Espectrometra de masas atmica

Casi todos los elementos de la tabla peridica se pueden determinar mediante

la espectrometra de masas. La espectrometra de masas atmica ofrece
numerosas ventajas frente a los mtodos espectromtricos pticos atmicos
que ya se estudiaron con profundidad.
Entre dichas ventajas estn:
1) los lmites de deteccin que, para muchos elementos, son tres rdenes de
magnitud mejores que en los mtodos pticos
2) espectros notablemente sencillos que casi siempre son nicos y a menudo
se interpretan con facilidad
3) capacidad para medir relaciones isotpicas atmicas.
Entre las desventajas estn:
1) el costo del instrumento es de dos a tres veces mayor comparado con los
instrumentos pticos atmicos
2) la deriva del instrumento puede ser de 5 a 10% por hora y
3) ciertos tipos de interferencia que se estudian ms adelante.
Aspectos generales de la espectrometra de masas atmica
Un anlisis por espectrometra de masas atmica consta de las etapas
siguientes: 1) atomizacin, 2) conversin de una fraccin significativa de los
tomos formados en la etapa 1 en un flujo de iones (casi siempre positivos de
una sola carga), 3) separacin de los iones formados en la segunda etapa con
base en su relacin masa/carga (m/z), donde m es el nmero de masa del ion
en unidades de masa atmica y z es el nmero de cargas fundamentales y 4)
conteo del nmero de iones de cada tipo o medicin de la corriente inica
producida cuando los iones formados a partir de la muestra inciden en un
detector adecuado.
En espectrometra de masas interesa con frecuencia la masa exacta m de
determinados istopos de un elemento o la masa exacta de los componentes
que contienen un cierto grupo de istopos, por lo regular, las masas exactas se
dan con tres o cuatro cifras a la derecha del punto decimal porque los
espectrmetros de masas de alta resolucin tienen la aptitud de medir con ese
nivel de precisin. En otros contextos se usa el trmino masa nominal, que
implica una precisin de un nmero entero en una medicin de masa.
Relacin masa-carga
Para un ion sta es la relacin adimensional entre su nmero de masa y el
nmero de cargas fundamentales z que tiene. Por consiguiente, para 12C1H4+,
m/z =16.0313/1 = 16.0313. Para 13C1H42+, m/z = 17.0346/2= 8.5173.

Tipos de espectrometra de masas atmica

Al inicio, las espectrometras de masas con ionizacin trmica y con fuente de
chispa fueron los primeros mtodos espectromtricos de masas para ejecutar
anlisis elemental tanto cualitativo como cuantitativo. Observe que las tres
primeras entradas de la tabla corresponden a mtodos acoplados, que son la
combinacin de dos tcnicas instrumentales que proporcionan resultados

analticos mejores que los que se obtienen con cada mtodo por separado.

Espectrmetros de masas
Un espectrmetro de masas es un instrumento que produce iones y los separa
de acuerdo con sus relaciones masa/carga, m/z. La mayor parte de los iones
que se estudian tienen una sola carga, de modo que la relacin es simplemente
el nmero de masa del ion.
En el diagrama de bloques se muestran los principales componentes de todos
los tipos de espectrmetros de masas. El objetivo del sistema de entrada es
introducir una cantidad muy pequea de muestra en la fuente de iones, donde
los componentes de dicha muestra se transforman en iones gaseosos gracias
al bombardeo con electrones, fotones, iones o molculas. Otra manera de
lograr la ionizacin es aplicar energa trmica o elctrica. La salida de la fuente
de iones es un flujo de iones positivos, que es lo ms comn, o iones negativos
gaseosos que son acelerados en el analizador de masas.

En el analizador de masas la dispersin

depende de la relacin masa-carga de los iones
del analito y no de la longitud de onda de los
fotones. Un espectrmetro de masas contiene
un transductor que convierte el haz de iones en
una seal elctrica que pueda ser procesada,
almacenada en la memoria de una
computadora y mostrada en una pantalla o
almacenada en otros medios. Los
espectrmetros de masas requieren un
complejo sistema de vaco para mantener una
presin baja en todos los componentes,
excepto en los sistemas para procesar la seal
y de lectura. La presin baja asegura colisiones
no frecuentes en el espectrmetro de masas
para producir y conservar iones y electrones
libres.

Transductores para espectrometra de masas

El multiplicador de
electrones es el transductor
de eleccin para la mayora
de los experimentos de
rutina. Cuando los iones o
electrones energticos
chocan contra las
superficies de Cu y Be del
ctodo y de los dinodos se
emiten rfagas de electrones. Entonces, stos son atrados al siguiente dinodo
abajo de la cadena hasta que en el ltimo de ellos aparece una gran cantidad
de electrones por cada ion que golpea el ctodo. Hay multiplicadores de
electrones con hasta 20 dinodos, que por lo general proporcionan una ganancia
de corriente de 107.

Copa de Faraday
El transductor est alineado de manera que los iones que salen del analizador
choquen contra el electrodo del colector. Este ltimo est rodeado por una
jaula que impide que escapen los iones reflejados y los electrones secundarios
expelidos. El electrodo colector est inclinado respecto a la trayectoria de los
iones entrantes, de forma que las partculas que golpeen o abandonen el
electrodo sean reflejadas desde la entrada hacia la copa. El electrodo colector y
la jaula estn conectados a tierra mediante una resistencia grande. La carga de
los iones positivos que inciden en la placa es neutralizada por un flujo de

electrones procedentes de tierra a travs de

la resistencia.
La cada de voltaje resultante en la
resistencia se aumenta por medio de un
amplificador de alta impedancia. La
respuesta de este transductor es
independiente de la energa, masa y
naturaleza qumica del ion.
Analizadores de masas
Analizador de masas cuadrupolar
Es el tipo ms comn de espectrmetro de masas
atmicas. Este instrumento es ms compacto, ms
barato y ms potente que cualquier otro tipo de
espectrmetro de masas. Tambin presenta la ventaja
de su elevada velocidad de barrido, de manera que se
puede obtener un espectro de masas completo en
menos de 100 ms.
La parte principal de un instrumento cuadrupolar son
las cuatro barras cilndricas paralelas que conforman
los electrodos. Las barras opuestas estn conectadas elctricamente: un par
est conectado al polo positivo de una fuente variable cd y el otro par se
conecta a la terminal negativa. Adems, a cada par de barras se les aplican
voltajes variables de corriente alterna de radiofrecuencia, que estn
desfasados 180. Para obtener un espectro de masas con este dispositivo, los
iones se aceleran en el espacio entre las barras mediante una diferencia de
potencial de 5 a 10 V. En cualquier momento, todos los iones excepto los que
tengan un determinado valor de m/z. chocan contra las barras y se convierten
en molculas neutras. Por tanto, slo los iones cuyo valor de m/z est dentro
de un intervalo limitado de valores llegan a al transductor. Por lo regular, los
instrumentos cuadrupolares separan con facilidad los iones cuya masa difiere
en una unidad, este dispositivo recibe a veces el nombre de filtro de masas en
lugar de analizador de masas.
Analizadores de masas de tiempo de vuelo
En los instrumentos de tiempo de vuelo, los iones positivos se producen de
manera peridica al bombardear la muestra con impulsos cortos de electrones,
iones secundarios o fotones generados por lser. Estos impulsos suelen tener
frecuencias de 10 a 50 kHz y un tiempo de vida de 0.25 ms. Los iones que se
producen de esta manera son acelerados despus mediante un pulso de
campo elctrico de 103 a 104 V que tiene la misma frecuencia que el pulso de
ionizacin, pero retrasada. Las partculas aceleradas pasan al tubo de deriva de
casi un metro de longitud que no est sometido a ningn campo. Debido a que
todos los iones que entran en el tubo tienen idealmente la misma energa
cintica, sus velocidades dentro de aqul deben ser inversamente

proporcionales a sus masas, y

las partculas ms ligeras
llegan al detector antes que
las ms pesadas. Por lo
regular, el transductor en un
espectrmetro de masas de
tiempo de vuelo es un
multiplicador de electrones
cuya seal de salida se
despliega en las placas de
desviacin vertical de un osciloscopio, mientras el barrido horizontal se
sincroniza con los pulsos del acelerador. En la pantalla del osciloscopio aparece
casi de manera instantnea la imagen del espectro de masas.
Analizadores de doble enfoque
Un espectrmetro de masas de doble enfoque contiene dos dispositivos para
enfocar un haz de iones: un analizador electrosttico y un analizador de sector
magntico. En este instrumento, los iones que proceden de una fuente son
acelerados a travs de una rendija en un campo electrosttico curvo que
concentra un haz de iones que se hallan en una estrecha banda de energas
cinticas hacia una rendija que conduce a un campo magntico curvo. En este
campo, los iones ms ligeros se desvan ms y los iones ms pesados se
desvan menos. Los iones dispersados chocan contra una placa fotogrfica y,
por tanto, quedan registrados.

Espectrometra de masas molecular

Esta tcnica tiene la aptitud de proporcionar informacin acerca de 1) la
composicin elemental de las muestras de materia; 2) la estructura de las
molculas inorgnicas, orgnicas y biolgicas; 3) la composicin cualitativa y
cuantitativa de mezclas complejas; 4) la estructura y composicin de
superficies slidas y 5) las relaciones isotpicas de tomos en las muestras.
Espectros de masas molecular
En la figura se ilustra la forma comn en que se presentan los espectros de
masas. El analito es etilbenceno, cuya masas molecular nominal es de 106
dalton (Da). Para obtener este espectro, se bombardea el vapor de etilbenceno
con un haz de electrones, lo cual origina la prdida de un electrn del analito y
la formacin de un ion molecular M como se muestra en la reaccin

La especie cargada C6H5CH2CH3+

es el ion molecular. Como lo
seala el punto, el ion molecular
es un radical y tiene la misma
masas molecular que la
molcula. En general, el choque
entre los electrones energticos
y las molculas de analito
proporcionan a stas suficiente
energa para dejarlas en estado
excitado. A menudo se produce
la relajacin por la
fragmentacin de parte de los
iones moleculares para dar lugar a iones de masas ms bajas.
Los iones positivos producidos por el impacto de electrones pasan a travs de
la rendija del espectrmetro de masas, en donde se clasifican de acuerdo con
sus relaciones masas-carga y originan un espectro de masas. Observe tambin
que al pico ms alto en cada espectro, denominado pico base o pico de
referencia, se le asigna el valor arbitrario de 100. Se considera que la altura del
resto de los picos es un porcentaje de la altura del pico base.
Fuentes de iones
La apariencia
de los
espectros de
masas para
distintas
especies
moleculares
depende en
gran medida
del mtodo
que se utilice para formar los iones.
Observe que estos mtodos pertenecen a dos categoras principales: fuentes
de fase gaseosa y fuentes de desorcin.
En las primeras, que incluye las tres primeras fuentes de la tabla, primero se
hace vapor la muestra y luego se ioniza. En el caso de las fuentes de desorcin,
la muestra, en estado slido o lquido, se transforma directamente en iones
gaseosos. Una ventaja de las fuentes de desorcin es que son aplicables a
muestras no voltiles y trmicamente inestables.
Las fuentes de iones se clasifican tambin en fuentes duras y fuentes blandas.
Las primeras confieren energa suficiente a las molculas del analito para
situarlas en un estado energtico altamente excitado. La relajacin posterior
involucra la rotura de enlaces, lo que genera iones fragmentados con una

relacin masas-carga menor que la del ion molecular. Las fuentes de ionizacin
blandas dan lugar a poca fragmentacin. Por tanto, el espectro de masas que
procede de una fuente de ionizacin blanda consta del pico del ion molecular y
slo alguno o incluso ningn otro pico.
Espectro de masas del 1-decanol: a) con una fuente dura (impacto de
electrones) y b) con una fuente blanda (ionizacin qumica).

Origen del impacto de electrones

En este proceso la muestra se someta a una temperatura suficientemente
elevada como para producir un vapor molecular, el cual se ionizaba despus
bombardendolo con un haz de electrones de elevada energa. Los electrones
son emitidos por un filamento caliente de wolframio o de renio y se les acelera
mediante la aplicacin de alrededor de 70 V entre el filamento y el nodo. Las
trayectorias de los electrones y las molculas son perpendiculares entre s y se
cruzan en el centro de la fuente, donde chocan y tiene lugar la ionizacin. El
producto principal son iones con una nica carga positiva que se forman
cuando los electrones de elevada energa se acercan lo suficiente a las
molculas para hacerles perder electrones por repulsin electrosttica. La
ionizacin por impacto de electrones no es muy eficaz, y slo alrededor de una
molcula entre un milln experimenta la reaccin principal M + e - M*+ + 2eDonde, M representa la molcula de analito y es su ion. Los iones positivos
producidos por el choque de electrones son atrados a travs de la rendija
hacia la primera placa de aceleracin mediante una pequea diferencia de
potencial (por lo regular 5 V) que se aplica entre esta placa y las placas
repulsoras. Con el objetivo de formar una cantidad importante de iones
gaseosos en una proporcin reproducible, es necesario que los electrones
generados por el filamento de la fuente sean acelerados mediante un potencial
mayor a unos 50 V. La pequea masas y la alta energa cintica de los
electrones resultantes producen pequeos aumentos en la energa de
traslacin de las molculas contra las que chocan. En consecuencia las
molculas adquieren estados vibracionales y rotacionales altamente excitados.
Por lo regular, la relajacin posterior tiene lugar mediante una elevada
fragmentacin que origina un gran nmero de iones positivos de diferentes
masas menores que la del ion molecular (en ocasiones son mayores a causa de
los choques). Estos iones de masas ms bajas se llaman iones hijas.

Los complejos espectros de masas que se obtienen en la ionizacin por

impacto de electrones son tiles para la identificacin de compuestos.

Fuentes y espectros de ionizacin qumica

En la ionizacin qumica, los tomos gaseosos de la muestra (derivados de una
entrada indirecta o de una sonda caliente) se ionizan al chocar con los iones
que se producen al bombardear con electrones un exceso de gas reactivo. Por
lo regular se utilizan iones positivos, aunque la ionizacin qumica de iones
negativos se utiliza a veces en aquellos analitos que contienen tomos muy
electronegativos. La ionizacin qumica es quiz el segundo de los
procedimientos que ms se utilizan para producir iones en espectrometra de
masas.
Con estos cambios se introduce un reactivo gaseoso en la regin de ionizacin
en una cantidad tal que la relacin de concentracin entre el reactivo y la
muestra sea de 103 a 104. Debido a esta gran diferencia de concentracin, el
haz de electrones reacciona casi exclusivamente con las molculas de reactivo.
Uno de los reactivos ms comunes es el metano, que reacciona con electrones
de energa elevada para producir varios iones como CH 4+, CH3+ y CH2+. Los dos
primeros predominan y representan alrededor de 90% de los productos de
reaccin. Estos iones reaccionan rpidamente con molculas de metano
adicionales como sigue:

Fuentes de ionizacin por campo y espectros

Los iones se forman por la influencia de un campo elctrico elevado (108
V/cm). Esos campos se generan al aplicar voltajes elevados (10 a 20 kV) a
emisores especialmente construidos, que estn formados por numerosas
puntas finas cuyos dimetros son menores a 1 m.
El resultado de este tratamiento es la aparicin de centenares de microagujas
de carbono que emergen de la superficie del hilo. Los emisores de ionizacin
por campo se colocan a una distancia de 0.5 a 2 mm del ctodo, el cual a
menudo tambin sirve de rendija. La muestra gaseosa procedente de un
sistema de entrada indirecto se puede difundir hacia el rea de campo elevado,
alrededor de las microagujas del nodo. El campo elctrico se concentra en las
agujas emisoras y la ionizacin se produce por un mecanismo de efecto tnel
de mecnica cuntica en el que los electrones del analito son extrados por las
microagujas del nodo. El analito adquiere poca energa vibracional y
rotacional, por lo que hay poca fragmentacin.
Fuentes de desorcin
Dichos mtodos no son aplicablesa muestras no voltiles o trmicamente
inestables. Se ha perfeccionado una cantidad de mtodos de ionizacin por
desorcin para estudiar este tipo de muestras. Los mtodos de desorcin
prescinden de la volatilizacin y de la posterior ionizacin de la molcula de
analito. En ellos se suministra energa a la muestra slida o lquida de diversas
maneras, de modo que se provoca la formacin directa de iones gaseosos. Por
consiguiente, se obtienen espectros muy simplificados y, a menudo, consisten
slo del ion molecular o del ion molecular protonado.
Fuentes de desorcin por campo
En la desorcin por campo se emplea un emisor con mltiples puntas, similar al
que se usa en las fuentes de ionizacin por campo.4 En este caso, el electrodo
se coloca sobre una sonda que puede retirarse del compartimiento de la
muestra y revestirse con una solucin de la muestra. Despus de reinsertar la

sonda en el compartimiento de la muestra, otra vez se produce la ionizacin al

aplicar un voltaje elevado a este electrodo. En algunas muestras es necesario
calentar el emisor haciendo pasar una corriente por el alambre. Por
consiguiente, puede haber una degradacin trmica antes de completarse la
ionizacin
Desorcin-ionizacin por lser con ayuda de una matriz
La espectrometra de desorcin-ionizacin por lser con ayuda de una matriz
(MALDI, por sus siglas en ingls) es un mtodo de ionizacin nuevo que
permite obtener informacin exacta sobre las masas moleculares de
biopolmeros polares que varan desde algunos miles a varios cientos de miles
de daltons. En la tcnica MALDI una baja concentracin del analito se dispersa
de manera uniforme en una matriz slida o lquida que est depositada en el
extremo de una sonda de acero inoxidable, o colocada en una placa de metal.
Esta ltima se coloca luego en una cmara de vaco y un rayo lser se enfoca
sobre la muestra. Adems de la MALDI con cmara de vaco ordinaria, tambin
se ha descrito una que trabaja a presin atmosfrica. La matriz para MALDI
debe absorber de manera intensa la radiacin lser. Despus, la matriz y el
analito son desorbidos y ionizados, lo que produce un penacho de iones.

Ionizacin por electronebulizacin

La espectrometra de masas con ionizacin por electronebulizacin, descrita
por primera vez en 1984, se convirti en una de las tcnicas ms importantes
para el anlisis de biomolculas, como polipptidos, protenas y
oligonucletidos cuyas masas moleculares son de 100 000 Da o superiores.
La ionizacin por electronebulizacin se efecta en condiciones de presin
atmosfrica y temperatura ambiente en un instrumento. La disolucin de la
muestra se bombea a travs de una aguja capilar de acero inoxidable a razn
de algunos microlitros por minuto. La aguja se mantiene a un potencial de
varios kilovoltios respecto al electrodo cilndrico que la rodea. La niebla de finas
gotitas cargadas resultante pasa despus por un capilar de desolvatacin,
donde se produce la evaporacin del solvente y donde las molculas del analito
adquieren la carga. Debido a que las gotitas se vuelven ms pequeas por
efecto de la evaporacin del solvente, su densidad de carga aumenta hasta
que la tensin superficial ya no puede soportar la carga en un punto llamado
lmite de Rayleigh. Aqu sucede la llamada explosin de Coulomb y la gotita se
divide en pequesimas gotitas. El proceso se repite en stas hasta que el
solvente es eliminado del analito; entonces slo quedar una molcula del
analito con mltiples cargas.
Una caracterstica muy interesante y til del proceso de electronebulizacin es
la pequea fragmentacin que se produce en biomolculas grandes y
trmicamente frgiles, causada por una pequea cantidad de energa extra
que retiene el analito en la ionizacin. Adems, los iones que se forman son de
carga mltiple y los valores de m/z son suficientemente bajos para poder ser

detectables con un instrumento de cuadrupolo con un alcance de 1500 o

menos.

Fuentes de bombardeo con tomos rpidos

FAB: Fast atom bombardment

ESI: Electrospray ionization
MALDI: matrix-assisted laser desorption/ionization