosa oxidasa
tambin se puede utilizar para eliminar el oxgeno contenido en muchos alimentos; este gas
es el iniciador de muchas reacciones de deterioro como cambios de color y el sabor, por lo
cual la eliminacin resulta conveniente.(Badui D. S. 1993)

POLIFENOLOXIDASA
Polifenol

Oxidasa(o-difenol:oxigeno

oxidoreductasa;Ec1.10.3.1)

tambin

llamada

tirosinasa,polifenolasa, fenolasa, catecol oxidasa, cresolasa.

En 1856 Schoenbein describe la enzima en hongos, en presencia de oxgeno molecular , la
enzima ese encuentra principalmente en hongos, papas, duraznos, manzanas, pltanos,
aguacates, granos de caf, etc.( Whitaker, J. R., 1994)
CATALASA Y PEROXIDASA
Catalasa (peroxidasa-hidrogeno: hidrgeno peroxidasa oxidoreductasa; EC. 1.11.1.6) y
peroxidasa (donante: hidrgeno-peroxidasa oxidoreductasa; EC. 1.11.1.7) difieren
marcadamente en sus caractersticas como protenas pero tienen algo en comn en el
mecanismo de accin.( Whitaker, J. R., 1994)
CATALASA
La catalasa cataliza la reaccin :
2H2O2------- 2H2O + O2
En la cual una molcula de perxido de hidrgeno acta como un donador y la segunda
molcula acta como aceptor de tomos de hidrgeno. Los productos de la reaccin es
agua y oxgeno. (Badui D. S. 1993)
PEROXIDASA
Cataliza la reaccin:
H2O2 + AH2 ------- 2H2O + A
En la cual el peroxido de hidrgeno acta como aceptor y el otro componente AH2 acta
como donador de tomos de hidrgeno.El oxgeno molecular no es el producto de la
reaccin.. .( Whitaker, J. R., 1994)
CELULASA
Las celulasas de microorganismos son de gran importancia en la degradacin de
celulosa de residuos de productos.

Las enzimas que actan en la celulosa, y productos derivados de celulosa, se pueden

dividir en tres grupos:
Las celulasas hidrolizan a la celulasa en monmeros de glucosa actuando en los enlaces
beta 1,4.

PAPANA
La papana, es un enzima proteoltica (que deshace las protenas de los alimentos), similar
a la pepsina que est en nuestro jugo gstrico, lo que le confiere sus beneficiosas
propiedades digestivas. En afecciones digestivas tales como la gastritis, la hernia de hiato,
la pirosis o acidez, etc., resulta muy adecuada, ya que contribuye a neutralizar el exceso de
acidez del estmago. La accin suavizante y antisptica sobre las mucosas digestivas, la
hacen muy til en caso de gastroenteritis y colitis de cualquier tipo.
ANTECEDENTES
Se han realizado diversos estudios de la composicin qumica de la sbila:
COMPOSICIN DE LA ZBILA
Las especies del gnero loe contienen una mezcla de glucsidos denominada Alona, la
cual es el principio activo de el frmaco.
Los diferentes anlisis realizados a la planta y su extracto ha permitido conocer la
naturaleza de las substancias que la componen. A continuacin se mencionan algunas de
ellas : Polisacridos ( glucosa, manosa, galactosa, xilosa, arabinosa), cidos (glucornico,
ctrico, succnico mlico), enzimas (Enzimas: oxidasa, celulasa, branquidasa, catalasa,
amilasa.)(15), taninos, esteroides, protena, saponina. ( Moroni, 1982 citado por
Martnez,1985)
COMPOSICIN QUMICA DEL ACBAR(Martinez,MMM.1978)
La principal sustancia que posee la planta es sin duda alguna el jugo o acbar que es
exudado de sus hojas al hacer incisiones en estas. El jugo presenta una apariencia de un
sabor muy amargo(Cutack,1962; Martnez, 1978; citado por

Segn una serie de estudios por Gjerstad (1971) el jugo de A. vera contiene un 99.52% de
agua , demostrndose cromtogrficamente la presencia de una D glucosa y un contenido
de 0.013% de protena, la cual contiene 18 aminocidos.
Actualmente, y debido a los grandes avances que se han tenido con respecto a la
composicin de la planta de sbila Aloe vera, se descubri que est posee una amplia
cantidad de vitaminas (y minerales en su jugo o en el Aloe gel(Rodriguez, C.A. 1992)
Determinado la presencia de varias enzimas Castelazo,E. Y Cruz y Victoria , en el 2002,
realizaron

un trabajo preliminar, de las presentes en cutcula, parnquima t acbar por

mtodos cromatografitos.
Se identific la presencia de siete enzimas con una purificacin preliminar las cuales son:
Invertasa, proteasa, peroxidasa, amilasa, lisozima, lipoxigenasa y lipasa.
La mejor solucin extractora fue el regulador de fosfatos y se identificaron proteasa,
invertasa y lisozima en acbar, cutcula y pulpa; en el caso de peroxidasa, esta se encuentra
presente en acbar y pulpa nicamente.(Castelazo, E. Y Cruz y Victoria 2001)
PAPAYA
La papaya est constituido principalmente por agua(86.8 %) y carbohidratos (12.18 %).
Es adems una buena fuente de vitamina A (Retinol) ; mientras que su contenido de
minerales tales como calcio, fsforo, y fierro es pobre.Los carbohidratos presentes en la
papaya son azcares con poco o nada de almidn presente. La cantidad de slidos solubles
del pur de papaya varia de 11.5 a 13.5 Brix.Entre los frutos es notable por su bajo
contenido de cidos y la porcin comestible tiene un valor de pH entre 4.5 y 6.0.Entre los
cidos que pueden encontrarse en la papaya destacan el mlico, ctrico, galacturnico y acetoglutrico. Entre otros de los compuestos caractersticos de la papaya se encuentra la
carpana que es un alcaloide presente principalmente en las semillas y las hojas y en
cantidades muy pequeas en la pulpa del fruto.
MATERIALES Y MTODOS
1. MATERIA PRIMA:
Zbila (Aloe vera). Material DE Un jardn de casa particular
Residuos de Papaya ( Cscara y semillas de papaya)

2. SUSTANCIAS Y REACTIVOS
Albmina . Marca sigma
Perxido de hidrgeno Merk
Acido 3, 5 DNS Sigma
Acido sulfrico
Permanganato de potasio
Azul Brillante de Comassie G-250
Reactivos de Folin Ciocalteau
Peroxidasa Tipo II Sigma

3. EQUIPO:
Espectrofotmetro UV 100-02 Shimadzu
Potencimetro Sargent Welch modelo DPT
Balanza analtica Sartorius
Balanza granataria Ohaus
Bao de agua Lab Line instruments
Fotocolorimetro Klett Sumerson modelo 900-3
Termospectronic Genesys 100V
Material de laboratorio
DESARROLLO EXPERIMENTAL
MTODOS
PREPARACIN DE LOS EXTRACTOS CRUDOS
El primer pas fue la preparacin del material el cual consisti:
Separar las hojas de la planta, lavarlas con agua y jabn y posteriormente enjuagar con
agua destilada y secar.
Cada una de las hojas fue separada en tres partes:
-

La cutcula

fue separada cuidadosamente del parnquima. Se dejan secar a

temperatura ambiente, se moli y se guard en un frasco a temperatura ambiente.

Acbar: Material que se encuentra en la parte interna de la hoja se recolect en

frascos y se congel a 20 C, pero como es un lquido muy voluminoso y para su
conservacin se liofiliz y se guard a 4 C.

Parnquima se separ de cutcula y se recolect en frascos y se congel a 20C.

Para los extractos se utiliz agua y NaCl 1 % donde las proporciones son las siguientes:
Primer y segundo extracto
Acbar: 25 g en 500ml de la solucin extractora
Cutcula: 14 g en 200 ml de la solucin extractora
Parnquima 100 g en 100 ml de la solucin extractora
Tercer extracto
Acbar: El material slido en 100 ml de la solucin.
Cutcula: Material slido en 100 ml de la solucin
Parnquima: Material slido en 50 ml de la solucin.
Todas estas se pusieron en agitacin durante 6 horas y se obtuvo el primer extracto y el
material slido se volvi a resuspender para obtener extracto 2, y con estos extractos se le
hicieron determinaciones de protenas y de actividad enzimtica.
DETERMINACIN DE PROTENA POR EL MTODO DE BRADFORD(Bradford 1976)
El mtodo de Bradford para la determinacin de protenas, implica el enlace del azul
brillante de Coomasie GG-250 con las protenas, originando un complejo colorido que se lee
a 595 nm. Est unin es independientemente de la composicin de aminocidos de las
protenas. El enlace del colorante a la protena es muy rpida aproximadamente 2 minutos
con una estabilidad aproximada de una hora.
PROCEDIMIENTO:
La determinacin de protena se hizo por triplicado para cada uno de los distintos extractos
de las diferentes partes de la sbila; se utiliza 0.1 ml de extracto, 0.9 ml de agua y 3.0 ml
del reactivo de Bradford. Posteriormente se agitan los tubos perfectamente y se dejan
reposar 10 minutos a temperatura ambiente y se leen en el espectrofotmetro a 595
usando el testigo para ajustar. Los datos se interpolan en la curva tipo de albmina.
Para la elaboracin de la curva tipo la cual se hace por triplicado se utiliz una solucin tipo
albmina con una concentracin 1 mg/ml que se prepar como sigue:

En una serie de tubos a diferentes concentraciones de albmina las cuales se manejaron de

20 g/ml hasta 200 g/ml, esto quiere decir que se adicion de 0.02 ml a 0.2 ml y se lleva
hasta un volumen de uno con agua, se aaden 3.0 ml del reactivo de Bradford, se agitan
los tubos perfectamente y se dejan reposar 10 minutos as temperatura ambiente y luego se
lee en el espectrofotmetro a 595 nm usando el testigo para ajustar.Por ltimo se saca la
media aritmtica de cada lectura por triplicado se elabora la grfica y se obtiene la ecuacin
de la recta.
Para los extractos, se consideran 0.1 ml, los mismos que se ajustan a 1.0 ml con agua
destilada; de la lecturas obtenidas por triplicado se saca la media aritmtica y el resultado
se interpola en la curva tipo de albmina par obtener los microgramos de protena por
mililitro de extracto.

Curva tipo de albmina por el Mtodo de

Bradford.

0,8

0,6

0,4

y = 0,0046x + 0,0609
2
R = 0,9955

0,2

0
0

20

40

60

80

a lbm ina ug/ m L

DETERMINACIN ENZIMTICA
CELULASA(Snails & Servy R.)
CURVA TIPO DE GLUCOSA

100

120

140

Se elabora a partir de una solucin de glucosa con una concentracin de 1000

ug/ml de concentracin.Se coloca una serie de 9 tubos por triplicado, 0, 0.1, 0.2,
0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, y 0.9 ml de est solucin y se completa a 1.0 ml con
agua destilada. Posteriormente se agrega 4 ml de cido 3,5-dinitrosaliclico e
inmediatamente los tubos se ponen en un bao Mara a ebullicin, durante 5
minutos, terminado este tiempo, se sacan y se enfran para leerlos posteriormente
en el fotocolormetro,utilizando filtro verde.
DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD DE LA CELULASA EN LOS EXTRACTOS
Para cada uno de los extractos se realiza por triplicado , en el cual en los tubos se adiciona
50 mg de papel higinico(cortado en cuadros pequeos) y 1.7 ml de regulador de acetatos
pH-5.5, 0.05 M. Se dejan los tubos en reposo a 5 C durante 24 horas. Despus de este
tiempo los tubos se incuban durante 30 minutos a 35 C, ak trmino de este tiempo, se
aade 0.3 ml del extracto y se deja que la reaccin se lleve a cabo durante 1 h, 3 h y 24 h
respectivamente. Al finalizar los diferentes tiempos de reaccin, se aade rpidamente 4 ml
de cido 3,5- dinitrosaliclico, para parar la reaccin. Se ponen los tubos en un bao Mara a
ebullicin por 5 minutos, se enfran y se leen en el fotocolormetro con filtro verde.
Los cuales estas lecturas de los extractos se interpolan en la curva tipo y se hacen una
serie de clculos para obtener los resultados.
GLUCOSA-OXIDASA(Voget E. C , Mazza A. L. & Balatti. A. 1987)
CURVA TIPO DE PEROXIDO DE HIDRGENO
Se utilizan soluciones de perxido de hidrgeno de concentracin conocida en la cual se
colocan en una serie de tubos por triplicado en la cual la concentracin se vario de 8.8 a
88 Mm de perxido de hidrgeno/ ml.
Por ltimo se saca la media aritmtica de las tres lecturas obtenidas para cada
concentracin, se elabora la grfica y se obtiene la ecuacin de la recta. Figura 12
El cual los tubos se les pone 2 ml del reactivo indicador(solucin de peroxidasa y
ortodianisidina, regulador de fosfatos) y 0.8 ml de la solucin de glucosa, se deja reposar
10 minutos, ha que alcance la temperatura de 37 C en un bao mara y despus se le
adiciona 0.4 ml del extracto en el caso de los problemas, el sistema se agita fuertemente
para alcanzar una aireacin adecuada.

Transcurrido una hora se interrumpe la reaccin agregando 2 ml de cido sulfrico

producindose un color estable que se lee a 530 nm.(filtro verde).
Testigo : La enzima se sustituye por regulador.
Unidad de actividad enzimtica: Una unidad de glucosa oxidasa se define: como la cantidad
de enzima que produce un micromol de perxido de hidrgeno por minuto.
POLIFENOLOXIDASA(Mtodo de kimberly and Lee,1981)
La actividad de la polifenoloxidasa se basa en la medicin de la velocidad de formacin del
producto de la reaccin, que se origina de la oxidacin del catecol por la polifenoloxidasa,
durante cada 30 segundos a una absorbancia de 420 nm y a 20 C.
La determinacin de polifenoloxidasa se realiza por triplicado para los diferentes extractos
de la zbila. Se colocaron en una celda 2.1 ml de regulador de fosfatos (10 mM, pH 6.5)
ms 0.4 ml de catecol(0.5 M) preparado con el mismo regulador, posteriormente se le
aade 0.5 ml del extracto y se toman las lecturas cada 30 segundos durante cinco minutos
a una temperatura de 20 C en un espectrofotmetro a 420 nm.
Una unidad de actividad esta definida como el cambio en la absorbancia en 0.001 por un
minuto.
Curva tipo de glucosa

Curva tipo de perxido de hidrgeno.

600
500

100
90

UK

400

80
70

300

60

y = 0,5652x + 25,463
2
R = 0,999

200
100

50

y = 0,4905x + 4,7453
R2 = 0,9938

40
30
20

10

200

400

600

800

1000

0
0

50

100

150

uM ol H 2 O 2

GLUCOSA ug/mL

PEROXIDASA(The Worhington Manua, 1961l) (Maetly,A. C. & Chance, b. 1954)

200

La velocidad de descomposicin del perxido de hidrgeno( H2O2) por la enzima peroxidasa

con o- dianisidina como donador de hidrgeno es determinado midiendo la velocidad del
color desarrollado con un filtro azul ( 460 nm) . Una unidad de actividad de peroxidasa es
esa cantidad de enzima descompuesta de un micromol de perxido por minuto a 25 C.
Procedimiento:
La determinacin de peroxidasa se hizo por triplicado para los distintos extractos. Se utiliza
como sustrato 1 ml de H2O2 diluido en 100 ml de agua, en seguida, se diluye 1 ml de esta
muestra en 100 ml de regulador de fosfatos pH 0.06 0.01M. En la determinacin se utiliza
12 ml de sustrato ms 0.1 ml de o- dianisidina 1 % ( colorante disuelto en metanol), se
toman 5.5 ml de esta solucin y se la adiciona 0.5 ml de los extractos primera extraccin.
El volumen restante de la solucin se utiliza para ajustar el fotocolormetro con un filtro
azul ( 460 nm), en seguida se van tomando intervalos de 1 min durante 15 minutos. Los
resultados obtenidos se expresan como moles de sustrato transformado/ mg de protena
min mediante la siguiente ecuacin:
A 460 NM/ MIN

11.3(ml extracto)(mg protena/ml reaccin)

moles de sustrato transformado

mg protena* min

La relacin entre el colorante oxidado y los moles de perxido de hidrgeno descompuesto

fue determinado midiendo la absorbancia de la o- dianisidina oxidada variando cantidades
de perxido en presencia de la enzima. Bbajo estas condiciones la absorbancia molar del
perxido de hidrgeno es igual al factor de 11.3 a 460 nm. (Maetly,A. C. & Chance, b.
1954)
Determinacin de Catalasa(Beer, R.F. & Sizer, I. W. 1952)
(Worthington , Manual 1961)
Es la desaparicin del perxido de hidrgeno seguido espectrofotomtricamente a 240 nm..
SUSTRATO: 0.3 ml de perxido al 30 % se diluyen a 50 ml con regulador de fosfatos pH
7.0.
En una serie de tubos se le adiciona 0.1 ml del extracto y se completa el volumen de 2 ml
con regulador de fosfatos. Se le adiciona 1 ml del sustrato, esto se realiza por triplicado, en

el cual se tiene un testigo con 2 ml de regulador y 1 ml de sustrato. El cual la densidad

ptica debe de ser de aproximadamente 0.850.Se midi en un intervalo de tiempo de un
minuto y se lee hasta los cinco minutos.

Unidades
mg protena

DO x1000
43.6 X mg de catalasa/ ml de la mezcla

PAPAYA
Mtodo colorimtrico con precipitacin de protenas con TCA:
Este mtodo consisti en hidrolizar un sustrato como la casena, luego se precipit la
protena con TCA (cido tricloro actico) al 30%, una vez precipitada y filtrada la protena,
se ley el sobrenadante (aminocidos) por espectrofotometra a 280nm.
Se utiliz 5ml de solucin de casena al 0.1% en cada muestra y se agreg 0.1ml de enzima
en cada tubo. El buffer en que disolvi el ltex fue buffer fosfato 0.05 N, Ph 7
El ltex usado como testigo fue de la marca SIGMA, ltex crudo secado al sol con actividad
1,7 U Baee / mg slido. La tcnica consiste en la hidrlisis de un sustrato sinttico BAEE
(N

-Benzoil-L-arginina Etil ster Hidroclordrico Mtodo titulomtrico (Shwert and Tanaka

1955).

RESULTADOS Y DISCUSIN
Los resultados de la presencia de las cuatro enzimas oxidativas y una hidroltica(celulasa)
mostrndose las actividades enzimticas de las tres partes de la hoja de la zbila( acbar,
parnquima y cutcula).Las soluciones extractoras que se utilizaron para

las diferentes

partes de la zbila son agua y NaCl 1 %, esto con el fin de observar el comportamiento de
solubilidad de las enzimas por influencia de la concentracin de las sales y el
comportamiento con agua.Con el material en estudio se obtuvieron tres extractos para el
caso de acbar y cutcula, para parnquima se obtuvieron dos extractos a los cuales se les
determin protena por dos mtodos y la determinacin de las actividades enzimticas.
En la primera extraccin con la soluciones extractoras se solubiliz la mayor parte de la
protena en la solucin de cloruro de sodio, de igual manera se presentaron las actividades
enzimticas ms altas, por lo que se tomaron algunos resultados como la suma de los

extractos. Se manejaron diferentes tiempos de reaccin dependiendo de cada enzima, y se

eligieron aquellos en donde se presentaron las mejores actividades enzimticas.
1. Determinacin de protena de los extractos crudos de las diferentes partes de la zbila
por el mtodo de Bradford .
En cuanto al mtodo de Bradford se aprecian los resultados en la tabla , en el cual se
observa que la mayor cantidad de protena es en el acbar, seguido del parnquima y por
ltimo la cutcula, en este mtodo no existe interferencias de los aromticos reductores por
lo que es ms especfico, por lo cual la cantidad de protena determinada por este mtodo
ser utilizado para los clculos posteriores de las actividades de las enzimas.

PARTE

SOLUCIN EXTRACTORA

1er
extracto

AGUA DESTILADA
ACiBAR
NaCl 1 %

339
340

PARNQUIMA

AGUA DESTILADA
NaCl 1 %

217
274

CUTCULA

AGUA DESTILADA

148

NaCl 1 %

163

2. Actividades enzimticas de Celulasa en las diferentes partes de la zbila a diferentes

tiempos de reaccin.
En las tablas siguientes se muestran las actividades obtenidas en los diferentes extractos de
cada una de las partes de la hoja de la zbila a 3 y 24 horas, expresadas en unidades de
celulasa las cuales son en microgramos de glucosa liberada/ mg protena.Siendo la mayor
actividad detectada en la solucin de cloruro de sodio a las 24 h en las diferentes partes de
la zbila.
En la figura, se muestran las actividades totales de los dos extractos en cloruro de sodio a
las 24 h donde se present mayor actividad ,en la cual se observa que la mxima actividad
se presenta en cutcula, en la que la actividad es de tres veces mayor comparada con la del
acbar y seis veces mayor la actividad de cutcula comparada con el parnquima, esto
puede ser debido a que en la superficie se encuentre la mayor parte de las enzimas.

60000

50000
40000
30000

20000
10000

0
C UT C U LA

ACIBAR

P A R N QU I M A

P A R T E D E LA H OJ A D E Z B I LA

Actividad total de Celulasa en la solucin extractora de NaCl 1%

3. Determinacin de la actividad enzimtica de catalasa en los extractos en las diferentes
partes de la zbila.
En la figura, se muestran los resultados de las actividades de catalasa en unidades de
catalasa la cual se da en micromoles de perxido que se descompone, por miligramo de
protena por minuto.En el caso de catalasa la mejor actividad se present en la solucin de
cloruro de sodio

en la tres diferentes partes de la enzima en el primer extracto. La

actividad mxima se presenta en el acbar seguido del parnquima y por ltimo en cutcula.

IM

LA
R
PA

Q
U

AR
B
AC

4500
4000
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
0

pa r t e s de l a z bi l a

4. Determinacin de la actividad enzimtica de peroxidasa en los extractos en las diferentes

partes de la zbila.
Las actividades de peroxidasa se presentan en la tabla los resultados donde las unidades
son umoles de sustrato transformado/ mg de protena por 5 minutos La figura, muestra la
actividad total de las diferentes partes de la zbila donde se aprecia mejor que la mayor
actividad es en parnquima, seguido del acbar y muy poca actividad en cutcula en el cual
en algunos casos ni se detect su actividad.

2000
1800
1600
1400
1200
1000
800
600
400
200
0
PARNQUIMA

ACBAR

CUTCULA

Figura Actividad Total de Peroxidasa en NaCl 1 %.

5. Determinacin de la actividad enzimtica de polifenoloxidasa en los extractos en las

diferentes partes de la zbila.
En la figura , se aprecian los resultados de las actividades de polifenoloxidasa las cuales
estn dadas en PFO/ mg protena por minuto.
La mejor actividad se present en este caso en la solucin extractora de agua destilada,. La
mayor actividad se present en cutcula igual que en celulasa, y su actividad es dos veces
mayor comparada con la del acbar y cuatro veces mayor comparado con la actividad total
de parnquima de los dos extractos.

UPFO/mg prot*min)

600
500
400
300
200
100
0
CUTCULA

ACBAR

PARNQUIMA

PARTES DE LA ZBILA

Figura Actividad Total de polifenoloxidasa en la solucin de Agua.

Porcentaje de las actividades de las diferentes enzimas en las partes de la zabila.

ENZIMA

ACIBAR

CUTCULA

CELULASA

19%

PARENQUI
MA
11%

CATALASA

57%

21%

22%

PFO

30%

16%

54%

PEROXIDA

32%

67%

1%

70%

CONCLUSIONES
La mayor cantidad de protena se solubiliz en la solucin de cloruro de sodio.
El acbar es la parte de la hoja de la zbila con mayor contenido de protena.
Se detectaron la presencia de las enzimas del tipo oxidativo e hidroltico.
La mayor actividad de las enzimas se present en la solucin extractora de Cloruro
de Sodio, siendo en cutcula el 70 % de la actividad total de celulasa. present el
54% de la actividad total de polifenoloxidasa. el 67% de la actividad total de
peroxidasa.
La presencia de la mayora de las enzimas se detect en cutcula, seguido de acbar
y por ltimo parnquima.

Estas conclusiones van a ser importantes para el proyecto de el aprovechamiento de zbila,

nopal y residuos de frutos en el cual est la papaya, adems que dar pauta a la obtencin
de enzimas, o aplicacin de ellas en productos.

BIBLIOGRAFA
Aguilar A. Camacho J.(1994) Herbolario Medicinal del Instituto Mexicano del Seguro
Social. Mxico . Informacin Etnobotnico
Badui D. S.(1993). Qumica de los Alimentos . Ed. Alambra S. A. Mxico
Bohinski, R. B. (1991). Bioqumica. Quinta Edicin. Edit. Adisson Wesley Iberoamericana.
Bradford, M. M. ( 1976) A rapid and sensitive method for quantitation of microgram
quantities of de protein utilizing the principle of protein dye binding. Anal. Biochem.
Dorantes A. L. (1978). Purificacin y Estudio de algunas caractersticas de la
Polifenoloxidasa del Aguacate Tesis de Maestra ENCB. IPN. Mxico D. F.
Garca V. R. (1993) Estudio Fitoqumico y Farmacologa de tres fracciones de Aloe
barbadensis( Sbila). Tesis Licenciatura. ENCB. IPN.Mxico D.F.
http://www.aloveria.com/espanol/aloevera.htm (Pgina Web)
INEGI . (1998).Cultivos Perennes de Mxico. VII Censo Agropecuario. INEGI. Mxico
Lowry, O. H. N. J. Roserbrough A. L. and R. J. Randall with the Foluin- Phenol Reogent. J.
Biol. Chem.
Martinez, MM. (1978). Flora medicinal del Estado de Mxico. Direccin de Recursos

Naturales. CODAGEM, Toluca

Whitaker, J. R. , (1994). Principles of Enzymology for the Food Science. Ed. Marcel
Dekker, Inc. 2da Edicin