1. Cules son los fundamentos en los que se basan las tcnicas espectrofotomtricas?

La medida de la cantidad de luz absorbida por una solucin de una especie absorbente, es
el fundamento en que se basan las tcnicas de Espectrofotometra.
La tcnica de basa en la absorcin de la luz por parte de los tomos vaporizados en estado
de reposo. El espectro de absorcin de un tomo es muy estrecho (corto), recibe el nombre
de espectro de lneas y va de 0,001 a 0,01 nm.
Se basa en medir la cantidad de luz a la longitud de onda seleccionada que es absorbida
cuando la luz pasa a travs de una nube atmica.
2. Qu relacin existe entre los espectros de absorcin de las sustancias y el color que
poseen?
La relacin es de absorcin y transmitancia; es decir, una solucin coloreada absorbe
ciertas longitudes de onda de luz policromtica que la atraviesa debido a que la estructura
de las molculas presentes en la solucin les permite captar la energa luminosa asociada
con ciertas vibraciones. Esta energa se utiliza, por ejemplo, para hacer cambiar electrones
de casilla cuntica (excitacin). Por eso existe una relacin estrecha entre la estructura de
una molcula y sus posibilidades de absorcin de ciertas radiaciones luminosas.
2

El color de una sustancia, en consecuencia, es producido por el hecho de que esta sustancia
absorbe ciertas longitudes de onda a partir de una luz policrmatica: Las longitudes de onda
restantes corresponden a una luz coloreada. Se llaman luces de colores complementarios a
dos luces cuya suma produce una luz blanca. Si una sustancia absorbe en la zona naranja,
deja pasar las luces de otras longitudes de onda y parece azul. El azul es complementario
del naranja. La absorcin de la luz por una sustancia coloreada obedece a una ley
exponencial. Esto quiere decir que cada molcula de sustancia coloreada que se encuentra
en una capta no la misma cantidad absoluta de luz, sino la misma proporcin en relacin
con la luz incidente.
3. Qu aplicaciones tienen las tcnicas espectrofotomtricas?

4. Qu factores pueden producir desviaciones al aplicar la Ley de Beer Lambert?

Desviaciones de la Ley de Beer: En ocasiones se producen alteraciones en la linealidad

entre la concentracin y las absorbancias. La recta se curva antes de su lmite de linealidad
debido a los siguientes factores:
a. Medir concentraciones muy elevadas del cromgeno: porque al aumentar la
concentracin el detector pierde sensibilidad y no detecta las distintas concentraciones.
b. Radiaciones incidentes no monocromticos: Un cromgeno slo absorbe una
determinada si hay distintas no ser absorbida.
c. Solvente significativo comparada con la del soluto: Si llega a lmite de linealidad con
menores concentraciones de la muestra.
d. Luz transmitida por otros mecanismos: luz errtica cuando no pasa por la cubeta pero
si por el sensor.
e. Lados de la cubeta no paralelos: Produce la desviacin de la luz
f. Interferentes: Los cromgenos que absorben a esa acta como muestra dando error en
absorbancias y en distintas concentraciones.
g. Fenmenos de Fluorescencia: La luz que incide y que produce la muestra equivocan al
sensor y dan errores en la medicin.

RESUMEN1
1.2 Determinacin del espectro de absorcin del azul de bromotimol a pH cido.
En este punto de la prctica se prepararon 2 tubos de ensayo as:
a. Con 10ml de agua destilada que sirvi como blanco este se utilizo para eliminar posibles
interferencias que pueda introducir el reactivo..
b. El otro tubo contena 1ml de azul de bromotimol, ms 9 ml de agua destilada, se mezclo
bien y se procedi a hacer la prueba en el espectrofometro con el blanco y la solucin
problema, obteniendo as, las respectivas bandas de absorcin de la sustancia problema.
1.4 Determinacin del espectro de absorcin de una mezcla de bromotimol y rojo congo, a
pH 7.5.

Se prepararon 2 tubos de ensayo de la siguiente manera.

a. Tubo de ensayo como blanco; es decir, con 10ml de agua destilada.
b.Tubo de ensayo con 1ml de azul de Bromotimol, ms 1ml de amortiguador de fosfatos pH
7.5 ms 1ml de rojo congo y 7ml de agua destilada; se agito bien la mezcla y se procedi a
hacer la prueba en el espectrofotmetro.
2. Comprobacin de la ley de Beer Lambert con azul de Bromotimol a pH 7.5
Se analizo la variacin de la absorcin con respecto a la concentracin de la sustancia que
absorbe.
Cada tubo, con una concentracin diferente de la sustancia, se ley a la longitud de
onda de mxima absorcin obtenida en el experimento anterior 400nm.

Para la comprobacin de la Ley de Beer Lambert con azul de bromotimol a pH 7.5

se prepararon las siguientes diluciones:
Nota: Cada tubo de ensayo se preparo como lo muestra la tabla a seguir, pero debi
reemplazarse 1ml de agua destilada por 1ml de amortiguador de fosfato pH 7.5, en
cada uno de los tubos.
Tubo No.
Solucin de
azul de
bromotimol
en mL
Agua
Destilada
Concentraci
n (mg/l)

Longitud De
Onda

400
430
460
490
520
550
580
610
640
670
700

0.25

0.5

8.75

1.0

8.5

Absorbanci
a
0,284
0,357
0,306
0,175
0,072
0,025
0,014
0,012
0,011
0,012
0,012

1.5

8.0

7.5

2.0

7.0

3.0

6.0

4.0

5.0

problema

Tabla No.1 Determinacin del Espectro De Absorcin del

Azul de Bromotimol a pH cido.

Espectro de Absorcin del Azul De Bromotimol a pH cido.

0.4
0.35
0.3
0.25

Absorbancia

0.2
0.15
0.1
0.05
0
350

400

450

500

550

600

650

700

750

Grafica No.1 Espectro De Absorcin del Azul de Bromotimol a pH cido.

Tabla No.2 Determinacin del Espectro De Absorcin del Azul de Bromotimol y Rojo
Congo pH 7.5
Longitud De
Onda
400

Absorban
cia
0,221

430
460
490
520
550
580
610
640
670
700

0,246
0,293
0,349
0,326
0,244
0,203
0,229
0,162
0,054
0,023

0.4
0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0

350

400

450

500

550

600

650

700

750

Grafica No.2 Determinacin del Espectro de Absorcin del Azul de Bromotimol y

Rojo Congo a pH 7.5

Tabla No.3 Variacin De La Absorcin con Relacin a la Concentracin.

Tubo No.

problema

Azul de
Bromotimol(mL)
Agua destilada (mL)
Transmitancia
Absorbancia
Concentracin (mg/L)

0.25

0.5

1.0

1.5

2.0

3.0

4.0

9.75

9.5

9.0

8.5

8.0

7.0

6.0

10

0.15
1
25

0.24
4
5

0.51
8
10

0.98
4
15

0.79
9
20

1.19
8
30

1.42
7
40

0.01
6

0.264
7.12

1. Gua de Laboratorio de Bioqumica General. L.D. Caicedo.

2. Bioqumica Dinmica. Borel Jacques-Paul; Randoux A; Le Peuch C; Maquart F. Valeyre
J. Editorial Medica Panamericana. Paris, 1987. Pag84.