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GUIA DE PRACTICAS N 13
I.- OBJETIVOS:
-Realizar el procesamiento de muestras de lquidos biolgicos segn protocolo.
II.-INTRODUCCION
PROTOCOLO DE PROCESAMIENTO DE LIQUIDO BIOLOGICO:
Cualquier liquido biolgico que llega al servicio de laboratorio debe ser procesado
cuanto antes como mximo a la hora de su extraccin, realizando primero: el
examen fsico (macroscpico), luego el examen citolgico, examen qumico y por
ltimo el reporte.
Si no va procesar en ese lapso guardarlo en la refrigeracin entre 2 a 8 C, como
mximo 24 horas. Separando el sobrenadante del sedimento para que no se alteren
los valores bioqumicos.
I.-EXAMEN FISICO
Para el examen fsico se colocara 5 cm de lquido biolgico en un tubo de vidrio
transparente y se calificara los siguientes parmetros:
Aspecto
Color
Grumos
Retculo
Fibrina
Volumen
- Tubo de vidrio de 12 x 75 mm
- Pipeta automtica de 0-20 ul.
- Pipeta automtica de 40-200 ul.
- Lquido de Disolucin: Cristal violeta 0.2%
Azul de Metileno al 0.3%
b.-Procedimiento:
- En un tubo de plstico colocar 5ul del colorante cristal violeta 0.2%
- Agregar 45ul del lquido biolgico, previamente mezclado y homogenizar bien.
- Cargar 10 ul del homogenizado en la cmara de Neubauer, dejar reposar 5 minutos
y realizar el recuento.
= 3 mm x mm
= 9 mm2x 0.1 mm
(*) Volumen ledo
Segn frmula:
N Leucocitos/mm3 = leucocitos contados x ttulo de dilucin x N encontrado
= leucocitos contados x 10/9 x 1.11
N Leucocitos = Leucocitos contados x 1.23
Con esta frmula se encuentra el nmero real de leucocitos por mm3.
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En el caso de fluidos corporales son turbios o muy turbios, con una pleocitosis,
marcada con elementos celulares iguales o mayor que en sangre, para el recuento
se emplearn las mismas diluciones que hematologa; es decir diluyendo la muestra
problema en 1/10, 1/20 con lquido de dilucin TURK. El nmero de leucocitos
contados en los cuadrantes se multiplica por 25 50 segn dilucin empleada. En el
caso de algunos lquidos que son purulentos y se coagulan con facilidad y no tienen
heparina (caso de Lquidos Pleural, Sinovial, etc.) se recomienda usar el suero
fisiolgico (ClNa al 9/000) como liquido de disolucin, esto evita la coagulacin de la
muestra y permite realizar un buen recuento.
Para el recuento leucocitario en lquidos hemorrgicos o ligeramente hemticos:
1) Recuento de Leucocitos de rutina con cristal violeta 0.2%
2) Recuento de hemates usando diluyente de Dacie (dilucin 1/100 1/200).
3) Se realiza el contaje en el cuadrante central en los 5 cuadraditos ms
pequeos como corresponde al recuento de hemates.
4) Los glbulos rojos contados se multiplican por 5000 (dilucin 1/100) o por
10,000 (dilucin 1/200)
5) Tener presente la siguiente relacin:
-Por cada 700 hemates corresponde 1 leucocito.
-Por los hemates contados corresponde N leucocitos adicionales.
-La cantidad leucocitos reales en el fluido biolgico es:
N Leuco. = Rec. De Leucocitos - Leucocitos Adicionales.
Este tipo de correccin es vlido cuando el paciente tiene en sangre cifras
normales en el hemograma como numero de hemates y leucocitos.
No es vlido en pacientes anmicos ni leucmicos.
En sangre perifrica.
D.-Observacin:
Adems es de rutina realizar un examen directo en fresco para informar el
porcentaje de leucocitos aglutinados, porcentaje de leucocitos degenerados si
lo hubiera, presencia de detritus celular, hemates por campo, etc.
Cuando el fluido biolgico es hemorrgico, ligeramente hemtico, antes de realizar
el recuento citolgico se har un examen directo en fresco sin cubreobjetos para
reportar hemates por campo % de crenados si lo hay. Este dato es importante sobre
todo en LCR, Liq. Pleural, Liq. Sinovial., etc.
III.-EXAMEN QUIMICO:
Es importante porque nos brinda la informacin necesaria para poder clasificar el
lquido biolgico en exudado y trasudado, para realizar el examen qumico,
utilizamos el sobrenadante por lo que se centrifuga la muestra a 3500 rpm durante
10 minutos.
Se realizara los exmenes de glucosa, protenas totales y fraccionadas, LDH, como
rutina a todos los lquidos. Otras pruebas se realizara solo si el medico las solicita.
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LIQUIDO SINOVIAL
TOMA DE MUESTRA: 3-4 tubos o frascos.
1. Tubo limpio (valoracin de la viscosidad y prueba de coagulacin
de la mucina.
2. Tubo con Heparina para estudio cito qumico (fsico, recuento
celular ,diferenciacin de clulas y qumica)
3. Tubo Esterilizado de preferencia heparinizado para estudio
microbiolgico.
4. Tubo Heparinizado para estudio anatomopatologico.
EXAMEN MACROSCOPICO: Describir lo siguiente:
1. Volumen
2. Aspecto (si se puede leer una letra imprenta a travs de la
muestra)
3. Color: amarillo plido o incoloro
4. Coagulo de fibrina: examinar el lquido del tubo 1 hora despus
para ver si se ha formado un cogulo.
*Ausencia de cogulo = Normal
*Cogulos eventuales se describen de una a 4 cruces, esto
refleja dao en la membrana celular (proceso inflamatorio) que
permite el ingreso del fibringeno al espacio articular.
5. Viscosidad: Hacer que el lquido que gotea de una jeringa con
cada gota forme un hilo pegajoso, si es:
* Por lo menos de 4 cm. = V. NORMAL
* Menor de 4 cm.
= V. Disminuida
* Menor de 1 cm.
= V. muy disminuida (esto indica
reduccin del hialuronato)
6. Coagulacin de la Mucina: Aadir 0.1 ml. Del lquido del tubo 1 a
2.0 ml. de Ac. Actico al 5% en un
Beaker, podr formarse:
* Cogulo rodeado por solucin clara = BUENO
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= PASABLE
= DEFICIENTE
= MALO.
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IV DESARROLLO DE LA PRCTICA
1.-ANALISIS MACROSCOPICO:
Fundamento.
Se describen las caractersticas de aspecto, color y presencia de cogulo. Los trminos a emplear
en la descripcin, segn protocolo.
2.-ANALISIS QUIMICO
Fundamento:
Determinar la concentracin de algunos analitos segn protocolo estandarizado generalmente se
dosa Glucosa ,Protenas, albuminas y LDH.
Procesar segn protocolo.
3.-EXAMEN MICROSCOPICO
Fundamento:
Realizar el recuento celular y la formula diferencial de PMN y MN. As mismo informar la presencia
de clulas atpicas.
Procesar segn protocolo.
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V TRABAJO PRCTICO
1-Elaborar una tabla indicando las reacciones qumicas de cada uno de los analitos bioqumicos
que se dosan en los lquidos biolgicos.
2-Elaborar un flujo grama para cada tipo de lquido biolgico segn el protocolo entregado y que
otras pruebas se le puede realizar
3.-Existe algn directiva nacional o internacional para el procesamiento de lquidos biolgicos?
Fundamentar su respuesta.
VI BIBLIOGRAFA
1.
GONZALES de B., Jos. (2010). Tcnicas y mtodos de laboratorio clnico. Barcelona. Editorial Elsevier
Masn.
2.
LYNCH, Rafael. (2003). Mtodos y tcnicas de laboratorio. Buenos Aires. Editorial Interamericana.
3.
Manual de procesamiento de lquidos biolgicos del Instituto nacional de Salud del Nio. Minsa. Per.
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