Universidad del Valle

de Toluca
Licenciatura: Nutricio y diettica

PRACTICA No. 5
PREPARACIN DE PLACAS PARA OBSERVACIN EN
MICROSCOPIO
Materia: Microbiologa de los alimentos

Maestra: Lic. Martha Lucia Rodrguez.

Alumna: Celia Monszerrat Aguirre Benancio.

Grupo: 51

Fecha: 25 de septiembre del 2015.

Calificaci
n

Introduccin
Procedimien
to
Resultados
Conclusin
Cuestionario

Bibliografa

INTRODUCCIN
La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en
bacteriologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras clnicas.
El cristal violeta (colorante catinico) penetra en todas las clulas bacterianas (tanto
gram positivas como gram negativas) a travs de la pared bacteriana. El lugol es un
compuesto formado por (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio),
los cuales estn presente para solubilizar el yodo, y actan de mordiente, haciendo que
el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana. El entra
en las clulas y forma un complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta..
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin, ya
que en la misma es soluble el complejo cristal violeta. Los organismos gram positivos
no se decoloran, mientras que los gram negativos s lo hacen.
Para poner de manifiesto las clulas gram negativas se utiliza una coloracin de
contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina.
Despus de la coloracin de contraste las clulas gram negativas son rojas, mientras
que las gram positivas permanecen violetas.
Preparaciones en fresco:
La forma ms simple de preparar un espcimen para su examen microscpico es hacer
una preparacin en fresco. Existen dos tcnicas, una preparacin en fresco simple
("entre porta y cubre") consiste en colocar una gota de lquido con los microorganismos
sobre un portaobjetos y a continuacin cubrirla con un cubreobjetos. Una preparacin
en gota pendiente se realiza colocando una gota del material en un cubreobjetos y
cubrindolo con un portaobjetos (invertido) con una excavacin central (portaobjetos
excavado). Hay que sellar la preparacin con vaselina alrededor de la excavacin. La
ventaja de esta ltima tcnica, es que la preparacin no se seca y puede ser observada
durante un tiempo ms largo.
Las preparaciones en fresco se utilizan para observar microorganismos vivos.
PROCEDIMIENTO
-Colocar una gota de agua en el portaobjetos
Con el asa estril esperar a que se enfre y frotar la colonia y mezclar con una gota de
agua.
-Colocar un cubreobjetos sobre la preparacin y despus observar.

Para la
Tincin Gram
1 Colocar en el portaobjetos una pequea gota de aga y tomar con el asa estril una
colonia y disolverla en el agua del portaobjetos
4.3 Dejar el portaobjetos cercano al mechero hasta que haya evaporado un poco el
agua

4.4 Cubrir la muestra con una gota de cristal violet y dejarlo por un minuto y lavar con
agua
4.7 Colocar una gota de lugo y 8dejar por un minuto y lavar con agua
4.10 Colocar una gota de mezcla acetona-alcohol dejar por 5 segundos y enjuagar con
agua
4.12 Colocar una gota de safranina y dejar por un minuto y lavar con agu y dejar secar
la muestra.
RESULTADOS
En la preparacin en fresco no se observaron muy bien los microorganismos. En la de
gram hubo una mancha morada y se tieron de azul violeta.
ANLISIS DE RESULTADOS
En la preparacin en fresco no se observaron por que la colonia mostraba un moco y
ya estaban muertos los microorganismos, tambien esto paso en la tincin de gram y
ademas en la tincin no funciono muy bien porque los microorganismos estaban muy
juntos.
CONCLUSION
Para poder ver bien los microorganismos necesitamos analizar las colonias en poco
tiempo porque aunque estn en un medio de cultivo llegan a morir los
microorganismos.

CUESTIONARIO

BIBLIOGRAFIA
https://es.m.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_negativa

CUESTIONARIO

Qu significa que una bacteria sea Grampositivo:

-Son aquellas bacterias que se tien de azul oscuro o violeta por las tincin de gram .o
Por qu hay tincin del color que has mencionad:
-La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende la membrana
citoplasmtica y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglucano,
que rodea a la anterior. La pared celular se une a la membrana citoplasmtica mediante
molculas de cido lipoteicoico. La capa de peptidoglicano confiere una gran
resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tincin de
Gram.o
Qu significa que una bacteria sea Gram negativ:
-Se denominan bacterias Gram negativas aquellas que no se tien de azul oscuro o de
violeta por la tincin de Gram, y lo hacen de un color rosado tenue: de ah el nombre de
"Gram negativas" o tambin "gramnegativas".o
Por qu hay tincin en el color que has mencionad:
-A diferencia de las Gram-positivas, las Gram-negativas presentan una segunda
membrana lipdica externa a la pared celularo
En qu casos es til una preparacin en fresc:
-Para observar a los microorganismos vivos y su movilidad en un medio acuoso. o
Para qu sirve el lugol en una tincin Gra
-Para fijar con mayor intensidad a la pares de la clula de la bacteria el cristal de
violeta. m