UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA

FACULTAD DE AGRONOMIA
DEPARTAMENTO DE QUIMICA Y TECNOLOGIA
CATEDRA DE BIOQUMICA

PRACTICA DE LABORATORIO N 2
DETERMINACIN CUALITATIVA DE MACROMOLCULAS
(CARBOHIDRATOS, PROTENAS Y LPIDOS)
INTRODUCCIN
Los compuestos orgnicos presentes en la materia viva muestran enorme variedad y la mayor
parte de ellos son extraordinariamente complejos; an la ms simple de las clulas, las bacterias,
contienen gran nmero de distintas molculas orgnicas. La mayor parte de la materia orgnica en
las clulas vivas est constituida por macromolculas, de pesos moleculares muy grandes, que
incluyen protena, carbohidratos, lpidos y cidos nucleicos.
En esta sesin prctica se realizaran algunos ejercicios que permitan diferenciar soluciones de
carbohidratos, lpidos y protenas.
OBJETIVOS:
Utilizar reacciones cualitativas de coloracin que nos permitan detectar la presencia de grupos

qumicos especficos de aminocidos y protenas.

Identificar carbohidratos mediante reacciones cualitativas de coloracin.
Realizar algunos ejercicios prcticos para demostrar las propiedades fsicas y qumicas ms

importantes de los lpidos (solubilidad y saponificacin)

Identificar una solucin problema de carbohidratos o protenas.

I.- DETERMINACIN CUALITATIVA DE AMINOCIDOS Y PROTENAS.

Las protenas son sustancias qumicas orgnicas de alto peso molecular, constituidas por
muchos aminocidos, que juegan un papel importante en la estructura y dinmica de la
materia viva. Solamente 20 diferentes aminocidos se encuentran formando parte de las
protenas; sin embargo, no todas las protenas contienen todos esos aminocidos.
FUNDAMENTO DE LAS REACCIONES:
1.- Reaccin de la Ninhidrina.
Esta es una reaccin general para cualquier - aminocido y es debido a la presencia del grupo
- amino ( - NH2). De manera que todos los aminocidos y por supuesto las protenas, dan
positiva esta reaccin. No obstante, cualquier sustancia no proteca que contenga un grupo - NH2
tambin da positiva la reaccin. La reaccin se efecta en tres etapas:
a) Reduccin de la Ninhidrina oxidada por accin del aminocido :

b) Hidrlisis del - aminocido producido para formar un -cetocido, el cual se descarboxila bajo

las condiciones de la reaccin :

c) Finalmente el NH3 producido reacciona con cantidades equimolares de ninhidrina oxidada y

ninhidrina reducida para formar un compuesto de color azul violeta, el cual es proporcional a la
cantidad de aminocido presente.

Esta reaccin se desarrolla mejor a pH neutro. Todos los aminocidos dan color azul violeta con
ninhidrina, con excepcin de prolina e hidroxiprolina que dan color amarillo.
2.- Reaccin de Biuret.
Esta reaccin es caracterstica para aquellos compuestos que poseen dos ms enlaces
peptdicos. La denominacin Biuret se debe a que el compuesto orgnico Biuret tambin da
positiva esta reaccin.
La reaccin del Biuret se basa en la formacin, en medio alcalino, de un complejo de
coordinacin de color violeta entre el ion cprico (cu+2) y 4 tomos de nitrgeno, provenientes de
las cadenas peptdicas.

Complejo de color violeta

PROCEDIMIENTO.
1.- Reaccin de la ninhidrina
a) Coloque 5 ml de solucin de aminocido de protena en un tubo de ensayo.
b) Agregue 2 ml de solucin de ninhidrina al 0,1% coloque el tubo de ensayo en un bao de
agua hirviente por unos 10 minutos. Retire el tubo del bao y deje enfriar. Observe si algn
color se produce.
Soluciones de aminocidos y protenas a usar:
Leucina al 0,1%
Albmina de huevo al 1%
Solucin problema
Agua destilada (testigo)
2.- Reaccin de Biuret
Coloque 5 ml de solucin de aminocido o de protena en un tubo de ensayo y agregue 1 ml de
NaoH 2,5N. Mezcle. Agregue 5 gotas de solucin al sulfato cprico al 1% observe si algn color se
desarrolla.
Soluciones de aminocidos y protenas a usar:
Leucina al 0,1 %
Albmina de huevo al 1 %
Solucin problema

II.- REACCIONES GENERALES DE CARBOHIDRATOS

Los carbohidratos o glcidos son polihidroxialdehidos o polihidroxicetonas y sus derivados, que
desempean dos funciones biolgicas principales ; una como combustible (almidn) y otra como
elementos estructurales (celulosa, hemicelulosa, sustancias pcticas quitina).
FUNDAMENTO DE LAS REACCIONES.
Reaccin de Molicsh

Esta reaccin se basa en la formacin de derivados furfricos a partir de los carbohidratos, por
accin deshidratante del cido sulfrico y permite reconocer cualquier azcar libre o combinado. En
el caso de las pentosas, el derivado furfrico que se forma es el furfural y en el de las hexosas es el
hidroximetil furfural.

Estos derivados furfricos se condensan con -naftol para producir compuestos coloreados de
constitucin desconocida.
Furfural
O
Hidroximetil furfural

- naftol
(condensacin)

COMPLEJO COLOR VIOLETA

Reaccin de Benedict
Esta reaccin se utiliza para detectar la presencia de carbohidratos reductores o sea aquellos
carbohidratos que poseen un grupo aldehdico o cetnico libre o potencialmente libre. La reaccin
se efecta en medio ligeramente alcalino; en este medio los carbohidratos reductores originan
formas enlicas intermedias, denominadas enodioles, las cuales reducen rpidamente el in cprico
a cuproso. Estos iones cuprosos se combinan con los iones oxidrilos produciendo hidrxido
cuproso, el cual se transforma en un precipitado rojo, indica la presencia de un azcar reductor.
Como ejemplo de la accin de los lcalis diluidos sobre los azcares, tenemos la isomerizacin
de la D-glucosa, la cual se representa a continuacin:

La
posible
reduccin del
azcar es la siguiente:

reaccin
de
cobre por el

Reaccin del Iodo.

Esta reaccin permite reconocer la presencia de polisacridos tales como : almidn y glucgeno,
dando el primero un color azul intenso y el segundo un color caoba.
El almidn se encuentra en dos formas, la amilosa y la amilopectina.
La amilosa est
constituida por cadenas largas no ramificadas de glucosa; no es verdaderamente soluble en agua,
pero micelas hidratadas que dan un color azul con el iodo. En tales micelas la cadena polisacardica
est retorcida, constituyendo un arrollamiento helicoidal.
La amilopectina se presenta muy
ramificada; produce disoluciones coloidales o micelares que dan una coloracin rojo violcea con el
iodo.
Es importante sealar que los productos de degradacin del glucgeno y el almidn tambin dan
reacciones de coloracin caractersticas con el Iodo. Como un ejemplo presentamos a continuacin
una secuencia de los productos de degradacin del almidn y sus respectivas coloraciones:

PROCEDIMIENTO
Reaccin de Molisch :
a) Coloque 2 ml de solucin de carbohidrato a un tubo de ensayo. Aada 5 gotas de naftol al 5%.

Agite, incline el tubo y deje deslizar cuidadosamente por las paredes de ste entre 25 y 30 gotas
de H2SO4 concentrado, de modo que el cido se deposite en el fondo.
b) En caso de estar presente un carbohidrato libre o combinado, aparecer un anillo de color violeta
en la interfase de los lquidos al cabo de pocos segundos.
Soluciones a usar:
Solucin problema
Agua (como testigo)
Glucosa

Reaccin del Iodo:

Coloque en un tubo de ensayo 1 ml de solucin de carbohidrato, agregue dos (02) gotas de
reactivo de iodo y agite. La aparicin de una coloracin variable desde el azul intenso (almidn)
hasta el pardo rojizo (dextrinas), indica la presencia de un polisacrido al menos.
Soluciones a usar:
Solucin problema
Almidn
Monosacrido (glucosa)
Reaccin de Benedict:
En un tubo de ensayo coloque 2 ml de solucin de carbohidrato, aada 3 ml del reactivo de
Benedict cualitativo. Agite y luego caliente en bao de agua hirviente durante 3 minutos.

Resultado: La formacin de un precipitado rojo ladrillo, indica la presencia de un carbohidrato

reductor.
Soluciones a usar:
Solucin problema
Azcar reductor (glucosa)
Azcar no reductor (sacarosa)

II. REACCIONES GENERALES DE LPIDOS.

Los lpidos son un conjunto heterogneo de molculas orgnicas, cuyas caracterstica
fundamental es ser insolubles en agua y solubles en disolventes orgnicos apolares. Dada la
amplitud de esta definicin, dicho grupo comprende sustancias de muy diversa estructura, as
mismo, su funcin biolgica es muy diversa. La de algunos es fundamentalmente energtica como
los cidos grasos de cadena larga, que son los ms abundantes y que se almacenan en forma de
steres de glicerol (triacilglicridos). Otros desempean funciones estructurales como los
fosfolpidos y esfingolpidos que son componentes importantes de las membranas celulares.
Tambin cumplen funcin hormonal (esteroides, prostaglandinas) y otros son vitaminas (vitamina a;
D y E).
Ellos se pueden clasificar en cuanto a la estructura de su esqueleto en:
a) Lpidos complejos o saponificables: contienen cidos grasos en su estructura y por lo tanto

producen jabones (sales de cidos grasos) por hidrlisis alcalina.

no saponificables: no contienen cidos grasos y no son, por lo tanto,
saponificables.

b) Lpidos sencillos o

FUNDAMENTO DE LAS REACCIONES:

Solubilidad
Una de las caractersticas principales de los lpidos es su insolubilidad en agua (solvente polar) y
su solubilidad en los solventes orgnicos (no polares), esta propiedad permite el aislamiento y
fraccionamiento de los diferentes lpidos de acuerdo a su solubilidad.
En los aceites o grasas la glicerina y los cidos grasos al esterificarse pierden sus grupos polares
(oxidrilos y carboxlicos, respectivamente) convirtindose en sustancias no polares, y por lo tanto
no solubles en solventes polares, como el agua, pero si solubilizan las solventes no polares (ter,
cloroformo, tetracloruro de carbono, etc.)
Saponificacin
Los lcalis concentrados hidrolizan las grasas produciendo glicerina y sales alcalinas de los
cidos grasos que la forman, los cuales reciben el nombre de jabones. El proceso se denomina
saponificacin. Por lo tanto, un jabn es una sal metlica de un cido aliftico superior, formndose
siempre que se hidroliza una grasa en medio alcalino.

Ejemplo:
C15 H31 CO

CH2

CH2

OH

C15H31CO

CH + 3NaOH

CH

OH + 3 C15H31COONa

C15H31CO

CH2

CH2

OH

Tripalmitina

Palmitato de sodio
(Jabn)

Glicerol

En el experimento realizado hemos obtenido un jabn que aparece como una pasta homognea y
al adicionar agua se obtiene una solucin jabonosa.

PROCEDIMIENTOS
Solubilidad de un aceite.
a) Coloque en dos tubos de ensayo 1 ml de aceite.
b) Agregue 1 ml de agua a uno de ellos y 1 ml de ciclohexano en el otro, mezcle bien deje reposar y

observe.
c) Anote sus observaciones.

Saponificacin
a)
b)
c)
d)
e)

Vierta en una cpsula de porcelana 1 ml de aceite

Agregue 5 ml de alcohol absoluto, mezcle bien
Aada 5 ml de hidrxido de sodio (NaOH) al 40%, vuelva a mezclar bien
Caliente lentamente y agite constantemente hasta la evaporacin del lquido
Retire la cpsula de la plancha y aada 20 ml de agua, mezcle bien con una barilla de vidrio
hasta obtener una solucin jabonosa.

MATERIALES Y REACTIVOS.
Tubos de ensayo

Sulfato cprico al 1%

Buretas de 50 ml

Aceite neutro

Bao de mara

Solucin de NaOH 2, 5Mc

Planchas de calentamiento

Solucin de Ninhidrina al 1%

Frascos goteros

Solucin de Iodo 0,1 Mc

Cpsulas de porcelana

(cido sulfrico concentrado)

Cilindro de 10 o 25 ml

Etanol

Ciclohexano

Solucin de NaOH al 40%

Reactivo de Molisch (-naftos al 5% en

alcohol etlico al 95%)

Soluciones acuosas de aminocidos,

protenas (Albmina), glucosa sacarosa,
almidn

Reactivo de Benedict (Solucin acuosa

de citrato de sodio, carbonato de sodio
y sulfato cprico)

Fecha

UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA

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Grupo
Nota

INFORME DE LABORATORIO N 2
DETERMINACIN CUALITATIVA DE MACROMOLECULAS

NOMBRE

CARNET

RESULTADOS
En el siguiente cuadro indique con el signo (+) si la reaccin es positiva, o con el signo (-) si es
negativa. En observaciones indique como se manifiesta la reaccin de su solucin problema.
REACCIONES
PROTENA
CARBOHIDRATOS
LPIDOS
Solubilidad
Saponificacin
SOLUCIONES Ninhidrina Biuret Molisch Iodo
Benedict
Leucina
Lisina
Albmina
Glucosa
Almidn
Sacarosa
Aceite
Agua destilada
Ciclohexano
Solucin
problema

Observaciones

Concluya en relacin a la naturaleza qumica de la solucin problema N