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Universidad Nacional Mayor de San Marcos

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA


EAP DE TECNOLOGIA MDICA

GUIA DE PRACTICAS N 13
I.- OBJETIVOS:
-Realizar el procesamiento de muestras de lquidos biolgicos segn protocolo.

II.-INTRODUCCION
PROTOCOLO DE PROCESAMIENTO DE LIQUIDO BIOLOGICO:
Cualquier liquido biolgico que llega al servicio de laboratorio debe ser procesado
cuanto antes como mximo a la hora de su extraccin, realizando primero: el
examen fsico (macroscpico), luego el examen citolgico, examen qumico y por
ltimo el reporte.
Si no va procesar en ese lapso guardarlo en la refrigeracin entre 2 a 8 C, como
mximo 24 horas. Separando el sobrenadante del sedimento para que no se alteren
los valores bioqumicos.

I.-EXAMEN FISICO
Para el examen fsico se colocara 5 cm de lquido biolgico en un tubo de vidrio
transparente y se calificara los siguientes parmetros:
Aspecto
Color
Grumos
Retculo
Fibrina
Volumen

: Transparente, Ligeramente turbio, turbio, muy turbio, purulento,


etc.
: Incoloro, Blanquecino, Ligeramente blanquecino, xantocrmico,
Amarillo, Amarillo Plido, etc.
: Se reportar como grumos (1+), (2+), etc.
: Se reportar con cruces (1+, (2+), etc. (al microscopio se
observar como una malla)
: Se reportar con cruces (1+), (2+), etc.
: Cantidad remitida
II.-EXAMEN CITOLOGICO

Debe efectuarse en forma rutinaria dentro de la primera media hora despus de su


extraccin, mientras que las clulas permanezcan en suspensin y antes que se
forme cogulos o fibrina que van atrapar a los leucocitos y van a dar falsos
negativos, para ello es muy importante homogenizar bien la muestra.
El recuento citolgico debe hacerse con toda exactitud especialmente cuando el
nmero de clulas va a ser determinante en la clasificacin del lquido.
a.-Materiales:
- Cmara de Neubauer
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Lic. TM Carlos Ortega Tumay

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- Tubo de vidrio de 12 x 75 mm
- Pipeta automtica de 0-20 ul.
- Pipeta automtica de 40-200 ul.
- Lquido de Disolucin: Cristal violeta 0.2%
Azul de Metileno al 0.3%
b.-Procedimiento:
- En un tubo de plstico colocar 5ul del colorante cristal violeta 0.2%
- Agregar 45ul del lquido biolgico, previamente mezclado y homogenizar bien.
- Cargar 10 ul del homogenizado en la cmara de Neubauer, dejar reposar 5 minutos
y realizar el recuento.

c.-Clculos para el Recuento Celular


Se contabilizan los leucocitos en los 9 cuadrados del retculo. El nmero de
leucocitos total por mm3 es igual al nmero de leucocitos en los 9 cuadrados
multiplicado por 1.23.
1.23 se obtiene de la siguiente manera:
(*) rea del retculo = 1 lado por lado

= 3 mm x mm

= 9 mm2x 0.1 mm
(*) Volumen ledo

= rea del retculo por profundidad


= 9 mm2 x 0.1 mm
= 0.9 mm3

Para obtener el nmero de leucocitos en un 1 mm3, se busca un nmero que


multiplicado por 0.9 mm3 nos resulte 1 mm3.
1/0.9 =1.11

0.9 mm3 x 1.11 = 1 mm3

Segn frmula:
N Leucocitos/mm3 = leucocitos contados x ttulo de dilucin x N encontrado
= leucocitos contados x 10/9 x 1.11
N Leucocitos = Leucocitos contados x 1.23
Con esta frmula se encuentra el nmero real de leucocitos por mm3.

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En el caso de fluidos corporales son turbios o muy turbios, con una pleocitosis,
marcada con elementos celulares iguales o mayor que en sangre, para el recuento
se emplearn las mismas diluciones que hematologa; es decir diluyendo la muestra
problema en 1/10, 1/20 con lquido de dilucin TURK. El nmero de leucocitos
contados en los cuadrantes se multiplica por 25 50 segn dilucin empleada. En el
caso de algunos lquidos que son purulentos y se coagulan con facilidad y no tienen
heparina (caso de Lquidos Pleural, Sinovial, etc.) se recomienda usar el suero
fisiolgico (ClNa al 9/000) como liquido de disolucin, esto evita la coagulacin de la
muestra y permite realizar un buen recuento.
Para el recuento leucocitario en lquidos hemorrgicos o ligeramente hemticos:
1) Recuento de Leucocitos de rutina con cristal violeta 0.2%
2) Recuento de hemates usando diluyente de Dacie (dilucin 1/100 1/200).
3) Se realiza el contaje en el cuadrante central en los 5 cuadraditos ms
pequeos como corresponde al recuento de hemates.
4) Los glbulos rojos contados se multiplican por 5000 (dilucin 1/100) o por
10,000 (dilucin 1/200)
5) Tener presente la siguiente relacin:
-Por cada 700 hemates corresponde 1 leucocito.
-Por los hemates contados corresponde N leucocitos adicionales.
-La cantidad leucocitos reales en el fluido biolgico es:
N Leuco. = Rec. De Leucocitos - Leucocitos Adicionales.
Este tipo de correccin es vlido cuando el paciente tiene en sangre cifras
normales en el hemograma como numero de hemates y leucocitos.
No es vlido en pacientes anmicos ni leucmicos.
En sangre perifrica.
D.-Observacin:
Adems es de rutina realizar un examen directo en fresco para informar el
porcentaje de leucocitos aglutinados, porcentaje de leucocitos degenerados si
lo hubiera, presencia de detritus celular, hemates por campo, etc.
Cuando el fluido biolgico es hemorrgico, ligeramente hemtico, antes de realizar
el recuento citolgico se har un examen directo en fresco sin cubreobjetos para
reportar hemates por campo % de crenados si lo hay. Este dato es importante sobre
todo en LCR, Liq. Pleural, Liq. Sinovial., etc.

E.-Recuento diferencial o citodiagnstico:


Consiste En clasificar los leucocitos en polimorfo nucleares y mononucleares hasta
llegar a un total de 100 leucocitos, luego se indica el % de cada uno de ellos. Si
existiera ms de 50 y menos de 100 se realiza la diferenciacin y se calcula el
porcentaje.
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Si encontramos que no se diferencian en PMN o MN, la muestra debe ser enviada al


Dpto. de Patologa o indicar a mdico que lo envi para su correcta identificacin. En
el reporte se debe describir detalladamente las caractersticas de las clulas.
Existen 2 coloraciones:
1) Coloracin Supra vital: Es sencilla, fcil y muy rpida nos permite observar
ntidamente los elementos y diferenciarlos en un breve tiempo.
Procedimiento:
-En una lmina porta objeto se coloca 1 gota del lquido biolgico previamente
homogenizado o del sedimento si la muestra tiene pocas clulas.
-Se adiciona una gota de azul de metileno al 0.3% y mezclar suavemente.
-Cubrir con laminilla de 20 x 20 mm.
-Se deja reposar por 1-2 minutos si es LCR (se puede poner a la estufa para
acelerar la coloracin slo 1 minuto) y 10-15 minutos si es otro liquido biolgico.
-Observar al microscopio con objetivo de 40x y luego con 100x usando aceite de
inmersin.
Nota: Esta tcnica nos permite observar los leucocitos degenerados que se
colorean ms rpido que los leucocitos normales.
Tambin se puede hacer esta tcnica en tubo, colocando 1 volumen de lquido
biolgico o del sedimento si hay escasos elementos celulares ms
1 volumen
de azul de metileno al 0.3%, se espera entre 10 a 15 minutos se coloca una 20 ul
entre lmina y laminilla para observar los elementos.
2).-Frotis coloreado con tincin de Romanowsky.Se realiza un frotis o extendido sobre una lmina portaobjeto, se deja secar y se
colorea con Wright, de la manera habitual, se usa cuando las clulas no son
tpicas o cuando queremos diferenciar otras estirpes celulares como eosinfilos,
basfilos, cel. Plasmticas, etc.

III.-EXAMEN QUIMICO:
Es importante porque nos brinda la informacin necesaria para poder clasificar el
lquido biolgico en exudado y trasudado, para realizar el examen qumico,
utilizamos el sobrenadante por lo que se centrifuga la muestra a 3500 rpm durante
10 minutos.
Se realizara los exmenes de glucosa, protenas totales y fraccionadas, LDH, como
rutina a todos los lquidos. Otras pruebas se realizara solo si el medico las solicita.

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1.-DETERMINACION DE LA GLUCOSA

La concentracin de la glucosa en todo fluido biolgico depende de su nivel en


sangre, de la presencia de grmenes y de la presencia de hemates.
Se recomienda hacer el dosaje de glucosa con el mtodo usado para dosar glucosa
en sangre.
Valor referencial es el 10% menos que el valor de glucosa srica.
2.-DETERMINACION DE PROTEINAS:

Se realiza mediante el mtodo de Biuret.


Las protenas nos va a proporcionar la clasificacin:
Exudado
mayor de 3.0 gr/dl
Trasudado
menor de 3.0 gr/dl
En los lquidos ascticos valores superiores 2.5 gr/dl confirma un exudado.
2.-DETERMINACION DE ALBUMINAS:

Se realiza por el mtodo de verde de bromo resol.


La diferencia entre la albumina srica y la albumina de cualquier liquido corporal nos
permitir diferenciar un exudado de un trasudado, ya que en los trasudados la
diferencia es menor de 1.2 gr/dl.
La diferencia entre albumina srica y albumina del lquido asctico menor de 1.1 gr/dl
indica su origen maligno.
4.-DETERMINACION DE LDH (LACTICO DESHIDROGENASA):

Se realiza por mtodos enzimticos.


La relacin de LDH del lquido corporal/LDH del suero mayor de 0.6 y/o LDH fluido
pleural mayor de los 2/3 de la LDH del suero nos indica que es un exudado.
5.-DETERMINACION DE AMILASA:

Se realiza por mtodos enzimticos.


Solo en caso de sospecha de pancreatitis.
6.-DETERMINACION DE FAL (FOSFATASA ALCALINA)

Se realiza por mtodos enzimticos.


En casos de sospecha de cncer de ovario o perforacin intestinal
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7.-DETERMINACION DE COLESTEROL Y TRIGLICERIDOS

Se realiza por mtodos colorimtricos.


Se usa para determinar la presencia de quillotras o ruptura del conducto torcico.
Valores de colesterol menor de 60 mg/dl es indicativo de exudado.
Valores de triglicridos mayores de 110 mg/dl se halla en el quilotorax.
La relacin colesterol liquido pleural/colesterol srico mayor de 0.3 confirma un
exudado.

LIQUIDO SINOVIAL
TOMA DE MUESTRA: 3-4 tubos o frascos.
1. Tubo limpio (valoracin de la viscosidad y prueba de coagulacin
de la mucina.
2. Tubo con Heparina para estudio cito qumico (fsico, recuento
celular ,diferenciacin de clulas y qumica)
3. Tubo Esterilizado de preferencia heparinizado para estudio
microbiolgico.
4. Tubo Heparinizado para estudio anatomopatologico.
EXAMEN MACROSCOPICO: Describir lo siguiente:
1. Volumen
2. Aspecto (si se puede leer una letra imprenta a travs de la
muestra)
3. Color: amarillo plido o incoloro
4. Coagulo de fibrina: examinar el lquido del tubo 1 hora despus
para ver si se ha formado un cogulo.
*Ausencia de cogulo = Normal
*Cogulos eventuales se describen de una a 4 cruces, esto
refleja dao en la membrana celular (proceso inflamatorio) que
permite el ingreso del fibringeno al espacio articular.
5. Viscosidad: Hacer que el lquido que gotea de una jeringa con
cada gota forme un hilo pegajoso, si es:
* Por lo menos de 4 cm. = V. NORMAL
* Menor de 4 cm.
= V. Disminuida
* Menor de 1 cm.
= V. muy disminuida (esto indica
reduccin del hialuronato)
6. Coagulacin de la Mucina: Aadir 0.1 ml. Del lquido del tubo 1 a
2.0 ml. de Ac. Actico al 5% en un
Beaker, podr formarse:
* Cogulo rodeado por solucin clara = BUENO
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* Cogulo blando en solucin turbia


* Cogulo frgil en lquido nebuloso
* No Formacin de cogulo con
Escamas en suspensin

= PASABLE
= DEFICIENTE
= MALO.

EXAMEN MICROSCOPICO: Normal, menos de 200 leucocitos x mm3


Diferencial: 75% de MN, 25% o menos de PMN.
Ragofitos son neutrfilos con inclusiones de 0.1 - 1.5 u, vistas
con tincin de Stemheimer-Malbin o por microscopa de
contraste de fase.
Los cristales se ven mediante luz polarizada
EXAMEN QUIMICO: Protenas = 1-3 gr/dl (normal) en este caso se pueden
utilizar los mtodos que se utilizan para
protenas en sangre.
Glucosa = 10 mg/dl menos que la glucosa en sangre (til
en Artritis crnica y con muestras tomadas
simultneamente y con Ayuno de 8 -12 horas.
Reportar la presencia de hemates y las caractersticas del sobrenadante en caso de
ser necesario.

CONTROL DE CALIDAD EN EL ESTUDIO CITOQUIMICO DE LIQUIDOS


CORPORALES
El LCR y todas las muestras corporales son valiosas, por los datos que podemos
obtener de su estudio y porque es de difcil obtencin.
Muchas veces la muestra es escasa, lo cual no permite que pueda repetirse un
anlisis en caso de duda o cuando se quiera verificar un resultado no congruente.
Por lo cual el trabajo debe realizarse con mucho cuidado y sin ninguna posibilidad
de error.
Por lo anterior los anlisis que se realicen, deben tener ASEGURADOS LA
CALIDAD DE SU PROCESAMIENTO
Tratando de resumir y recalcando que ceda uno de los resultados tienen que ser
correctos y que ningn dato vale por s solo, pues toda esta correlacionado, se
enumera las siguientes pautas que deben cumplirse:

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1. ANTES DE RECIBIR LA MUESTRA:


a) El personal que lo procesa debe tener conocimientos tericos y
prcticos, sobre todo lo que significa realizar el estudio de LCR y otros
lquidos biolgicos.
b) Los equipos y dems materiales de laboratorio debe estar en
excelentes condiciones.
c) Deben estar estandarizados todas las fases del proceso pre-analtico,
analtico y post-analtico.
d) Se debe contar con Controles (Nivel Normal y patolgico
e) Elaborar los criterios de rechazo de muestras.

2. AL RECIBIR LA MUESTRA Y DURANTE SU PROCESAMIENTO:


a) Verificar los datos del paciente y anotar la hora de obtencin de la
muestra y la recepcin de la misma.
b) Manipular la muestra CUMPLIENDO TODAS LAS NORMAS DE
BIOSEGURIDAD.
c) Procesar los anlisis solicitados segn indicaciones del Manual de
Procedimientos Tcnicos inmediatamente y en presencia de hemates,
realizar un examen microscpico directo para evidenciar la presencia
de hemates CRENADOS tan pronto como se reciba la muestra
(Reportar la presencia de hemates crenados en %)
d) Usar siempre CONTROLES, no solo de PRECISION sino de
EXACTITUD.
e) En caso de duda, es mejor preguntar, revisar los libros, los manuales
de procedimientos tcnicos, etc. antes de poner en el reporte un dato
dudoso que pueda resultar incorrecto.
f) En caso de no poder reconocer algunas clulas por falta de
experiencia o coloraciones especficas, basta con reconocerlas como
tales y en el reporte poner clulas de morfologa tpica, se sugiere
enviar la muestra al servicio de Anatoma Patolgica. Si queda
muestra, coordinar para que el envo se haga inmediatamente.
g) En caso de no poder realizar algunos anlisis, por algn motivo, derivar
la muestra al lugar correspondiente a la brevedad posible o conservarla
correctamente.
h) Los frascos o viales con las muestras deben ser guardadas en la
refrigeradora para verificar algn dato en caso que el mdico manifieste
su NO FIABILIDAD; o para aumentar anlisis que el mdico solicite
posteriormente como en el caso del TEST DE ADA. Despus de 72
horas, eliminarlas luego de haberlas auto clavado en el Servicio de
Microbiologa.
3. REPORTE DE LOS RESULTADOS
a) Evaluar los resultados y validarlos antes de reportarlos.
b) Hacer el reporte de los resultados en formatos adecuados sin omitir
ningn dato. No olvidar que gracias a la Tecnologa, los laboratorios
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tenemos la oportunidad de objetivar y documentar muchos datos


que son fundamentales para darles mejor tratamiento a los
pacientes.
c) En caso de hallazgos muy trascendentes para el paciente,
comunicrselo por telfono a la brevedad, como dato preliminar, al
mdico tratante y de no ser posible, ir personalmente hasta donde est
el paciente hospitalizado o en la Unidad de Emergencia.

III EQUIPOS Y MATERIALES


-

Centrifuga de mediana velocidad.


Microscopio Binocular
Cmara de Neubauer
Tubos de 12x 75
Laminas portaobjetos y laminillas cubreobjetos
Pipetas automticas de 10,50 y 100 ul
Gradillas
Papel toalla
Guantes
Reactivo de Bioqumica
Colorante de Wright
Buffer
Coloracin supra vital
Reactivo de acido actico al 3%

IV DESARROLLO DE LA PRCTICA
1.-ANALISIS MACROSCOPICO:
Fundamento.
Se describen las caractersticas de aspecto, color y presencia de cogulo. Los trminos a emplear
en la descripcin, segn protocolo.
2.-ANALISIS QUIMICO
Fundamento:
Determinar la concentracin de algunos analitos segn protocolo estandarizado generalmente se
dosa Glucosa ,Protenas, albuminas y LDH.
Procesar segn protocolo.
3.-EXAMEN MICROSCOPICO
Fundamento:
Realizar el recuento celular y la formula diferencial de PMN y MN. As mismo informar la presencia
de clulas atpicas.
Procesar segn protocolo.
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REPORTE E INTERPRETACION DE RESULTADOS:


Se har el reporte respectivo del lquido biolgico procesado segn formato establecido, teniendo
el cuidado de revisar cada dato antes de ser impreso, firmado y validado .

V TRABAJO PRCTICO
1-Elaborar una tabla indicando las reacciones qumicas de cada uno de los analitos bioqumicos
que se dosan en los lquidos biolgicos.
2-Elaborar un flujo grama para cada tipo de lquido biolgico segn el protocolo entregado y que
otras pruebas se le puede realizar
3.-Existe algn directiva nacional o internacional para el procesamiento de lquidos biolgicos?
Fundamentar su respuesta.

VI BIBLIOGRAFA
1.

GONZALES de B., Jos. (2010). Tcnicas y mtodos de laboratorio clnico. Barcelona. Editorial Elsevier
Masn.

2.

LYNCH, Rafael. (2003). Mtodos y tcnicas de laboratorio. Buenos Aires. Editorial Interamericana.

3.

Manual de procesamiento de lquidos biolgicos del Instituto nacional de Salud del Nio. Minsa. Per.

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