Nuevo Manual Bioca 2014-1

Facultad de Odontologa
GUA DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE
BIOQUMICA
D. en C. Paola Prez Polanco
Agosto, 2013
PRESENTACIN
A) IMPORTANCIA
Siendo una introduccin a los aspectos especficos de la materia de Bioqumica, el
alumno debe iniciar su capacitacin para trabajar en un laboratorio y manejar equipo,
reactivos e instrumental.
El laboratorio es el espacio para familiarizar al estudiante con un mtodo para
resolver problemas.
El laboratorio le permite al estudiante investigar experimentalmente y recoger algunos
datos del tema que ser tratado en clase.
El ensayo experimental brinda un apoyo para visualizar y reforzar los temas cubiertos
en la teora y de esta manera, entender los fenmenos biolgicos.
En el laboratorio se realiza una actividad eminentemente organizadora e integradora,
en torno a ejercicios experimentales que tengan como propsito primario cumplir con
los objetivos educativos de la enseanza, en cuanto a desarrollar en el estudiante las
habilidades y la capacidad de emplear en forma sistemtica el mtodo cientfico.
B) ASIGNATURAS CON LAS QUE SE VINCULA LA BIOQUMICA
La Bioqumica es el estudio de la base molecular de la vida. Existe un gran inters y

actividad en la Bioqumica actual debido a que su rpido desarrollo ha permitido a los
investigadores, resolver algunos de los ms desafiantes y fundamentales problemas
de la Biologa y de la Medicina.
El estudio de la Bioqumica est vinculado dentro del plan de estudios del Cirujano
Dentista, con las asignaturas de Fisiopatologa, Microbiologa, Patologa bucal,
Farmacologa, Gentica, Medicina Estomatolgica, Inmunologa, Teraputica en
Estomatologa, Qumica, Qumico Farmacutico-Bilogo, Qumico FarmacuticoIndustrial, Qumico Bacterilogo y Parasitlogo, entre otras reas.
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUMICA

Semestre 2014-1
ALUMNO:_____________________________________GRUPO:________
PROFESORES
TITULAR:_____D. en C. Paola Prez Polanco _________
TITULAR:____________________________________________________
PRCTICA
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FIRMA
FACULTAD DE ODONTOLOGA
PRACTICARIO DE LABORATORIO MULTIUSOS
DATOS GENERALES
Nombre de la Asignatura
BIOQUMICA
Carcter de la Asignatura
LABORATORIO
Semestre en que se imparten
PRIMERO
Nmero de horas de ejecucin de la prctica del laboratorio / taller
2 HORAS
OBJETIVO GENERAL DEL LABORATORIO

Que el alumno realice experimentos que se relacionan con los conocimientos que est
adquiriendo en teora, para vincular las experiencias prcticas y tericas. Adems de
elaboracin de un reporte representativo de los aspectos ms importantes de su trabajo,
discutiendo los resultados obtenidos.
REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA

1. El alumno ingresar al laboratorio con bata, la cual debe ser blanca y de manga
larga. Es indispensable portar la bata abotonada y guardar el comportamiento
apropiado durante la estancia en el laboratorio.
2. El alumno se familiarizar con los sitios en donde se encuentran localizadas las
regaderas, extinguidores, botes de basura, caja para material punzo-cortantes,
bolsa roja para desecho de material biolgico, etc.
3. En ningn momento se permitir la aplicacin de cosmticos, fumar y/o ingerir
alimentos dentro del laboratorio.
4. Tomar la postura ms cmoda para trabajar correctamente con el fin de tener
control y precisin de los movimientos durante el uso de materiales, equipos y
reactivos.
5. Limpiar las mesas de trabajo antes y despus de cada prctica, as tambin
durante la prctica si se ha derramado algn reactivo.
6. Para evitar quemaduras, se debern apagar mecheros y/o planchas calientes
cuando stos no se utilicen. As tambin, se debern emplear gradillas o pinzas
para sostener o transportar tubos calientes.
7. Mantener las sustancias qumicas inflamables alejadas de fuego, planchas
calientes o ambos.
8. No deber olfatear y/o probar reactivos o soluciones. No se debe mirar nunca el

interior de un tubo de ensayo que se est calentando, ni apuntar hacia alguna
persona porque el contenido podra proyectarse en cualquier momento. La misma
precaucin debe tomarse cuando se mezclen reactivos o se agiten vigorosamente
los tubos.
9. Utilizar guantes de ltex y gafas de seguridad cuando se manejan cidos, hielo
seco o sustancias desconocidas.
10. Utilizar propipeta o perilla de goma para la medicin de lquidos corrosivos, cidos,
bases, sustancias voltiles, veneno, entre otros. No aspirar con la boca.
11. Evitar agregar agua sobre cidos para prevenir quemaduras por proyeccin. Par
diluir cualquier cido, se vierte el cido sobre el agua y nunca agua sobre cido.
Emplear bao del hielo o bao de agua fra para preparar soluciones diluidas de
cidos.
12. Mantener los frascos de reactivos tapados para evitar derrames.
13. Depositar en los recipientes apropiados las puntas y lavar las pipetas
inmediatamente.
14. Utilizar guantes desechables cuando se manejen muestras biolgicas. Considerar
que cualquier material biolgico es potencialmente infeccioso aun cuando proceda
de personas aparentemente sanas.
15. Lavarse las manos con agua y jabn antes de salir del laboratorio.
16. Reportar inmediatamente al profesor del laboratorio cualquier accidente o lesin
que suceda para que se tomen las medidas apropiadas.
17. Las prcticas se iniciarn y se pasar lista a la hora indicada en los horarios, con
una tolerancia de 15 minutos, no habr retardos y se pondr falta a quien no llegue
a la hora.
18. No entraran al laboratorio hasta que el profesor est en el aula.
19. El alumno deber cumplir con el 80% de las asistencias por parcial, por lo que solo
tendr derecho a tres faltas durante el semestre.
20. El alumno que falte a una sesin de laboratorio tendr cero en la prctica, sin
excepcin alguna.
21. Para tener derecho a entrar en el laboratorio el alumno deber leer y comprender
las sesiones prcticas antes de su realizacin.
22. Por razones de seguridad, queda estrictamente prohibido el uso de telfonos
celulares, iPods, iPads, Laptops o cualquier otro aparato de comunicacin en las
aulas y/o laboratorios de enseanza y durante los exmenes.
23. El material de laboratorio roto o deteriorado por alumnos, deber reponerse sin
excusa a la siguiente sesin por el responsable directo o por el equipo de
personas que efecten la prctica. Se retendr la credencial y se elaborar un
vale que entregar una vez repuesto el material, por el o los responsable(s) del
incidente.
24. Se mantendr orden y respeto a los profesores y compaeros durante la prctica.
Alumnos que no cumpla con este punto se le pedir retirarse del laboratorio y
tendr cero en la prctica.
25. La evaluacin del Laboratorio de Bioqumica se realizar de la siguiente manera:
Se aplicara el siguiente porcentaje para la calificacin final:
TEORIA
60%
LABORATORIO
40%
Nota. Es requisito pasar el laboratorio para aprobar la materia de Bioqumica.
El 30 % correspondiente a laboratorio o actividades prcticas, se integra de la
siguiente manera:
20% Examen parcial (3 evaluaciones por semestre).
20% Reporte de prcticas.
El reporte de practica deber contener los siguientes aspectos, los cuales
tendrn un valor con respecto a la escala de 10:
PUNTOS A EVALUAR
Introduccin
Hiptesis
Metodologa
Resultados
Anlisis de resultados
Conclusiones
Referencias
(redactar en estilo APA)
Total
EQUIVALENCIA
EN ESCALA DE
10
1.0
1.0
1.0
1.0
3.0
2.0
1.0
10.0
RECOMENDACIONES PARA TENER XITO EN LAS PRCTICAS

1. El alumno leer la prctica completa y la discutir con el profesor
antes de la realizacin de la misma.
2. Los tiles y objetos personales debern ser colocados en la parte
inferior de las mesas de trabajo.
3. El material con el que se trabajar deber estar perfectamente limpio
antes y despus de la prctica.
4. Antes de preparar las mezclas de reaccin etiquetar
apropiadamente cada uno de los tubos con marcador indeleble.
5. Por ningn motivo alterar el orden de adicin de reactivos en la
prctica.
6. Utilizar agua destilada en todos los experimentos en los que se
solicite agregar agua.
7. Mantener los frascos de reactivos tapados para evitar contaminacin
y/o vaporizacin de los mismos.
8. Utilizar slo cantidad requerida de reactivos para evitar el
desperdicio de los mismos.
9. Procurar no regresar excedentes de reactivo al frasco de donde se
extrajo el mismo.
PRACTICA NO. 1
USO Y MANEJO DEL MATERIAL DE LABORATORIO
OBJETIVO DE LA PRCTICA
Capacitar al alumno en el uso del material ms utilizado en el laboratorio, as como el
adecuado manejo de reactivos.
INTRODUCCIN
La clasificacin usual del material del laboratorio es la siguiente:
MATERIAL :
a) De sostn:
Soporte universal, anillo de fierro, rejilla de asbesto, pinzas para bureta,

pinzas universales, pinzas de refrigerante, pinzas para crisol, pinzas para
tubo de ensayo, gradilla.
b) Recipientes:
Frasco de reactivos, vaso de precipitados, matraz Erlenmeyer, frasco

gotero, tubos de ensayo, piseta.
c) Volumtricos
Pipetas, buretas, probetas, matraz aforado o volumtrico
d) De uso especfico:
Mechero Bunsen, matraz Kitazato, embudos, vidrio de reloj, cpsula de

porcelana, mortero, placa de porcelana
EQUIPO :
Balanza granataria, balanza analtica
a) Mecnico:
b) ptico:
Refractmetro, colormetro, microscopio, polarmetro
c) Electromagntico
Potencimetro, espectrofotmetro
MATERIAL DE VIDRIO:
El tipo de vidrio que se utiliza en la fabricacin del material de laboratorio es el de borosilicato (pyrex),
el cual tiene las siguientes propiedades especiales:
Puntos de fusin muy altos

Alta resistencia mecnica
Coeficiente trmico de expansin mucho menor que el del vidrio ordinario
Altamente resistente a los lcalis y cidos.
El material comnmente utilizado es el siguiente:

Pipetas graduadas:
Son cilindros de vidrio terminados en punta, su graduacin inicia en el extremo superior. Por su
graduacin pueden ser terminales y no terminales.
Uso:
Se utilizan para medir diferentes volmenes de lquidos a la temperatura que marca el fabricante. Las
pipetas son de diferente capacidad: 0.1, 1, 5, 10, 25 ml.
Pipetas volumtricas:
Son tubos cilndricos que se ensanchan formando un bulbo o ampolla. Su extremo inferior termina en
punta y en el extremo superior presenta una marca o aforo.
Uso:
Se utilizan para medir un volumen determinado a la temperatura que marca el fabricante.
Bureta:
Es un tubo cilndrico graduado, provisto de un mecanismo de llave de paso en su parte inferior. Para
utilizar la bureta se requiere de un soporte universal y ajustar la bureta con una pinza especial (pinza
para bureta).
Uso:
Se utiliza para realizar titulaciones.
Probetas:
Son cilndricos huecos de vidrio o plstico graduados, con una base.
Uso:
Se utilizan en la medicin de volmenes ms grandes en forma menos exacta que con las pipetas, sus
capacidades son de 10, 50, 100, 250 y 500 ml.
Vasos de precipitado:
Son recipientes cilndricos anchos con vertedero
Uso:
Son utilizados como receptculos de soluciones, para vaciar lquidos a las probetas o a las buretas y
para calentar lquidos. Poseen diferentes capacidades y los ms usados son de 50, 100, 250 y 500 ml.
Matraz Erlenmeyer:
Presenta un cuerpo de forma cnica de base circular y boca ancha, generalmente es de vidrio, de
paredes delgadas.
Uso:
Se utiliza como recipiente en las titulaciones.
Tubos de ensayo:
Son tubos de vidrio delgado, los ms usados son los de 1.3 x 10 cm.
Uso:
Son utilizados para llevar a cabo en su interior las reacciones qumicas en pequeos volmenes. El
soporte donde se colocan estos tubos se llama gradilla.
Mechero Bunsen:
Es un tubo metlico vertical enroscado en una base por donde entra el gas, un regulador de la entrada
de aire y una boca superior por donde sale la flama.
Uso:
Se utiliza como fuente de calor, generalmente en combinacin con utensilios de sostn tales como
soporte universal, anillo de hierro y rejilla de asbesto.
Baos de temperatura regulada:
Son recipientes de acero inoxidable que requieren de corriente elctrica y que tienen un regulador de la
temperatura.
Uso:
Su principal funcin es la de calentar sustancias o soluciones que no puedan tener contacto directo con
la flama, ya sea para evaporar solventes flamables o para mantener constante la temperatura durante
el transcurso de una reaccin enzimtica (incubacin)
MATERIALES E INSTRUMENTAL POR EQUIPO
DESCRIPCIN
(por equipo)
MATERIAL QUE DEBE

TRAER EL ALUMNO
MATERIAL QUE
PROPORCIONA EL
LABORATORIO
2 Vaso de precipitados 100 ml.
1 Pinzas para bureta
1 Mechero Bunsen
1 Soporte universal
1 Rejilla
1 Anillo de hierro
1 Embudo de vidrio
1 Pinzas para tubo de ensaye
1 Propipeta
1 Papel filtro
1 Gradilla
1 Tubo de ensaye
1 Piseta
1 Probeta de 100 ml.
1 Matraz Erlenmeyer de 250 ml.
2 Pipetas 5, 10 ml.
1 Matraz aforado de 100 ml.
1 Pipeta volumtrica de 10 ml.
1 Placa de pruebas
1 Balanza granataria
DESARROLLO DE LA PRCTICA
1. Lavar el material de vidrio.
2. Realizar actividades de pipeteo: medir 0.5, 2 y 5 ml de agua de la llave y transferirlos
de un recipiente a otro.
3. Medir 100 ml de agua de la llave en un matraz aforado, en una probeta y en un vaso
de precipitados. Cul es la medida ms exacta?
4. Pesar 1 g de carbn activado y mezclarlo con 50 ml de agua de la llave en un vaso de

precipitados, aadir dos gotas de azul de metileno. Posteriormente filtrar la mezcla
utilizando un embudo provisto de papel filtro.
CUESTIONARIO (previos o posteriores de la prctica)
1. Cul es la clasificacin del material de laboratorio?

2. Cul es la clasificacin del equipo del laboratorio?
3. Qu caractersticas tiene el vidrio empleado en la fabricacin del material de
laboratorio?
SISTEMA DE CALIFICACIN (Puntos de consideracin para la evaluacin de la

prctica
Incluir en el reporte el siguiente cuestionario

1. Describir el material que utilizar con ms frecuencia en las prcticas de Bioqumica
2. Identificar el material de vidrio y esquematizarlo en el reporte de la prctica
3. Investigar los diferentes usos del matraz Erlenmeyer
4. Cul es la funcin del carbn activado.
BIBLIOGRAFA
Atkins J. (2006). Principios de qumica los principios del descubrimiento. Tercera
edicin. Editorial Panamericana. Pp. 170 175.
Koolman J, Rohm K. (2012). Bioqumica humana. Texto y atlas. Editorial
Panamericana. Cuarta edicin.
Ordanza R. (2010). Bioqumica mdica. Editorial Trillas. Primera edicin.
Murray R, Granner D, Mayes M, y Rodwell V. (2010). Bioqumica de Harper.
Manual moderno. 15 Edicin.
Sidney W. (1974). Clculos qumicos. Editorial Limusa. Tercera edicin.
PRACTICA NO. 2
TENSION SUPERFICIAL
Que el alumno observe que dentro de las propiedades de los lquidos su superficie
se comporta como membrana invisible.
MATERIAL
DESCRIPCIN
(por equipo)
MATERIAL QUE DEBE

TRAER EL ALUMNO
MATERIAL QUE PROPORCIONA

EL LABORATORIO
3 recipientes de vidrio
1 copa de vino
Grapas
Palillos de plstico
Goteros
Detergente lquido y en polvo
2 monedas grandes
Hojas de papel tamao carta
INTRODUCCIN
El agua es el compuesto ms abundante en la biosfera; como tal, es indudable
que juega un papel determinante en las caractersticas de los seres vivos y su
medio ambiente. Todos los procesos que en conjunto llamamos "vida", se llevan a
cabo en un medio acuoso o estn influenciados por la presencia del agua. En
Medicina, el balance hdrico es uno de los factores que tienen mayor influencia en
el estado de salud de los seres humanos.
Por si mismos, estos hechos bastaran para impulsar el estudio del agua. Si a ello
aadimos que el conjunto de sus propiedades fisicoqumicas resulta una coleccin
de singularidades, para un compuesto de peso molecular tan bajo, la importancia
de su estudio en Bioqumica, resulta an ms evidente.
Entre las propiedades del agua importantes para la vida se encuentran el volumen
negativo de fusin, densidad mxima en el estado lquido (4 C), elevada
constante dielctrica, temperaturas de fusin, ebullicin y crtica demasiado altas
para un compuesto covalente, movilidad inica alta para H+ y OH-, por mencionar
algunos ejemplos.
Otra propiedad de los lquidos que surge de las fuerzas intermoleculares es la
tensin superficial. La superficie de los lquidos es lisa porque las fuerzas
intermoleculares tienden a atraer a las molculas unas a otras y hacia el interior
(Fig. 1).
La tensin superficial es la atraccin neta hacia adentro. Una vez ms, podemos
esperar que un lquido compuesto por molculas con elevadas fuerzas
intermoleculares tenga una mayor tensin superficial, porque
la atraccin hacia el interior del lquido ser mayor. Sin duda,
la tensin superficial del agua es unas tres veces mayor que
la de los dems lquidos comunes, por sus fuertes puentes
de hidrogeno. La tensin superficial del mercurio es an
mayor, ms de seis veces que el agua. La tensin superficial
es responsable de varios fenmenos comunes de la vida
cotidiana. Por ejemplo, una gota de liquido suspendida en el
aire en una superficie serosa es esfrica porque la tensin
superficial atrae a las molculas y las fuerzas a tomar la
forma ms compacta, la de una esfera. Las fuerzas de
atraccin entre las molculas de agua son mayores que las
que existen entre el agua y la cera, que es principalmente
hidrocarbonada.
El agua tiene fuertes interacciones con el papel, la madera y
la tela, porque las molculas de la superficie de stas forman
puentes de hidrogeno que pueden reemplazar a algunos de
los puentes de hidrogeno que se dan entre las molculas de
agua. Como resultado, el agua toma un mximo contacto
con estos materiales extendindose sobre ellos; en otras
palabras el agua los humedece. Vemos ahora que el agua
es hmeda por los puentes de hidrogeno que sus molculas
pueden formar.
Figura 1.- La forma casi esfrica de

estas gotas de agua sobre una
superficie encerada se debe al
efecto de la tensin superficial. Las
gotas se aplastan levemente por
efecto de la gravedad de la tierra.
La accin capilar, el ascenso de los lquidos por tubos finos ocurre cuando existen
atracciones favorables entre las molculas del lquido y la superficie interna del
tubo. Estas atracciones son fuerzas de adhesin, fuerzas que unen la sustancia a
la superficie y que son distintas a la fuerza de cohesin, las que unen entre s a las
molculas de una sustancia en el seno del material.
a) El metal puede flotar

-Poner agua en un recipiente de vidrio hasta casi llenarlo.
- Dejar reposar, hasta que el agua no se mueva.
- Con cuidado depositar en la superficie grapas en forma horizontal de una en una
o en un paquete de 3 o 4.
- Observar que no se hundan.
b) El plstico flota y se mueve
-Poner agua en un recipiente de vidrio hasta casi llenarlo.
- Esperar hasta que el agua no se mueva.
- Con cuidado depositar en la superficie 2 palillos de plstico en forma horizontal.
- Con otro palillo hacer que se queden ligeramente separados en forma paralela.
- Lentamente con un gotero con detergente lquido sacar una gota sin dejarla caer
y tocar suavemente la superficie entre los palillos.
- Observar el movimiento rpido de los palillos.
- Si se desea repetir el experimento se tiene que enjuagar todo muy bien con
bastante agua para eliminar el detergente.
c) El agua no se cae de una moneda
-Lavar, enjuagar y secar bien 2 monedas grandes.
- Con un gotero poner agua en las monedas.
-Observar que el agua no se cae, al contrario toma forma de una cpula.
- Cuando se forma perfectamente bien la cpula en las dos monedas aadir a una
moneda otra gota de detergente lquido y ver cmo este se desparrama.
d) Desplazamiento de un barquito de papel
-Colocar en un recipiente de vidrio agua hasta casi llenarlo.
- Hacer en una hoja un barquito de papel.
- Cortar el barquito y colocarlo cuidadosamente sobre la superficie del agua en un
extremo del recipiente.
- Con un gotero, con detergente lquido, tocar con la gota el hueco posterior del
barquito.
- Observar el movimiento rpido del barquito hacia el otro extremo del recipiente.
e) El agua se cuelga de las paredes de vidrio y sube
-En una copa de vidrio colocar agua hasta la mitad.
-Esperar que se deje de mover y ver por afuera, a la altura del nivel del agua, la
superficie que no es plana.
- Quitar la bombita de goma de un gotero.
-Introducir el gotero a la copa y observar que el nivel del agua en el gotero subi
ms que el agua de la copa .
Despus de realizar los experimentos y anotar los resultados, obtener sus
conclusiones. Volver a hacer los experimentos con las variables que se sugieren o
con las propias.
1. Importancia del agua en sistemas biolgicos?
SISTEMA DE CALIFICACIN (Puntos de consideracin para la evaluacin de

la prctica)
1. Cules son las propiedades del agua?
2. Qu es la tensin superficial?
3. Por qu es importante conocer la tensin superficial?

4. Cules son las propiedades del agua?
5. Qu es la tensin superficial?
6. Por qu es importante conocer la tensin superficial?
BIBLIOGRAFIA
Atkins J. (2006). Principios de qumica los principios del descubrimiento.
Tercera edicin. Editorial Panamericana. Pp. 170 175.
Sidney W. (1974). Clculos qumicos. Editorial Limusa. Tercera edicin.
PRACTICA NO. 3
PREPARACIN DE SOLUCIONES Y MEDICION DE PH
El alumno estudiar las soluciones, formas de expresar su concentracin y sus
principales propiedades
DESCRIPCIN
(por equipo)
MATERIAL QUE DEBE

TRAER EL ALUMNO

EL LABORATORIO
3 Vasos de precipitados 100 ml.
2 Pipetas de 1 ml.
1 Propipeta de hule
2 matraces volumtricos de 100 ml.
HCl conc.
H2 SO4 conc.
CH3 COOH conc.
NaOH, lentejas.
Leche, jugo, refresco, etc.
INTRODUCCION
Las soluciones se definen como mezclas homogneas de dos o ms especies
moleculares o inicas. Las soluciones gaseosas son por lo general mezclas
moleculares. Sin embargo las soluciones en la fase liquida son indistintamente mezclas
moleculares o inicas.
Cuando una especie molecular o inica se dispersa hasta el grado de que, a una
temperatura dada, no se disuelva ms, se dice que la solucin est saturada. Los
componentes de una solucin son las sustancias puras que se han unido para
obtenerla y convencionalmente reciben los nombres de soluto y solvente. Este ltimo
es el componente que se halla presente en mayor cantidad.
Para expresar la concentracin de las soluciones se utilizan los trminos de diluida
y concentrada. Pero estos trminos son imprecisos, ya que no indican la cantidad de
soluto disuelto en una cantidad dada de solucin o de disolvente, es decir, la
concentracin exacta.
Las unidades fsicas de concentracin vienen dadas en masa o en volumen. La
primera es la comnmente usada. Por ejemplo, una solucin al 10% m/m contiene 10
gramos de soluto en 90 gramos de disolvente. Se utilizan soluciones % m/m; % v/v, %
m/v.
Las unidades qumicas en la que se expresan las concentraciones son los moles y
los equivalentes gramos. Se utilizan soluciones molares, normales y molales.
Molaridad: es un valor que representa el nmero de moles de soluto disueltos en
un litro de solucin (mol / L). Para preparar una solucin de una molaridad dada, se
pesa la cantidad calculada de la sustancia (soluto), se disuelve en una pequea
cantidad de solvente (agua destilada u otro) y finalmente se completa hasta el volumen
deseado con el solvente.
Normalidad: un valor que representa el nmero de equivalentes gramos de
soluto contenidos en un litro de solucin (equiv.gr./ L). Muchas veces es conveniente
expresar la concentracin en unidades de masa empleando la molalidad.
Molalidad: es un valor que representa el nmero de moles de soluto disueltos en
un kilogramo de disolvente (mol / Kg.disolv.).
1. Preparar 100 ml de una solucin de cido clorhdrico (HCI) 0.1 N.
Peso molecular 36.5 g/mol.
Densidad p = 1.18 g/cm3
Pureza 36.7%
Cunto se agregar de HCI en 100 ml.?
2. Preparar 100 ml. de una solucin 0.15 N de cido sulfrico (H2SO4)
Peso molecular 98 g/mol
Pureza 98.0%
Cunto se agregar de H2SO4 en 100 ml?
3. Preparar 100 ml. de una solucin de cido actico (CH3COOH) 0.1 N
Peso molecular 60 g/mol

Pureza 99.8%
Cunto se agregar de CH3COOH en 100 ml.?
4. Preparar 100 ml. de una solucin 0.1 N de hidrxido de sodio (NaOH)
Peso molecular 40g/mol
Cunto se agregar de NaOH en 100 ml.
5. Medir el pH de las soluciones preparadas, utilizando un medidor de pH.
6. Medir el pH de diferentes sustancias como leche, refresco, jugo, etc.
7. Qu es una solucin?
8. Qu tipos de soluciones existen?
SISTEMA DE CALIFICACIN (Puntos
evaluacin de la prctica
de
consideracin
para
la
1. Defina mol y equivalente qumico.
2. Escriba los clculos que realiz para obtener las concentraciones requeridas.
BIBLIOGRAFIA
FACULTAD DE ODONTOLOGIA
PRACTICA NO. 4
TITULACION DE SOLUCIONES
Que el estudiante conozca el mtodo ms empleado en la valoracin de
soluciones.
INTRODUCCION
Las disoluciones o soluciones son mezclas homogneas de sustancias en iguales

o distintos estados de agregacin. La concentracin de una disolucin constituye
una de sus principales caractersticas. Bastantes propiedades de las disoluciones
dependen exclusivamente de la concentracin. Su estudio resulta de inters tanto
para la fsica como para qumica.
Una solucin es una mezcla homognea de dos o ms sustancias puras, en la
cual, al componente en menor proporcin se denomina soluto y al componente en
mayor proporcin disolvente o solvente.
Proceso de disolucin
El mecanismo del proceso de disolucin puede llevarse a cabo una reaccin
qumica o sin reaccin qumica. Ambos se tratan de una mezcla de soluto y
disolvente. Un soluto puede disolverse con o sin reaccin qumica en un disolvente
(solvente). Ejemplo:
2Na + H2O
NaCl (en agua)
2NaOH + H2
Na+ + Cl-
(con reaccin qumica)

(sin reaccin qumica)
Si la primera solucin se evapora o seca, se obtiene NaOH e hidrgeno gaseoso.

En cambio, la evaporacin de la segunda solucin permite tener NaCl original. La
facilidad del proceso de disolucin depende de dos factores:
1. El cambio de energa, puede ser de tipo exotrmico o endotrmico (calor de

disolucin).
2. El cambio en el desorden (entropa)
El proceso de disolucin desde el punto de vista molecular consta de tres etapas:
Separacin de molculas del soluto
Separacin de molculas de disolvente
Mezcla de molculas del soluto y el disolvente
Y se debe fundamentalmente a dos factores: La tendencia a una energa mnima
denominada entalpia de disolucin y del desorden molecular llamada entropa, a
mayor desorden mayor entropa. Se estable que la estabilidad depende de la
energa mnima o la mxima entropa en un proceso de disolucin, a nivel
molecular debe existir afinidad entre molculas de soluto y solvente. Para que se
realice la disolucin se considera una regla importante: LO SEMEJANTE
DISUELVE A LO SEMEJANTE. O SUSTANCIAS POLARES DISUELVEN
SUSTANCIAS POLARES Y SUSTANCIAS NO POLARES DISUELVEN
SUSTANCIAS NO POLARES.
El agua es una sustancia polar, entonces solo formara disolucin con aquellas
sustancias que son polares, como el cloruro de sodio, el etanol. El aceite es una
sustancia no polar, formando disoluciones con sustancias no polares como:
cloroformo, benceno y otros. Entonces no habr disolucin si mezclamos una
sustancia polar con una no polar, como ejemplo tenemos el agua y el aceite,
donde se ven dos fases, la del agua y la del aceite (mezcla heterognea).
CLASIFICACIN DE SOLUCIONES
Las soluciones se pueden clasificar atendiendo a 5 aspectos importantes:
a) Segn el nmero de componentes: soluciones binarias, soluciones ternarias
y soluciones cuaternarias.
b) Segn la naturaleza del disolvente: soluciones acuosas y soluciones
orgnicas.
c) Segn la naturaleza del soluto: soluciones cidas, soluciones bsicas y
soluciones neutras.
d) Segn la cantidad de sus componentes: soluciones diluidas, soluciones
concentradas, soluciones saturadas y soluciones sobre saturadas.
e) Segn los estados de agregacin: soluciones slidas, lquidas y gaseosas.
Solubilidad
La solubilidad se define como la cantidad de una sustancia que se disuleve en 100
gramos de agua a una temperatura dada; es la concentracin mxima posible. Por
ejemplo:
La solubilidad de NaCl es:
Solubilidad = 36 g de NaCl
----------------------100 g de H2O
Al aadir 40 gramos de agua quedaran 4 g de sal sin disolverse.

Formas de expresar la concentracin
Existen diferentes formas de expresar la concentracin de una disolucin. Las
que se emplean con mayor frecuencia suponen el comparar la cantidad de soluto
con la cantidad total de disoluci{on, ya sea en trminos de masa, ya sea en
trminos de masa a volumen o incluso de volumen a volumen, si todos los
componentes son lquidos. En este grupo se incluyen las siguientes:
a) Molaridad. Es la forma ms frecuente de expresar la concentracin de las
disoluciones en qumica. Indicca el nmero de moles de soluto disueltos por
cada litro de disolucin; se representa por la letra M. Una disolucin 1 M
contendr un mol de soluto por litro, una 0.5 M contendr medio mol de
soluto por litro, etc. El clculo de la molaridad se efecta determinando
primero el nmero de moles y dividiendo por el columen total en litros:
MOLARIDAD = NUMERO DE MOLES DE SOLUTO
------------------------------------------------------1 LITRO DE SOLUCION
b) Normalidad. Es otra de las unidades de concentracin ms usadas en

qumica y se define de acuerdo a la siguiente expresin matemtica:
NORMALIDAD = NUMERO DE EQUIVALENTES - GRAMO DE SOLUTO
---------------------------------------------------------------------------------1 LITRO DE SOLUCIN
c) MOLALIDAD.- Tambin es una unidad de concentracin qumica cuya

simbologa es m y se define:
MOLALIDAD = NUMERO DE MOLES DE SOLUTO
-------------------------------------------------------1 Kg DE DISOLVENTE
La molalidad suele calcularse a partir de la concentracin del soluto % (p/p).
d) Fraccin molar.- La fraccin molar de un soluto (XA) se define como los

moles de sustancia A divididos entre los moles totales de solucin, esto es:
XA = NUMERO DE MOLES DE SOLUTO A
-------------------------------------------------------NUMERO DE MOLES TOTALES
La fraccin molar tambin se determina a partir de la concentracin del

soluto en % (P/P).
TITULACIN CIDO BASE
Las soluciones de concentracin exactamente conocida, se denominan
soluciones estndar. Se pueden preparar soluciones estndar de algunas
sustancias disolviendo una muestra cuidadosamente pesada de slido en
suficiente agua para obtener un volumen conocido de solucin. Cuando las
sustancias no pueden pesarse con exactitud y convenientemente porque
reaccionan con la atmsfera, se preparar soluciones de las mismas y se procede a
determinar sus concentraciones por titulaciin con una solucin estndar.
La titulacin, es el proceso en el cual un reactivo de la solucin, el titulante, se
aade cuidadosamente a la solucin de otro reactivo y se determina el columen
del titulante necesario para que la reaccin se complete.
Valoracin o estandarizacin, es el proceso por el cul se determina la
concentracin de una solucin midiendo con exactitud el volumen necesario de la
misma para reaccionar con una cantidad perfectamente conocida de un estndar
primario. La solucin estandarizada recibe el nombre de estndar secundario y se
emplea para analizar problemas. Las propiedades de las soluciones estndar
primarios son:
No deben reaccionar o absorber componentes de la atmsfera, como vapor
de agua, oxgeno o dixido de carbono.
Deben ser solubles en el disolvente de inters.
No deben ser txicos.
Cundo se sabe cundo detener la titulacin?
Para esto se agregan unas cuantas gotas de solucin de indicador a la solucin
que se va a titular.
Indicadores cido base
Un indicador es un colorante que se utiliza para distinguir entre las soluciones
cidas y bsicas por medio del cambio de color que experimentan estas
soluciones. Tales colorantes son comunes en materiales naturales. El color ambar
del t, por ejemplo, es aclarado por adicin de jugo de limn (cido ctrico): Un
indicador es una ssustancias que adopta colores diferentes dependidneo de la
concentracin de H+ en la solucin. Es preciso que por lo menos una de estas
formas tenga color intenso para que puedan observarse cantidades muy pequeas
de la misma.
Supngase que se titula una solucin cida de concentracin desconocida
aadiendo solucin estandarizada de hidrxido de sodio gota a gota mediante una
bureta. Las buretas comunes estn graduadas a intervalos de 1 ml de manera que
permiten estimar el volumen de solucin empleado. El analista debe elegir un
indicador que cambie claramente el color en el punto en que reaccionan
cantidades estequiomtricamente equivalentes de cido y base, es decir, el punto
de equivalencia.
El punto en el cul el indicador cambia de color y se detiene la titulacin se llama
punto final. Lo ideal es que el punto final coincida con el punto de equivalencia. La
fenolftaleina es incolora en solucin cida y color rojo violceo en solucin
bsica. Si en la titulacin se anae una base a un cido, suele emplearse
fenolftalena como indicador. El punto final se observa cuando aparece una
coloracin rosa dbil que persiste por lo menos 15 segundos al agitar la solucin.
Valoracin cido fuerte base fuerte
Una curva de titulacin es una grfica de pH contra cantidad de cido o base
aadida (por lo general, en volumen). Indica de manera grfica el cambio de pH al
aadir cido o base a la solucin y muestra con claridad como cambia el pH cerca
del punto de equivalencia.
La solucin que se prepara con el soluto patrn primario se denomia estndar
primario.
La solucin estandarizada con el patrn primario pasa a denominarse solucin
estndar o de concentracin exactamente conocida, que podr ser utilizada para
estandarizar otra. Para estandarizar determinado columen de una solucin (X), se
utiliza un volumen de la solucin patrn con el cual llegamos al punto final de
estandarizacin o punto de equivalencia, es decir, cuando ambas soluciones han
reaccionado completa y estequimtricamente de equivalente a equivalente. Este
punto se lo detecta, por el cambio de color que experimenta el indicador del inicio
y final del proceso.
En general se considera la siguiente ecuacin: C1 V1 = C2 V2
Donde:
C1 = concentracin de solucin estndar
V1 = volumen utilizado de solucin estndar (bureta)
N2 = concentracin que se desea conocer
C2 = Volumen de la solucin de concentracin desconocida

DESCRIPCIN
(por equipo)
MATERIAL QUE DEBE

TRAER EL ALUMNO

EL LABORATORIO
3 Vasos de precipitados 100 ml.
2 Pipetas de 1 ml.
1 Propipeta de hule
2 matraces volumtricos de 100 ml.
HCl conc.
H2 SO4 conc.
CH3 COOH conc.
NaOH, lentejas.
Leche, jugo, refresco, etc.
DESCRIPCIN
(por equipo)
MATERIAL QUE DEBE

TRAER EL ALUMNO

EL LABORATORIO
1 Bureta.
1 Soporte universal.
1 Pinzas para bureta.
1 Vaso de precipitados de 100 ml.
3 matraces erlenmeyer de 250 ml.
2 Pipetas de 10 ml.
2 Pipetas de 1 ml.
1 Frasco gotero con indicador fenoftalena.
Solucin de NaOH 0.1 N.
Solucin problema de HCl.
Vinagre
H2O destilada.
1 limn
1. Medir cuidadosamente con una pipeta un volumen de 20 ml de la solucin
problema de HCI de concentracin desconocida y colquelo en un matraz
erlenmeyer. Aada 2 3 gotas del indicador de fenolftalena.
2. Revisar que la bureta est perfectamente limpia antes de colocarla en el
soporte universal.
3. Revisar que la llave de paso funcione adecuadamente, para comprobar esto,
llene la bureta con agua y observe que no halla goteo en el extremo inferior
donde se ubica la llave. En caso de que ocurra el goteo, retirar la llave y
adicionar grasa de silicn (con ayuda del profesor) y ajustar nuevamente la
llave
4. Llenar la bureta con la solucin patrn de NaOH 0.1 N (agente titulante),
utilizando un vaso de precipitados.
5. Iniciar la titulacin colocando el matraz erlenmeyer que contiene el cido
clorhdrico debajo de la bureta. Adicionar la solucin titulante gota a gota
(emplee la mano izquierda para abrir la llave de paso), agitando
constantemente el matraz erlenmeyer con la mano derecha.
6. El punto final de la titulacin se establece cuando en la solucin de HCI se
observe un color rosa plido que permanezca estable con la agitacin. Anotar
el volumen de NaOH gastado e la titulacin.
7. De la misma forma determine la concentracin de jugo de limn (cido ctrico).
En un matraz erlenmeyer colocar 0.4 ml de jugo de limn y aadir 19.6 ml de
agua. Mezclar y aadir 2 3 gotas de fenoftaleina e iniciar la titulacin segn
el procedimiento descrito anteriormente.
8. Preparar 10 ml de una solucin de vinagre (cido actico). En un matraz
erlenmeyer, medir 2 ml de vinagre y aadir 8 ml de agua. Mezclar
perfectamente y aadir 2 3 gotas de fenoftalena. Realizar la titulacin como
se describi anteriormente.
NOTA: Utilizar una pipeta para cada reactivo, evitando contaminaciones.
1.
2.
3.
4.
Soporte Universal
Pinzas para bureta
Bureta
Matraz Erlemeyer
Figura 1.- montaje para realizar una

titulacin

1. En qu consiste una titulacin?
2. Qu tipos de titulaciones existen?
SISTEMA DE CALIFICACION (Puntos de consideracin para la evaluacin de

la prctica)
1. Anotar los gastos de NaOH en cada una de las titulaciones
2. Utilizando la frmula C1 x V1 = C2 x V2 determinar las concentraciones de los
diferentes cidos utilizados.
3. Explicar cules son las caractersticas del indicador que se utiliz.
+
4. Calcular el pH de los diferentes cidos utilizando la frmula: pH = -log [H ]

con base a los resultados obtenidos en la titulacin.
5. Explicar la diferencia de las lecturas de pH
BIBLIOGRAFIA
PRACTICA NO. 5
RECONOCIMIENTO DE GLCIDOS
El alumno realizar algunas pruebas qumicas de identificacin de carbohidratos.
Diferenciar entre un azcar reductor y uno no reductor.
MATERIAL
Tubos de ensayo
Gradilla
Pinzas
Mechero
Pipetas
Solucin de Lugol
Solucin de Fehling A y B
Solucin alcalina (sosa, potasa, bicarbonato,
etc.)
HCl diluido
Soluciones al 5% de glucosa, maltosa, lactosa,
fructosa, sacarosa y almidn.
1. ESTUDIO DE AZCARES REDUCTORES

FUNDAMENTO
Los hidratos de carbono constituyen un grupo de compuestos naturales con
enlaces carbonilo (aldehdo o cetona) que adems tienen varios grupos hidroxilo.
Entre ellos se encuentran los azcares simples (monosacridos) y sus polmeros,
los disacridos y los polisacridos.
MONOSACRIDOS
El monosacarido natural ms importante, la D-glucosa, es un aldehdo aliftico con
seis tomos de carbono de los cuales cinco contienen un grupo hidroxilo. Como
los tomos de carbono (C) 2 a 5 son centros quirales, adems de la D-glucosa hay
otros quince ismeros aldohexosas; de stos, slo algunos son de inters en la

naturaleza. La myor parte de los monosacridos naturales tienen la misma
configuracin que el D-gliceraldehdo en el C-5 y por lo tanto pertenecen a la serie
D.
Los azcares (monosacridos) se encuentran en muchas formas derivadas en el
metabolismo.
Reacciones de los monosacridos (ver Fig. 1)
1.- Mutarrotacin.- Las aldosas cclicas difieren de las formas en cadena abierta
en que tienen un centro quiral en C-1. Las formas isomricas correspondientes se
denominan anmeros. En los anmeros (centro a la izquierda) tanto el grupo OH
de C-1 (el grupo anomrico OH) como el CH2OH del C6 estn en el mismo lado
del anillo; n los anmeros (a la derecha) dichos grupos se ubican en lados
distintos. La reaccin por la cual los anmeros se convierten uno en el otro se
conocen con el nombre de mutarrotacin.
2.-Oxidacin y reduccin.- La reduccin del centro anomrico en el C-1 de la
glucosa produce un azcar-alcohol, el sorbitol. Por medio de la oxidacin del
grupo aldehdo en C-1 se obtiene el ster intramolecular (lactona) del cido
glucnico. Si se oxida el C-6 de la glucosa se obtiene el cido glucurnico que es
muy polar. ste desempea un papel importante en la biotransformaciones que
tienen lugar en el hgado.
3.- Formacin de glsidos.- Cuando el grupo anomrico de OH de un azcar
reacciona con un alcohol se obtiene un -glucsido (un ejemplo, el alfa
metilglucsido), con desprendimiento de agua. El enlace glucosdico no es una
unin ter no es una unin habitual porque el grupo OH del C-1 tiene carcter de
hemiacetal. Los oligosacridos y los polisacridos tambin tienen enlaces glucosdicos. La reaccin de los grupos anomricos OH con un grupo NH2 o NH
produce un N-glucsido.
4.- Epimerizacin.- En solucin levemente alcalina y mediante un producto
intermediario endiol, la D- glucosa se encuentra en equilibrio con la D-fructosa y la
D-manosa. La glucosa y la manosa se diferencian slo por la configuracin en el
C-2. Estos pares de azcares se llaman epmeros y su conversin tiene lugar por
epimerizacin.
5.- Esterificacin.- Los grupos hidroxilo de los monosacridos pueden formar
steres cuando reaccionan con los cidos. En el metabolismo son importantes
sobre todo los steres del cido fosfrico, como la glucosa-6-fosfato y la glucosa1-fosfoato.
Figura 1. Reacciones de los

monosacridos
Dentro de los monosacridos ms importantes encontramos a la D-ribosa que

forma parte de las aldopentosas, forma parte de la estructura del RNA y de las
coenzimas nucleotdicas, donde siempre se le encuentra como furanosa. La dglucosa es la ms importante de las aldohexosas, porque gran parte de la
biomasa est formada por los polmeros de la glucosa, sobre todo la celulosa y el
almidn. La D-glucosa se encuentra libre en los jugos vegetales (azcar de uva)
y como glucosa sangunea en los animales. La D-galactosa es un constituyente
del azcar de la leche de gran importancia en la nutricin humana. Justo con la Dmanosa se encuentra tambin en muchos glucolpidos y glucoprotenas.Los
animoazcares
acetilados
N-acetil-D-galacturnico
y
L-idurnico
son
representants tpicos de los glucosaminoglucanos del tejido conjuntivo. Los
azcares alcoholes como el sorbitol y el manitol no tienen un papel importante en
los organismos animales sanos (ver figura 2).
Figura 2.- A. Monosacridos

importantes. B. Disacridos
DISACRIDOS
Cuando el hidroxilo anomrico de un monosacrido se une al grupo OH de otro
azcar con un enlace glucosdico se obtiene un disacrido. Dentro de los
disacridos encontramos a la maltosa, se obtiene como producto de degradacin
de almidn en la malta y en la digestin intestinal. En la maltosa el grupo OH
anomrico de una molcula de glucosa est unido por un enlace glucosdico en
el C-4 de una segunda molcula de glucosa.
La lactosa azcar de leche es el hidrato de carbono ms importante de la leche

de los mamfeos. La leche de vaca contiene aproximadamente 4.5% de lactosa,
mientras que la leche de mujer contiene hasta 7.5% (ver figura 2).
Los polisacridos presentan una alta distribucin en la naturaleza y por su funcin
pueden ser divididos en tres grupos, a saber: los polisacridos estructurales
confieren estabilidad mecnica a las clulas, los rganos y los organismos; los
polisacidos hidrfilos, que estn muy hidratados e impiden que las clulas y los
tejidos se deshidraten; por ltimo , los polisacridos de reserva que sirven
fundamentalmente como almacenadores de hidratos de carbono y pueden
liberarlos segn los requerimentos de monosacridos. Por su carcter de
polmeros, los hidratos de carbono de reserva son menos activos que otros desde
el punto de vista osmtico y por eso pueden ser almacenados en la clula en
grandes cantidades.
Dentro de los polisacridos estructurales encontramos al glucgeno y a la
celulosa. De los polisacridos importantes encontramos al almidn, un
polisacrido de reserva de amplia presencia en el reino vegetal, es el hidrto de
carbono ms importante de la alimentacin humana; se puede encontrar en las
hojas, los frutos, las semillas y los tubrculos. La inulina, un polmero de la
fructosa, es utilizada en la dieta para diabticos como sustituto de los almidones.
Adems sirve como sustancia de prueba para la determinacin del clareance
renal. La quitina un homopolmero de la N-acetilglucosamina, es la suatancia ms
importante en el caparazn de los insectos y de los crustceos y por ende, el
polisacrido ms abundante del reino animal. El glucgeno, el hidrato de carbono
de reserva ms importante en los animales, es almacenado principalmente en el
hgado y en los msculos. La sntesis y degradacin del glucgeno estn sujetas a
mecanismos complejos de regulacin hormonal y a otros factores.
Los monosacridos y la mayora de los disacridos poseen poder reductor, que
deben al grupo carbonilo que tienen en su molcula. Este carcter reductor puede
ponerse de manifiesto por medio de una reaccin redox llevada a cabo entre ellos
y el sulfato de Cobre (II). Las soluciones de esta sal tienen color azul. Tras la
reaccin con el glcido reductor se forma xido de Cobre (I) de color rojo. De este
modo, el cambio de color indica que se ha producido la citada reaccin y que, por
lo tanto, el glcido presente es reductor (ver Figura 3).
Figura 3.- A. Estructura de los polisacridos. B. Caractersticas de los polisacridos ms importantes.
Poner en los tubos de ensayo 3ml de la solucin de glucosa, maltosa, lactosa

fructosa o sacarosa (segn indique el profesor).
1. Aadir 1ml de solucin de Fehling A (contiene CuSO4) y 1ml de Fehling B
(lleva NaOH para alcalinizar el medio y permitir la reaccin)
2. Calentar los tubos a la llama del mechero hasta que hiervan.
3. La reaccin ser positiva si la muestra se vuelve de color rojo y ser
negativa si queda azul o cambia a un tono azul-verdoso.
4. Observar y anotar los resultados de los diferentes grupos de prcticas con
las distintas muestras de glcidos.
2. HIDRLISIS DE LA SACAROSA
La sacarosa es un disacrido que no posee carbonos anomricos libres por lo que
carece de poder reductor y la reaccin con el licor de Fehling es negativa, tal y
como ha quedado demostrado en el experimento 1. Sin embargo, en presencia de
ClH y en caliente, la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una molcula de
agua y se descompone en los monosacridos que la forman, glucosa y fructosa,
que s son reductores. La prueba de que se ha verificado la hidrlisis se realiza
con el licor de Fehling y, si el resultado es positivo, aparecer un precipitado rojo.
Si el resultado es negativo, la hidrlisis no se ha realizado correctamente y si en el
resultado final aparece una coloracin verde en el tubo de ensayo se debe a una
hidrlisis parcial de la sacarosa.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Tomar 3ml de solucin de sacarosa y aadir 10 gotas de ClH diluido.

Calentar a la llama del mechero durante unos 5 minutos.
Dejar enfriar.
Neutralizar aadiendo 3ml de solucin alcalina.
Realizar la prueba de Fehling como se indica en el experimento 1.
Observar y anotar los resultados.
3. INVESTIGACIN DE POLISACRIDOS (ALMIDN)
El almidn es un polisacrido vegetal formado por dos componentes: la amilosa y

la amilopectina. La primera se colorea de azul en presencia de yodo debido no a
una reaccin qumica sino a la adsorcin o fijacin de yodo en la superficie de la
molcula de amilosa, lo cual slo ocurre en fro. Como reactivo se usa una
solucin denominada lugol que contiene yodo y yoduro potsico. Como los
polisacridos no tienen poder reductor, la reaccin de Fehling da negativa.
1.
2.
3.
4.
Colocar en un tubo de ensayo 3ml de la solucin de almidn.

Aadir 3 gotas de la solucin de lugol.
Observar y anotar los resultados.
Calentar suavemente, sin que llegue a hervir, hasta que pierda el color.
Enfriar el tubo de ensayo al grifo y observar cmo, a los 2-3 minutos, reaparece el
color azul.
la prctica)
1. Escriba la definicin de monosacridos, disacrido y polisacrido.
2. Complete la siguiente tabla: Reaccin positiva (+) y reaccin negativa (-).
SOLUCION
PROBLEMA
Glucosa
Lactosa
Sacarosa
REACCION DE MOLISH
(anillo color violeta)
REACCION DE BENEDICT
(precipitado rojo
ladrillo)
Almidn
BIBLIOGRAFIA
PRACTICA NO. 6
RECONOCIMIENTO DE LPIDOS
El alumno realizar algunas pruebas qumicas de identificacin de lpidos.
MATERIAL
Tubos de ensayo
Gradilla
Varillas de vidrio
Mechero
Vasos de precipitados
Pipetas
Solucin de NaOH al 20%

Solucin de Sudn III
Tinta china roja
Eter, cloroformo o acetona
Aceite de oliva
INTRODUCCION
Los lpidos conforman un grupo grande y heterogneo de sustancias de origen
biolgico fcilmente solubles en solventes orgnicos como el metanol, la acetona,
el cloroformo y el benceno (benzol). No se disuelven en agua o lo hacen
escasamente; esto se debe a que carecen de tomos ionizables como el O, el N,
el S o el P en su estructura (ver figura 1).
CLASIFICACIN
Los lpidos se pueden clasificar en hidrolizables, es decir que se rompen ante el
agregado de agua y no hidrolizables.
Lpidos hidrolizables, a los steres simples pertenecen las grasas (o trigliceroles: 1

glicerol + 1 resto acilo), las ceras (1 alcohol graso + 1 resto acilo) y los steres del
esterol (1 esterol + 1 resto acilo). Entre los steres complejos un grupo fosfato
caracterstico se encuentran los fosfolpidos, entre ellos los fosfatidatos (1 glicerol
+ 2 restos acilo + 1 fosfato) y los fosftidos (1 glicerol + 2 cidos grasos + 1
fosfato + 1 aminoalcohol). En los esfingolpidos el glicerol y un residuo acilo se
sutituyen por la esfingosina. En los glucolpidos el fosfato de los esfingolpidos
est sustituido por uno o ms azcares (1 esfingosina + 1 cido graso + 1 azcar).
Don representantes de este grupo los cerebrsidos (1 esfingosina + 1 cido graso
+ 1 azcar) y los ganglsidos (1 esfingosina + 1 cido graso + varios azcares;
entre otros, por ejemplo., el cido neuramnico).
Los lpidos hidrolizables pueden ser clasificados tambin alternativamente en base
a sus componentes bsicos en: glicerolpidos y esfingolpidos. Sus componentes
estn unidos por enlaces ster y pueden ser degradados fcilmente por medios
qumicos y enzimticos.
Lpidos no hidrolizables; entre los hidrocarburos se cuentan, entre otros, los
alcanos y los carotenoides. Tampoco son hidrolizables los lpidos alcoholes que
incluyen a los alcanoles de cadena larga, a los esteroles como el estradiol y la
testosterona. Los cidos grasos son los cidos ms importantes entre los lpidos.
Tambin pertenecen a este grupo los eicosanoides, que son derivados del cido
araquidnico, un cido graso poliinsaturado.
FUNCIN BIOLGICA
1.- Combustible.- Los lpidos son importantes portadores de energa en la
alimentacin. Cuantitativamente representan la reserva energtica ms
significativa de los animales. Las grasas neutras se almacenan como gotas de
lpidos en clulas especializadas, los adipocitos. Luego, segn necesidad, estas
clulas vuelven a liberar cidos grasos, que tras su transporte a los tejidos que lo
requieren se oxidan en la mitocondria con consumo de oxgeno y generan agua y
dixido de carbono. Durante este proceso se forman coenzimas reducidas que se
usan para la produccin de ATP en la cadena respiratoria.
2.- Material estructural.- Algunos lpidos anfipticos son utilizados en la clula
para la formacin de las membranas. Los lpidos caractersticos de la membrana
son fosfolpidos, los glucolpidos y el colesterol. Las grasas son levemente
anfipticas y por esa razn no resultan apropiadas como componentes de las
membranas.
3.- Material aislante.- Los lpidos son materiales aislantes excelentes. En los
animales superiores las grasas neutras se localizan en el tejido subcutneo y
alrededor de diferentes rganos (grasa estructural) para el aislamiento elctrico y
mecnico de las clulas respecto de su medio ambiente. La impermeabilidad de
las membranas lipdicas a los iones permite la formacin de potencial elctrico de
membrana.
4.- Funciones especiales.- Ciertos lpidos desempean funciones especiales en

el organismo. Por ejemplo, los esteroides, los eicosanoides y algunos metabolitos
de los fosfolpidos funcionan como seales. Actan como hormonas, mediadores y
segundos mensajeros. Otros lpidos operan como anclaje para fijar protenas a las
membranas. Los lpidos tambin actan como cofactores en las reacciones
enzimticas, por ejemplo, la vitamina K. Como lpido fotosensible, el carotenoide
retinal desempea un papel central en el proceso de la visin.
Figura 1. A. Clasificacin de lpidos.

B. Funcin biolgica.
1. SAPONIFICACIN
FUNDAMENTO
Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido sdico o potsico
descomponindose en los dos elementos que las integran: glicerina y cidos
grasos. stos se combinan con los iones sodio o potasio del hidrxido para dar
jabones, que son en consecuencia las sales sdicas o potsicas de los cidos
grasos. En los seres vivos, la hidrlisis de los triglicridos se realiza mediante la
accin de enzimas especficos (lipasas) que dan lugar a la formacin de cidos
grasos y glicerina.
TCNICA
. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%.
. Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos.
. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara
que contiene la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra
intermedia semislida que es el jabn formado y una superior lipdica de aceite
inalterado.
2. TINCIN
FUNDAMENTO
Los lpidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el colorante
Sudn III.
TCNICA
1. Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de
aceite.
2. Aadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solucin alcohlica de Sudn III.
3. Al otro tubo aadir 4-5 gotas de tinta roja.
4. Agitar ambos tubos y dejar reposar.
5. Observar los resultados: en el tubo con Sudn III todo el aceite tiene que
aparecer teido, mientras que en el tubo con tinta, sta se ir al fondo y
el aceite no estar teido.
3. SOLUBILIDAD
FUNDAMENTO
Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se
dividen en pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso, que
es transitoria, pues desaparece en reposo por reagrupacin de las gotitas de
grasa en una capa que, por su menor densidad, se sita sobre el agua.
Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgnicos, como el ter,
cloroformo, acetona, benceno, etc.
TCNICA
1. Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo.
2. Aadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de ter u otro disolvente
orgnico,
3. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.
4. Observar los resultados: Se ver cmo el aceite se ha disuelto en el ter
y, en cambio no lo hace en el agua y el aceite subir debido a su menor
densidad.
SISTEMA DE CALIFICACION (Puntos de consideracin para la evaluacin
de la prctica)
1.- Describir los resultados que obtuviste en cada apartado haciendo una tabla.
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
Qu son los jabones?

Cmo se pueden obtener los jabones?
Por qu en la saponificacin la glicerina aparece en la fase acuosa?
Qu enzima logra en el aparato digestivo la hidrlisis de las grasas?
Indica lo que ocurre con la mezcla aceite-Sudn III y aceite-tinta y explica
a qu se debe la diferencia entre ambos resultados.
6. Qu ocurre con la emulsin de agua en aceite transcurridos unos
minutos de reposo? y con la de benceno y aceite? A qu se deben las
diferencias observadas entre ambas emulsiones?
BIBLIOGRAFA
PRACTICA NO.7
RECONOCIMIENTO DE PRTIDOS
El alumno realizar algunas reacciones coloridas especficas para la identificacin
de los aminocidos que constituyen una protena.
MATERIAL
Tubos de ensayo
Gradilla
Mechero
Pipetas
Solucin de HCl concentrado

Alcohol etlico
Solucin de SO4Cu al 1%
NaOH al 20%
Clara de huevo o leche
Solucin de albmina al1-2%
INTRODUCCION
La unin de dos o ms aminocidos por enlaces cido-amida genera cadenas de
molculas lineales; la longitud de la cadena de aproximadamente 100 residuos se
denomina pptidos (oligopptidos y polipptidos). Los polipptidos con ms de
100 residuos de aminocidos reciben el nombre de protenas.
Todos los organismos contienen miles de protenas distintas y con funciones
diferentes. La Figura 1 muestra es forma semiesquemtica la estructura de
algunas protenas intracelulares y extracelulares, con un aumento aproximado de
1,5 millones de veces, para dar una idea de su gran variedad. Las protenas
pueden ser clasificadas segn sus funciones, de la siguiente manera:
Protenas estructurales.- Las protenas estructurales son responsables de la

forma y la estabilidad de las clulas y los tejidos. Como ejemplo de una protena
estructural se muestra un fragmento de la molcula de tropocolgeno. El tamao
de la molcula completamente es aproximadamente 1,5 300 nm. Las histonas
(fig. 1 parte derecha superior) organizan la disposicin (enrollado) del DNA en el
ncleo celular y rigen la transcripcin. Las unidades bsicas de la cromatina, los
nucleosomas, estn formados por un complejo de histonas sobre el cual se enrolla
el DNA.
Protenas de transporte.- Una protena de transporte conocida es la hemoglobina
de los eritrocitos (Fig. 1, izquierda, abajo). Tiene a su cargo el transporte de
oxgeno y de dixido de carbono entre los pulmones y los tejidos. Tambin el
plasma de la sangre contiene muchas protenas con funcin de transporte; por
ejemplo, la prealbmina (transtiretina) transporta las hormonas tiroideas tiroxina y
triiodotironina. Los canales inicos y otras protenas integrales de membrana
posibilitan el transporte de iones y de metabolitos a travs de las membranas
biolgicas.
Protenas de defensa.- El sistema inmune protege al organismo de los grmenes
patgenos y de las sustancias extraas- Como componente importante del
sistema inmune se muestra la inmunoglobulina tipo G (IgG); como anticuerpo, esta
sustancia respalda la defensa inmunitaria especfica.
DESARROLLO DE LA PRACTICA
1. COAGULACIN DE LAS PROTENAS
FUNDAMENTO
Las protenas debido al gran tamao de sus molculas forman con el agua
soluciones coloidales que pueden precipitar formndose cogulos al ser
calentadas a temperaturas superiores a 70C o al ser tratadas con soluciones
salinas,
cidos,
alcohol,
etc.
La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su
desnaturalizacin por los agentes indicados que al actuar sobre la protena la
desordenan por destruccin de sus estructuras secundaria y terciaria.
TCNICA
1. Colocar en tres tubos de ensayo una pequea cantidad de clara de
huevo (puede diluirse en un poco de agua para obtener una mezcla
espesa) o 2-3ml de leche.
2. Calentar uno de los tubos al bao Mara, aadir a otro 2-3ml de HCl
concentrado y al tercero 2 o 3ml de alcohol etlico.
3. Observar los resultados.
2. REACCIONES COLOREADAS ESPECFICAS (BIURET)

FUNDAMENTO
Entre las reacciones coloreadas especficas de las protenas, que sirven por
tanto para su identificacin, destaca la reaccin del Biuret. Esta reaccin la
producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos ya que se debe
a la presencia del enlace peptdico CO-NH que se destruye al liberarse los
aminocidos.
El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre(II) y sosa, y el Cu, en un medio
fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptdicos formando un
complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la
concentracin de protenas.
TCNICA
1.
2.
3.
4.
5.
Colocar en un tubo de ensayo 3ml de solucin de albmina al 1-2%.

Aadir 4-5 gotas de solucin de SO4Cu al 1%.
Aadir 3ml de solucin de NaOH al 20%.
Agitar para que se mezcle bien.
Observar los resultados.
SISTEMA DE CALIFICACION (Puntos de consideracin para la evaluacin

de la prctica)
1.- Describir los resultados que obtuviste en cada apartado haciendo una tabla
CUESTIONARIO
1. Cmo se manifiesta la desnaturalizacin de la clara de huevo?
2. Cul de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de
desnaturalizacin?
3. Cmo podramos saber que una sustancia desconocida es una
protena?
4. Qu coloracin da la reaccin del Biuret?
5. Una protena coagulada podra dar la reaccin del Biuret?
6. Si se realiza la reaccin del Biuret sobre un aminocido como la Glicina
es positiva o negativa? Por qu?
BIBLIOGRAFA

PRACTICA NO. 8
AISLAMIENTO DE CASENA Y LACTOSA
El alumno realizar algunas pruebas qumicas de identificacin de carbohidratos.
MATERIALES
Mechero, rejilla y trpode
Varilla de vidrio o esptula
Trompa de vaco
Papel secamanos de
laboratorio
Erlenmeyer
Leche descremada
Actico glacial
Carbonato clcico en
polvo
Etanol 95%
Etanol acuoso 25%
Carbn activo
INTRODUCCION
a) CASEINA
La leche contiene vitaminas (principalmente tiamina, riboflavina, cido
pantotico y vitaminas A, D y K), minerales (calcio, potasio, sodio, fsforo y
metales en pequeas cantidades), protenas (incluyendo todos los aminocidos
esenciales), carbohidratos (lactosa) y lpidos. Los nicos elementos importantes
de los que carece la leche son el hierro y la vitamina C.
Las protenas se pueden clasificar de manera general en protenas globulares y
fibrosas.
Las protenas globulares son aquellas que tienden a agregarse en formas
esferoidales y no establecen interacciones intermoleculares como son los
puentes de hidrgeno (caractersticos de las protenas fibrosas) siendo

solubilizadas en suspensiones coloidales.
En la leche hay tres clases de protenas: casena, lacto albminas y lacto
globulinas (todas globulares).
La casena es una protena conjugada de la leche del tipo fosfoprotena que se
separa de la leche por acidificacin y forma una masa blanca. Las
fosfoproteinas son un grupo de
protenas que estn qumicamente unidas a una sustancia que contiene cido
fosfrico. En la casena la mayora de los grupos fosfato estn unidos por los
grupos hidroxilo de los aminocidos serina y treonina. La casena en la leche se
encuentra en forma de sal clcica (caseinato clcico). La casena representa
cerca del 77% al 82% de las protenas presentes en la leche y el 2,7% en
composicin de la leche lquida.
La casena est formada por alpha(s1), alpha(s2)-casena, -casena, y kappacasena
formando una micela o unidad soluble. Ni la alfa ni la beta casena son solubles
en la leche, solas o combinadas. Si se aade la kappa casena a las dos
anteriores o a cada una de ellas por separado se forma un complejo de casena
que es solubilizado en forma de micela. Esta micela est estabilizada por la
kappa casena mientras que las alfa y beta son fosfoprotenas que precipitan en
presencia de iones calcio.
La kappa casena, sin embargo, tiene pocos grupos fosfato y un alto contenido
de carbohidratos unidos a ella. Tambin tiene todos sus residuos de serina y
treonina con sus correspondientes grupos hidroxilo, as como los carbohidratos
dispuestos en una sola cara de su superficie por lo que esta parte exterior es
fcilmente soluble en agua gracias a los grupos polares que posee. La otra
parte de su superficie se une fcilmente a las alfa y beta casena insolubles, lo
que da lugar a la formacin de la micela.
La propiedad caracterstica de la casena es su baja solubilidad a pH 4,6. El pH

de la leche es 6,6 aproximadamente, estando a ese pH la casena cargada
negativamente y solubilizada como sal clcica. Si se aade cido a la leche, la
carga negativa de la superficie de la micela se neutraliza ( los grupos fosfato se
protonan) y la protena neutra precipita
La conformacin de la casena es similar a las protenas desnaturalizadas

globulares.
El alto nmero de residuos de prolina en la casena causa un especial
plegamiento en la cadena de protena e inhibe la formacin de una fuerte y
ordenada estructura secundaria. La casena no contiene puentes di sulfuro. De
igual manera la falta de estructura secundaria es importante para la estabilidad
de la casena frente a la desnaturalizacin por calor. La carencia de estructura
terciaria facilita la situacin al exterior de los residuos hidrofbicos lo que facilita
la unin entre unidades proteicas y la convierte en prcticamente insoluble en
agua. En cambio es fcilmente dispersable en lcalis diluidas y en soluciones
salinas tales como oxalato sdico y acetato sdico.
La funcin biolgica de las micelas de caseina es transportar grandes
cantidades de Ca y P altamente insoluble en forma liquida a los lactantes y
formar un coagulo en el estomago para favorecer una nutricin eficiente.
Adems de casena, Ca y P la micela formada tambin contiene citrato, iones,
lipasa, enzimas plasmticos y suero. Estas micelas ocupan del 6-12% del
volumen total de la leche.
Las protenas que aparecern en el sobrenadante cuando precipitemos la
casena en medio cido son protenas globulares, hidrofilicas y fcilmente
solubles en agua as como susceptibles de desnaturalizacin por calor. Las
principales son -lacto globulina, alphalactalbumina, bovine serum albumin
(BSA), y inmunoglobulinas (Ig).
La casena se emplea en la industria para la fabricacin de pinturas especiales y

en el apresto de tejidos, la clarificacin de vinos, la elaboracin de preparados
farmacuticos y la fabricacin de plsticos. La pintura de casena ha sido usada
desde la antigedad por los egipcios.
b) PUNTO ISOELECTRICO
Todas las macromolculas de la naturaleza adquieren una carga cuando se
dispersan en agua. Una caracterstica de las protenas y otros biopolmeros es
que la carga total que
adquieren depende del pH del medio.
As, todas las protenas tienen una carga neta dependiendo del pH del medio en
el que se encuentren y de los aminocidos que la componen, as como de las
cargas de cualquier ligando que se encuentre unido a la protena de forma
covalente (irreversible).
Debido a la composicin en aminocidos de la protena, los radicales libres
pueden existir en tres formas dependiendo del pH del medio: catinicos, neutros
y aninicos.
Cualquier protena tendra una carga neta positiva si se encuentra en un medio
lo suficientemente cido debido a que los grupos COOH de los aminocidos
asprtico y glutmico estaran en su forma neutra pero los grupos amino de
Arginina y lysina estaran protonados (-NH3+).
De igual forma si la protena se encuentra en un medio con un pH muy alto
estara cargada negativamente ya que en este caso los grupos carboxilo
estaran desprotonados(COO-) y los grupos amino estaran en su forma neutra
(NH2).
De lo anterior se deduce que las protenas tienen un pH caracterstico al cual su
carga neta es cero. A este pH se le denomina punto isoelctrico (pI).
En el punto isoelctrico (pI), se encuentran en el equilibrio las cargas positivas y
negativas por lo que la protena presenta su mxima posibilidad para ser
precipitada al disminuir su solubilidad y facilitar su agregacin.
Si suponemos una protena formada nicamente por aminocidos sin grupos
laterales ionizables la carga neta de la protena dependera exclusivamente de
la protonacin / desprotonacin de los grupos amino y carboxilo terminal. En la
realidad las protenas estn formadas por multitud de aminocidos unidos
mediante enlaces peptdicos y la carga va a depender de los grupos ionizables
que poseen los aminocidos que la componen (anexo I) y del pH del medio.
La lactosa es un glcido libre que existe en cantidad importante en todas las

leches; es tambin el componente ms abundante, el ms simple y el ms
constante de proporcin. Si se considera la leche de las principales especies de
mamferos, de los que se posee un nmero suficiente de anlisis y si se tiene en
cuenta el contenido en lactosa de la leche desnatada, se aprecia que las
variaciones son limitadas, menos de dos veces entre una leche pobre en
lactosa, como la de la ballena, y una leche rica como la humana(mientras que el
contenido en materia grasa vara ms de 30 veces). Por consiguiente, existe
una relativa constancia de la secrecin de lactosa entre las especies, lo que
hace pensar que el proceso enzimtico implicado en la sntesis es similar en
especies muy diversas.
La lactosa predomina ampliamente en la leche de numerosas especies,
especialmente en la leche humana. 675g/l, o sea, ms de la mitad del extracto
seco.
Es el componente ms abundante de la leche de vaca y de cabra. La primera
correccin que se hace a la leche de vaca para semejarla a la leche humana, es
la adicin de azcar.
La leche en algunos animales contiene poca lactosa, hasta el presente
solamente se conoce una especie cuya leche no contiene lactosa, el len de
mar de California.
La lactosa parece ser el factor que limita la produccin de leche; es decir, que la
cantidad de leche producida depende de las posibilidades de sntesis de la
lactosa en la mama; es el elemento soluble ms abundante y su actividad
osmtica global es mucho ms elevada que la de los otros componentes.
Desde el punto de vista biolgico, la lactosa se distingue de los azcares
comunes, por su estabilidad en el circuito alimentario. Las enzimas especficas
que aseguran la hidrlisis de la lactosa y la desmlisis de la galactosa son o
poco abundantes o poco activas. La lactosa no es simplemente un glcido
energtico para los seres humanos y para numerosos animales, la lactosa es,
en la prctica la nica fuente de galactosa que es un componente de los tejidos
nerviosos.
La lactosa es el componente de la leche ms dbil frente a la accin microbiana.
La leche es fcilmente presa de bacterias de diversos tipos, que transforman la
lactosa en cido lctico y en otros cidos alifticos; transformacin a veces
nociva y frecuentemente muy til.
En la leche de vaca el contenido de lactosa vara poco, entre 48-50 g/l. El factor
ms importante de la variacin es la infeccin de la mama, que reduce la
secrecin de lactosa. Debido a la regulacin osmtica, el contenido en lactosa
de la leche es aproximadamente inversamente proporcional al contenido de
sales.
1. AISLAMIENTO DE LA CASEINA
1. Introducir 200 ml. de leche descremada en un vaso ancho de 600 ml. No
se debe dejar la leche en reposo durante mucho tiempo antes de
utilizarla, ya que la lactosa puede convertirse lentamente en cido lctico,
aunque se guarde en la nevera.
2. Calentar la leche hasta aproximadamente los 40 C y aadir gota a gota
una disolucin de cido actico diluido (1 volumen de cido actico
glacial en 10 volmenes de agua), con un cuentagotas.
3. Agitar continuamente la mezcla con una varilla de vidrio durante todo el
proceso de adicin. Continuar aadiendo cido actico diluido hasta que
no precipite ms casena. Debe evitarse un exceso de cido porque
puede hidrolizarse parte de la lactosa. Agitar la casena hasta que se
forma una gran masa amorfa.
4. Separar la casena con ayuda de una varilla o esptula y colocarla en
otro vaso.
5. Aadir, inmediatamente, 5 g de carbonato de calcio en polvo al primer
vaso (que contiene el lquido del que se ha separado la casena).
6. Agitar esta mezcla durante unos minutos y guardarla para utilizarla luego
en la siguiente prctica. Debe utilizarse cuanto antes y durante el mismo
perodo de trabajo. Esta mezcla contiene lactosa.
7. Filtrar la masa de casena al vaco durante aproximadamente 15 minutos
para separar todo el lquido que sea posible.
8. Presionar la casena con una esptula durante la operacin de filtrado.
9. Colocar el producto entre varias toallas de papel para ayudar a secar la
casena. Cambiar el producto por lo menos en tres o cuatro ocasiones,
poniendo nuevas toallas de papel, hasta que la casena est
completamente seca. Dejar que la casena se seque completamente al
aire durante uno o dos das y finalmente pesarla.
10. La densidad de la leche es de 1,03 g/ml. Calcular el porcentaje de
casena aislada.
2. AISLAMIENTO DE LA LACTOSA
1. Calentar la mezcla que se guardaba del experimento anterior a ebullicin
suave durante aproximadamente 10 minutos. Esto causar la
precipitacin casi completa de las albminas (proteinas del suero).
2. Filtrar la mezcla caliente al vaco para separar las albminas precipitadas
y el carbonato de calcio que an quede.
3. Concentrar el filtrado (transparente), en un vaso de boca ancha de 600
ml. con un mechero Bunsen, hasta aproximadamente 30 ml. Utilizar
varias varillas para ayudar a conseguir una ebullicin homognea y evitar
las salpicaduras que se produciran al ir aumentando el precipitado.
Tambin se puede formar espuma, si la mezcla entra en ebullicin con
demasiada fuerza. Esto puede controlarse soplando suavemente sobre la
superficie de la disolucin de lactosa.
4. Aadir 175 ml de etanol del 95% (lejos de cualquier llama) y 1 2 g de
carbn activo a la disolucin caliente.
5. Despus de haberlo mezclado todo bien, filtrar la solucin caliente al
vaco. El filtrado debe ser transparente. El filtrado puede enturbiarse
debido a la cristalizacin rpida de la lactosa, despus de la filtracin al
vaco. Si la turbidez aumenta con relativa rapidez al dejarla en reposo,
debe evitarse otra filtracin, pues se perdera producto.
6. Pasar la disolucin a un matraz Erlenmeyer y dejarla reposar durante la
noche o hasta que se inicie el siguiente perodo de trabajo. En algunos
casos, se requieren varios das para que la cristalizacin haya finalizado.
La lactosa cristaliza en la pared y en el fondo del matraz.
7. Desalojar los cristales y filtrarlos al vaco.
8. Lavar el producto con unos pocos mililitros de etanol acuoso fro al 25 %.
La lactosa cristaliza con una molcula de agua, C12H22O11H2O.
9. Pesar el producto cuando est completamente seco. La densidad de la
leche es de 1,03 g/ml. Con este valor, calcular el porcentaje de lactosa en
la leche.

la prctica)
1.- Describir los resultados que obtuviste en cada apartado haciendo una tabla
CUESTIONARIO
1.- Mencionar cual es la importancia biolgica que tiene la casena.
2.- Describir la importancia fisiolgica de la lactosa
3.- Describir la patologa de la intolerancia a la lactosa
BIBLIOGRAFA
PRACTICA NO. 9
IDENTIFICACIN DE COMPONENTES QUIMICOS EN ALIMENTOS
OBJETIVO DE LA PRCTICA:
Identificar la presencia de determinados componentes qumicos en algunos

alimentos, a travs de pruebas qumicas cualitativas, para que al relacionarlas con
la informacin revisada se reconozca su importancia en los seres vivos.
MATERIAL
Cantidad
1
12
1
5
1
2
1
Material
Cantidad Material
Gradilla
Tubos de ensayo de 15 X 150 Mm.
Mortero con pistilo
Vasos precipitado de 50 a 100 ml.
Pinza para tuvo de ensayo
Portaobjetos
Lmpara de alcohol (50 ml)
200 ml
3 ml
3 ml
3 ml
3 ml
3 ml
1 gota
15 gotas
15 ml
15 ml
20 gotas
20 gotas
60 gotas
5 gotas
Agua destilada
Solucin de cloruro de sodio al 1%
Solucin de CaCO3 al 1%
Solucin de glucosa al 2%
Solucin de almidn al 1%
Solucin de grenetina al 1%
Aceite comestible
Solucin de AgNO3 al 1%
Solucin reguladora pH 10
Solucin de negro heril romo T (NET)
Solucin de Fehling A
Solucin de Fehling B
Lugol ninhidrina (solucin al 1%)
Sudn III
MATERIAL POR EQUIPO

Cantidad
1
1 caja
100 g
Material
Cantidad Material
Cuchillo de mesa (para cortar la naranja)

Cerillos
Algodn
20 ml
1
1
Leche
Huevo
Naranja
Pltano
La qumica y el anlisis de los alimentos son disciplinas muy amplias que se basan
en los principios de la fisicoqumica, qumica orgnica, biologa y qumica analtica.
Los avances en estas ciencias realizados en los siglos XIX y XX han tenido un
efecto importante en la comprensin de muchos aspectos de la ciencia y
tecnologa de alimentos y han sido decisivos en el mejoramiento de la cantidad,
calidad y disponibilidad del suministro de alimentos a nivel mundial.
El anlisis de alimentos es la disciplina que se ocupa del desarrollo, uso y estudio
de los procedimientos analticos para evaluar las caractersticas de alimentos y de
sus componentes. Esta informacin es crtica para el entendimiento de los factores
que determinan las propiedades de los alimentos, as como la habilidad para
producir alimentos que sean consistentemente seguros, nutritivos y deseables
para el consumidor.
Existen un nmero considerable de tcnicas analticas para determinar una
propiedad particular del alimento. De ah que es necesario seleccionar la ms
apropiada para la aplicacin especfica. La tcnica seleccionada depender de la
propiedad que sea medida, del tipo de alimento a analizar y la razn de llevar a
cabo el anlisis.
Las determinaciones que se realizan ms frecuentemente para conocer la
composicin de los alimentos incluyen la determinacin de humedad, cenizas,
extracto etreo (grasa cruda), protena total, fibra y carbohidratos asimilables, en
un protocolo conocido como Anlisis Proximal. As mismo, dependiendo del
objetivo del anlisis, resultan importantes las determinaciones relacionadas con la
caracterizacin de algn grupo de nutrientes en particular, tal es el caso del
anlisis de carbohidratos en el que se podra considerar la diferenciacin de los
que presentan poder reductor, del contenido total. En el mismo sentido se podran
analizar las protenas solubles o considerar la caracterizacin de los lpidos
extrados de un alimento.
CONCEPTOS ANTECEDENTES
a) Escribir en concepto de carbohidratos
b) Para qu sirven los aminocidos?
c) Escribir los nombres de los principales minerales que constituyen a los

seres vivos
d) Nombrar cinco vitaminas y proporcionar un ejemplo de los alimentos que

las contienen
HIPTESIS
Cules con los componentes qumicos de los siguientes alimentos. Mencionar
aquellos que sean conocidos.
Leche:
Huevo:
Naranja:
Pltano:
RESULTADOS
Cuadro de resultados No. 2
COMPONENTES QUIMICO IDENTIFICADO
Alimento Agua Cloruro Calcio Monosacridos Polisacridos Protenas Lpidos
Leche
( )
( )
( )
( )
( )
( )
( )
Clara de
huevo
( )
( )
( )
( )
( )
( )
( )
Jugo de
naranja
( )
( )
( )
( )
( )
( )
( )
Pltano
( )
( )
( )
( )
( )
( )
( )
( + ) Componente identificado
( - ) Componente identificado
PREPARACIN DE ALIMENTOS
Sustancia a
identificar
Agua
Cloruros
Alimento 1
20 ml
de
leche
Alimento 2
Procesar 20 de
3 ml de ml clara
leche
de
huevo
3 ml de
leche
Procesar
3 ml de
clara de
huevo
3 ml de
clara de
huevo
Alimento 3
Jugo de
naranja
+ H2O
Procesar
3 ml de
jugo de
naranja
3 ml de
jugo de
naranja
Alimento 4
Papilla Procesar
de
trozo de
pltano pltano
Papilla
de
pltano
Monosacridos
3 ml de
leche
3 ml de
clara de
huevo
3 ml de
jugo de
naranja
Polisacridos
3 ml de
leche
3 ml de
clara de
huevo
3 ml de
jugo de
naranja
Protenas
3 ml de
leche
3 ml de
clara de
huevo
3 ml de
jugo de
naranja
1 gota de leche
1 gota de clara de
huevo
1 gota de jugo de
naranja
Lpidos
diluido
Papilla
de
pltano
diluido
Papilla
de
pltano
diluido
Papilla
de
pltano
diluido
1 gota de papilla
de pltano
Preparar y ordenar (en la gradilla) las sustancias que servirn de testigo, como se
indica a continuacin y realizar la prueba correspondiente en la determinacin de
cada uno de los componentes qumicos.
Procurar no contaminar los reactivos.
Registrar las observaciones en el cuadro de los resultados nmero 1.
Identificacin de:
Sustancia testigo
Prueba para la identificacin
Agua
30 ml de agua
Tapar el tubo con algodn y
calentar hasta llegar al punto de
ebullicin.
Cloruro
3 ml de NaCL al 1%
Agregar 3 gotas de AgNO3
Calcio
3 ml de CaCO3 al 1%
Agregar 3 ml de solucin
reguladora con pH 10 y 3 ml de
solucin de negro erio cromo
Monosacridos
3 ml de glucosa al 1%
Agregar 4 gotas de las
soluciones de Fehling A y
cuatro gotas de Fehling B.
Calentar hasta llegar el punto
de ebullicin
Polisacridos
3 ml almidn al 1%
Agregar 4 gotas de lugol.
Protenas
3 ml de grenetina al 1%
Agregar 12 gotas de ninhidrina
y calentar hasta llegar al punto
de ebullicin por un minuto
aprox.
Lpidos
1 gota de aceite
Agregar una gota de Sudn III.
Conservar los tubos testigos para que sirvan de referencia en cada

identificacin.
Preparar y ordenar la gradilla cada uno de los alimentos que se analizarn

(leche, clara de huevo, jugo de naranja y pltano).
Indicar sus componentes qumicos siguiendo, las pruebas realizadas con

los testigos.
Anotar si se identificaron (+) o no identificaron (-) cada uno de los

componentes y describir lo observado en el cuadro resultado nmero 2.
RESULTADOS
SUSTANCIAS TESTIGO
Alimento agu clorur calci monosacrid polisacrid
s
a
o
o
os
os
Cambios
observad
os
protena lpido
s
s
CUESTIONARIOS
1. Qu componente estuvo presente en todos los alimentos cul fue ms fcil
identificar?
2. Cul de los alimentos es ms rico en componentes qumicos?
1. En caso de haber identificado algn componente qumico en los alimentos, se
puede considerar que la prueba no detecta su presencia? Explica la respuesta.
2. Fundamentar por qu?
CONCLUSIN
Sealar cules fueron los componentes qumicos identifcados en los alimentos y
cul es su importancia en los seres vivos?
BIBLIOGRAFA
PRACTICA NO.10
EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD DE LA
ENZIMA -AMILASA
El alumno determinar el efecto de la temperatura en la actividad enzimtica de la
amilasa (ptialina).
DESCRIPCIN
(por equipo)
MATERIAL QUE DEBE

TRAER EL ALUMNO
MATERIAL QUE
PROPORCIONA EL
LABORATORIO
7 tubos de ensaye.
1 gradilla
1 vaso de precipitados 100 ml.
2 Baos termostticos *
3 agitadores de vidrio.
Solucin de KI (lugol)
Solucin de almidon 1%
2 placas de porcelana
1 vaso de precipitados de 250 ml
1 mechero, anillo, soporte, rejilla
2 pipetas de 10 ml
1 pipeta de 5 ml
Hielo
* POR GRUPO
INTRODUCCION
ENZIMAS
A. BIOCATALIZADORES
Los biocatalizadores son sustancias biolgicas encargadas de acelerar las
reacciones qumicas. Casi todos los biocatalizadores son enzimas, es decir
protenas con un efecto cataltico. Existen asimismo cidos ribonucleicos con
capacidad cataltica, las ribozimas. El sistema metablico funciona
exclusivamente debido a que cada una de las clulas del organismo cuenta con
una determinada cantidad de enzimas originadas genticamente, lo que permite
que se genere una sucesin de reacciones coordinadas. Las enzimas tambin
forman parte de diversos mecanismos de regulacin, permitiendo as que el
metabolismo se adapte a diferentes condiciones.
B. ESPECIFICIDAD DE LA CATLISIS ENZIMTICA
La mayor parte de las enzimas tiene un efecto altamente especfico debido al tipo
de reaccin cataltica (especificidad de efecto) y al tipo de conexiones
(sustratos), cuya transcripcin es catalizada por estas enzimas (especificidad de
sustrato). Las enzimas son adems capaces de diferenciar entre estereoismeros
(espcificidad isomrica).
El proceso de degradacin de la glucosa que se lleva a cabo dentro de las clulas
se forma piruvato, el anin de un 2-oxocido. En condiciones anaerbicas y al
unirse con la coenzima NADH, el piruvato se reduce a lactato, el anin del 2hidroxicido respectivo. En condiciones aerbicas, la reaccin que se
desencadena es precisamente la opuesta. Ambas transformaciones son
catalizadas por la enzima lactato deshidrogenasa.
C. CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS
Actualmente se conocen ms de 2000 tipos diferentes de enzimas. En un intento
de clasificarla, se desarrollo un esquema que incluye la especificidad de efecto y la
de su sustrato. Cada enzima est registrada en el catlogo de enzimas bajo un
nmero EC de cuatro cifras. Estos nmeros representan una clasificacin
progresivamente ms especfica: la primera cifra indica la pertenencia a uno de los
seis principales grupos de enzimas, la siguiente define el subgrupo y as
sucesivamente hasta llegar a la cuarta cifra, que indica el nmero de la nueva
enzima obedeciendo un orden correlativo.
Las oxidorreductasas (clase 1) catalizan reacciones redox, es decir la
transferencia de electrones entre sistemas redox. Las transferasas (clase 2) son
las encargadas de transferir otros grupos tales como los aminos y los restos de
fosfato. Tanto las oxidorrectasas como las transferasas necesitan siempre la

presencia de coenzimas. Las hidrolasas tambin transfieren grupos, pero el
aceptador no es una coenzima si no una molcula de agua. Las liasas (clase 4),
tambin llamadas sintasas segn el sentido en el que se produzca la reaccin,
catalizan la divisin o formacin de conecciones qumicas, proceso en el cual se
generan o desaparecen duplicados. Las isomerasas (clase 5) desplazan grupos
dentro de una molcula sin modificar la frmula sumatoria del sustrato. Las
reacciones de unin catalizadas por medio de las ligasas (sintetasas, clase 6)
son endergnicas y por lo tanto, energticas a la divisin del nuclesido trifosfato
(generalmente ATP).
La -amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana

y cataliza la degradacin del almidn, que es un polisacrido de reserva
vegetal. El almidn est formado por dos tipos de molculas: la amilosa y
la amilopectina, ambos polisacridos de glucosa. La amilosa se conforma
por cadenas lineales de glucosas unidas por enlaces - C1-C4, mientras
que la amilopectina tiene, adems de estos ltimos enlaces, uniones C1 con
C6, formando cadenas ramificadas. La -amilasa rompe uniones C1-C4,
tanto en la amilasa como en la amilopectina, dejando dextrinas lineales y
ramificadas (oligosacridos) como productos.
Para medir la actividad enzimtica de la -amilasa, se utilizar un test
colorimtrico que detecta el almidn. Para ello se contar con una solucin
de iodo/ioduro de potasio (I 2 /IK), ya que el almidn en presencia de esta
solucin adquiere una coloracin azulada caracterstica. Esto tiene una
explicacin fsica: el iodo se coloca en el interior de la hlice que forma la
amilosa (en las regiones hidrofbicas), formando un complejo de color azul.
Cuando la -amilasa acta, degrada la amilosa, se desintegra la hlice y por tanto
en presencia de I 2 /IK ya no dar una coloracin azul.
Por lo tanto, en este TP mediremos la desaparicin de sustrato (evidenciada
por el test colorimtrico) para determinar la actividad de la enzima. Adems,
analizaremos cmo afectan las distintas condiciones en que acta la enzima
(pH, temperatura, concentracin de NaCl), as como los efectos que pueden
causar diferentes pretratamientos (proteinasa, calor).
La dilucin ptima nos indicar cunto debemos diluir la saliva para que se
logre el efecto acromtico dentro del rango propuesto (2-8 minutos).
La amilasa (ptialina) es una enzima que hidroliza (rompe) los enlaces
glucosdicos (1-4) de los polisacaridos como el almidn. Existen dos sitios
caractersticos donde se encuentra la -amilasa, en la saliva y en el jugo
pancretico.
El mtodo ms usado para la determinacin de las diferentes amilasas es la
reaccin de color azul que produce el yodo con el almidn.
A medida que se produce la hidrolizacin del almidn por la presencia de las amilasas, la molcula se hace ms pequea y la coloracin azul va disminuyendo
hasta que queda un color mbar (reaccin negativa de la presencia de almidn).
1. Preparacin de la saliva diluida: Tomar 2 ml. de saliva en un tubo de ensaye, y
transferirlos a un vaso de precipitados con 25 ml de agua destilada. Mezclar
perfectamente. Una vez diluida se utilizar lo ms pronto posible.
2. Agregar a 3 tubos de ensaye 5 ml de solucin de almidn, a cada uno

colocarlo en una temperatura diferente; durante 5 minutos
a) 0 C.
b) 37 C.
c) 93 C.
3. Agregar a tres tubos de ensaye 3 ml de saliva diluida (punto 1) y colocarlos en
cada una de las temperaturas a), b) y c) durante 5 minutos.
4. Despus de transcurrido el tiempo en cada una de las diferentes temperaturas,
vace el contenido de cada uno de los tres tubos con la solucin de almidn, en
cada uno de los tubos con saliva diluida.
NOTA: Los tres tubos resultantes deben permanecer en el bao de su
temperatura correspondiente durante el resto del experimento.
5. En el momento de la mezcla, tomar inmediatamente 3 gotas de cada una de
los tubos (a, b y c), utilizando tres pipetas diferentes, colocarlas en la placa y
agregar 2 gotas de lugol, observando y anotando la coloracin en cada una de
las diferentes temperaturas.
6. Estas determinaciones se llevarn a cabo cada a los tiempos 0, 3, 6, 9, 14 y 19
minutos.
1. Qu es una enzima?
2. Qu factores desnaturalizan a una enzima?
3. Qu es el almidn?

la prctica
1. Completar el siguiente cuadro : Actividad de la -amilasa:
Reaccin positiva (+): Color AMBAR.
Reaccin negativa (-): Color AZUL.
TEMPERATURA
TIEMPO (MINUTOS)
0
14
19
0 C.
37 C.
93 C.
2. Cul fue la temperatura en la cual desapareci el color azul en el menor tiempo?,
por qu?
3. Hubo alguna temperatura en la que no cambi el color azul?, cul y por qu?
4. Explica el efecto de las diferentes temperaturas en la enzima -amilasa y de acuerdo
a los resultados, cul es la temperatura ptima de la -amilasa salival?, por qu?
5. Investiga de qu forma reacciona el yodo con el almidn.
BIBLIOGRAFIA
PRACTICA NO. 11
EFECTO DEL pH EN LA VELOCIDAD DE LA REACCION ENZIMATICA DE LA
HIDRLISIS DEL ALMIDN
El alumno determinar el pH ptimo de actividad de la enzima -amilasa salival.
El alumno concluir como se ve afectada la accin de la enzima -amilasa salival
a pH cido y a pH alcalino.
DESCRIPCIN
(por equipo)
MATERIAL QUE DEBE

TRAER EL ALUMNO

EL LABORATORIO
7 Tubos de ensaye.
1 gradilla
1 vaso de precipitados de 100 ml.
2 placas de porcelana.
3 agitadores de vidrio
2 baos mara de temperatura regulada*
Solucin de HCl 1 N
Solucin de NaOH 1 N
Solucin amortiguadora de pH 7.
Solucin de almidn al 1%.
Solucin de KI (lugol).
Solucin de -amilasa salival.
2 pipetas de 10 ml
1 pipeta de 5 ml
* POR GRUPO.
INTRODUCCION
1.1. Determinacin de velocidades iniciales
La actividad cataltica de un enzima se determina midiendo la velocidad inicial de
reaccin, que es la pendiente de la curva de progreso (curva de producto formado
sustrato transformado frente al tiempo) en el tiempo cero (Fig. 1). Inicialmente,
las reacciones transcurren linealmente, pudindose tomar la pendiente de esta
recta como velocidad inicial. A tiempos ms largos, el progreso de la reaccin se
aparta de la linealidad. Esta cada de la velocidad de reaccin se debe a la
disminucin significativa de la concentracin de sustrato, aunque tambin pueden
influir otros factores como el aumento de la concentracin de producto, cambios
de pH, inactivacin del enzima, etc. La mxima fiabilidad en la determinacin de la
actividad de un enzima la suministra el valor de velocidad inicial o velocidad
durante el tramo inicial de progreso lineal de la reaccin.
1.2. Efecto de la concentracin de enzima sobre la actividad enzimtica

De forma general, la velocidad de una reaccin catalizada enzimticamente es
proporcional a la cantidad de enzima en la mezcla de ensayo, segn:
v = Vmax[S]/(Km + [S]) = k'[E0]
Vmax = kcat [E0]
1.3. Efecto del pH sobre la actividad enzimtica

La actividad de un enzima se ve afectada por el pH al cual se lleva a cabo la
reaccin. La curva actividad-pH puede ser diferente para cada tipo de enzima
(Fig. 2). En el caso ms general la curva tiene forma de campana. El valor de pH
al cual la actividad es mxima se denomina pH ptimo; dicho pH no tiene porqu
coincidir con el pH intracelular. La relacin entre el pH y la actividad depende del
comportamiento cido-base del enzima y del propio sustrato.
Sustrato y enzima (centro activo) pueden contener grupos funcionales cidos y
bsicos, siendo su grado de disociacin dependiente del pH, lo que determinar,
entre otros aspectos, la conformacin de la protena, la capacidad de unin del
sustrato al centro activo del enzima (Km) y la capacidad de transformacin del
sustrato (kcat). Los estudios cinticos a diferentes valores de pH nos proporcionan
informacin sobre el mecanismo cataltico de los enzimas y la naturaleza de los
aminocidos ms directamente implicados en la catlisis.
1.4. Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica

La velocidad de una reaccin enzimtica vara al aumentar la temperatura de
acuerdo a lo indicado en la Fig. 3, donde se representa una tpica curva de
actividad enzimtica/temperatura. Tal dependencia refleja un doble efecto de la
temperatura: positivo a bajos valores, debido al incremento general que
experimenta la velocidad de cualquier reaccin qumica al hacerlo la temperatura,
y negativo a valores altos, debido a la desnaturalizacin trmica del enzima. Esto
es, la velocidad de una reaccin enzimtica se incrementa al aumentar la
temperatura dentro de un determinado rango, alcanzando un valor mximo a la
denominada temperatura ptima. A valores superiores la actividad disminuye

debido a que el enzima, como cualquier otra protena, sufre procesos de
desnaturalizacin y, por lo tanto, de inactivacin. Durante la fase de incremento de
la velocidad, la relacin entre sta y la temperatura viene determinada por la
ecuacin de Arrhenius:
v = k e -Ea/RT
ln v = ln k - Ea/RT
Ea es la energa de activacin, R la constante de los gases (1,9872 cal K-1mol -1;

8,3145 J K -1 mol -1) y T la temperatura absoluta (K). El valor de Ea se puede
calcular a partir de la representacin de Arrhenius (Fig. 4).
Otro parmetro que se utiliza para cuantificar el efecto de la temperatura es el
coeficiente de temperatura (Q10), que se define, para una temperatura dada (p. ej.
25 C), como el factor de incremento de la velocidad de reaccin cuando la
temperatura se incrementa 10 C.
(Q10)t = vt+10/vt
1.5. Efecto de la concentracin de sustrato sobre la actividad enzimtica

En la Fig. 4 se representa el efecto de la concentracin de sustrato sobre la
velocidad de una reaccin catalizada enzimticamente. Este comportamiento
cintico, conocido como curva de saturacin hiperblica por el sustrato, constituye
la norma seguida por la mayora de los enzimas, los denominados enzimas
michaelianos. Como principal desviacin, algunos enzimas muestran curvas
sigmoideas, en vez de hiperblicas, de saturacin por el sustrato (caso de algunos
enzimas cooperativos o alostricos).
El anterior modelo cintico se ajusta a la ecuacin:
v = Vmax [S] / (Km + [S])
Donde Km es la constante de Michaelis e indica la afinidad del enzima por su
sustrato, y Vmax es la velocidad mxima e indica la capacidad cataltica.
Observar el comportamiento de las diversas soluciones de la enzima -amilasa y
almidn, al modificar el pH teniendo controlada la temperatura.
1. Preparacin de saliva diluida, tomar 2 ml de saliva fresca y agregarla en un
vaso de precipitado limpio con 25 ml de agua destilada.
2. Agregue en tres diferentes tubos de ensaye, 3 ml de cada una de las
soluciones: pH 1, pH 7, pH 13. A los tres tubos de ensaye anteriores, agregue
3 ml de saliva diluida a cada uno y colquelos en bao Mara a 37 C, durante

5 minutos.
3. Agregue a cada uno de tres tubos de ensaye 5 ml de solucin de almidn al
1% y llvelos a bao Mara de 37 C, durante 5 minutos.
4. Transcurrido el tiempo, vierta el contenido de cada uno de los tubos con
almidn a los 3 tubos marcados con un pH diferente, mezcle e inmediatamente
tome una muestra y posteriormente cada 3 minutos, como en el experimento
de la prctica anterior.
NOTA: Mantenga los tubos a temperatura constante de 37 C.

la prctica)
1. Completar el siguiente cuadro: Reaccin positiva (+): Color AMBAR.
Reaccin negativa (-): Color AZUL.
PH
TIEMPO (MINUTOS)
0
14
19
1
7
13
1. Cul fue el pH en donde se observ ms rpido la desaparicin de la

coloracin azul?
2. A qu se debe?
3. Cul fue el ms lento, explicar por qu?
4. Por qu el almidn es el sustrato de la amilasa y no la celulosa?
5. Cul es el pH ptimo de la actividad de la -amilasa?
BIBLIOGRAFA
PRACTICA NO. 12
Extraccin "casera" de ADN
(y comparacin con el protocolo normalizado)
OBJETIVOS DE LA PRCTICA
Que el alumno aprenda a hacer una extraccin de ADN en e laboratorio.
MATERIAL
Muestra vegetal
Agua (destilada o mineral)
Sal de mesa
Bicarbonato sdico
Detergente lquido o
champ
Alcohol isoamlico a 0C
Batidora
Nevera
Colador o
centrfuga
Vaso
Tubo de ensayo
Varilla fina
INTRODUCCION
Hasta casi la mitad del siglo XX una de las preguntas que mantena ocupados a
los investigadores en el campo de la Biologa Molecular y Celular era Qu
molcula posee la informacin gentica? La mirada apuntaba principalmente a dos
macromolculas: las Protenas y el ADN.
La molcula de ADN, por ese entonces, pareca demasiado simple para
encargarse de tamaa tarea, ya que estaba constituida por solo cuatro
componentes. El mismo Levene en la dcada del 20 haba aseverado que, como
las muestras de ADN estudiadas posean proporciones casi iguales de las cuatro
Bases nitrogenadas, el ADN deba comportarse como un tetranucletido, en el
cual los ramilletes de a cuatro nucletidos se repetan a lo largo de la molcula de
manera ms que montona. Una molcula tan montona y repetitiva no se
acercaba en lo ms mnimo a la idea de una verdadera portadora de la
informacin gentica.
Fue hasta la dcada del 50 que gracias a las experiencias y trabajos de Alfred D.
Hershey y su colega Martha Chase se pudo comprobar, a travs de estudios
realizados con virus Bacterianos, que la informacin gentica era portada por la
molcula de ADN.
El broche de oro lo constituye el trabajo realizado por James Watson y Francis
Crick quienes realizan el modelo del ADN que concordaba perfectamente con los
hechos conocidos y ayudara a explicar el papel biolgico de esta molcula. No
nos olvidemos que los dos jvenes investigadores contaban ya con una suma de
informacin ms que relevante e imprescindible para el armado del modelo. Entre
los datos ms importantes con los que contaban podemos rescatar:
Se saba que la molcula de ADN era muy grande, larga y delgada.
Compuesta por nucletidos que contenan las bases nitrogenadas
Adenina, Timina, Citosina y Guanina.
Linus Pauling (1950) haba demostrado que las cadenas de aminocidos
que componen las protenas estn dispuestas a menudo en forma de una
hlice y se mantienen con esa conformacin gracias a las uniones puente
de Hidrgeno que se forman entre los aminocidos de los distintos giros de
la hlice. Pauling haba sugerido que la estructura del ADN poda ser
semejante a la hlice que presentaban las protenas.
Los patrones de las fotografas del ADN, obtenidas hasta este momento,
reflejaban los giros de una hlice de grandes dimensiones.
Erwin Chargaff analiz el ADN y confirm que las cantidades de las Bases
Pricas eran iguales a las de las Bases Pirimdicas. En sntesis, las
cantidades de Adenina eran iguales a las de Timina y, las de Citosina se
correspondan a las de Guanina.
Con todos estos datos, Watson y Crick intentaron construir el modelo de ADN.
Para llevar la gran cantidad de informacin gentica el modelo deba considerar
dos aspectos fundamentales: ser heterogneo y variado. Armaron as el modelo
en hojalata y alambre y, como quien arma un rompecabezas, encajaron cada
pieza en su lugar.
A medida que armaban el modelo, se dieron cuenta que los nucletidos que
conformaban la molcula de ADN podan encajarse en cualquier orden. Dado que
la molcula de ADN posee miles de nucletidos de largo, la variabilidad y la
heterogeneidad estaban aseguradas, puesto que la combinacin de las bases se
volva incalculable.
Otra de las conclusiones a las que arribaron fue que la cadena posea una
direccin, ya que cada grupo fosfato est unido a un azcar en la posicin 5 (el
quinto carbono en el anillo de azcar) y al otro azcar en la posicin 3 (el tercer
carbono en el anillo del azcar). As la cadena tiene un extremo 5 y otro 3.
Lo interesante del trabajo fue el armado de la cadena complementaria. Las

Adeninas nicamente podan aparearse con las Timinas y las Guaninas con las
Citosinas. Pero, para que esto ocurra, la direccin de las cadenas deba ser
inversa. Es as como el extremo 5 se aparea con el 3, vale decir que ambas
cadenas son Antiparalelas.
Los estudios de Watson y Crick determinaron que la conformacin tridimensional
del ADN consiste en dos cadenas enrolladas de tal manera que se constituye una
doble Hlice. Las Bases Nitrogenadas estn agrupadas unas sobre otras
constituyendo lo que se conoce como Ordenamiento de Apilamiento.
Si la cadena gira conformando una hlice, debe de existir un eje de rotacin. El
mismo est conformado por las desoxirribosas que estn unidas entre s por una
molcula de Fosfato constituyendo entonces un enlace 3- 5 fosfodiester. Este eje
azcar - fosfato se encuentra en la parte externa de la molcula, mientras que las
Bases Nitrogenadas quedan dispuestas hacia el lado interno de la misma.
La doble hlice exige que cada una de las Bases Nitrogenadas de una cadena se
aparee en forma complementaria con la base de la otra cadena. Este
apareamiento tiene lugar mediante las uniones Puente de Hidrgeno que se
forman entre las mismas. Entre las Bases Adenina y Timina se forman dos
uniones Puente de Hidrgeno, mientras que entre la Guanina y la Citosina se
establecen tres uniones de la misma naturaleza. No esta dems aclarar que la
unin entre las Bases Citosina y Guanina ser, en consecuencia, ms fuerte que
la que se establece entre la Adenina y la Timina.
Replicacin del ADN

Una de las caractersticas ms notables del ADN es su capacidad de replicarse.
Vale decir que el ADN es capaz de formar copias de s mismo. El proceso de
autoduplicacin del ADN se lleva a cabo en el perodo S del ciclo celular. Esta
etapa es un paso previo obligado para realizar la divisin celular en la etapa M de
mencionado ciclo. Los genes deben poseer tres funciones principales, como
portadores del material hereditario:
Deben ser capaces, por medio de una replicacin fiel, de transmitir la
informacin gentica de generacin en generacin.
Deben contener la informacin necesaria para sintetizar todas las protenas
fundamentales para permitir el normal desarrollo de la clula.
Deben aceptar cambios ocasionales como forma de evolucin, es decir,
deber aceptar la capacidad de mutar.
La replicacin permite que el ADN sea capaz de cumplir con las funciones
anteriormente mencionadas. La rplica del material hereditario es un producto
directo de este proceso; la informacin para la sntesis de las protenas est
asegurada por medio de la replicacin y los errores en la replicacin posibilitan y
generan cambios que pueden llevar a la evolucin
La replicacin del ADN es Semiconservativa, puesto que las dos cadenas del
ADN sirven de patrn para la sntesis de las nuevas cadenas. Cada doble hlice
hija, producto del proceso de autoduplicacin, tendr una cadena recin
sintetizada (nueva) y otra cadena que, con anterioridad, formaba parte de la

molcula parental.
La replicacin se llevar a cabo en el ncleo de la clula eucariota, e intervendrn

una dotacin de enzimas que se encargarn de abrir la doble hlice, incorporar los
nucletidos y disminuir la tensin que se genere por delante de ella.
Enzimologa de la Replicacin:
Con el fin de esclarecer el proceso de replicacin, describiremos primero todas las
enzimas que intervienen y luego desarrollaremos el proceso en su conjunto.
ADN polimerasa: Es la principal enzima de este proceso. Ella es capaz de
sintetizar nuevas cadenas de ADN , a partir de una hebra patrn y las
unidades estructurales correspondientes (desoxirribonucletidos).
Los desoxirribonucletidos, para ser incorporados por esta, deben estar
trifosfatados. Es decir que se necesitarn dATPs, dGTPs, dTTPs y dCTPs,
para poder sintetizar las nuevas cadenas de ADN.
Otra de las
caractersticas principales de esta enzima, es que polimerizar los
nucletidos en la direccin 5a 3. Como consecuencia de esto, la direccin
en la cual leera la cadena patrn de ADN ser de 3a 5. Un rasgo a tener
en cuenta es que la ADN polimerasa NO puede iniciar su sntesis sin la
existencia de un cebador de ARN. No solamente polimeriza los nucletidos,
sino que se ha comprobado que es capaz de corregir los posibles errores
que se cometan durante la autoduplicacin.
Helicasas: Son las enzimas encargadas de separar las dos hebras del
ADN. Estas enzimas son responsables de la ruptura de las uniones puente
de Hidrgeno que se establecen entre las bases de las dos cadenas del
ADN. Para poder separar las dos hebras del ADN se necesitar energa,
que es obtenida de la hidrlisis del ATP. Por cada dos pares de bases que
separan, se gastan dos molculas de ATP.
Protenas estabilizadoras de la cadena: Una vez que las cadenas del ADN
son separadas, la estabilidad de las mismas disminuye considerablemente.
El ADN tiende a reasociarse y, son estas protenas quienes impiden que el
ADN vuelva a su conformacin inicial. Su presencia es fundamental para
mantener las cadenas estiradas.
Topoisomerasas: Al producirse la duplicacin, el ADN adquiere cierto grado
de superenrollamiento. Imaginemos que la molcula de ADN es como una
bandita elstica, a la cual le conferimos vueltas alrededor de su eje
longitudinal. Si ahora tomamos uno de sus extremos y separamos cada una
de sus partes veremos que, por delante de donde se produce la separacin,
la bandita adquirir una mayor tensin, plegndose sobre s misma. Lo
mismo ocurre con la molcula de ADN, si la Helicasa separa las cadenas
delante de donde se est produciendo la replicacin aumentar, en forma
ms que considerable, la tensin de la molcula. Para evitar esto, las
topoisomerasas cortan la doble hlice, rotan el ADN y vuelven a unirlo,
evitando as que aumente la tensin por delante de la horquilla de
replicacin. En consecuencia, encontraremos a las Topoisomerasas por
delante del lugar donde se est produciendo la duplicacin.
ARN polimerasa o Primasa: Esta enzima es la que sintetiza el cebador, un
primordio de ARN necesario para que la ADN polimerasa pueda iniciar la
sntesis de las nuevas cadenas. El cebador es una pequea porcin de
ARN de 10 a 12 ribonucletidos de largo que se mantendr unido a la
cadena de ADN molde hasta que sea removido.
Mecanismo de la Replicacin:
Ya dijimos que la duplicacin se llevar a cabo durante el perodo S del ciclo
celular y que es un proceso fundamental para que la clula pueda dividirse. El
ADN actuar como patrn, ya que la ADN polimerasa agregar los nucletidos de
las nuevas cadenas por complementariedad de bases. El lugar donde transcurre
la replicacin se denomina Horquilla de Replicacin, esta estructura tiene forma de
Y, y es la zona donde se sintetiza el ADN para formar las dos molculas hijas
(Ver figuras N 4 y 5). Las horquillas de replicacin se originan en una estructura
denominada Burbuja de Replicacin, una regin en la que las cadenas de la hlice
de ADN se separan una de otra, actuando como patrn para la sntesis de las
nuevas cadenas de ADN. Las zonas donde se producen las Burbujas de
replicacin no son aleatorias, se ha demostrado que existen secuencias de bases
que indican los lugares precisos donde la replicacin ha de comenzar. Cada
Burbuja de Replicacin posee dos Horquillas de Replicacin, una de las cuales se
desplaza hacia la derecha y otra hacia la izquierda.
La ADN polimerasa no es capaz de iniciar la sntesis a partir de los
desoxirribonucletidos libres, por lo tanto necesitar que la Primasa sintetice en
forma previa el Primer o Cebador. Una vez incorporado el Cebador, la ADN
polimerasa incorporar los nucletidos en forma complementaria a las bases de la

cadena patrn.
Una vez que la Horquilla avance, la tensin por delante de la misma aumentar,
para evitar esto las Topoisomerasas cortarn la doble hlice, la rotarn y volvern
a unirla.
Debido a la orientacin antiparalela del ADN, una de las cadenas de la horquilla de
replicacin quedar en sentido 3a 5, por lo cual la ADN polimerasa podr trabajar
en forma continua (recordemos que esta enzima lea en direccin 3a 5y
polimerizaba en direccin 5a 3).
Este proceso necesita, en primera instancia, que las dos cadenas del ADN se
separen. Para esto, las Helicasas se unirn a la cadena de ADN e hidrolizarn las
uniones Puente de Hidrgeno que las mantienen unidas. La consecuente apertura
de la doble hlice hace que las cadenas simples adquieran inestabilidad, esta es
compensada por la unin de las protenas estabilizadoras de la cadena simple. En
cambio, la otra cadena de la Horquilla, quedar orientada en la direccin inversa
(5a 3), por lo cual en cada Horquilla de Replicacin debern actuar al menos
dos ADN polimerasas. Una de ellas podr actuar en forma contnua, puesto que, a
medida que se abra la doble hlice se encontrar con el extremo 3 de la cadena
patrn, pudiendo as incorporar el nucletido correspondiente. En cambio, la otra
ADN polimerasa se encontrar, cuando la apertura de la doble hlice avance, con
el extremo 5 de la cadena patrn, por lo cual ser necesario incorporar otro
cebador de ARN para poder continuar la sntesis.
Una de las consecuencias de la sntesis Discontinua es que quedarn pequeos

fragmentos de ADN, de unos 100 a 200 pb, intercalados con los cebadores. A
estas porciones de ADN se los denomina Fragmentos de Okazaki, en honor al
cientfico que los describi por primera vez. En el caso de la cadena conductora
(la que se polimeriza en forma continua) es necesario la presencia de un solo
Cebador, en cambio, en la cadena retardada (la que se polimeriza en forma
discontinua) se necesita ms de un Primer.
Luego de terminada la sntesis de ambas cadenas, los Cebadores son removidos
por una enzima y la ADN polimerasa agrega los nucletidos faltantes. La enzima
denominada Ligasa, se encarga de unir ambos extremos del ADN.
FUNDAMENTO
La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los
iones salinos son atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su
disolucin y posterior extraccin de la clula. Se empieza por lisar (romper) las
clulas mediante un detergente, vacindose su contenido molecular en una
disolucin tampn en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampn
contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos,
protenas y otras sustancias en menor proporcin. Las protenas asociadas al
ADN, de gran longitud, se habrn fraccionado en cadenas ms pequeas y

eparado de l por accin del detergente. Slo queda, por tanto, extraer el ADN de
esa mezcla de tampn y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamlico,
probablemente el nico reactivo de esta prctica que no suele haber en una
cocina.
REALIZACIN
1. Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera
o en un bao de hielo triturado:
o 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua
del grifo.
o 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.
o 5 g de bicarbonato sdico.
o 5 ml de detergente lquido o champ.
2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que
pueda haber en la cocina (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en
cuadraditos.
3. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las
cuchillas a impulsos de 10 segundos. As se rompern muchas clulas y
otras quedarn expuestas a la accin del detergente.
4. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del
tampn fro y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar
despus los restos vegetales ms grandes del caldo molecular hacindolo
pasar por un colador lo ms fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja
velocidad 5 minutos y despus pipetear el sobrenadante.
5. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con pipeta 10
ml de alcohol isoamlico enfriado a 0C. Se debe dejar escurrir lentamente
el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo ste inclinado. El
alcohol quedar flotando sobre el tampn.
6. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la
separacin entre el alcohol y el tampn. Remover la varilla hacia delante y
hacia atrs y poco a poco se irn enrollando los fragmentos de mayor
tamao de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de
alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su estremo con el aspecto
de un copo de algodn mojado.
RESULTADOS
El producto filamentoso obtenido de la extraccin no es ADN puro ya que,
entremezclado con l, hay fragmentos de ARN. Una extraccin "profesional" se
realiza aadiendo enzimas que fragmentan las molculas de ARN e impiden que
se unan al ADN.

la prctica)
Describir los resultados que obtuviste
CUESTIONARIO
1.- Explica porque es importante el ADN
2.- Explica de qu forma puedes extraer ADN
3.- Explica en qu consiste la tcnica de RT-PCR
BIBLIOGRAFA
PRACTICA NO. 13
DETERMINACION DE CALCIO Y FOSFORO SALIVAL
Detectar la presencia de calcio y fsforo en la saliva y exaltar la importancia que
ello representa.
DESCRIPCIN
(por equipo)
MATERIAL QUE DEBE

TRAER EL ALUMNO

EL LABORATORIO
4 Tubos de ensaye
1 Gradilla
3 Pipeta graduada de 5 ml.
Acido ntrico concentrado
Molibdato de amonio al 5%
Oxalato de amonio al 5%
Tubo de ensaye con tapa (15 cm x 1.5 DI)
INTRODUCCION
Desde hace un tiempo atrs la odontologa se ha enfocado en el estudio de

materiales y tcnicas con las cuales se puedan prevenir futuros problemas
dentales y realizar tratamientos poco invasivos a la estructura dental.
Es normal, que el esmalte del diente se desmineralice gradualmente, debido a la
prdida de calcio y de iones de fosfato. Es el mantenimiento de la saliva, de
balance mineral y de pH oral, el que protege el medio oral y ayuda a prevenir la
destruccin del diente. El balance oral y mineral puede ser afectado, inclinndose
principalmente en favor a la desmineralizacin. Para compensar este desbalance
ocurre la remineralizacin, proceso en el que precipita el calcio, fosfato y otros
iones dentro o en la superficie del esmalte parcialmente desmineralizado.
El Fosfato de Calcio Amorfo (FCA), un sistema ideal de suministro de iones de
calcio y fosfato libremente disponibles, interviene en el balance de dicha
desmineralizacin y remineralizacin; previniendo caries o remineralizando las
incipientes, al expulsar calcio e iones de fosfato, que en proporciones adecuadas,
pueden formar el mineral de las estructuras dentarias.
Adems de remineralizador, el FCA aadido al perxido de carbamida produce

una reduccin significativa en la hipersensibilidad dentinaria durante y despus del
tratamiento. Ofrece un tratamiento adicional para casos de disfuncin salival;
erosin; fijacin de prtesis temporales; para el llenado del canal dental y en el
esmalte maltratado. Se utiliza como suplemento en chicles, enjuagues bucales,
dentfricos, pastas profilcticas y ltimamente en materiales de obturacin y tiene
por objeto reparar la prdida de mineral en ambientes cidos producida por
bacterias.
Desmineralizacin / Remineralizacin
Los dientes necesitan calcio, fosfato y flor. La saliva saludable contiene estos
minerales y junto con ciertas protenas salivales puede liberar bio-naturalmente
calcio y fosfato a la superficie del diente durante los procesos de
desmineralizacin / remineralizacin. El Calcio y el Fosfato influyen en el
fortalecimiento del esmalte dental, la reduccin de la sensibilidad y neutraliza la
acidez de la placa bacteriana.
El esmalte, est formado por varios prismas superpuestos uno al lado del otro y en
el interior de ellos se encuentran cristales de hidroxiapatita que corren a lo largo
de todo el trayecto de los prismas del esmalte. Es importante tener en cuenta el
papel de orientacin y la forma de estos cristales, porque es en esa zona donde
inicialmente se va a producir el ataque cido y la primera desmineralizacin de la
superficie dentaria para ir avanzando hacia la profundidad. Es normal, que el
esmalte del diente se desmineralice gradualmente. El balance oral y mineral
puede ser afectado por varias causas: Xerostoma, placa bacteriana, mala higiene
oral y malos hbitos dietticos. Todo esto puede inducir a que el equilibrio mineral
se pierda y el balance entre la remineralizacin y desmineralizacin, se incline
hacia la desmineralizacin. La primera respuesta del organismo es la accin de los
sistemas buffer, como la saliva y el lquido de la placa. La saliva suministra iones
de calcio y fosfato frescos, dndole otra vez su equilibrio y remineraliza el esmalte.
El sistema buffer va a ser capaz de amortiguar el bajo pH y llevarlo a uno ms
neutro.
As la desmineralizacin ocurre cuando los cidos entran en el esmalte, disuelven
los cristales de apatita y liberan iones de calcio y fosfato en la saliva lejos de la

superficie del diente. Con el tiempo, lleva a la destruccin de la infraestructura del
esmalte y la destruccin comienza, vindose en forma de manchas blancas.
Al examinarse la superficie del esmalte producto de esta desmineralizacin inicial,
se observa que presenta cambios desde el punto de vista estructural, el esmalte
adopta un aspecto moteado dado principalmente por el aumento en el tamao de
los poros y el incremento en el tamao de los espacios interprismticos; la
superficie presenta un aspecto diferente a lo normal, no visible al ojo humano slo
mediante microscopia electrnica, es decir, son cambios superficiales iniciales a
nivel molecular.
La Remineralizacin es un proceso de precipitacin del calcio, fosfato y otros
iones en la superficie o dentro del esmalte parcialmente desmineralizado. Los
iones pueden proceder de la disolucin del tejido mineralizado, de una fuente
externa o una combinacin de ambos. La deposicin inicial de los minerales
ocurre cerca o en la capa externa de la lesin. El compuesto mineral que se
deposita inicialmente es una forma soluble, al transcurrir el tiempo los minerales
son transferidos dentro de la lesin y eventualmente depositados en forma de
compuestos insolubles, en la parte ms profunda del cuerpo de la lesin.
La remineralizacin completa de la superficie, impide la formacin de cristales en
las microcavidades ms profundas; dando como resultado una superficie
hipermineralizada de esmalte, que retarda el efecto cariognico transitorio y
mantiene el potencial de remineralizacin de la unidad estructural.
Durante el proceso carioso hay liberacin de calcio (Ca2+) y fsforo (PO43-), iones
que en forma soluble van a dar a la saliva (desmineralizacin del diente); pero as
mismo, en la saliva procede un intercambio que reincorpora el calcio y el fsforo al
diente, reconstruyendo los cristales que haban sido disueltos (remineralizacin del
diente).
Esto hace pensar que en el proceso carioso puede representarse por un modelo
aritmtico:
Acidez (mayor)
_____________________
=
Caries
Calcio + Fsforo
Calcio + Fsforo
______________________
caries
Acidez (menor)
Restauracin del proceso
Determinacin de calcio (Ca2+)
A 2 ml de saliva filtrada, adicionar 2 ml de la solucin de oxalato de amonio. Si hay calcio
suficiente, se formar un precipitado blanco.
Esta reaccin es muy lenta, as que el tubo se deber dejar reposar durante 15 minutos,
antes de hacer cualquier conclusin.
Ca2+ + (NH4)2C2O4 CaC2O4 (precipitado blanco).
Determinacin de fsforo (PO43-)
Colocar en un tubo de ensaye 2 ml de saliva filtrada mas 0.5 ml de cido ntrico
concentrado y 2 ml de molibdato de amonio. Al haber fosfatos, aparecer un precipitado
fino de color amarillo.
H2PO4- + 12 MoO42- + 3 NH4+ + 22 H+ 34 H2O + (NH4)PO412MoO3 (precipitado
(ac. ntrico)
amarillo)
Interpretacin de los resultados
Casi seguramente al aplicar los dos procedimientos en salivas filtradas y frescas, habr
reaccin positiva, con lo cual se aprecia que la saliva posee ambos elementos, incluso a
un nivel de alta concentracin.
SISTEMA DE CALIFICACION (Puntos
evaluacin de la prctica
de
consideracin
para
la
1.- Por qu es necesario filtrar la saliva?

2.- Por qu se emplea el cido Ntrico para la reaccin con fsforo?
3.- Explicar el proceso carioso
4.- Explicar la relacin entre calcio y fsforo en el proceso carioso.
BIBLIOGRAFIA
Lazzari E. (2008). Bioqumica Dental. Ed. Interamericana. Mxico.
Williams R, Elliot J. (2008).Bioqumica Dental Bsica y Aplicada. Ed. El

Manual Moderno. S. A. Mxico, DF.
PRACTICA NO. 14
PRINCIPALES COMPONENTES DE LOS DIENTES
Determinacin de magnesio y fosfato en los dientes.
DESCRIPCIN
(por equipo)
MATERIAL QUE DEBE

TRAER EL ALUMNO

EL LABORATORIO
1 Embudo de vidrio
1 Pipeta graduada de 5 ml.
1 Papel filtro
Acido ntrico diluido.
1 Matraz erlenmeyer de 250 ml.
4 Tubos de ensaye
1 Gradilla.
1 Diente.
Molibdato de amonio al 5%
NaOH al 30%
Acido actico conc.
INTRODUCCIN
COMPOSICION QUIMICA DEL DIENTE
Un diente asido constituido y formado por un individuo gentico y bioqumico nico
por ello puede ser tan variado como la naturaleza lo permita. Cuando se hace eL
anlisis de un diente es preciso tomar en cuenta:
los efectos de la dieta

La posicin de la boca
localidad geografa edad
estado del diente
historia clnica del individuo del que proviene
El anlisis del diente nos permite ver los componentes orgnicos e inorgnicos del
diente.
COMPONENTES INORGANICOS:
Entre ellos tenemos:
CALCIO Y FOSFORO.Generalmente se encuentran bajo la forma de mineralhidroxiapatita.
El calcio y el fosforo es algo ms bajo en el diente cariado que en un diente sano.
CARBONATO: tiene un cuadro de distribucin inversa aumentando en una curva
ascendente desde la superficie del esmalte hacia la unin dentina esmalte.
MAGNESIO: se halla en proporcin menor en la superficie del esmalte que en el
seno mismo.
FLUOR: se atribuye a la inhibicin de las caries por concentraciones relativamente
altas en la capa del esmalte.
CLORURO:
el cloruro muestra una disminucin gradual desde la superficie delesmalte hasta la
unin dentina esmalte.
ESTRONCIO: ocurre antes de la erupcin del diente y probablemente antes de la
erupcin.
VANADIO: componente esencial para la vida. Estimula la mineralizacin de
huesos vivientes y es altamente protectora contra la caries.
PLOMO: Es altamente nocivo. El 85% que es ingerido se absorbe en los tejidos
calcificados y se acumula especialmente en los dientes temporarios del nio.
COMPONENTES ORGANICOS.CITRATO: Se encuentra en mayor concentracin en el esmalte y en la unin

dentina esmalte.
LACTATO: el lactato sigue el mismo cuadro de distribucin que el citrato, y es
posible que ambos estn situados primariamente en el esmalte.
NITROGENO: La concentracin de nitrgeno puede usarse como medida de la
cantidad de materia orgnica en reas del diente
PROTEINAS:
La
dentina tiene
aproximadamente 22%
de protenas que
es 100 tanto mas que el contenido hallado en el esmalte, una muestrea de
esmalte contaminada con tan solo 1% de dentina o esmalte con 99% de pureza tendr
cantidades iguales de protenas, dentina y de esmalte.
CARBOHIDRATOS: numerosos anlisis efectuados en el esmalte dental nos
indican que las aldosas presentes de mayor significacin son: la galactosa,
glucosa, manosa, xilosa, ramnosa en indicios.
LIPIDOS: tinciones histolgicas han demostrado que varios grnulos observados
en el citoplasma y prolongaciones perifricas de los odontoblastos contienes
mayormente lpidos.
Composicin inorgnica de los dientes:
SUSTANCIA
COMPOSICIN (%)
H2O
Ca
P
Mg
CO2
Ca/P
8.98
35.2
16.8
0.32
3.45
2.1 (diente sano).
1.97 (diente cariado).
El tejido dentinario est conformado por cristales de hidroxiapatita, cuya frmula

general es: Ca10(PO4)6(OH)2
Ensayo para la determinacin de magnesio y fosfato
Colquese un diente en un vaso de precipitados, agrguese 20 ml de cido ntrico
diluido. Djense en contacto durante toda la noche o bien hasta la siguiente sesin de
laboratorio.
Se disolvi la mayor parte del diente?
Qu parte del diente se esperara que no se disolviera?
Tome 5 ml de la solucin de la disolucin del diente y agrguese solucin de

hidrxido de sodio hasta que la solucin sea alcalina (prubese con papel
Litmus)
Se forma un precipitado?
De qu color es el precipitado?
Un precipitado blanco-amarillento indica que se ha formado fosfato amnico

magnesiano (MgNH4PO4)
De dnde procede el magnesio de este compuesto?
Filtre la solucin y deseche el filtrado.
Lvese el residuo que est en el papel filtro con 5 ml de cido actico y colecte
el nuevo filtrado en un tubo de ensaye.
Tome 1 ml del filtrado lavado con cido actico y hgase la prueba para
determinar fosfatos, agregando unas gotas de cido ntrico y 1 ml de solucin de
molibdato de amonio. Calintese suavemente.
Cul fue el resultado?
Todo el fosfato se encuentra combinado con el magnesio? Porqu

la prctica).
1.- Cules son los elementos ms importantes que forman el diente ?
2.- En qu forma encontramos el calcio y el fsforo en el esmalte dentario?
3.- Cmo son los elementos ms importantes que forman el diente?
4.- Explicar porqu se disuelve el diente en el cido.
5.- Cmo relacionara los resultados con un proceso carioso?
BIBLIOGRAFIA
Lazzari E. (2008). Bioqumica Dental. Ed. Interamericana. Mxico.
Williams R, Elliot J. (2008).Bioqumica Dental Bsica y Aplicada. Ed. El
Manual Moderno. S. A. Mxico, DF.

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GUA DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE

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La Bioqumica es el estudio de la base molecular de la vida. Existe un gran inters y

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUMICA

Semestre en que se imparten

Nmero de horas de ejecucin de la prctica del laboratorio / taller

OBJETIVO GENERAL DEL LABORATORIO

REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA

8. No deber olfatear y/o probar reactivos o soluciones. No se debe mirar nunca el

RECOMENDACIONES PARA TENER XITO EN LAS PRCTICAS

Soporte universal, anillo de fierro, rejilla de asbesto, pinzas para bureta,

Frasco de reactivos, vaso de precipitados, matraz Erlenmeyer, frasco

Pipetas, buretas, probetas, matraz aforado o volumtrico

Mechero Bunsen, matraz Kitazato, embudos, vidrio de reloj, cpsula de

Refractmetro, colormetro, microscopio, polarmetro

Puntos de fusin muy altos

El material comnmente utilizado es el siguiente:

MATERIALES E INSTRUMENTAL POR EQUIPO

MATERIAL QUE DEBE

2 Vaso de precipitados 100 ml.

1 Pinzas para bureta

1 Pinzas para tubo de ensaye

1 Probeta de 100 ml.

1 Matraz Erlenmeyer de 250 ml.

1 Matraz aforado de 100 ml.

1 Pipeta volumtrica de 10 ml.

4. Pesar 1 g de carbn activado y mezclarlo con 50 ml de agua de la llave en un vaso de

1. Cul es la clasificacin del material de laboratorio?

SISTEMA DE CALIFICACIN (Puntos de consideracin para la evaluacin de la

Incluir en el reporte el siguiente cuestionario

MATERIAL QUE DEBE

MATERIAL QUE PROPORCIONA

Detergente lquido y en polvo

Hojas de papel tamao carta

Figura 1.- La forma casi esfrica de

a) El metal puede flotar

SISTEMA DE CALIFICACIN (Puntos de consideracin para la evaluacin de

3. Por qu es importante conocer la tensin superficial?

MATERIAL QUE DEBE

MATERIAL QUE PROPORCIONA

3 Vasos de precipitados 100 ml.

2 matraces volumtricos de 100 ml.

CH3 COOH conc.

Leche, jugo, refresco, etc.

Densidad p = 1.05 g/cm3

1. Defina mol y equivalente qumico.

Las disoluciones o soluciones son mezclas homogneas de sustancias en iguales

(con reaccin qumica)

Si la primera solucin se evapora o seca, se obtiene NaOH e hidrgeno gaseoso.

1. El cambio de energa, puede ser de tipo exotrmico o endotrmico (calor de

Al aadir 40 gramos de agua quedaran 4 g de sal sin disolverse.

b) Normalidad. Es otra de las unidades de concentracin ms usadas en

c) MOLALIDAD.- Tambin es una unidad de concentracin qumica cuya

La molalidad suele calcularse a partir de la concentracin del soluto % (p/p).

d) Fraccin molar.- La fraccin molar de un soluto (XA) se define como los

La fraccin molar tambin se determina a partir de la concentracin del

MATERIALES E INSTRUMENTAL POR EQUIPO

MATERIAL QUE DEBE

MATERIAL QUE PROPORCIONA

3 Vasos de precipitados 100 ml.

2 matraces volumtricos de 100 ml.