Herramientas de Trabajo

Identificacin de Anticuerpos
Nancy Benitez
E?

S?

K?

C
?

Objetivos..
Tecnicas a seguir
para la identificacion
de anticuerpos.
AplicacionesResolucion de
casos.

Proporcionar
sangre compatible.
Su participacion.
2

Pruebas pre-transfusionales .
Globulos Rojos
Anti-A
0

Anti-B
0

Plasma
Anti-D
3

A1 cells B cells
4

Puebla de rastreo-pantallas:
R1R1: DCe/DCe
R2R2: DcE/DcE
rr: dce/dce
Duffy, Kk, MNSs, Kidd

RESULTADOS SEROGICOS
INEXPERADOS

Anticuerpos
Positivos
Prueba cruzada
incompatible.
Resultados entre la
prueba celular y
srica no
concuerdan.

Retardan la
terapia
transfusional

% DE IMMUNIZACION
%

Rate

60
50

40
30
20

10
0
Warm auto

Sickle cell
From%

Myelodisplatic Overall hospital

Thalasemia

To %
5

Caja de Herramientas Problemas

serologicos.
ABO-Rh
Pruebas Rastreo
Fase slida, Gel,
Tubo (anti-IgM, IgG)

Coombs Directo o
Auto Control.
Sustancias quimicas.
Fenotipo o Genotypo.
D+C-E-c+e+; Fy(a-b+); K1-

Informacion Relevante (pistas)

Embarazos
Historia de transfusiones
Diagnostico
Medicamentos
Raza
Edad
Hgb
Alo-Anticuerpos (Hx)

Paciente: Femenina, 39, 2 para

5 meses de
embarazo
Ultimo bebe, muy
icterico.
Accidente de moto
cuando tenia 18 anos.
ABO: O Pos
Seguimiento prenatal

Pruebas de rastreo y ABO-Rh

3
C
Kp Kp Js Fy Fy Jk Jk
Le Le Lu Lu Xg IS 7 AGH PEG
D C c E e V w K k a b Jsa b a b a b M N S s P1 a b a b a
C
Rh

Kell

Duffy

Kidd

MNSs

Lewis

Lu

I R1 + + 0 0 + 0 0 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 0 + + 0 + 0 + 0 + 0 0 0 0
II R2 + 0 + + 0 0 0 0 + 0 + 0 + + + 0 + + 0 + + + 0 + 0 + + 0 0 1+
III rr 0 0 + 0 + 0 0 + + 0 + 0 + + 0 0 + 0 + 0 + + + 0 0 + + 0 0 2+

0
2
2+

O Pos
9

Protocolo de su laboratorio. Por favor

comparta con nosotros
1. Correr panel comercial
completo
2. Preparan su propio
panel con donantes
conocidos.
3. Hacen un panel
limitado de acuerdo al
fenotipo
4. Utilizan pruebas de
rastreo como panel.
10

Initial Panel Correr un panel- Determinar especifidad del

anticuerpo(s) y la importancia clinica.
Rh

MNSs

Cw M

Lewis

Kell

Duffy

P1 Lea Leb

k Fya Fyb

Kidd
Jka

Jkb

AGH-PEG

rr

rr

+vw 0

r'r

3+

r"r

3+

rr

+vw 0

R or

2+

R 1R 1 +

NT

+w

2+

R 1R 1 +

NT

2+

R1R
+
1w

NT

10

R 2R 2 +

NT

11

Auto
C

2+
2+

2+

2+
3+

11

PeG

(HO-(CH2CH2O)n- CH2CH2OH
Polimero lineal que
desplaza al diluente y
aumenta la
concentracion del
Anticuerpo.
Aumenta la
sensibilidad del
anticuerpos(Rh, Duffy,
Kidd)
Lectura en la fase de
Coombs.
12

Fenotipo:Fenotipo..Fenotipo!
O Genotipo- lo antes posible

C E

e M N S

s K Fya Fyb Jka Jkb

+ 0 0 + + + 0 + 0 0 + 0 +

13

Initial Panel Correr un panel- Determinar especifidad del

anticuerpo(s) y la importancia clinica.
Rh

MNSs

E c

Cw M

Lewis

Kell

Duffy

P1 Lea Leb

k Fya Fyb

Kidd
Jka

Jkb

AGH-PEG

rr

rr

+vw 0

r'r

3+

r"r

3+

rr

+vw 0

Ror

2+

R 1R 1 +

NT

+w

2+

R 1R 1 +

NT

2+

R1R
+
1w

NT

10 R2R2 +

NT

11

Auto
C

0 0

2+
2+

2+

2+
3+

14

Analizemos los resultados

1. El paciente tiene uno
ms aloanticuerpos
2. El paciente tiene alos mas
autoanticuerpos
3. Mandemos el caso a otro
laboratorio y
transfundimos sangre
compatible.
4. Es un anticuerpo de alta
incidencia.
15

Initial Panel Correr un panel- Determinar especifidad del

anticuerpo(s) y la importancia clinica.
Rh
1

rr

rr

r'r

r"r

rr

Ror

c
+
+
+
+
+
+

MNSs
e

Cw M

Kell

Lewis
b

P1 Le Le

+
vw

Kidd
Duffy
Fya Fyb Jka Jkb
+ + + 0

2+

3+

3+

2+

2+

2+

2+

vw

R1R1 +

NT

R 1R 1 +

NT

NT

+
+
+

NT

R1R
+
1w
10 R2R2 +
Auto
11
C

0 0

2+

Fase Solida

2+
3+

3
C
K K Js Js Fy Fy Jk Jk
Le Le Lu Lu Xg IS 7
D C c E e V w K k pa pb a b a b a b M N S s P1 a b a b a
C
Rh

Kell

Duffy

Kidd

MNSs

Lewis

Lu

I R1 + + 0 0 + 0 0 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 0 + + 0 + 0 + 0 + 0 0
II R2 + 0 + + 0 0 0 0 + 0 + 0 + + + 0 + + 0 + + + 0 + 0 + + 0
III rr 0 0 + 0 + 0 0 + + 0 + 0 + + 0 0 + 0 + 0 + + + 0 0 + + 0
AC
0

0
0
0
0

AG
H

PEG

0
1+
2+
0

0
2+
3+
0

16

Panel selectivo con celulas tratadas con Enzymas -

Rh
D C

MNSs
e

f Cw M N S

P Lewis Kell Duffy Kidd

s P1 Lea Leb K

k Fya Fyb

Jka

Jkb

rr

0 0 0 + + + 0 + 0 + 0 + + 0 0 + + + + 0

R1R1

+ + 0 0 + NT 0 + 0 0 + +w + 0 0 + + 0 + 0

R1R1

+ + 0 0 + NT 0 + + + + 0 0 + + + + + 0 +

Ficina
AGH-PEG
2+
0
2+

17

Efecto
de las
enzimas

18

Uso de Enzymas proteoliticas/celulas

Ficina-Papaina
Bromelina

Usos especiales y no de
rutina.
Aumenta la reaccion de
anticuerpos debiles (Rh,
Kidd, Lewis)
Aumenta la deteccion de
anticuerpos frios
Remueve las cargas
negativa de la
membrana.
Ayuda en la deteccion de
anticuerpos mezclados.
19

Efecto enzymatico en antigenos de los

Globulos Rojos

20

Interesante

21

CE
Adolescente de 14 aos transferido a un
hospital universitario
Diagnstico: Abscesos en piel mltiples
Refractario a antibiticos

Anmico
Hemoglobina: 6 g/dL
2 unidades de GR solicitadas para
transfusin.
Historia de transfusiones multiples.
22

ABO-Rh Determinacin O Pos

TIPO DIRECTO

TIPO INVERSO

ANTI-A

ANTI-B

ANTI-D

A1 CELLS

B CELLS

23

Rastreo de Anticuerpos
LISS Screen
Rh
I
II
III

R1R1
R2R2
rr

IV

AC

D
+
+
0

C
+
0
0

c
0
+
+

Kell
E
0
+
0

e
+
0
+

Cw
0
0
0

K
0
+
0

k
+
+
+

Duffy

Kpa Kpb Fya

0
+
+
0
+
+
0
+
0

Fyb
+
0
+

Kidd
Jka
+
+
0

Jkb
0
+
+

MNSs
M
+
0
+

N
+
+
0

S
+
0
0

P
s
0
+
+

P1
+
+
0

Lewis
Lea
+
0
0

Lu

Leb Lua Lub

0
0
+
0
0
+
+
0
+

IS

37 C IAT

4
4
4

4
4
4

4
4
4

24

Panel Inicial - LISS

1
2
3
4
5

rr
rr
r'r
r"r
rr

D
0
0
0
0
0

Ror

C
0
0
+
0
0

E
0
0
0
+
0

Rh
c
+
+
+
+
+

e
+
+
+
+
+

f
+
+
+
+
+

Cw
0
0
0
0
0

M
+
0
+
+
+

MNSs
N
S
0
+
+
0
0
+
0
+
+
+

s
0
+
+
+
+

P
Lewis
P1 Lea Leb
+
+
0
vw
+
0
+
+
0
+
+
0
+
vw
+
0
+

K
0
+
0
0
0

k
+
+
+
+
+

+
w

Kell

Duffy
Fya Fyb
+
+
+
+
0
+
+
0
+
0

Kidd
b
Jka Jk
+
0
0
+
+
0
+
+
0
+

IS 37C
4
4
4
4
4

4
4
4

R1 R1

NT

R1 R1

NT

NT

NT

R1R1

10

R2 R2

11

R2 r

vw

IAT
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4

Autocontrol
negativo

25

Problemas para resolver

Pnel que reacciona
con todas las
clulas que estn
siendo evaluadas
Reacciones con la
misma fuerza en
todas las fases
Encontrar sangre
compatible
26

Resolucin:
1. Hacer un pnel con clulas
fenotpicamente
concordantes?
2. Hacer un pnel con clulas
seleccionadas?
3. Seleccionar clulas
negativas para antgenos de
alta incidencia?
4. Hacer un panel usando
tecnica de precalentamiento.

27

Revisemos el fenotipo del paciente

c e

0 + +

Fya

Fyb

Jka

Jkb

Clulas fenotpicamente concordantes

vs plasma

Cells #

Rh
D

345

Kell
E

e Cw K

Duffy

Kidd

MNSs

k Kpa Kpb Fya Fyb Jka Jkb M N

P
s

Lewis

Lu

All
phases

P1 Lea Leb Lua Lub

+ + + 0 + 0 0 + 0 + 0 + 0 + + + + + + + 0 0 +

4+

29

Cul es el siguiente paso:

1. Evaluar el plasma del
paciente con enzimas y
con clulas tratadas con
DTT?
2. Seleccionar pnel de
clulas negativas para
antgenos de alta
incidencia?
3. Realizar adsorcinelusin para descartar
aloanticuerpos
subyacentes?
4. Remitir el caso?

30

Ficin
Rh

Kell

Duffy

Kidd

MNSs

Lewis

Lu

Ficin
IgG

Cw

Kpa

Kpb

Jsa

Jsb

Fya

Fyb

Jka

Jkb

P1

Lea

Leb

Lua

Lub

II

III

0.2 M DTT
Rh

Kell

Duffy

Kpa Kpb Jsa

Jsb

Fya Fyb

Kidd

MNSs

Lewis

Lu

Jka

Jkb

P1

Cw

R1R1

R2R2

rr

Lea Leb Lua Lub

0.2 M DTT TTD

PEG IgG

4
4
4

31

32

Testing
Como tanto ficin como 0.2M DTT no
reaccionaron: se descarta: MNS; Ge2,
Ge4;Ch/Rg; Indian; JMH; Cromer; Knops;
Lutheran; Dombrock;; Yt; Kell(system);
LW; Scianna;

Todava se sospechan: ABO; I, i, Vel,

P1pk, Lewis.
Rh, Diego; Co; P; Ata; Lan..
33

Revisemos el fenotipo del paciente

c e P

0 + + +

S s

+ +

Lea Fya

0 +

Fyb

Jka

Jkb

H
0

Clulas hh (Bombay)

Rh

II
III

hh
hh

Kell

Duffy

Kpa Kpb

Cw

Kidd

MNSs

Lewis

Lu

IAT

Fya

Fyb

Jka

Jkb

P1

Lea

Leb

Lua

Lub

35

Discusin Fenotipo Bombay

Incidencia

Taiwan 1:8,000
India 1:10,000
Japn 1:150,000
Europa 1:1 milln

Relevancia
IgM>>IgG
Acute hemolytic
transfusion reaction
HDN (IgG)
www.free-stock-illustration.com 08/15
36

Discusin
Defecto de la Adhesin Leucocitaria
Tipo II
Sndrome autosmico recesivo raro
Ausencia de carbohidratos fucosilados que
actan como ligandos
Rolling de clulas hematopoyticas defectuoso
Los GRs carecen de los antgenos A, B y H

Cuadro Clnico
Retraso mental y del crecimiento
Infecciones recurrentes
Grupo de sangre Bombay
N Engl J Med. 1992;327(25):1789
Blood. 2003;101(5):1705

37

Encontrar Sangre Compatible.

GRs y Granulocitos
1. Llamar a los OB IRL
labs?
2. Evaluar familiares?
3. Contactar al
Programa Americano
de Donantes Raros
4. Evaluar donantes
mltiples?

38

Otras opciones remover los GRs de

donantes de sangre estndar
Sedimentacin por
Gravedad
Sistema de
Separacin Celular
Sepax Aprobado para
clulas
mononucleares pero
no para granulocitos.

Transfusion 2010; 50: 1203-09

39

Granulocitos por Sedimentacin por

Gravedad

40

Granulocitos por Sedimentacin por

Gravedad

41

Granulocitos por Sedimentacin por

Gravedad

42

43

Caso 3

Mujer, 63 anos
Diagnostico: Mieloma multiple.
Multitransfundida
Raza: Blanca
3 unidades de sangre fueron solicitadas
para una histerectomia de rutina

ABO-Rh: B Pos

Panel
1 R1wR1
2 R1R1
3 R2R2
4 Ror
5 r'r
6 r''r
7 rr
8 rr
9 rr
10 rr
AC Ror

Rh
D
+
+
+
+
0
0
0
0
0
0
+

C
+
+
0
0
+
0
0
0
0
0
0

c
0
0
+
+
+
+
+
+
+
+
+

E
0
0
+
0
0
+
0
0
0
0
0

e
+
+
0
+
+
+
+
+
+
+
+

Kell
K
0
+
0
0
0
0
+
0
0
+
0

Duffy
k Kpa
+ 0
+ 0
+ 0
+ 0
+ 0
+ 0
+ 0
+ 0
+ 0
+ 0
+ 0

Kpb
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+

Fya
+
0
+
0
+
+
0
+
+
0
0

Kidd
Fyb
+
+
+
0
+
+
+
0
0
+
0

Jka
+
+
0
+
+
0
+
+
+
0
+

Jkb
+
+
+
0
+
+
0
0
+
+
0

P MNS
P1 M
+ +
+ +
+ +
+ 0
0 +
+ +
+ +
0 +
0 +
0 +
+ 0

N
+
+
0
+
+
+
+
+
+
0
+

S
0
0
+
+
0
0
+
0
0
0
0

s IS
+ 0
+ 0
+ 0
+ 0
+ 0
+ 0
0 0
+ 0
+ 0
+ 0
+ 0

IAT
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1

45

Resolucin:
1. Hacer un pnel con clulas
fenotpicamente
concordantes?
2. Usar panel de ficina o DTT.
3. Referir el caso a un
laboratorio de referencia.
4. Hacer un panel usando
tecnica de precalentamiento.

46

Celulas de rastreo tratadas con DTT

Rh

Kell

Duffy Kidd

MNSs

P Lewis

Lu
AGH

Kp Kp
D C c E e V Cw K k

Fy
Jsa

Jsb

Fyb Jka Jkb M N S s P1 Lea Leb Lua Lub

Xg
a

I R1 + + 0 0 + 0 0 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 0 + + 0 + 0 + 0 + 0

II R2 + 0 + + 0 0 0 0 + 0 + 0 + + + 0 + + 0 + + + 0 + 0 + +

III rr 0 0 + 0 + 0 0 + + 0 + 0 + + 0 0 + 0 + 0 + + + 0 0 + +

47

Medicamentos
Daratumumab
(DARA)
Anticuerpo antiIgG 1k reacciona
con CD38
receptors.
Panagglutinacion

CD38

48

Medicamentos
Quimico DTT
Destruye los
receptores de
CD38.
Plasma se evalua
con las celulas
Rojas tratadas con
DTT.

CD38

49

Mas tecnicas utiles para la identificacion de

anticuerpos
Tratamientos Quimicos
DTT
Ficina

Bromelina

Potenciadores

PEG
Liss
Otros:
Neutralizaciones

Titulaciones

Absorciones

50

Especificidad del anticuerpo

Importancia Clinica
Tipo de
Immunoglobilina

# de Donantes
para conseguir
sangre compatible

Evitar reaccion
transfusional
retardada

Cuidado
Prenatal
51

Comunicacion.
planeen y trabajen en
anticipacin.
La comunicacin
entre el equipo
mdico y el proveedor
de sangre es crucial
para prevenir
complicaciones
adicionales.

52

Biblia de la inmunohematologa

53